Способ диагностики низкоинвазивных тремадозов гепато-билиарной системы


 


Владельцы патента RU 2582946:

Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Казанская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики трематодозов. При лабораторном исследовании к 2 г фекалий добавляют 10 мл 5%-ной уксусной кислоты. Взвесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 1,5 мин. Полученный осадок уменьшают наполовину механически путем сливания верхней рыхлой половины. К оставшемуся осадку добавляют 5 мл 1%-ной уксусной кислоты и 4 мл диэтилового эфира, который повторно центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин. Полученный в результате осадок исследуют. Заявленный способ высокоэффективен для первичной диагностики низкоинвазивных печеночных трематодозов, а также для мониторинга паразитологической излеченности. 6 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано при лабораторной диагностике гельминтозов желудочно-кишечного тракта, в частности печеночных трематодозов.

Трематодозы гепато-билиарной системы человека - группа природно-очаговых биогельминтозов, антропозоонозов, вызываемых трематодами, зонами облигатного паразитирования которых у человека являются внутрипеченочные желчные протоки, внепеченочные желчевыводящие пути и протоки поджелудочной железы.

Из практики медицины известен метод уксусно-эфирной седиментации (УЭС), который используется в качестве специального метода для диагностики трематодозов (включая описторхоз), в том числе при инвазиях низкой степени (Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. Методические указания. МУК 4.2.735-99. Минздрав России. М., 2003. Стр. 13-15).

Суть метода УЭС заключается в том, что смесь эмульгированной при помощи раствора уксусной кислоты взвеси фекалий и диэтилового эфира в соотношении 3:2 подвергается центрифугированию с целью послойного осаждения (седиментации). Осадок после удаления надосадочной жидкости и "каловой пробки" содержит яйца и личинки гельминтов, цисты и ооцисты простейших, а также незначительное количество частиц фекалий с удельным весом более 1, т.е. тяжелее воды. При использовании метода УЭС возможно выявление яиц гельминтов при их низкой концентрации в биоматериале (1 и более яиц в 1 г фекалий). Однако широко распространены гельминтозы, при которых концентрация яиц в фекалиях ниже пороговой для этого метода (низкоинвазивные терматодозы гепато-билиарной системы). Кроме того, наличие артефактов затрудняет поиск и визуализацию мелких яиц трематод. Попытки увеличить объем исследуемых фекалий более стандартного в УЭС (более 1 г) приводят к увеличению объема получаемого осадка, увеличению в осадке содержания артефактов, невозможности получить тонкий и прозрачный мазок.

В качестве прототипа принят известный химико-седиментационный метод (ХСМ) исследования фекалий, который является наиболее близким к предлагаемому (Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. Методические указания. МУК 4.2.735-99. Минздрав России. М., 2003. Стр. 15-16). Химико-седиментационный метод имеет преимущество перед аналоговым (УЭС) в том, что позволяет уменьшить количество артефактов в полученных мазках с помощью дополнительной обработки осадка химическими реактивами. Суть ХСМ заключается в том, что этапу, принципиально аналогичному УЭС, предшествует дополнительный этап флотационного осаждения, заключающийся в том, что эмульгированная при помощи уксусной кислоты взвесь фекалий подвергается центрифугированию в смеси с насыщенным раствором азотно-кислого натрия с удельным весом 1,15. После центрифугирования удаляется надосадочная жидкость, полученный осадок повторно центрифугируется в смеси с раствором уксусной кислоты и диэтилового эфира (аналогично УЭС). По чувствительности он не превосходит УЭС, т.к. количество исследуемых фекалий составляет 0,5-1 г, но

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности диагностики низкоинвазивных трематодозов гепато-билиарной системы.

Поставленная в изобретении цель достигается тем, что к 2 г. фекалий добавляют 10 мл 5%-ной уксусной кислоты, взвесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 1,5 мин, сливают надосадочную жидкость вместе с верхней половиной осадка, к оставшейся половине осадка добавляют 5 мл 1%-ной уксусной кислоты и 4 мл диэтилового эфира, повторно центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин, полученный в результате осадок исследуют.

Предлагаемым способом достигается следующий положительный эффект:

1. Чувствительность метода повышается, т.к. количество исследуемых фекалий в 2-4 раза больше, чем в прототипе.

2. Дополнительный этап первичной седиментации позволяет механически (путем сливания) уменьшить объем осадка наполовину и более, дополнительно эмульгировать взвесь фекалий и обесцветить ее. Полученные мазки более тонкие, обесцвеченные, прозрачные, облегчается визуализация мелких (менее 20 мкм), с тонкой оболочкой, слабо окрашенных яиц.

3. По сравнению с прототипом используются более дешевые реактивы (уксусная кислота вместо азотно-кислого натрия).

4. Уменьшается трудоемкость (отсутствует этап приготовления рабочего раствора азотно-кислого натрия с заданным удельным весом, т.е. порционное растворение реактива в горячей воде с постоянным нагреванием на плите и постоянным помешиванием до полного растворения, а также необходимость регулярно контролировать ареометром постепенно снижающийся удельный вес приготовленного рабочего раствора).

5. Сокращается время проведения диагностики (1 центрифугирование в течение 1,5 мин вместо 5 мин).

Таким образом, предлагаемый метод является более эффективным по сравнению с прототипом.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:

1 этап: В одноразовый градуированный до 12 мл пластиковый флакон наливают 10 мл 5%-ной уксусной кислоты, помещают 2 г фекалий, доводя уровень до метки 12 мл, размешивают стеклянной палочкой. Интенсивно встряхивают до образования однородной взвеси. Дают постоять 2 мин. Профильтровывают взвесь через двойной слой марли в градуированную центрифужную пробирку.

2 этап: Центрифугируют 1,5 мин при 1500 об/мин. Сливают надосадочную жидкость.

Затем удаляют верхнюю рыхлую сливаемую часть осадка переворачиванием пробирки так, чтобы осадок уменьшился наполовину. В случае образования осадка однородной плотности верхнюю половину осадка удаляют с помощью стеклянной палочки. Яйца гельминтов, цисты и ооцисты простейших, будучи тяжелее воды, при центифугировании остаются в нижней части осадка.

3 этап: К оставшейся части осадка (около 1 мл) добавляют 5 мл 1%-ной уксусной кислоты, размешивают, добавляют 4 мл диэтилового эфира. Закрывают пробкой. Интенсивно встряхивают пробирку, держа ее в горизонтальном положении, в течение 30 сек. Повторно центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин. При этом образуются 3 слоя: верхний - "каловая пробка", средний - надосадочная жидкость с эфиром, нижний - осадок. Далее осторожно отделяют "каловую пробку" от стенок пробирки стеклянной палочкой, затем сливают надосадочную жидкость вместе с эфиром и "каловой пробкой". К оставшемуся осадку добавляют каплю 50%-ного глицерина, размешивают, равномерно распределяют на предметном стекле. Готовый мазок микроскопируют.

Предлагаемый метод используется для первичной диагностики гельминтозов и протозоозов желудочно-кишечного тракта в клинической лаборатории "Лабмед" с 2008 года по настоящее время и зарекомендовал себя как надежный и в то же время достаточно дешевый и нетрудоемкий способ, особенно в диагностически сложных случаях: при подозрении на низкоинвазивные состояния, микст-инвазии, неполную паразитологическую излеченность.

Заявленные преимущества предлагаемого метода при массовом и продолжительном практическом использовании позволили придти к следующим результатам:

1. Чувствительность предлагаемого метода выше, поэтому выявляемость низкоинвазивных трематодозов становится лучше. Повышение выявляемости трематодозов гепато-билиарной системы у обследованного контингента приводит к выводу о распространенности инвазий низкой и крайне низкой степени, так как на одного инвазированного со средней и высокой степенью инвазии приходится не менее 20-30 инвазированных низкой степени.

Сравнительная чувствительность предлагаемого и аналогового (УЭС) методов в отношении трематодозов гепато-билиарной системы:

количество обследованных одновременно обоими методами 94
количество выявленных инвазий при использовании УЭС 38
количество выявленных инвазий при использовании предлагаемого метода 49

2. Техническая возможность лабораторной диагностики инвазий низкой и крайне низкой степени меняет представление о структуре паразитарной заболеваемости. Обнаружено, что инвазированность описторхидозами на территории РТ выше инвазированности всеми остальными гельминтозами, включая ларвальные (исключая энтеробиоз), вместе взятыми.

3. При использовании аналога и прототипа попытка увеличить объем исследуемых фекалий приводит к недостаточной тонкости и прозрачности мазков, соответственно, визуализация и идентификация мелких яиц описторхид технически затруднительна. Это исключено при использовании предлагаемого метода. Обнаруживаемые стойкие морфологические отличия яиц позволяют предположить распространенность не менее 6-7 видов и подвидов трематод.

4. Предлагаемый метод позволяет существенно увеличить частоту встречаемости мелких (менее 20 мкм), слабо окрашенных яиц с тонкой оболочкой, невизуализируемой структурой мирацидия, плохо различимой крышечкой, что затруднительно при использовании аналога и прототипа.

5. Предлагаемый метод позволяет обнаружить зависимость между морфологией яиц и чувствительностью к стандартным методам дегельминтизации.

6. Предлагаемый метод приобретает ценность для контроля паразитологической излеченности. Так, из 20 пролеченных, у которых предлагаемый метод контроля дал положительный результат (обнаружение яиц), аналоговые методы (УЭС) дали положительный результат у 14 пролеченных, у 6 - отрицательный результат.

Следующие клинические наблюдения иллюстрируют ценность выявления инвазий низкой и крайне низкой степени:

Пример 1. Больной Ш., 10 лет. Направлен аллергологом с диагнозом: рецидивирующий отек Квинке. Рецидивирующая крапивница. Паразитологический диагноз: низкоинвазивный трематодоз гепато-билиарной системы (меторхоз).

Пример 2. Больной К., 46 лет. Направлен гастроэнтерологом с диагнозом: хр. гепатит неуточненной этиологии с синдромом холестаза, цитолитическим синдромом, умеренной гепато-спленомегалией. Паразитологический диагноз: микст-инвазия низкой степени (описторхоз + меторхоз). Хр. вторичная инфекция вирусом Эпштейна-Барр.

Пример 3. Больной С, 36 лет. Направлен дерматологом с диагнозом: папилломатоз гладкой кожи. Паразитологический диагноз: хр. низкоинвазивный описторхоз. Приобретенная дисфункция иммунной системы. Хр. папилломавирусная инфекция.

Пример 4. Больной К., 5 лет. Направлен офтальмологом с диагнозом: рецидивирующий фибринозно-пластический увеит. Паразитологический диагноз: хр. низкоинвазивный описторхоз. Хр. лямблиоз. Вторичное иммунодефицитное состояние. Хр. герпесвирусная + цитомегаловирусная инфекция. Хр. хламидийная инфекция.

Пример 5. Больная П, 52 года. Направлена гастроэнтерологом с диагнозом: хр. холецистит, панкреатит. Хр. энтероколит неуточненной этиологии. Паразитологический диагноз: хр. низкоинвазивный описторхоз. Хр. лямблиоз. Хр. изоспороз.

Пример 6. Больной В., 12 лет. Направлен аллергологом с диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, средней степени тяжести. Аллергический риносинусит круглогодичный. Атопический дерматит ограниченный. Паразитологический диагноз: хр. низкоинвазивный описторхоз. Хр. лямблиоз. Токсокароз, висцеральная форма.

Применение предлагаемого метода.

Метод двойной седиментации предназначен для первичной диагностики низкоинвазивных печеночных трематодозов, а также для мониторинга паразитологической излеченности.

Способ диагностики низкоинвазивных тремадозов гепато-билиарной системы, включающий двойное центрифугирование взвеси фекалий с последующим сливом надосадочной жидкости, отличающийся тем, что к 2 г фекалий добавляют 10 мл 5%-ной уксусной кислоты, взвесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 1,5 мин, сливают надосадочную жидкость вместе с верхней половиной осадка, к оставшейся половине осадка добавляют 5 мл 1%-ной уксусной кислоты и 4 мл диэтилового эфира, повторно центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин, полученный в результате осадок исследуют.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, может быть использовано при подготовке детей раннего возраста к АВО-несовместимой трансплантации печени.
Изобретение относится к медицинской аллергологии, иммунологии, медицинской лабораторной диагностике. Сущность способа состоит в том, что в периферической крови обследуемых лиц определяют концентрацию IgE и абсолютное содержание лимфоцитов СD23+.

Изобретение относится к медицине, а именно прогнозированию риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) с сахарным диабетом 2 типа (СД 2 типа), перенесших стентирование коронарных артерий.

Изобретение относится к выполнению анализа при помощи мобильного устройства. Тестовое устройство для выполнения тестового анализа содержит емкость с реагентом; портативное устройство, включающее процессор и устройство для ввода изображения.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития ретинопатии недоношенных. Проводят непрямую офтальмоскопию глазного дна в условиях медикаментозного мидриаза.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики заболеваний тканей пародонта на разных стадиях. Для осуществления способа исследуют слюну, в качестве показателя воспалительного процесса определяют концентрацию свободного оксипролина спектрофотометрическим методом.

Группа изобретений относится к сельскому хозяйству и может быть использована для сбора информации для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний биологических объектов - животных и птиц.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, судебной психиатрии и сексологии, и может быть использовано для диагностики расстройств сексуального предпочтения.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения больных риносинуситом с рецидивирующим течением заболевания. Для этого проводят общепринятую терапию риносинусита.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, может быть использовано при подготовке детей раннего возраста к АВО-несовместимой трансплантации печени.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA). Осуществление изобретения обеспечит выявление вариаций, которые могут стать основой для индивидуализации использования препаратов платины в противоопухолевой терапии. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано для уточнения стадий распространенного рака шейки матки. Для этого у пациентки определяют стадию заболеванию по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят его к Ib-IIa или IIb-IV клинической стадии по уровню IL-1β в плазме крови. Причем Ib-IIa стадия определяется уровнем IL-1β от 1,330 пг/мл и выше, a IIb-IV стадия - уровнем IL-1β от 0 пг/мл до 1,330 пг/мл. Изобретение позволяет проводить дифференциальную диагностику Ib-IIa или IIb-IV стадии рака шейки матки у пациенток. 15 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к биосенсорам с системой распознавания недостаточного заполнения. Способ оценки объема образца в биосенсоре содержит подачу регулярной последовательности опроса, обнаружение наличия образца, подачу расширенной последовательности опроса и определение того, является ли объем образца достаточным для анализа. Расширенная последовательность опроса содержит, по меньшей мере, один отличающийся расширенный входной импульс. При этом регулярная и расширенная последовательности опроса по существу исключают необратимые изменения концентрации аналита в образце. Также раскрывается вариант способа оценки объема образца в биосенсоре, который дополнительно включает указание, когда объем образца является недостаточным, и подачу возбуждающего измерительного сигнала, когда объем образца является достаточным, а также биосенсор с системой распознавания недостаточного заполнения. Группа изобретений обеспечивает более точное и достоверное обнаружение недостаточного заполнения сенсорных полосок. 3 н. и 42 з.п. ф-лы, 16 ил.

Изобретение относится к областям биологии и генетической инженерии. Предложен выделенный пептид для терапевтических целей, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную SEQ ID NO:4 (GG00444), или его фрагмент или вариант, способные связываться со слизью кишечника человека, а также содержащая его ворсинчатая структура, пищевой продукт, фармацевтическая композиция, полинуклеотид, экспрессионный вектор, клетка-хозяин, кластер генов, антитело, способ лечения и способ скрининга пробиотических бактериальных штаммов. 20 н. и 11 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 11 пр.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода, включающий выделение внеклеточной ДНК из образца крови беременной женщины, приготовление геномных библиотек и их обогащение регионами генома, секвенирование, картирование полученных чтений на референсный геном, корректировку полученного значения покрытия для каждого региона генома на общее покрытие генома, сравнение скорректированного значения покрытия со значениями покрытий, полученных для обучающей выборки и определение наличия анеуплоидий плода. Предложен также способ получения регионов генома, характеризующихся открытостью хроматина между плацентой и клетками крови матери, отличающейся не менее чем на 20%. Предложенная группа изобретений обеспечивает получение более простого и экономичного способа пренатальной диагностики анеуплоидий плода на ранних сроках беременности. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу исследования реакции организма человека при трансфузии эритромассы путем анализа кислорода в крови. Сущность способа состоит в том, что предварительно определяют артериовенозные разницы содержания по кислороду до и после трансфузии эритромассы с получением коэффициента Р. Реакция организма при трансфузии эритромассы (P) определяется по математической формуле и для каждого индивидуальна. Использование заявленного способа позволяет расширить возможности исследования реакции организма при трансфузии эритромассы. 1 пр.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для бесконтактного манипулирования, концентрирования и сортировки бактериальных клеток E.coli и/или диамагнитных микрочастиц в микрофлюидных системах. Для этого создают направленную диффузию, используя эффект вытеснения объектов из градиента концентрации парамагнитных наночастиц CoFe2O4. Изобретение обеспечивает бесконтактное манипулирование, концентрирование и сортировку жизнеспособных бактерий E.coli без жгутиков. 11 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования тяжести течения гломерулонефрита. Сущность способа состоит в том, что больному с гломерулонефритом проводят иммуноферментный анализ сыворотки крови на содержание тиреотропного гормона (ТТГ). При содержании уровня тиреотропного гормона выше 2,7 мМЕ/л прогнозируют развитие тяжелого течения гломерулонефрита, а при содержании уровня тиреотропного гормона ниже 2,7 мМЕ/л диагностируют легкое течение гломерулонефрита. 4 пр., 9 табл.

Изобретение относится к медицине и предназначено для уточнения стадии фиброза печени в клинико-лабораторных условиях. В качестве определяемых белковых продуктов используют цитокины CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α. Их концентрацию определяют в плазме крови и по соответствию концентрации маркера пороговым значениям диагностируют степень фиброза печени. Пороговые значения для дифференциальной диагностики F1 и F2: CXCL11/ITAC - 166,5 пг/мл, TNFα - 15,7 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 10,6 пг/мл; для дифференциальной диагностики F2 и F3: TNFα - 15,8 пг/мл, CXCL11/ITAC - 301,8 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 15,5 пг/мл. Способ позволяет сократить количество измеряемых показателей с одновременным повышением чувствительности метода до 67-91% и сохранением требуемой специфичности. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики у детей гломерулярного и тубулоинтерстициального заболеваний почек нетоксической природы и ассоциированных с токсическим действием Cd, Pb, Cr и фенола, характеризующийся тем, что при содержании указанных веществ в крови выше референтного значения осуществляют генетическое исследование, при наличии полиморфизма генов CYPOX, RCYT 450, SULTA1 проводят ультразвуковое исследование, при установлении обеднения кровотока в подкапсульной зоне почек, отклонений показателей спектрограммы импульсно-волнового допплера и повышения эхогенности паренхимы почек, осуществляют дополнительные исследования, и при отклонении относительно физиологической возрастной нормы 65% или более из следующих показателей: содержание ОАС, Cu/Zn-СОД, ГлПО; повышение уровня каталазы, гидроперекисей липидов, МДА; и снижении абсолютного фагоцитоза и фагоцитарного числа диагностируют заболевание, ассоциированное с токсическим действием, а при отсутствии таких отклонений - заболевание нетоксической природы. Изобретение обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.
Наверх