Способ определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей

Авторы патента:

Бейкин Яков Борисович (RU)

Оленькова Ольга Михайловна (RU)

Ковтун Ольга Петровна (RU)

Лившиц Аркадий Афанасьевич (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2580624:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГБОУ ВПО УГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей. В крови заболевших детей в период с 1 по 7-й день болезни определяют X- значение уровня лимфоцитов, на поверхности которых находятся СD3+IL4+ маркеры, рассчитывают значение Y по формуле 1,12+9,32*X. При значении Y выше критического значения 1,28 делают заключение, что возбудителем заболевания являются вирусы Коксаки группы В, если Y ниже критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем являются вирусы ЕСНО. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей. 1 пр.

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и иммунологии, а именно к диагностике энтеровирусных (неполио) инфекций. Предназначен для определения типа энтеровируса, вызвавшего развитие менингита у детей, в первые дни заболевания по уровню CD3+IL4+ лимфоцитов. Может быть использован педиатрами, иммунологами, эпидемиологами.

Согласно существующим нормативным документам (МУ 3.1.1.2363-08 «Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции»; СП 3.1.2950-11 «Профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции»; «Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита», 4-е издание, ВОЗ, Женева) основными методами лабораторного подтверждения энтеровирусных (неполио) инфекций (ЭВИ) являются вирусологический и молекулярно-биологические методы: полимеразно-цепная реакция, секвенирование.

Вирусологические методы диагностики энтеровирусных инфекций являются длительным и трудоемким процессом. Окончательный ответ на вопрос, какой вирус (тип) вызвал заболевание, можно получить по истечению 10-14 дней от начала заболевания. Проведение таких исследований возможно в специально оборудованных лабораториях, сотрудники таких подразделений должны обладать определенными навыками работы с культурами клеток, владеть методами выделения и идентификации энтеровирусов.

Метод ПЦР бесспорно является наиболее быстрым и информативным. Однако на сегодняшний день используя данный способ, возможно лишь определить, является ли причиной инфицирования энтеровирус, либо заболевание вызвано другим возбудителем, т.е. назвать тип энтеровируса (ECHO или Коксаки) невозможно.

Метод секвенирования (определение нуклеотидной последовательности ДНК и РНК для получения формального описания ее первичной структуры) является наиболее точным и высокотехнологичным способом диагностики, но является дорогостоящим и пока не может быть широко использован в рутинной практике.

Помимо традиционных способов индикации и идентификации энтеровирусов, которые были описаны выше, учеными были предложены и другие варианты их дифференцировки. Одним из ранних можно назвать способ использования гидрохлорида гуанидина, подавляющий репродукцию пикорновирусов, в т.ч. и вирусов Коксаки А. Для его проведения необходимо использование клеточных культур. Данный метод был запатентован в 1993 году, авторами его были К.И. Спыну и В.П. Вуткарев (патент РФ №1824441).

Позднее был описан и запатентован (1995 г.) метод иммунологической экспресс-диагностики энтеровирусных инфекций группой авторов (Аксенов О.А., Осипова З.А., Мурина Е.А.). В его основе лежал особый способ обработки исследуемого материала и дальнейшее его исследование в реакции связывания комплимента (РСК) со специфическими сыворотками (патент РФ №2034025).

Одним из последних изобретений является способ идентификации 5′HΤΡ генома энтеровирусов, который был описан в диссертационном исследовании Голициной Л.Н. в 2003 г., а позднее запатентован (патент РФ №2441917). Однако все эти методы выполняя одну и ту же задачу - дифференцировка энтеровирусов, не могут рассматриваться в качестве аналогов.

Задачей изобретения является разработка способа определения типа энтеровируса в первые дни заболевания на основании незначительного количества показателей, а именно по уровню CD3+IL4+ лимфоцитов, который определен в первые дни заболевания (1-7 день).

Технический результат: доступность и информативность диагностики типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей.

Заявляется способ определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей, отличающийся тем, что в крови заболевших детей в первые дни болезни определяют содержание Х=CD3+IL4+-лимфоцитов при спонтанном синтезе, рассчитывают значение Y по формуле Y=1,12+9,32*Х,

если Y выше критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем заболевания являются вирусы Коксаки группы B;

если Y ниже критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем являются вирусы ECHO;

при этом значения 1,12 и 9,32 - коэффициенты, которые выведены с помощью уравнения регрессии.

Предположим, что уровень CD3+IL4+ был равен 0,014 (109/л), тогда подставляя значения в формулу (1,12+9,32*0,014), получаем значение 1,25. Полученное значение (X=1,25) ниже критического значения (1,28), а это значит, что с вероятностью 95% этиологическим агентом менингита у ребенка являются вирусы ECHO.

Предположим, что уровень CD3+IL4 был равен 0,082 (109/л), тогда подставляя значения в формулу (1,12+9,32*0,082), получаем значение 1,885.

Полученное значение (X=1,885) выше критического значения (1,28), а это значит, что с вероятностью 95% этиологическим агентом менингита у ребенка являются вирусы Коксаки В.

Параметры общего анализа крови регистрировали с помощью гематологического анализатора «Cobas Micros 60» («ABX»). Оценку внутриклеточного синтеза цитокинов (IL-4) Т-лимфоцитами проводили в условиях 4-часовой инкубации в присутствии брефельдина A, без стимуляции (спонтанная экспрессия) и при стимуляции Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) («Sigma», 25 ng/ml) и иономицином («Sigma», 1 µg/ml) при 37°C (стимулированная экспрессия). Окрашивание проводили с использованием моноклональных антител: фикоэритрин (PE)-коньюгированные анти-IL-4 и фикоэритринцианин 5.1 (PC-5)-коньюгированные CD3 («IO Test»).

Методом дисперсионного и регрессионного анализов были выделены наиболее значимые иммунологические показатели, среди которых ведущее место занимал уровень CD3+IL4+-лимфоцитов при спонтанном синтезе. Была выведена формула, позволяющая установить с точностью до 95,0%, какой энтеровирус (ECHO или Коксаки B) вызвал заболевание.

Способ был проверен следующим образом.

В контрольную группу вошли данные пациентов, показатели иммунограммы которых не были использованы при выведении формулы.

В группу детей с ECHO-вирусными менингитами вошло 12 человек, с Коксаки B-вирусными менингитами - 15 человек.

Были получены следующие результаты:

- из 12 человек, от которых при проведении вирусологических исследований были выделены вирусы ECHO, совпадение результатов наблюдали в 11 случаях (полученное значение было ниже критического 1,28), в 1 случае значение было выше критического уровня;

- из 15 человек, от которых при проведении вирусологических исследований были выделены вирусы Коксаки B, совпадение результатов наблюдали в 12 случаях (полученное значение было выше критического 1,28), у 3-х детей данный показатель оказался ниже 1,28.

Таким образом, формула оказалась достоверной в 80,0% при Коксаки B-вирусных менингитах и в 92,0% - при ECHO-вирусных менингитах. Для проведения расчетов были использованы результаты обследования 94 детей, из них с ECHO-вирусными менингитами - 67 человек, с Коксаки B-вирусными менингитами - 27.

Способ определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей, отличающийся тем, что в крови заболевших детей в период с 1 по 7-й день болезни определяют X - значение уровня лимфоцитов, на поверхности которых находятся CD3+IL4+маркеры, рассчитывают значение Y по формуле Y=1,12+9,32*X, если Y выше критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем заболевания являются вирусы Коксаки группы В; если Y ниже критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем являются вирусы ECHO.

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики рака желудка. В сыворотке крови определяют концентрации фактора роста эндотелия сосудов, раково-эмбрионального антигена и пепсиногена-1.

Способ оценки эффективности процедуры радиочастотной симпатической денервации почечных артерий у пациентов с медикаментозно-резистентной артериальной гипертензией // 2578461

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности процедуры радиочастотной симпатической денервации почечных артерий у пациентов с медикаментозно-резистентной артериальной гипертензией, характеризующийся тем, что пациенту в условиях стационара проводят измерение β-адренореактивности эритроцитарных мембран периферической крови до и через 7 дней после процедуры, и при снижении значения β-адренореактивности мембран на 10 условных единиц и более процедуру оценивают как эффективную.

Способ прогнозирования риска развития осложнений хронической истинной экземы // 2578442

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития осложнений ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, отличающийся тем, что способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетического полиморфизма лимфотоксина α(+250A/G Ltα) в сочетании с такими предикторами, как наличие очагов хронической инфекции и уровень лейкоцитов, прогноз риска развития осложнений по уравнениям линейной дискриминантной функции следующего вида: у1=-114,015+108,475x1+1,267x2+2,743x3 у2=-114,720+103,793x1+2,370x2+3,399x3, где x1 - наличие очагов хронической инфекции (да - 1; нет - 2), x2 - уровень лейкоцитов (1012/л), x3 - генетический вариант по локусу+250 A/G Ltα: AA - x3=1; AG - x3=2; GG - x3=3.

Способ прогнозирования риска развития преэклампсии // 2578425

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования вероятности риска возникновения преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России.

Способ очистки гозерелина // 2578414

Изобретение относится к медицине и касается способа очистки гозерелина, включающего растворение гозерелина-сырца в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую трехстадийную хроматографическую очистку: жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом, ионообменную хроматографию низкого давления и ВЭЖХ.

Генетические полиморфизмы при возрастной дегенерации желтого пятна // 2577726

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности, ранибизумабом.

Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров // 2577712

Изобретение относится к области клинико-лабораторной диагностики и предназначено для прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с использованием молекулярно-генетических маркеров.

Способ диагностики дисбиотических нарушений в биоптатах слизистых носа, глотки у детей раннего и дошкольного возраста с постоянно рецидивирующими острыми респираторными инфекциями // 2576839

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики дисбиотических нарушений в биоптатах слизистых носа и глотки у детей раннего и дошкольного возраста с постоянно рецидивирующими острыми респираторными инфекциями.

Набор с лиофилизированными праймерами для пцр-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины // 2576780

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины. Предложен набор с лиофилизированными праймерами, содержащий готовые к амплификации реакционные пробирки с лиофилизированными праймерами и праймерами-зондами для экзонов RHD-5 и RHD-7 гена RHD.

Способ идентификации соединений для лечения рака // 2575828

Изобретение относится к области онкологии и касается комплекса, включающего сочетания полиинозинполицитидиловой кислоты (pIC) и полиэтиленимина (PEI), и его применения в качестве средства для лечения рака, в частности меланомы.

Способ прогнозирования эндогенной интоксикации у больных острым перитонитом // 2581024

Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и может быть использовано для прогнозирования эндогенной интоксикации у больных острым перитонитом. Способ осуществляют следующим образом: начиная с первых суток после оперативного лечения в динамике определяют содержание молекул средней массы и малонового диальдегида, на основе которых рассчитывают индекс прогнозирования эндогенной интоксикации по определенной формуле. При значении индекса прогнозирования эндогенной интоксикации до 0,95 констатируют положительную динамику эндогенной интоксикации, при значении от 0,95 до 1,34 - низкую степень вероятности прогрессирования эндогенной интоксикации, при значении 1,35 и выше - высокую степень вероятности прогрессирования эндогенной интоксикации. Изобретение позволяет точно и адекватно отражать вероятность прогрессирования эндогенной интоксикации путем определения индекса прогнозирования эндогенной интоксикации больных острым перитонитом, что позволяет судить о направленности (прогрессирование или купирование) течения синдрома эндогенной интоксикации и оценивать в динамике эффективность оперативного лечения, а также действия дезинтоксикационной и эфферентной терапии. 2 пр., 3 табл.

Набор синтетических олигодезоксирибонуклеотидов для амплификации и детекции эндогенного внутреннего контроля при исследованиях биологического материала крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции в режиме "реального времени" // 2581026

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики и молекулярной биологии. Предложен набор, содержащий два олигодезоксирибонуклеотидных праймера и флуоресцентно-меченый ДНК-зонд. Изобретение обеспечивает эффективную амплификацию и детекцию эндогенного внутреннего контроля при исследованиях биологического материала крупного рогатого скота методом ПЦР в режиме «реального времени» и уменьшает частоту недостоверных результатов. 2 ил., 3 табл., 1 пр.

Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом пцр в реальном времени // 2581952

Изобретение относится к биохимии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом ПЦР в реальном времени. Набор содержит последовательности олигонуклеотидов, видоспецифичных к риккетсиям: прямой праймер (PrF_gltA) 5`→3`: 5'-GGCTTCGGTCATCGTGT-3' (17 н); обратный праймер (PrR_gltA) 5`→3`: 5'-TTGCTATTTGTAAGAGCGGATTG-3' (23 н); флуоресцентно-меченый ДНК-зонд Z(ROX)_gltA 5`→3`: ROX-CCACGTGCCGCAGTACTTAAAGAAAC-BHQ2' (26 н). Техническим результатом заявляемого изобретения является создание набора специфичных олигонуклеотидных праймеров и зонда для выявления генетического материала риккетсий, в том числе R. tarasevichiae и R. raoultii, в гомогенатах клещей, клинических образцах и биологических жидкостях, распространенных на территории Российской Федерации методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. 1 ил., 3 табл., 3 пр.

Срочная флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика метастатического поражения лимфатических узлов // 2582275

Изобретение относится к флуоресцентной иммуноцитохимической диагностике метастатического поражения лимфатических узлов. Сущность способа состоит в том, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из растворов: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки с питательной средой, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флуоресцентную микроскопию. Использование заявленного способа не требует сложной предподготовки материала и значительных временных затрат и позволяет повысить эффективность флуоресцентной иммуноцитохимической диагностики метастатического поражения лимфатических узлов. 1 ил., 2 пр.

Способ выявления мутации p.q368x в гене миоцилина (myoc), вызывающей развитие первичной открытоугольной глаукомы // 2582956

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ выявления мутации p.Q368X (с.1102С>Т) в гене MYOC, сопровождающейся развитием наследственной формы первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). Осуществляют выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции и проведение полимеразной цепной реакции в реальном времени с последующей детекцией пика кривой плавления в конечной точке. Амплификацию участка гена MYOC проводят в присутствии двух последовательностей олигонуклеотидов с красителем EvaGreen. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику развития ПОУГ у пациентов из семей с отягощенной наследственностью. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания цисплатином // 2582968

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA). Осуществление изобретения обеспечит выявление вариаций, которые могут стать основой для индивидуализации использования препаратов платины в противоопухолевой терапии. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Способ определения полисорбата // 2583132

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения полисорбата в пробе, содержащей белок. Способ по настоящему изобретению включает предварительную обработку пробы посредством щелочного гидролиза с последующим колориметрическим определением на основе металлокомплекса, определяемого при анализе вещества с тиоцианатным реагентом, при этом указанный комплекс экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем. Щелочной гидролиз приводит к удалению мешающих белков и повышению селективности относительно поверхностно-активных веществ, подобных определяемому при анализе веществу, например селективности по Tween 80 относительно Triton X-100. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 8 пр.

Способ исследования операционного материала при карциноме ампулярной области // 2583887

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано для исследования резецированного органокомплекса по поводу ампулярной карциномы. Для этого располагают органокомплекс согласно анатомическому строению, проводят его диссекцию, макроскопическое исследование, взятие опухоли, микроскопическое и иммуно-гистохимическое исследование. Способ позволяет провести постановку более объективного, достоверного и точного диагноза после проведенного хирургического лечения. 6 з.п. ф-лы, 7 ил.

Способ мультиплексной пцр-детекции atopobium vaginae, leptotrichia amnionii, sneathia sanguinegens и eggerthella spp. в клиническом материале // 2583924

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале. Осуществляют выделение ДНК, амплификацию и электрофорез. Проводят мультиплексную ПЦР с использованием специфичных праймеров в циклическом режиме. При электрофоретическом обнаружении ампликонов размерами 286 п.н., и/или 768 п.н., и/или 135 п.н., и/или 428 п.н. определяют наличие Atopobium vaginae, и/или Leptotrichia amnionii, и/или Sneathia sanguinegens, и/или Eggerthella spp. соответственно. Изобретение обеспечивает одновременное выявление в клиническом материале до 4 видов ассоциируемых с бактериальным вагинозом бактерий. 1 ил., 2 табл., 10 пр.

Способ диагностики нарушений анаэробного метаболизма глюкозы у работников химической и нефтехимической промышленности // 2583946

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы. При значении концентрации лактата выше 2,1 ммоль/л и значении концентрации лактатдегидрогеназы ниже 225 Е/л диагностируют нарушение в энергетической системе у работников. Использование изобретения повышает точность и достоверность диагностики нарушений в энергетической системе у работников химической и нефтехимической промышленности и служит прогнозом развития профессиональных заболеваний у работников химического комплекса. 4 пр.