Смеси стевии, содержащие ребаудиозид в

Настоящее изобретение относится к пищевой промышленности. Предложенный экстракт стевии содержит ребаудиозид В в концентрации от 10 до 90 вес.% экстракта стевии. Также предложены подслащивающая композиция, съедобный продукт и способ подслащивания съедобного продукта. Изобретение позволяет получить подсластитель с улучшенным профилем сладости, близким к сахару, пониженной горечью в послевкусии и пониженным привкусом лакрицы. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 3 ил., 21 табл., 6 пр.

 

Настоящая заявка имеет приоритет заявки США № 61/437390 от 29 января 2011, которая введена здесь ссылкой в полном объеме.

При проведении исследований и разработок федеральной правительственной программой не спонсировалось оказание материальной помощи.

Уровень техники

Натуральные калорийные подсластители, такие как сахароза, глюкоза и фруктоза, обладают желаемыми характеристиками вкуса, но они повышают калорийность продуктов. Следовательно, существует большой интерес потребителей в отношение низкокалорийных или некалорийных подсластителей, которые являются здоровой альтернативой. Известны натуральные и синтетические высокоинтенсивные подсластители, но подавляющее большинство из них обладает вкусовыми профилями, которые не так желательны для потребителей, как таковые у сахаров. Таким образом, желательно разработать не калорийные подсластители, которые могут заменить сахар и которые обладают более желательным вкусовым профилем.

Растения вида Stevia rebaudiana («стевия») являются источником специфических сладких стевиол-гликозидов. Было проведено множество исследований и разработок для оценки исследования применения сладких стевиол-гликозидов стевии в качестве не калорийных подсластителей. Из стевии могут быть экстрагированы сладкие стевиол-гликозиды, включая шесть ребаудиозидов (то есть ребаудиозид A-F), стевиозид (преобладающий гликозид в экстрактах из дикой стевии), дулькозиды.

Коммерческие низкокалорийные или не калорийные подсластители на основе ребаудиозида A и других стевиол-гликозидов имеют горькое или лакричное послевкусие. По существу эти характеристики ощутимы при концентрациях выше около 300 м.д. (миллионных долей). При использовании в пищевых продуктах предпочтительные уровни (8-10% показателей сахарного эквивалента), как правило, составляют от около 500 м.д. до около 1000 м.д., что выше уровня, при котором послевкусие первоначально становится заметным. Следовательно, продолжает существовать необходимость в подсластителях с пониженной, низкой калорийностью и/или не калорийных подсластителях, включающих сладкие стевиол-гликозиды, которые имеют профили вкуса с уменьшенной горечью или уменьшенным нежелательным привкусом (например, лакрицы) или с отсутствием горечи и нежелательного привкуса (например, лакрицы), или профили сладости более похожие на таковые у натуральных калорийных подсластителей, или комбинации таковых с такими свойствами.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к экстракту стевии, содержащему ребаудиозид B в концентрации, которая составляет от 10 до около 90 вес.% экстракта стевии.

Также настоящее изобретение относится к подслащивающей композиции, содержащей соединения сладких стевиол-гликозидов, где соединения сладких стевиол-гликозидов содержат ребаудиозид B в концентрации, которая составляет от 10% до около 90 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

Также настоящее изобретение относится к потребительским товарам, таким как напитки, пищевые продукты, средства ухода за полостью рта, табачные изделия, лекарственные средства и нутрицевтические продукты, содержащие указанные выше подслащивающие композиции, и способам их подслащивания при использовании указанных выше подслащивающих композиций.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 - график растворимости ребаудиозида B в лимоннокислом буфере при pH 3, как функция ребаудиозида A и концентраций стевиозида.

Фиг.2 - структуры стевиол-гликозидов.

Фиг.3 - график влияния содержания ребаудиозида B (в растворе, содержащем ребаудиозид A и добавленный ребаудиозид B, в общей концентрации в воде 900 м.д.) на различные вкусовые характеристики согласно оценке комиссии квалифицированных дегустаторов.

Подробное описание

I. Определения

Используемый в описании настоящей патентной заявки термин «сладкие соединения стевиол-гликозидов» относится к любому из множества натуральных соединений с общей кольцевой структурой системы дитерпенового стевиола с одним или более сахаридным остатком, химически прикрепленным к кольцу.

II. Общий обзор

Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что включение и/или контроль концентрации ребаудиозида B в экстрактах стевии и подслащивающих композициях, содержащих сладкие стевиол гиликозиды, позволяет снижать или приводит к отсутствию характеристик вкуса, как правило, считающихся негативными, таких как горечь и лакричное послевкусие, или позволяет получит профиль сладости, более похожий на таковой у натуральных калорийных подслатсителей. В частности, авторы настоящего изобретения обнаружили, что указанные выше преимущества могут быть достигнуты проведением выбора относительно высокой концентрации ребаудиозида B относительно общей концентрации сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии и подслащивающей композиции (например, по меньшей мере 10 вес.% от общего содержания соединений сладких стевиол-гликозидов, представленных ребаудиозидом B).

Указанные выше экстракты стевии и подслащивающие композиции по изобретению используют в качестве подсластителей с пониженной калорийностью, низкокалорийных или некалорийных подсластителей в пищевых продуктах, то есть пищевых композициях или жевательных композициях, таких как пищевые продукты, напитки, лекарственные средства, карамельные кондитерские изделия, жевательная резинка и тому подобное. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что экстракт стевии и подслащивающие композиции по изобретению имеют профили сладости, более похожие на таковые у сахара, пониженной горечью в послевкусии, пониженным привкусом (например, лакрица) по сравнению с другими смесями сладких стевиол-гликозидов, таких как коммерчески доступные комбинации и смеси стевиол-гликозидов. Тестирование вкуса показало, что в большинстве случаев подслащивающие композиции по изобретению являются предпочтительными тестируемыми объектами по сравнению с композициями, содержащими 97% ребаудиозида A, при тестировании в одной и той же концентрации. Предполагается, что добавление экстракта стевии и подслащивающих композиций по изобретению в пищевые продукты и напитки приведет к улучшению вкуса пищевых продуктов и напитков по сравнению с таковыми, полученными при использовании известных экстрактов стевии и подслащивающих композиций, содержащих сладкие стевиол-гликозиды, такие как композиции с 97% содержанием ребаудиозида A.

Также предполагается, что ребаудиозид B может добавляться в другие высокоинтенсивные подсластители. Приведенные в качестве примера высокоинтенсивные подсластители, подходящие для вариантов изобретения, включают: дулькозид A, дулькозид B (также известный, как ребаудиозид C), рубузозид, стевиозид и его соли (монатин SS, RR, RS, SR), куркулин, глицирризиновая кислота и ее соли, тауматин, монелин, мабинлин, браззеин, эрнандульцин, филлодульцин, глицифиллин, флоридзин, стевиозид, ребаудиозид A, ребаудиозид D, ребаудиозид E, ребаудиозид F, стевия, стевиолмонозиды;

и стевиолбиозиды;

и искусственные высокоинтенсивные подсластители, такие как:

сахарин, аспартам, сукралоза, неотам, ацельсульфам калия.

Дополнительно, специалисту в данной области будет понятно, что ребаудиозид B может добавляться в калорийные подсластители, такие как сахара (например, высокофруктозный кукурузный сироп, сахароза, фруктоза и тому подобное) и полиолы (например, сорбит, ксилит, лактит и тому подобное), или другие низкокалорийные подсластители с получением подслащивающих композиций с пониженной калорийностью.

Простая экстракция стевиол-гликозидов из растений, как правило, приводит к получению экстрактов, которые менее предпочтительны с точки зрения вкуса, чем очищенные экстракты с более высоким содержанием ребаудиозида A. Однако простые экстракты легче получить, и они, как правило, менее дорогие для получения, чем ребаудиозид A высокой степени очистки. Следовательно, дополнительное преимущество настоящего изобретения состоит в том, что возможно объединение простого экстракта или частично очищенного продукта с ребаудиозидом B, с получением, таким образом, гликозидной смеси, которая является менее дорогой для получения, чем очищенный ребаудиозид A, но все еще обладает сравнимыми или превосходящими вкусовыми характеристиками. Также предполагается, что в процессе очистки ребаудиозида A технологические потоки стевиол-гликозидов, обедненные по гликозидам с хорошим вкусом, могут иметь улучшенный вкус за счет повышения содержания ребаудиозида B.

Композиции, содержащие ребаудиозид B, могут быть дополнительно модифицированы при использовании известной технологии модификации размера частиц, такой как агломерирование, распылительная сушка, барабанная сушка и другие формы физической технологической обработки, традиционно применяемой для регулирования размера частиц для обеспечения более лучших свойств сыпучести, гидратации или растворения.

Композиции, содержащие ребаудиозид B, могут быть дополнительно модифицированы при использовании известной технологии для обеспечения жидких форм с консервантом для легкого использования при конкретных применениях.

Композиции, содержащие ребаудиозид B, могут быть дополнительно модифицированы при использовании известных технологий для совместной технологической обработки с агентами-наполнителями, такими как мальтодекстрины и аналогичные соединения, для обеспечения продуктам контролируемой сладости, подбора доз, эффективности и технологичности. Дополнительно, следует отметить, что ребаудиозид B и/или комбинации его и других стевиол-глиуозидов могут быть скомбинированы с другими ингредиентами, которые могут быть желательны для включения в подслащивающую композицию. Например, ребаудиозид B может быть нанесен распылением или может быть агломерирован с ребаудиозидом A или другими стевиол-гликозидами и/или другими материалами, такими как мальтодекстрины, сахароза или любой другой функциональный носитель.

III. Экстракты стевии и подслащивающие композиции, содержащие ребаудиозид B

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что вкус смеси и комбинации сладких стевиол-гликозидов (например, смесь и комбинация стевиол-гликозидов) может быть улучен за счет контроля и/или повышения концентраций ребаудиозида B в композициях стевиол-гликозидов согласно настоящему изобретению. Считается, что улучшенный вкус очевиден при показателях pH от около pH 2 до около pH 8.

Определены пределы растворимости ребаудиозида B (см., Пример 5). Например, результаты экспериментов показали, что (i) ребаудиозид B имеет относительно высокую растворимость в растворе с нейтральным pH, и (ii) растворимость ребаудиозида B ограничена в лимоннокислом буфере с pH 3. Дополнительно, результаты экспериментов показали, что присутствие ребаудиозида A в растворе повышает растворимость ребаудиозида B. С другой стороны, результаты экспериментов показали, что присутствие стевиозида немного снижает растворимость ребаудиозида B. Информация о растворимости может быть учтена при составлении растворов ребаудиозида B и смеси ребаудиозидов.

Для смешивания с другими подсластителями ребаудиозид B может быть получен различными способами. Например, ребаудиозид B может быть выделен из растительных экстрактов при использовании хроматографии, осаждения или кристаллизации. В качестве альтернативы, ребаудиозид B может быть получен обработкой ребаудиозида A различными гидроксидами моно-, ди- или тривалентных катионов при подходящих условиях температуры и pH. Смесь ребаудиозида B с остаточным ребаудиозидом A может быть использована для повышения количества ребаудиозида B в другой смеси, или ребаудиозид B может быть выделен из смеси ребаудиозид A/ребаудиозид B при использовании хроматографии, осаждения или селективной кристаллизации. Ребаудиозид B также может быть получен аналогичным способом обработкой ребаудиозида D теми же гидроксидными соединениями, как указано выше, для ребаудиозида A. Продукт в виде смеси или выделенный ребаудиозид B может быть использован для получения указанных выше смесей стевиол-гликозидов с улучшенным вкусом. В качестве другой альтернативы, ребаудиозид B может быть получен ферментативно из ребаудиозида A или ребаудтиозида D.

В конкретных вариантах изобретения экстракт стевии или подслащивающая композиция содержит ребаудиозид B и одно или более дополнительное соединение сладкого гликозида. Приведенные в качестве примера соединения сладких гликозидов включают: ребаудиозид A, ребаудиозид B, ребаудиозид C (дулькозид B), ребаудиозид D, ребаудиозид E, ребаудиозид F, стевию, стевиозид, дулкозид A и рубузозид. В конкретных вариантах изобретения один или более сладкий гликозид может представлять собой сладкий стевиол-гликозид, включая стевиолбиозиды и стевиолмонозиды. В частности, приведенные в качестве примера сладкие стевиол-гликозиды включают: ребаудиозид A, ребаудиозид B, ребаудиозид C (дулькозид B), ребаудиозид D, ребаудиозид E, ребаудиозид F и стевиозид. Например, частично очищенные экстракты стевиол-гликозидов из растений часто содержат смесь ребаудиозида B и дополнительных стевиол-гликозидов.

В конкретных вариантах изобретения, где экстракт стевии или подслащивающая композиция содержит ребаудиозид B и одно или более дополнительное соединение сладкого стевиол-гликозида, концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 10 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозид B составляет по меньшей мере около 15 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 20 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 25 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 30 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 35 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 40 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 45 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида B составляет по меньшей мере около 50 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции.

В конкретных вариантах изобретения, где экстракт стевии или подслащивающая композиция содержат ребаудиозид B и одно или более соединение сладкого стевиол-гликозида, и где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения (термин «согласуется» исключает потенциальные комбинации, где из более высокого значения нижнее предела выбирается, таким образом, что оно выше, чем более низкое значение верхнего предела), концентрация ребаудиозида B также может составлять не более чем около 90 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 80 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 70 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 60 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 50 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 40 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 35 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 30 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид B, где концентрация ребаудиозида B согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения и концентрация ребаудиозида B составляет не более чем около 25 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции.

В конкретных вариантах изобретения одно или более дополнительное соединение сладкого стевиол-гликозида содержит ребаудиозид A. Например, частично очищенные экстракты стевиол-гликозидов могут содержать смесь ребаудиозида B и ребаудиозида A, или ребаудиозид B может быть введен в очищенные препараты ребаудиозида A. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 1 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 5 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 10 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 20 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 30 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 40 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 50 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 60 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация ребаудиозида A составляет по меньшей мере около 70 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции.

В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A также может составлять не более чем около 95 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 90 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 85 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 70 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A не более чем около 75 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 70 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 65 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 50 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 55 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения, содержащих ребаудиозид A, где концентрация ребаудиозида A согласуется с любым из указанных выше вариантов изобретения, концентрация ребаудиозида A составляет не более чем около 50 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции.

Хотя подслащивающие композиции по изобретению могут содержать смеси подсластителей различных типов и в различных количествах, в конкретных вариантах изобретения подслащивающая композиция с ребаудиозидом B и одним или более дополнительным соединением сладкого стевиол-гликозида по существу состоит из соединений сладких стевиол-гликозидов. Например, в таких вариантах изобретения общая концентрация ребаудиозида B и всех других соединений сладких стевиол-гликозидов, присутствующих в них, обеспечивает по существу всю функциональность сладости подслащивающей композиции. Количество других подслащивающих соединений, которые могут быть включены в подслащивающие композиции, по существу состоящие из ребаудиозида и соединений сладких стевиол-гликозидов, зависит от типа других указанных подслащивающих соединений и пороговых концентраций сладости, ниже которых считается, что они не существенно способствуют сладости подслащивающей композиции. Дополнительно, в конкретных вариантах изобретения подслащивающая композиция с ребаудиозидом B и одним или более дополнительным соединением сладкого стевиол-гликозида состоит из соединений сладких стевиол-гликозидов.

В конкретных вариантах изобретения экстракт стевии или подслащивающая композиция содержит ребаудиозид B и одно или более соединение сладкого стевиол-гликозида, содержащее стевиозид. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 1 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 5 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 10 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 20 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 30 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере около 40 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет по меньшей мере не более чем около 95 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет не более чем около 90 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет не более чем около 80 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет не более чем около 70 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции. В конкретных вариантах изобретения концентрация стевиозида составляет не более чем около 60 вес.% от общего веса соединений сладких стевиол-гликозидов в экстракте стевии или подслащивающей композиции.

IV. Продукты, содержащие высокоинтенсивные подсластители с ребаудиозидом B

В конкретных вариантах изобретения приведены пищевые продукты, содержащие экстракт стевии или подслащивающие композиции с высокой концентрацией ребаудиозида B. Специалисту в данной области будет понятно, что любая пищевая или жевательная композиция может быть подслащена в соответствии с настоящим изобретением, такая как пищевые продукты (например, снэки, выпеченные изделия, супы, соусы, прошедшие технологическую обработку мясные продукты, консервированные фрукты, консервированные овощи, молочные продукты, замороженные кондитерские изделия, кексы, печенье, батончики и другая сладкая выпечка, готовые каши, злаковые батончики, йогурт, напитки, содержащие йогурт, энергетические батончики, батончики гранола, твердая карамель, желейные конфеты, шоколадные конфеты и кондитерские изделия); напитки (например, газированные безалкогольные напитки, готовые к употреблению чаи, спортивные напитки, молочные напитки, алкогольные напитки, энергетические напитки, кофе, ароматизированные воды, витаминные напитки, фруктовые напитки и фруктовые соки, порошкообразные безалкогольные напитки), лекарственные средства или фармацевтические продукты (например, таблетки, лекарственные леденцы, суспензии и тому подобное), нутрицевтические продукты (например, добавки, витамины и тому подобное), леденцы или кондитерские изделия; жевательная резинка; табачные изделия (например, жевательный табак); и тому подобное. Добавление ребаудиозида B или экстрактов стевии или подслащивающих композиций, содержащих ребаудиозид B и другие необязательные подсластители, в пищевые продукты представляет собой процесс, который зависит от пищевого продукта и способа его получения. Такие способы получения известны специалисту в области пищевых продуктов. Предпочтительно, подслащивающую композицию вводят в эффективном количестве, которое придает желаемую сладость пищевому продукту.

В конкретных вариантах изобретения пищевой продукт содержит подслащивающую композицию, содержащую ребаудиозид B и одно или более дополнительное соединение сладкого стевиол-гликозида, как указано выше. В конкретных вариантах изобретения стевиол-гликозид подслащивающей композиции присутствует в общей концентрации ниже порога сладости (который, как считается, составляет около 40 м.д.). В конкретных вариантах изобретения считается, что при таких низких количествах сладкие стевиол-гликозиды выполняют функцию вкусоароматического агента, или агента, усиливающего вкусоаромат, а не подсластителя. В конкретных вариантах изобретения сладкие стевиол-гликозиды подслащивающей композиции присутствуют в общей концентрации, которая составляет по меньшей мере около 50 м.д. В конкретных вариантах изобретения сладкие стевиол-гликозиды подслащивающей композиции присутствуют в общей концентрации, которая составляет по меньшей мере около 200 м.д., или которая составляет по меньшей мере около 500 м.д., или которая составляет по меньшей мере около 1500 м.д.

В конкретных вариантах изобретения пищевой продукт является напитком, содержащим подслащивающую композицию, содержащую ребаудиозид B и одно или более дополнительное соединение сладкого стевиол-гликозида, как указано выше. В конкретных вариантах изобретения pH напитка составляет по меньшей мере около 2 (и предпочтительно по меньшей мере pH около 4) и не более чем pH около 8. В конкретных вариантах изобретения сладкие стевиол-гликозиды подслащивающей композиции присутствуют в общей концентрации, которая составляет по меньшей мере около 50 м.д. В конкретных вариантах изобретения сладкие стевиол-гликозиды подслащивающей композиции присутствуют в общей концентрации, которая составляет по меньшей мере около 200 м.д., которая составляет по меньшей мере около 500 м.д., которая составляет по меньшей мере около 1500 м.д.

V. Получение подслащивающей композиции

Подслащивающие композиции согласно приведенным выше принципам могут быть получены при использовании любого из множества подходящих способов. Один из таких способов включает смешивание определенных количеств ребаудиозида B с одним или более соединением сладкого стевиол-гликозида, такого как ребаудиозид A, и/или другое соединение сладкого стевиол-гликозида. Например, смесь очищенного ребаудиозида B и ребаудиозида A и/или другого соединения сладкого стевиол-гликозида может быть получена смешиванием сухих порошкообразных компонентов. В качестве альтернативы, смесь соединений сладких стевиол-гликозидов может быть получена в растворе или суспензии и подвергнута совместной сушке с получением порошка.

Ребаудиозид A является коммерчески доступным материалом, который, как правило, характеризуется присутствием, например, >80% ребаудиозида A, >95% ребаудиозида A, или >97% ребаудиозида A. Такая очищенная форма ребаудиозида A, как правило, достигается снижением количеств других стевиол-гликозидов при использовании рекристаллизации растворителем, адсорбции на смолах или хроматографического фракционирования.

Ребаудиозид B может быть получен различными способами. Например, ребаудиозид B может быть выделен из технологических потоков, связанных с технологической обработкой и очисткой ребаудиозида A, при использовании, например, осаждения, рекристаллизации, хроматографического фракционирования, адсорбции на смолах. Дополнительно, ребаудиозид B может быть получен щелочным или кислотным гидролизом ребаудиозида A, как описано у Kohda, et. al., Phytochemistry, vol. 15, стр. 981-983 (1975) и в JP 52083731 A. Ребаудиозид B также может быть получен ферментативным гидролизом ребаудиозида A, как описано у Mizukani, H., et al., Phytochem vol. 21, стр. 1927-1930 (1982).

Поскольку ребаудиозид B может быть получен из ребаудиозида A, экстракты стевии могут иметь собственное повышенное содержание ребаудиозида B, например, за счет модификации параметров процесса, связанных с экстракцией стевиол-гликозидов из растения стевия. Например, количество ребаудиозида B может быть повышено за счет контроля pH технологического потока, температуры технологическое потока, увеличения длительности процесса или комбинации таких модификаций.

Если требуется, ребаудиозид B может быть отделен от других стевиол-гликозидов и родственных соединений при использовании любого походящего способа. Например, ребаудиозид B может быть осажден из растворов, понижением pH раствора. Ребаудиозид B, как правило, трансформируется по существу в нерастворимую, протонированную форму в воде комнатной температуры при показателях pH менее чем около 4,5.

После осаждения ребаудиозида B он может быть отделен от раствора, содержащего растворимые соединения, при использовании любых традиционных средств очистки суспензии. Осаждение может быть проведено центрифугированием и удалением супернатанта. Преципитат может быть отделен фильтрацией, такой как вакуумная фильтрация, или при использовании фильтр-пресса. Растворимая и нерастворимая фаза могут быть отделены при использовании мембран. Фильтрат, центрифужный осадок или мембранный ретентат могут быть дополнительно очищены промыванием водой. В качестве альтернативы, частично очищенный и удаленный преципитат или восстановленный преципитат может быть повторно растворен водой с pH более чем около 7,7; повторно осажден добавлением кислоты для снижения pH ниже около 4,5; и снова отделен от жидкой фазы, содержащей примеси, при использовании любой указанной выше технологии.

В качестве альтернативы, ребаудиозид B может быть осажден добавлением растворителя, в котором ребаудиозид B имеет ограниченную растворимость или нерастворим. Конкретный растворитель, добавляемое количество и температуру предпочтительно выбирать, таким образом, чтобы по существу осаждался только ребаудиозид B, а не другие соединения.

При нейтральном pH воды растворимый ребаудиозид B может быть отделен от других растворимых соединений при использовании хроматографического фракционирования, рекристаллизации, мембранного отделения при использовании мембраны с подходящим размером пор, которые задерживают ребаудиозид, но позволяют проходить более мелким молекулам, или обработки адсорбционной смолой, которая будет адсорбировать все примеси, элюированием ребаудиозида, или адсорбции ребаудиозидов и элюированием всех примесей. Затем смола может быть промыта при использовании элюента с аффинностью к адсорбируемому материалу для регенерации смолы (в первом случае) или извлечения ребаудиозидов (второй случай).

Отделенный ребаудиозид B может быть высушен любым подходящим способом и соответствующим устройством, таким как ленточная конвейерная сушка, барабанная сушка, лотковая сушка, распылительная сушка, лиофильная сушка, мгновенная распылительная сушка или сушка в псевдоожиженном слое. В качестве альтернативы, вместо сушки ребаудиозида B с последующим смешиванием высушенного ребаудиозида B с ребаудиозидом A и/или другим побочным соединением сладкого стевиола (steviolside compounds), он может быть смешан одновременно в растворе с последующей сушкой композиции.

ПРИМЕРЫ

Следующие описанные варианты изобретения приведены только для иллюстрации возможности изобретения в различных формах. Следовательно, специфические структурные, функциональные и процедурные детали, приведенные в следующих Примерах, не являются ограничивающими.

Пример 1 - Тест-предпочтение коммерческих смесей стевиол-гликозидов и гликозидных смесей, обогащенных ребаудиозидом B

Коммерческую смесь стевиол-гликозидов растворили в 0,0056 M лимоннокислом буфере с pH 3,1. Раствор, содержащий коммерчески доступную подслащивающую композицию, содержащую 97% ребаудиозида A, был получен аналогичным образом.

Таблица 1 Композиции 97% ребаудиозида A и коммерческой смеси
Гликозид	97% ребаудиозида A, мг	Коммерческая смесь, мг/л
Ребаудиозид A	437	437
Стевиозид	1	35

Ребаудиозид B	14	17
Ребаудиозид C	0	9
Ребаудиозид D	0	20
Итого	498	518

В парных сравнительных тестах-предпочтениях на сладость принял участие тридцать один сотрудник Tate & Lyle. Продукты получали в лимоннокислом буфере с pH 3,1 (0,9 грамм безводной лимонной кислоты (Tate & Lyle, Decatur, IL) и 0,26 грамм дигидратцитрата натрия (Tate & Lyle, Decatur, IL) на литр и тестировали при комнатной температуре в двух унциевых чашках типа souffle cups, помеченных ярлычком со случайным трехзначным кодом. Квалифицированных дегустаторов просили определить, какой раствор слаще и какой раствор им нравится больше. Было проведено голосование, и данные были собраны при использовании программного обеспечения SIMS sensory software (Sensory Computer Systems, LLC, Morristown, NJ). Для очистки вкусовых рецепторов перед, во время и после тестирования дегустаторам была доступна бутилированная вода, 2% раствор сахарозы и несоленые крекеры.

Результаты сладости и предпочтения анализировали при использовании биноминального теста и провели расчет при использовании d' Thurstonian. p-показатель для одностороннего биноминального теста рассчитывали как

где c - число успешных исходов, n - число серий, p₀ - вероятность. Тест считается статистически значимым, когда p-показатель составляет менее чем априори установленный альфа-риск. Двухсторонний p-показатель представляет собой двойной односторонний p-показатель, как рассчитано выше.

d' Thurstonian является линейным измерением психофизических различий. d' 1, как правило, считается порогом чувствительности (JND), где стимул будет оцениваться строже в 75% серий. d' Thurstonian не зависит от метода тестирования и для парного сравнения рассчитывают, как

где p_c - пропорция успешных исходов, а Φ(•) - кумулятивная функция распределения стандартного нормального распределения. Эти статистические термины более полно определены в стандартных пособиях по этому вопросу, таких как «Sensory Discrimination Tests and Measurements», Jian Bi (Blackwell Publishing, 2006).

Инструкции для теста на парное сравнение:

(i) Важно, чтобы Вы проводили полоскание перед и между образцами.

(ii) Очистите небо кусочком крекера. Затем прополощите водой с сахаром. Наконец, прополощите простой водой.

(iii) Протестируйте вкус образцов в представленном порядке слева направо.

(iv) Протестируйте по меньшей мере половину первого образца и оцените сладость.

(v) Прополощите водой с сахаром и затем прополощите простой водой.

(vi) Теперь протестируйте по меньшей мере половину второго образца.

(vii) Не тестируйте повторно первый образец.

(viii) Оцените образцы по предпочтению и сладости. Выберите образец, который Вы считаете наиболее предпочтительным, и выберите образец, который Вы считаете наиболее сладким. Если Вы не уверенны или у Вас нет предпочтений, затем выберите любой другой.

Вопросы для теста на парное сравнение:

(i) Какой из этих двух образцов Вам понравился больше?

(ii) Какой из этих двух образцов слаще?

Результаты этого теста и показатель психофизический d' приведены в Таблице 2 ниже.

Таблица 2 Коммерческая смесь по сравнению с 97% ребаудиозидом A
Образец	№ предпочтений	№ слаще
Коммерческая смесь	11	16
97% ребаудиозидом A	20	15
Итого	31	31
Биноминальный p-показатель, двухсторонний	0,07	0,72
d'- показатель	-0,53	0,16

Результаты показали, что коммерческая смесь была немного более предпочтительной и примерно такой же сладкой, как 97% ребаудиозид A.

Последующий тест проводили аналогичным образом, добавляя ребаудиозид B в указанную выше коммерческую смесь с получением смеси гликозидов, которая представляет собой вариант изобретения с концентрацией ребаудиозида B относительно общего содержания сладких стевиол-гликозидов, составляющей около 21% и соотношением ребаудиозида A к ребаудиозиду B, составляющим около 3:1.

Смесь гликозидов из сладких стевиол-гликозидов растворили в 0,0056 M лимоннокислом буфере с pH 3,1. Аналогичным образом был получен раствор, содержащий коммерчески доступную подслащивающую композицию, содержащую 97% ребаудиозида A.

Таблица 3 Композиции 97% ребаудиозид A и гликозидная смесь
Гликозид	97% ребаудиозида A, мг	Коммерческая смесь, мг/л
Ребаудиозид A	437	350
Стевиозид	1	32
Ребаудиозид B	14	104
Ребаудиозид C	0	10
Ребаудиозид D	0	0
Итого	498	496

Тестирование двух представленных растворов проводили при участии дегустационной комиссии из сотрудников Tate & Lyle, которых просили определить, какой раствор слаще и какой раствор им нравится больше при использовании тех же самых инструкций и вопросов, как указано выше. Результаты по сладости и предпочтениям анализировали при использовании биноминального теста и показатель d' Thurstonian рассчитывали, как указано выше. Результаты и показатель психофизический d' приведены в Таблице 4 ниже.

Таблица 4 Смесь ребаудиозида B по сравнению с 97% ребаудиозидом A
Образец	№ предпочтений	№ слаще
Смесь ребаудиозида B	27	27
97% ребаудиозидом A	11	11
Итого	38	38
Биноминальный p-показатель, двухсторонний	<0,01	<0,01
d'- показатель	0,79	0,79

Смесь с ребаудиозидом B в обоих случаях и в предпочтении и в сладости была лучше чем 97% ребаудиозид A.

Пример 2 - Тест-предпочтение смесей с 800 м.д. ребаудиозида A или ребаудиозида B, смешанного со стевиозидом

Квалифицированных дегустаторов просили сравнить коммерческую смесь ребаудиозида A и стевиозида с образцом 500 м.д. 97% ребаудиозида A. Гликозидную смесь стевиол-гликозидов растворили в 0,0056 M лимоннокислом буфере с pH 3,1. Раствор, содержащий коммерчески доступную подслащивающую композицию, содержащую 97% ребаудиозида A, был получен аналогичным образом. Ознакомительные образцы переворачивали, и дегустационной комиссии из сотрудников Tate & Lyle были представлены образцы двух растворов (при комнатной температуре), и их просили определить, какой раствор слаще и какой раствор им нравится больше при использовании тех же самых инструкций и вопросов, что и в Примере 1. Результаты сладости и предпочтения анализировали при использовании биноминального теста и провели расчет при использовании d' Thurstonian, как в Примере 1.

Таблица 5 Композиции 97% ребаудиозида A и смесь ребаудиозида A и стевиозида
Гликозид	97% ребаудиозида A, мг	Коммерческая смесь, мг/л
Ребаудиозид A	437	374
Стевиозид	1	403
Ребаудиозид B	14	11
Ребаудиозид C	0	0
Ребаудиозид D	0	0
Итого	498	789

Других квалифицированных дегустаторов просили сравнить смесь ребаудиозида B и стевиозида. Гликозидную смесь стевиол-гликозидов растворили в 0,0056 M лимоннокислом буфере с pH 3,1. Раствор, содержащий коммерчески доступную подслащивающую композицию, содержащую 97% ребаудиозида A, был получен аналогичным образом. Дегустационной комиссии из сотрудников Tate & Lyle были представлены образцы двух растворов, и их просили определить, какой раствор слаще и какой раствор им нравится больше при использовании тех же самых инструкций и вопросов, что и в Примере 1.

Таблица 6 Композиции 97% ребаудиозида A и смесь ребаудиозида B и стевиозида
Гликозид	97% ребаудиозида A, мг	Коммерческая смесь, мг/л
Ребаудиозид A	437	4
Стевиозид	1	397
Ребаудиозид B	14	400
Ребаудиозид C	0	0
Ребаудиозид D	0	0
Итого	498	801

Результаты сладости и предпочтения анализировали при использовании биноминального теста и провели расчет при использовании d' Thurstonian, как в Примере 1. Результаты двух дегустационных комиссий и психофизические показатели d' приведены в Таблице 7 и Таблице 8, соответственно.

Таблица 7 Смесь ребаудиозида A и стевиозида по сравнению с 97% ребаудиозидом A
Образец	№ предпочтений	№ слаще
Ребаудиозид A и стевиозид	4	22
97% ребаудиозидом A	37	19
Итого	41	41
Биноминальный p-показатель, двухсторонний	<0,01	0,27
d'- показатель	-1,83	0,13

Результаты показали, что смесь ребаудиозида A и стевиозида была немного более предпочтительной по сравнению с 97% ребаудиозидом A, а сладость была практически одинаковой.

Таблица 8 Смесь ребаудиозида B и стевиозида по сравнению с 97% ребаудиозидом A
Образец	№ предпочтений	№ слаще
Смесь ребаудиозида В и стевиозида	21	30
97% ребаудиозидом A	22	13
Биноминальный p-показатель, двухсторонний	0,38	<0,01
Итого	43	43
d'- показатель	-0,04	0,73

Результаты показали, что смесь ребаудиозида B и стевиозида равно предпочтительна 97% ребаудиозиду A (500 м.д.), и смесь ребаудиозида B и стевиозида слаще чем 97% ребаудиозид A.

Пример 3 - Тест-предпочтение смесей ребаудиозида A или ребаудиозида B

Квалифицированных дегустаторов просили сравнить коммерческую смесь ребаудиозида A и ребаудиозида B с образцом 900 м.д. 97% ребаудиозида A. В парных сравнительных тестах-предпочтениях на сладость приняли участие сотрудники Tate & Lyle. Образцы тестировали при комнатной температуре в двух унциевых чашках типа souffle cups, помеченных ярлычком со случайным трехзначным кодом. Ознакомительные образцы переворачивали из-за остатка послевкусия ребаудиозида A при 900 м.д. Сначала дегустаторы оценивали тестируемый образец, и затем контрольный образец с 900 м.д. ребаудиозида A. Дегустаторы были проинструктированы не тестировать образцы повторно. Дополнительно дегустаторов просили подождать одну минуту между тестированием образцов и проинструктировали провести очистку неба перед, во время и после тестирования дегустаторами при использовании 2% раствора сахарозы, несоленых крекеров и бутилированной воды. Квалифицированных дегустаторов просили определить, какой раствор слаще и какой раствор им нравится больше. Было проведено голосование, и данные были собраны при использовании программного обеспечения SIMS sensory software (Sensory Computer Systems, LLC, Morristown, NJ).

Таблица 9 Композиции 97% ребаудиозида A и смеси ребаудиозида A и ребаудиозида B
Ингредиент	Тест	Контроль
Родниковая вода Hinkley	98,88	98,88
Ребаудиозид A	0,0536	0,0900
Ребаудиозид B	0,0310	0,0000
Фосфорная кислота, 85%	0,0361	0,03361
Итого	100	100

Инструкции для теста на парное сравнение:

(i) Важно, чтобы Вы проводили полоскание перед и между образцами.

(ii) Очистите небо кусочком крекера. Затем прополощите водой с сахаром. Наконец, прополощите простой водой.

(iii) Протестируйте вкус образцов в представленном порядке слева направо.

(iv) Протестируйте по меньшей мере половину первого образца и оцените сладость.

(v) Прополощите водой с сахаром и затем прополощите простой водой.

(vi) Оцените образцы по предпочтению и сладости. Выберите образец, который Вы считаете наиболее предпочтительным, и выберите образец, который Вы считаете наиболее сладким. Если Вы не уверенны или у Вас нет предпочтений, затем выберите любой другой.

(vii) Теперь протестируйте образец слева.

(viii) Подождите одну минуту перед тестированием вкуса следующего образца (запускается 60 секундный таймер в SIMS).

(ix) Теперь протестируйте образец справа.

Вопросы для теста на парное сравнение:

(i) Какой из этих трех образцов Вам понравился больше? Внимательно проверьте 3-значный код перед тем, как ответить. Они могут быть не в том порядке, в котором представлены образцы.

(ii) Какой из этих двух образцов слаще? (запускается 120 секундный таймер в SIMS между тестами). Результаты сладости и предпочтения анализировали при использовании биноминального теста и провели расчет при использовании d' Thurstonian, как в Примере 1.

Результаты двух дегустационных комиссий и психофизические показатели d' приведены в Таблице 11.

Таблица 11 Ребаудиозид A и ребаудиозид B по сравнению с 97% ребаудиозидом A
	Сладость	Двухсторонний p-показатель	d'	Предпочтение	Односторонний p-показатель	d'
Тест 1536 м.д. ребаудиозида A и 310 м.д. ребаудиозида B	23	0,14	0,38	36	<0,01	2,29
Контроль 900 м.д. ребаудиозида A	15	2

Результаты показали, что смесь ребаудиозида A и ребаудиозида B была предпочтительна по сравнению с 97% ребаудиозидом A, сладость была практически одинаковой.

Пример 4 - Тест-предпочтение смесей стевиол-гликозидов

Это исследование проводили для определения предпочтения смесей ребаудиозида A и ребаудиозида B относительно только одного ребаудиозида A по сладости около 10 SEV при использовании измененной сенсорной методологии для снижения недоразумений у дегустаторов при голосовании, и от дегустаторов требуется потреблять около 2 унций каждого образца.

Дегустаторы используют тесты на парное сравнение для определения сладости и предпочтений. Продукты тестировали при пониженной температуре в двух унциевых чашках типа souffle cups, помеченных ярлычком со случайным трехзначным кодом. Образцы разливали непосредственно перед подачей. Квалифицированных дегустаторов просили определить, какой напиток слаще и какой напиток им нравится больше. Для очистки вкусовых рецепторов перед, во время и после тестирования дегустаторам была доступна бутилированная вода, 2% раствор сахарозы и несоленые крекеры.

Сначала дегустаторы первым оценивали тестируемый образец и затем вторым оценивали контрольный образец 900 м.д. ребаудиозида A. Ознакомительные образцы переворачивали из-за остатка послевкусия ребаудиозида A при 900 м.д. Сначала дегустаторы оценивали тестируемый образец и затем контрольный образец с 900 м.д. ребаудиозида A. Дегустаторы были проинструктированы не тестировать образцы повторно. Дегустаторы были предупреждены, что порядок образцов при голосовании отличается от порядка представления образцов. Дегустаторов проинструктировали отметить, приклеив листочек бумаги сзади чашки с образцом, предпочтенный ими образец, и эти результаты сравнивали с результатами голосования. Дегустаторов проинструктировали подождать одну минуту между тестированием образцов и две минуты между тестами, также дегустаторов проинструктировали провести очистку неба перед, во время и после тестирования дегустаторами при использовании 2% раствора сахарозы, несоленых крекеров и воды.

Тестируемые продукты представляли собой безалкогольные газированные напитки лимон-лайм, содержащие одну часть сиропа и четыре части газированной воды, где сиропы имели композиции, приведенные в Таблице 12 ниже.

Таблица 12 Композиции сиропа
Ингредиент	Тест 1	Контроль
Родниковая вода Hinkley	98,20	98,18
Бензоат натрия	0,10	0,10
Ребаудиозид A	0,268	0,450
Ребаудиозид B	0,155	0,000
Дигидрат цитрата натрия	0,15	0,15
Безводная лимонная кислота	0,63	0,63
Натуральный ароматизатор лимон Givaudan #881337	0,50	0,50
Итого	100	100

Результаты анализировали при использовании биноминального теста при альфа риске 0,05 при одностороннем тесте на предпочтения и при двухстороннем тесте на сладость. Результаты теста приведены в Таблице 13 ниже.

Таблица 13 1 тестируемый напиток по сравнению с контрольным напитком
	Сладость	Двухсторонний p-показатель	d'	Предпочтение	Односторонний p-показатель	d'
Тест 1536 м.д. ребаудиозида A и 310 м.д. ребаудиозида B	20	0,76	-0,04	26	0,03	0,48
Контроль 900 м.д. ребаудиозида A	21	15

Тесты показали, что оба тестируемых безалкогольных газированных напитка лимон-лайм незначительно отличаются по сладости от безалкогольного газированного напитка лимон-лайм, подслащенного ребаудиозидом A, и они имели значительное предпочтение по сравнению с безалкогольным газированным напитком лимон-лайм, подслащенным ребаудиозидом A.

Анализ показал, что смесь ребаудиозида A и ребаудиозида B должна быть более приятной по сравнению с только одним ребаудиозидом A, в частности при высоких уровнях сладости.

Пример 5 - Растворимость

Для определения растворимости ребаудиозида A и ребаудиозида B в конкретных растворах получили четыре маточных раствора. 10X концентрированный маточный раствор буфера лимонная кислота/цитрат натрия с pH 3 получили растворением 0,9 г безводной лимонной кислоты и 0,26 г дигидрата цитрата натрия в воде с получением 100 мл буфера (0,047 M лимонной кислоты + 0,0088 M цитрат натрия). Раствор 2500 м.д. (номинальный) ребаудиозида A получали растворением 0,125 г GLG RA 97 с получением 50 мл раствора. Раствор 2500 м.д. (номинальный) стевиозида получали растворением 0,125 г GLG STV 97 с получением 50 мл раствора. Раствор 1000 м.д. (номинальный) ребаудиозида B получали растворением 56 мл раствора, анализированного при 1790 м.д. с получением 100 мл раствора.

Эти растворы смешивали, как 1 мл общего количества при использовании прокапывания объемов микропипеткой в микролитрах в 1,5 мл микроцентрифужные пробирки, как приведено в Таблице 14. Полученные в результаты номинальные концентрации каждого из трех гликозидов в м.д. также приведены в Таблице 14.

Таблица 14 Краткое описание тестируемых растворов
	Микролитры добавленного маточного раствора	М.д. (номинальный)
	2500 м.д.	2500 м.д.	1000 м.д.
Про- бирка	10X лимонной кислоты	Вода	Ребаудиозид A	Стевиозид	Ребаудиозид B	Ребаудиозид A	Стевиозид	Ребаудиозид B
1	100	200	0	200	500	0	500	500
2	100	250	0	150	500	0	375	500
3	100	300	0	100	500	0	250	500
4	100	350	0	50	500	0	125	500
5	100	400	0	0	500	0	0	500
6	100	150	50	200	500	125	500	500
7	100	200	50	150	500	125	375	500
8	100	250	50	100	500	125	250	500
9	100	300	50	50	500	125	125	500
10	100	350	50	0	500	125	0	500
11	100	100	100	200	500	250	500	500
12	100	150	100	150	500	250	375	500
13	100	200	100	100	500	250	250	500
14	100	250	100	50	500	250	125	500
15	100	300	100	0	500	250	0	500
16	100	50	150	200	500	375	500	500
17	100	100	150	150	500	375	375	500
18	100	150	150	100	500	375	250	500
19	100	200	150	50	500	375	125	500
20	100	250	150	0	500	375	0	500
21	100	0	200	200	500	500	500	500

22	100	50	200	150	500	500	375	500
23	100	100	200	100	500	500	250	500
24	100	150	200	50	500	500	125	500
25	100	200	200	0	500	500	0	500

Непосредственно после смешивания все растворы были прозрачными (против мутных) и не наблюдалось осаждения. Затем пробирки отстаивали в покое при комнатной температуре в лаборатории (~25°C) в течение около 100 часов, в течение этого времени у всех появился осадок. После отстоя в течение пяти дней (~100 часов) пробирки центрифугировали в настольной микроцентрифуге для гранулирования осадка. Образцы прозрачного супернатанта собирали в пробирки и проводили анализ на гликозиды при использовании градиентного метода обращенно-фазовой высокоинтенсивной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ детекцией (Waters 2695 Separations Module equipped with a Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector или эквивалентного устройства), результаты приведены в Таблице 15. Условия ВЭЖХ были следующими:

колонка - Waters Atlantis T3 4,6×250 мм; 4µ с защитным картриджем Phenomenex Security Guard AQ C 18,4×3,0 мм; буфер - 0,0284% ацетат аммония; 0,0116% уксусная кислота;

скорость потока - 1,0 мл/мин;

детектор - УФ детектор, анализ при 203 µм;

объем вводимой пробы - 20 µл, или как желательно, чтобы соответствовать стандартной концентрации; и

температура колонки - 40°C.

Таблица 15 Градиентный метод ВЭЖХ: Мобильная фаза: Ацетонитрил/Градиент буфера
Время (минуты)	% вода	% буфер	Кривая воды
0	70	30	Нет данных (na)
15	65	35	6
20	65	35	6
25	20	80	6
30	20	80	1
35	70	30	1

Данные, собранные по супернатанту, полученные при использовании ВЭЖХ, обрабатывали при использовании программного обеспечения DESIGN EXPERT 8. Кратко, данные ввели в программу, как «фактор» («factor») данные, как 2 фактор - 5 уровень плана факторного эксперимента, как номинальные данные, которые затем переводили в числовые данные и заменяли фактическими результатами ВЭЖХ. Затем программное обеспечение выбрало модель, которая дала прогноз концентрации (растворимости) ребаудиозида B, как функции концентрации ребаудиозида A и стевиозида в супернатанте. Также программное обеспечение рассчитало множество статистических факторов, которые указывают на значимость параметров модели. В этом случае моделирование указывает на то, что модели с или без малых параметров взаимодействия ребаудиозид A - стевиозид были примерно одинаково статистически достоверны, поэтому авторы настоящего изобретения для дальнейшей обработки выбрали более простую (отсутствие взаимозависимости). Дисперсионный анализ (ANOVA) для этой модели, полученный при использовании этой программы, приведен в Таблице 16.

Таблица 16 Результаты ANOVA - Design Expert
Переменная 1		Ребаудиозид B
ANOVA для поверхности отклика линейной модели
Таблица дисперсионного анализа [Частичная сумма квадратов - тип III]
Источник	Сумма квадратов	df	Среднее квадрата	Показатель F	P-показатель Prob>F
Модель	61253,89	2	30626,95	443,84	<0,0001
A-ребаудиозид A	61056,01	1	61056,01	884,81	<0,0001
B-стевиозид	363,55	1	363,55	5,27	0,0316
Остаточный	1518,11	22	69,00
Скор. показатель итого	62772,00	24

Станд. отклонение	8,31	Коэффициент детерминации R-квадрата	0,9758
Среднее	301,80	Скорректированный коэффициент детерминации R-квадрата	0,9736
C.V.%	2,75	Прогнозируемый коэффициент детерминации R-квадрата	0,9691
PRESS	1939,25	Приемлемая точность	52,665
Фактор	Оценка коэффициента	df	Стандартная ошибка	95% CI Low	95% CI High	VIF
Intercept	297,61	1	1,67	294,15	301,08

A-ребаудиозид A	78,09	1	2,63	72,65	83,54	1,00
B-стевиозид	-5,66	1	2,47	-10,78	-0,55	1,00
Конечное уравнение с учетом закодированных факторов:
	Ребаудиозид B =+297,61 +78,09 *A -5,66 *B
Конечное уравнение с учетом фактических факторов:
	Ребаудиозид B = +225,17918 +0,31238 *Ребаудиозид A -0,02264 *Стевиозид

В Таблице 17 приведены экспериментально установленные композиции супернатантов каждого из тестируемых растворов.

Таблица 17 Данные анализа ВЭЖХ сырьевого материала
Концентрации гликозидов в м.д., полученных при использовании ВЭЖХ
Пробирка	Ребаудиозид A	Стевиозид	Ребаудиозид B	Стевиолбиозид
1	38,8	478	234	4,39
2	38,5	351	231	3,61
3	37,6	241	229	2,28
4	36,2	112	233	1,59
5	34,9	0	226	0,73
6	154	480	265	5,03
7	154	360	255	3,35
8	151	241	284	2,86
9	149	121	273	2,03
10	146	0	271	0,77
11	274	476	300	5,1
12	273	363	293	4,51
13	269	248	305	3,38
14	260	119	286	1,49
15	260	0	308	0
16	375	473	336	4,87
17	381	357	344	3,78
18	372	245	340	2,61

19	370	125	342	2
20	365	0	342	0
21	487	475	361	4,74
22	477	356	363	4,35
23	481	245	358	2,72
24	489	120	375	1,25
25	484	0	391	0

Ребаудиозид B, использованный в этом исследовании, содержал около 6-7% ребаудиозида A, что объясняет его обнаружение в пробирках 1-5. Также из данных очевидно, что концентрации стевиозида и ребаудиозида A в образцах согласуются с убеждением, что эти соединения полностью растворимы в буфере при такой концентрации, то есть только ребаудиозид B осаждался в эксперименте. Данные, приведенные в Таблице 17, ввели в DESIGN EXPERT 8 и сгенерировали двухфакторную модель линейной регрессии, которая изложена в Уравнении 1 ниже.

ConcB = 225,18+0,312*concA-0,02264*concSs (Ур. 1)

Уравнение показало, что концентрация B в супернатанте (concB, то есть предел растворимости) зависит от обоих, и от концентрации ребаудиозида A (concA) и от концентрации стевиозида (concSs). Растворимость ребаудиозида B существенно повышалась при повышении концентрации ребаудиозида A, и наблюдалось небольшое снижение при повышении концентрации стевиозида.

Линейно-линейная модель согласно Уравнением 1 представлена на графике в виде плоскости на 3-D графике, как показано на Фиг. 1. Плоскость представляет максимальную растворимость ребаудиозида B в лимоннокислом буфере (pH 3,1), варьирует от низкого 225 м.д. при 478 м.д. стевиозидов (согласно модели) до около 380 м.д. при 480 м.д. ребаудиозида A.

Используя пределы растворимости (Уравнение 1), и при условии, что сумма масс фракций должна добавляться до 1, позволяет получить уравнение, которое относится к массе фракции ребаудиозида B (X_B) при пределе растворимости к массе фракции ребаудиозида A (X_A), общая концентрация ребаудиозидов (ребаудиозид B + ребаудиозид A + стевиозид = C_tot), и коэффициенты (α₀ = 225,18 м.д., α₁ = 0,312, α₂ = -0,0226) уравнения регрессии (Уравнение 2, ниже).

(Ур.2)

Считается, что Уравнение 2, следовательно, определяет край области стабильной растворимости в растворе тройных смесей из ребаудиозида A, стевиозида и ребаудиозида B. Следовательно, размер стабильной области зависит от общей концентрации (C_tot).

Это исследование ясно показало, что растворимость ребаудиозида B в лимоннокислом буфере при pH 3 ограничена, хотя ребаудиозид B имеет высокую растворимость в растворах с нейтральным pH. Дополнительно, присутствие ребаудиозида A повышает растворимость ребаудиозида B, но присутствие стевиозида немного снижает растворимость ребаудиозида B. Эту информацию о растворимости следует принимать во внимание при попытках составления композиций растворов ребаудиозида B и смесей ребаудиозидов.

Пример 6 - Оценка более сладкого вкуса, как функции содержание ребаудиозида B

Для количественной оценки вкусоароматических характеристик и интенсивности различных уровней ребаудиозида B с добавлением ребаудиозида A (который имел 97% чистоты и содержал 0,62% ребаудиозида B) привлекли квалифицированных дегустаторов. В частности, дегустаторы оценивали подсластители в растворах при 900 м.д. ребаудиозида A + ребаудиозида B, где количество добавленного ребаудиозида B было, таким, что общее содержание ребаудиозида B составило 0,6%, 3,6%, 6,5%, 11,4%, 22,3%, 37,5%, и 52%. В качестве контроля использовали 8% раствор сахарозы. Растворы получали в воде с нейтральным pH. Другие высокоинтенсивные подсластители, включенные в тестирование, представляли собой аспартам в количестве 500 м.д., ASK в количестве 750 м.д., сахарозу в количестве 250 м.д. и стевия в количестве 500 м.д.

Перед проведением тестирования десять дегустаторов были тщательно обучены использованию стандартного словаря для описания внешнего вида, аромата, вкуса и текстуры широкого ряда продуктов для оценки образцов на сладость, горечь, привкус, вкусоаромат химических или искусственных подсластителей, аниса и обволакивание ротовой полости. Каждую из этих характеристик оценивали на первом или втором глотке и послевкусие. Тестирование начинали с сессии по определению дегустаторов, во время которой они тестировали образцы и обсуждали вкусовые характеристики. Также они определяли и обсуждали «сладость», «горечь» и «анис». Определения терминов по вкусоаромату приведены в Таблице 18 ниже.

Таблица 18 Определения
Термин	Определение
Общий вкус	Общая интенсивность всех ароматов или всех вкусов продукта.
Сладость	Один из четырех основных вкусов, как правило, воспринимаемый кончиком языка; традиционный для сахарозы и других сахаров.
Общий привкус	Все вкусы и ароматы образца, не являющиеся сладкими, и которые могут рассматриваться как несвойственные для образца.
Искусственный/химический подсластитель	Вкус, напоминающий искусственные или химические подсластители, которые не должны присутствовать в образце.
Истинная горечь	Один из основных вкусов, как правило, ощущаемый спинкой языка; традиционный для кофеина и хинина.
Анис	Общий вкус, напоминающий таковой аниса или лакрицы.
Обволакивание ротовой полости	Ощущение любого типа, обволакивающее мягкие ткани ротовой полости

На второй и третий день тестирования дегустаторы оценивали образцы по различным характеристикам, оценку проводили при использовании шкалы от полного отсутствия до очень сильной степени выраженности, которая включает все ингредиенты пищевых продуктов, не только подсластители. Продукты и растворы приведены в Таблице 19 и использованы в качестве ссылочных показателей для сравнительной оценки дегустаторами.

Таблица 19 Ссылочные показатели вкуса и аромата
Вкус и аромат	Оценка	Эталон
Анис	NR (нет данных)	Анис на блоттере
Сладкий	5,0	5% сахарозы в воде
10,0	10% сахарозы в воде
Горький	2,0	0,025% кофеин в воде
5,0	0,04% кофеин в воде

За сессию оценивали восемь образцов. Между каждым из образцов делали 7-минутный перерыв на отдых и 15-минутный перерыв после оценки первых 4 образцов. Каждый образец получал две оценки (то есть повторы) дегустаторов, следовательно, всего было дано 20 оценок для каждого продукта. Во время сбора данных дегустаторы были проинструктированы указывать интенсивность каждой сенсорной характеристики постановкой вертикальной чертой на 15 см линейных шкалах. Порядок подачи был сбалансирован, продукты находились приблизительно равное время в каждой возможной позиции. Для очистки неба между образцами в комнате ожидания были представлены в доступе питьевая вода комнатной температуры Alhambra, несоленые крекеры на соде и сельдерей.

Оценочные черты на линейных шкалах переводят в цифры от 1 до 15 при использовании SIMS, компьютеризированной системы сбора сенсорных данных. Для каждой сенсорной характеристики рассчитывали среднее интенсивности. В соответствующих случаях использовали дисперсионный анализ и многоранговый критерий Дункана (Duncan's Multiple Range Test) для определения статистически значимых различий для каждой характеристики образцов. Когда взаимодействия дегустатор-продукт были значительными, для расчета показателей F продукта использовали средний квадрат взаимодействия вместо среднего квадрата ошибки. Результаты приведены в Таблицах 20 и 21 ниже.

Таблица 20 Оценки маскировки горечи, полученные при использовании количественного описательного метода n=18 (9 дегустаторов, каждый по 2 оценки)
	Сахароза	0,6% ребаудиозид B	3,6% ребаудиозид B	6,5% ребаудиозид B	11,4% ребаудиозид B	22,3% ребаудиозид B	37,5% ребаудиозид B	52% ребаудиозид B	P- показатель	Уровень достоверности
Общий вкус
Первый глоток	d 8,67	abc 9,94	a 10,16	ab 10,04	bc 9,69	bc 9,61	abc 9,76	c 9,47	0,0008	**
Второй глоток	c 7,86	ab 8,62	a 8,79	ab 8,56	bc 8,28	c 8,07	c 8,00	c 7,97	0,0047	**
Послевкусие	d 4,32	ab 5,96	a 6,34	bc 5,77	bc 5,59	bc 5,80	c 5,45	bc 5,63	0,0001	**
Сладость
Первый глоток	d 8,06	abc 9,15	ab 9,34	a 9,56	abc 9,13	bc 9,01	abc 9,21	c 8,80	0,0057	**

Второй глоток	7,43	7,27	7,66	7,36	7,40	6,92	6,91	7,02	0,2088	NSD
Послевкусие	c 3,92	bc 4,44	a 5,15	ab 4,70	ab 4,58	ab 5,01	ab 4,61	ab 4,75	0,0184	**
Общий привкус
Первый глоток	e 0,89	ab 7,69	a 7,79	abc 7,34	cd 6,83	cd 6,72	bcd 6,98	d 6,48	0,0001	**
Второй глоток	c 0,49	a 7,01	a 7,02	a 6,88	b 6,09	b 5,67	b 5,83	b 5,68	0,0001	**
Искусственный/ химический подсластитель
Первый глоток	D 0,59	a 7,74	ab 7,45	ab 7,37	c 6,67	c 6,54	bc 6,87	c 6,52	0,0001	**

Второй глоток	c 0,41	a 6,79	a 6,88	a 6,71	b 5,73	b 5,31	b 5,48	b 5,64	0,0001	**
Послевкусие	f 0,12	ab 5,00	a 5,22	bc 4,66	cd 4,39	de 3,99	e 3,79	de 3,91	0,0001	**
- Дисперсионный анализ уровней достоверности: *=90%, **=95% - NSD: Незначительное отличие от уровней достоверности 905 или выше. - Средние значения различных индексов значительно отличаются при 90% уровне достоверности (многоранговый критерий Дункана (Duncan's Multiple Range Test)).

Таблица 21 Оценки маскировки горечи, полученные при использовании количественного описательного метода (продолжение) n=18 (9 дегустаторов, каждый по 2 оценки)
	Сахароза	0,6% ребаудиозид B	3,6% ребаудиозид B	6,5% ребаудиозид B	11,4% ребаудиозид B	22,3% ребаудиозид B	37,5% ребаудиозид B	52% ребаудиозид B	P- показатель	Уровень достоверности
Истинная горечь
Первый глоток	e 0,29	a 3,78	ab 3,63	abc 3,28	ab 3,37	cd 2,80	bc 3?11	d 2,49	0,0001	**
Второй глоток	d 0,24	a 3,89	ab 3,71	ab 3,46	b 3,36	c 2,81	c 2,62	c 2,74	0,0001	**
Послевкусие	e 0,15	a 3,39	a 3,45	b 2,78	bc 2,57	bcd 2,26	cd 2,08	d 1,89	0,0001	**
Анис

Первый глоток	c 0,52	ab 1,73	ab 1,73	ab 1,45	a 1,79	ab 1,59	ab 1,58	b 1,34	0,0001	**
Второй глоток	b 0,41	a 1,53	a 1,64	a 1,36	a 1,62	a 1,34	a 1,36	a 1,29	0,0001	**
Послевкусие	d 0,13	a 1,42	a 1,46	abc 1,27	ab 1,34	c 0,98	abc 1,12	bc 1,03	0,0001	**
Обволакивание ротовой полости
Первый глоток	c 0,76	b 1,47	b 1,48	b 1,40	a 1,74	b 1,49	b 1,49	b 1,37	0,0001	**
Второй глоток	b 0,69	a 1,48	a 1,46	a 1,29	a 1,56	a 1,42	a 1,40	a 1,42	0,0001	**
- Дисперсионный анализ уровней достоверности: *=90%, **=95% - NSD: Незначительное отличие от уровней достоверности 905 или выше. - Средние значения различных индексов значительно отличаются при 90% уровне достоверности (многоранговый критерий Дункана (Duncan's Multiple Range Test))

На Фиг. 3 показана магнитуда средних ответов дегустаторов по каждой характеристике вкуса и аромата, для которой статистически значимое различие было измерено, как функция содержания ребаудиозида B. Поскольку используемая шкала включала «всю совокупность», магнитуда различий между 97% раствором ребаудиозида A и повышением уровней ребаудиозида B не была такой большой, как при других неофициальных тестах. Например, несколько неофициальных тестеров посчитали, что добавление около 20% ребаудиозида A снижает горечь на около 80%, в то время как результаты, полученные при участии указанной выше комиссии из квалифицированных дегустаторов, посчитали, что добавление около 20% ребаудиозида A снизило горечь на около 30%.

Также сравнивали вкусовые характеристики образцов. Характеристика указывается, как «самая высокая» или как «самая низкая», если характеристика образца значительно выше или ниже таковой всех остальных образцов. Характеристика указывается, как «высокая» или как «низкая», если характеристика образца самая высокая или самая низкая относительно других образцов, но не значительно выше или ниже таковой всех остальных образцов. Приведенные характеристики имели значимость на уровне 95% достоверности.

По сравнению с образцами высокоинтенсивного подсластителя сахароза имела самые низкие следующие характеристики: общий вкус (хотя не значительно на втором глотке по сравнению с 22,3%, 37,5% и 52% ребаудиозида B); сладость на первом глотке и послевкусие (хотя незначительно ниже, чем горечь контроля); общий привкус; искусственный/химический подсластитель; истинная горечь; анис; и обволакивание ротовой полости.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью 97% ребаудиозид с 0,6% ребаудиозида B имел следующие высокие характеристики: общий привкус на втором глотке; искусственный/химический подсластитель на первом и втором глотке; истинная горечь; и анис в послевкусии.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 3,6% ребаудиозида B имел следующие высокие характеристики: общий вкус; сладость в послевкусии; общий привкус; искусственный/химический подсластитель на втором глотке и в послевкусии; истинная горечь в послевкусии; и анис в послевкусии.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 6,5% ребаудиозида B имел следующие высокие характеристики: сладость в первом глотке; общий привкус на втором глотке; и искусственный/химический подсластитель на втором глотке.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 11,4% ребаудиозида B имел низкое общий привкус на втором глотке и искусственный/химический подсластитель на первом и втором глотках, и высокий анис на первом глотке, и обволакивание во рту на первом глотке.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 22,3% ребаудиозида B имел следующие низкие характеристики: общий вкус на втором глотке; общий привкус на втором глотке; искусственный/химический подсластитель на первом и втором глотках; истинная горечь на втором глотке; и анис в послевкусии.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 37,5% ребаудиозида B имел следующие низкие характеристики: общий вкус на втором глотке и в послевкусии; общий привкус на втором глотке; искусственный/химический подсластитель на втором глотке и в послевкусии; и истинную горечь на втором глотке.

Среди образцов подсластителей с высокой интенсивностью образец с добавлением 52% ребаудиозида B имел следующие низкие характеристики: общий вкус на первом и втором глотках; сладость на первом глотке; общий привкус на первом и втором глотках; искусственный/химический подсластитель на первом и втором глотках; истинная горечь; и анис на первом глотке.

Результаты указывают на то, что добавление 3,6% ребаудиозида B приводит к ухудшению вкусоароматических характеристик, а добавление 6,5% ребаудиозида B имело малое влияние на общий привкус и искусственный/химический подсластитель. Добавление больших количеств ребаудиозида B приводит к тому, что образцы оценивались гораздо ближе к сахарозе в подавляющем большинстве характеристик со снижением привкуса, частично горечи. С учетом вышеуказанного, результаты показали, что повышение содержания ребаудиозида B выше около 20% оказывает слабое дополнительное влияние на нежелательные вкусовые характеристики. Неожиданно остаточная сладость осталась в достаточной степени неизменной за счет содержания ребаудиозида B, что противоречит сделанным ранее докладам в отношении ребаудиозида B, который имел от половины до двух третей от сладости ребаудиозида A. Хотя сладость и общий вкус растворов интенсивных подсластителей были аналогичны таковой у 8% раствора сахарозы и аналогичны друг другу, вкус искусственного/химического подсластителя был значительно более высоким, чем у раствора сахарозы, с большим распространением среди образцов высокоинтенсивного подсластителя, что указывает на то, что концентрация ребаудиозида B оказала значительное влияние на эти вкусы.

Предпочтительно, настоящее изобретение может использоваться для получения композиции высокоинтенсивных подсластителей, которые могут быть использованы для обеспечения «полной» сладости, необходимой во множестве применений, что, как правило, не может быть достигнуто при использовании только одного ребаудиозида A из-за его горечи при концентрациях выше чем около 200 м.д. В частности, поскольку настоящее изобретение позволяет получить высокоинтенсивные подсластители, которые могут добавляться в потребительские товары, содержащие от около 800 до около 100 м.д. ребаудиозидов без приобретения съедобным продуктом неприемлемых уровней горечи, композиции подсластителей по изобретению могут быть использованы для обеспечения полной сладости, требуемой у многих съедобных продуктов (пищевые применения).

1. Экстракт стевии, содержащий ребаудиозид В в концентрации, составляющей 10-90 вес.% экстракта стевии.

2. Экстракт стевии по п. 1, в котором концентрация ребаудиозида В составляет 20-60 вес.% экстракта стевии.

3. Экстракт стевии по п. 1, в котором концентрация ребаудиозида В составляет 15-30 вес.% экстракта стевии.

4. Экстракт стевии по п. 1, в котором концентрация ребаудиозида В составляет 20-25 вес.% экстракта стевии.

5. Экстракт стевии по любому из пп. 1-4, в котором присутствует ребаудиозид А, причем концентрация ребаудиозида А составляет 20-90 вес.% экстракта стевии.

6. Экстракт стевии по п. 5, в котором концентрация ребаудиозида А составляет 40-80 вес.%.

7. Подслащивающая композиция, содержащая соединения сладких стевиол-гликозидов, причем соединения сладких стевиол-гликозидов включают ребаудиозид В в концентрации, составляющей 10-90 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

8. Подслащивающая композиция по п. 7, в которой концентрация ребаудиозида В составляет 20-60 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

9. Подслащивающая композиция по п. 7, в которой концентрация ребаудиозида В составляет 15-30 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

10. Подслащивающая композиция по п. 7, в которой концентрация ребаудиозида В составляет 20-25 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

11. Подслащивающая композиция по любому из пп. 7-10, в которой присутствует ребаудиозид А, причем концентрация ребаудиозида А составляет 20-90 вес.% от общего веса сладких соединений стевиол-гликозидов в подслащивающей композиции.

12. Подслащивающая композиция по п. 11, в которой концентрация ребаудиозида А составляет 40-80 вес.%.

13. Съедобный продукт, содержащий подслащивающую композицию по любому из пп. 7-12.

14. Съедобный продукт по п. 13, в котором общая концентрация сладких стевиол-гликозидов ниже пороговых концентраций сладости.

15. Съедобный продукт по п. 13, в котором общая концентрация сладких стевиол-гликозидов составляет 50-2000 м.д. (миллионных долей), а общая концентрация ребаудиозида В составляет по меньшей мере 20 м.д.

16. Съедобный продукт по п. 15, в котором общая концентрация ребаудиозида В составляет по меньшей мере от 50 м.д., но не более чем 500 м.д.

17. Съедобный продукт по п. 15, в котором общая концентрация ребаудиозида В составляет по меньшей мере от 100 м.д., но не более чем 400 м.д.

18. Съедобный продукт по п. 15, в котором общая концентрация ребаудиозида В составляет по меньшей мере от 200 м.д., но не более чем 300 м.д.

19. Съедобный продукт по любому из пп. 13-18, выбранный из группы, состоящей из напитков из группы, состоящей из газированных безалкогольных напитков, порошкообразных безалкогольных напитков, готовых к употреблению чайных напитков, спортивных напитков, молочных напитков, напитков, содержащих йогурт, алкогольных напитков, энергетических напитков, ароматизированных вод, витаминных напитков, фруктовых напитков и фруктовых соков; пищевых продуктов, выбранных из группы, состоящей из выпеченных изделий, супов, соусов, прошедших технологическую обработку мясных продуктов, консервированных фруктов, консервированных овощей, молочных продуктов, замороженных кондитерских изделий, кондитерских изделий, жевательной резинки, кексов, печенья, батончиков и других сладких выпеченных изделий, готовых каш, злаковых батончиков, йогурта, энергетических батончиков, батончиков гранола, твердой карамели, желейных конфет, шоколадных конфет и других сладких кондитерских изделий; средств по уходу за полостью рта, выбираемых из группы, состоящей из зубной пасты, зубного эликсира, ополаскивателя для полости рта; табачных изделий, выбираемых из группы, состоящей из нюхательного табака и жевательного табака; фармацевтического средства, выбираемого из группы, состоящей из таблеток, лекарственных леденцов и суспензий; нутрицевтических продуктов, выбираемых из группы, состоящей из добавок и витаминов.

20. Способ подслащивания съедобного продукта, включающий введение эффективного количества подслащивающей композиции по любому из пп. 7-12 в съедобный продукт.