Способ получения усниновой кислоты из талломов лишайников с использованием предэкстракционной механохимической обработки


 


Владельцы патента RU 2582981:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологических проблем криолитозоны Сибирского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения усниновой кислоты из сухих талломов лишайников Cladonia stellaris. Способ заключается в том, что проводят предэкстракционную механохимическую обработку сырья в присутствии сильной щелочи для перевода усниновой кислоты в растворимую в водно-спиртовых смесях форму уснината натрия, затем проводят экстракцию 50%-ной водно-этанольной смесью, полученный экстракт центрифугируют, надосадочную жидкость фильтруют, затем проводят повторную экстракцию 50% этанолом, после чего полученные экстракты объединяют и переводят уснинат натрия обратно в форму усниновой кислоты путем доведения pH-среды раствора до определенного значения, затем водно-этанольную смесь отгоняют, в полученном водном концентрате выпадает осадок, который отделяют центрифугированием и проводят высушивание осадка на воздухе до порошкообразного состояния с практическим выходом усниновой кислоты до 93-98% от содержания ее в исходном сырье. Способ, описанный выше, позволяет получить усниновую кислоту, обладающую выраженным антибактериальным действием против грамположительных и микробактерий, включая штаммы, устойчивые к другим видам антибиотиков. 1 ил.

 

Изобретение относится к биотехнологической промышленности и может использоваться для производства препаратов противомикробного действия.

Использование механохимической стадии в технологическом цикле получения усниновой кислоты из талломов лишайников на стадии обработки сухого сырья и последующей водно-спиртовой экстракции позволяют выделить более 90% усниновой кислоты, содержащейся в исходном сырье.

Техническим эффектом изобретения является получение усниновой кислоты, обладающей выраженным антибактериальным действием против грамположительных и микобактерий (туберкулезная палочка), включая штаммы, устойчивые к другим видам антибиотиков (Cocchietto, et al., 2002; Lauterwein et al., 1995; Stoll et al., 1950). В связи с этим препараты на основе усниновой кислоты нашли свое применение в медицине как противомикробные средства для обработки ран и ожогов (Машковский, 2005). Эффект достигается тем, что использование механохимической обработки лишайникового сырья в присутствии щелочи приводит к переводу водонерастворимой формы усниновой кислоты в водорастворимое состояние.

Сущность изобретения состоит в том, что предэкстракционная механохимическая обработка сухих талломов лишайников с добавлением сухой щелочи позволяет переводить плохо растворимую в воде и водно-спиртовых смесях усниновую кислоту в хорошо растворимый в водно-спиртовых смесях фенолят (уснинат натрия, рис.).

Аналогом предлагаемому способу получения усниновой кислоты является метод, описанный в патенте «Способ получения усниновой кислоты» (RU 2317076), который основан на экстракции усниновой кислоты из воздушно-сухого сырья хлороформом, четыреххлористым углеродом, ацетоном, гексаном, петролейный эфиром, нефрасом и их смесями при кипячении, с последующей перекристаллизацией. Недостатком данного способа является использование токсичных и легко воспламеняющихся органических растворителей, что может создать дополнительные трудности при организации технологического цикла получения усниновой кислоты.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения препарата, содержащего в составе усниновую кислоту, с широким спектром фармакологического действия «ЯГЕЛЬ-М», реализуемый путем механохимической обработки талломов лишайников в присутствии сильной щелочи с последующей водно-спиртовой экстракцией (патент RU 2385159). Отличием предложенного нами способа является получение сухого порошка, содержащего до 93,3-98,5% по массе усниновой кислоты.

Изобретение может быть реализовано следующим образом. Высушенные талломы лишайников, содержащие усниновую кислоту (например, Cladonia stellaris), подвергают предэкстракционной механохимической обработке на шаровой мельнице (например, АГО-3) в присутствии сильной щелочи при скорости вращения ротора 1800 об/мин в течение двух минут для перевода усниновой кислоты в растворимую форму уснината (см. рис.). Для этого в каждый стальной стакан объемом 2 л помещалось по 2.5 кг стальных шариков с d=0.5 см, 142.5 г воздушно-сухих талломов лишайников и 7.5 г сухого гидрооксида натрия.

Полученный высокодисперный порошок экстрагировали 50%-ной водно-этанольной смесью в соотношении 1:20 по массе в течение 14 суток при температуре 20-25°С.

Экстракт центрифугировали при 4000g в течение 10 мин, надосадочную жидкость фильтровали для удаления из нее нерастворившейся взвеси и сливали в отдельную емкость. Для исчерпывающего извлечения уснината натрия проводили повторную экстракцию 50%-ным этанолом, после чего полученные экстракты объединяли.

Для перевода уснината натрия обратно в усниновую кислоту рН-среды фильтрата доводили лимонной кислотой до значения ≈6.0, после чего водно-этанольную смесь отгоняли при помощи роторного испарителя до ≈20% от исходного объема. Этанол после вакуумной перегонки (регенерация этанола) не требовал дополнительной очистки и использовался для повторных экстракций. В полученном водном концентрате выпадал желтый осадок, который отделяли центрифугированием при 4000g в течение 10 мин, после чего проводили высушивание осадка на воздухе до порошкообразного состояния.

Для определения содержание усниновой кислоты в полученном порошке брали навеску массой 0.01 г и растворяли в 100 мл ацетонитрила. Полученный раствор пропускали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм. Анализ проводили методом ВЭЖХ на микроколоночном хроматографе Милихром А-02 фирмы «ЭкоНова» (Россия) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования, используя программу «МультиХром для «Windows».

Разделение проводили на обращено-фазовой колонке ProntoSIL 120-5-С18 AQ размером 2×75 мм. В качестве оптимальных были выбраны условия: подвижная фаза «А» - 0.1% водный раствор уксусной кислоты, «В» - ацетонитрил, градиентный режим элюирования с возрастанием доли «В» от 10 до 50% в течение 5 мин и от 50 до 100% в течение 20 мин при скорости потока 100 мкл/мин и температуре колонки 40°С. Объем вносимой пробы - 4 мкл. Детектирование осуществляли с помощью сканирующего УФ-спектрофотометрического детектора при длинах волн 230, 240, 260 и 280 нм. Длина волны 230 нм была взята в качестве опорной и аналитической, так как на нее приходится максимум поглощения усниновой кислоты.

В качестве стандарта использовали усниновую кислоту производства Sigma-Aldrich. Стандартные образцы готовили в концентрациях 6.25, 12.5, 25.0, 50.0, 100.0 и 200.0 мкг/мл в ацетонитриле. Построение калибровочных графиков проводили на основе линейной регрессии площади пиков усниновой кислоты и ее концентраций. Идентификацию усниновой кислоты в исследуемых образцах проводили путем сопоставления времен удерживания и спектральных отношений пиков аналита и стандарта.

Для определения содержания усниновой кислоты в исходном лишайниковом сырье на примере Cladonia stellaris брали навеску из измельченных воздушно-сухих талломов лишайников массой 0.1 г и экстрагировали в 10 мл ацетонитрила при постоянном перемешивании в течение 24 ч и комнатной температуре, после чего полученный экстракт пропускали через мембранный фильтр и анализировали по вышеописанной методике.

Проведенный анализ исходного лишайникового сырья на примере Cladonia stellaris показал, что содержание в нем усниновой кислоты составляет 1.1% от сухой массы талломов, что можно считать теоретически возможным выходом продукта. Использование предложенного нами способа получения усниновой кислоты дало выход 11.4 г продукта с содержанием 90-95% усниновой кислоты в пересчете на 1 кг сырья, то есть практический выход усниновой кислоты составил 93-98% от содержащейся в исходном сырье.

Способ получения усниновой кислоты из сухих талломов лишайников Cladonia stellaris с применением стадии предэкстракционной механохимической обработки сырья в присутствии сильной щелочи для перевода усниновой кислоты в хорошо растворимую в водно-спиртовых смесях форму уснината натрия, отличающийся тем, что экстракцию проводят 50%-ной водно-этанольной смесью в соотношении 1:20 по массе в течение 14 суток при температуре 20-25°C, полученный экстракт центрифугируют, надосадочную жидкость фильтруют, затем проводят повторную экстракцию 50% этанолом, после чего полученные экстракты объединяют и переводят уснинат натрия обратно в форму усниновой кислоты путем доведения pH-среды раствора до значения 6.0 лимонной кислотой, затем водно-этанольную смесь отгоняют при помощи роторного испарителя, в полученном водном концентрате выпадает желтый осадок, который отделяют центрифугированием и проводят высушивание осадка на воздухе до порошкообразного состояния с практическим выходом усниновой кислоты до 93-98% от содержания ее в исходном сырье.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения экстракта из слоевищ лишайника рода Cladonia. Способ получения экстракта из слоевищ лишайника рода Cladonia путем экстракции сырья диоксидом углерода при определенных условиях, при этом экстракт содержит 85% усниновой кислоты.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к получению меланина чаги. Способ получения меланина включает получение водного экстракта чаги, к которому добавляют водный раствор поливинилпирролидона, подкисление раствором хлороводородной кислоты, полученный осадок меланина отделяют и проводят его сушку при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения эфирного масла из лекарственного растительного сырья. Способ заключается в том, что навеску измельченного лекарственного растительного сырья помещают между двумя сетчатыми электродами из нержавеющей стали, которые погружают в емкость с очищенной водой комнатной температуры объемом, необходимым для полного погружения электродов, и в течение 30-40 мин проводят перемешивание до набухания сырья, затем к внешним контактам электродов подводят напряжение 5В от генератора переменного напряжения с частотой 3,16*103 Гц и экстрагируют в течение 30-60 минут при постоянном перемешивании до выделения эфирного масла в виде надводной фазы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего стресс-протективной и антигипоксической активностью.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к производству фармацевтического препарата, обладающего слабительным действием. Сироп из плодов жостера слабительного, обладающий слабительным действием, который получают путем приготовления отвара из плодов жостера слабительного при определенных условиях, далее отвар смешивают с сахаром-рафинадом, нагревают смесь до полного растворения сахара, доводят до кипения дважды, каждый раз снимая образующуюся пену, полученный сироп фильтруют через марлю.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения экстракта из костей оленя. Способ получения экстракта из костей оленя, заключающийся в том, что проводят экстракцию горячей водой отмытых от крови костей оленя при нормальном давлении, с получением экстракта, кости оленя, полученные после экстракции при нормальном давлении, подвергают экстракции под давлением, с получением экстракта, экстракты, полученные после предыдущих операций, выдерживают и затем отделяют от них масло для удаления липидного слоя, отделенный от масла раствор фильтруют, фильтрат концентрируют при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению суммы флавоноидов из корней или надземной части Alchemilla vulgaris L. в качестве противовирусного средства в отношении РНК-содержащего вируса гриппа А и ДНК-содержащих ортопоксвирусов и вируса простого герпеса 2-го типа.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противовирусному средству на основе экстракта ксилотрофного базидиомицета Bjerkandera adusta (Willd.) P. Karst, представляющему собой сухой экстракт гриба, приготовленный методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при определенном содержании компонентов в сухом экстракте.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для профилактики и лечения опухолевой кахексии. Средство для лечения опухолевой кахексии, представляющее собой сухой экстракт листьев и цветков аврана лекарственного, полученный путем измельчения их, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и выпаривания, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой, затем добавления хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее, при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения меланоидного антиоксиданта. Способ получения меланоидного антиоксиданта из лузги подсолнечника включает промывание водой неизмельченной лузги подсолнечника, сушку, экстракцию раствором гидроксида натрия, фильтрацию, обработку полученного фильтрата катионитом КУ-2, его отделение, обработку пищевым адсорбентом КСМ №6С и упаривание до желеобразного состояния при определенных условиях.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения экстракта из слоевищ лишайника рода Cladonia. Способ получения экстракта из слоевищ лишайника рода Cladonia путем экстракции сырья диоксидом углерода при определенных условиях, при этом экстракт содержит 85% усниновой кислоты.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к получению меланина чаги. Способ получения меланина включает получение водного экстракта чаги, к которому добавляют водный раствор поливинилпирролидона, подкисление раствором хлороводородной кислоты, полученный осадок меланина отделяют и проводят его сушку при определенных условиях.

Изобретение относится к способу получения средства из корней астрагала перепончатого, обладающего адаптогенным действием. Указанный способ характеризуется тем, что проводят ультразвуковую экстракцию измельченного растительного материала 55-65% этиловым спиртом в соотношении сырье:экстрагент 1:(8-10) в течение 20-30 мин, далее растительный материал экстрагируют дважды тем же экстрагентом в соотношении сырье:экстрагент 1:(18-20) при температуре 85-90°С в течение 80-100 мин, затем спиртовые извлечения объединяют и концентрируют, сгущенный экстракт высушивают и измельчают.
Изобретение относится к жидкой композиции, представляющей собой жидкость для полоскания рта или промывной раствор для полоскания рта, содержащей структурирующий агент, содержащий: от 0,01 до 0,5% по массе коллоидного полимера типа камеди, выбранного из геллановой камеди, ксантановой камеди, и их смеси, от 0,01 до 0,5% по массе карбоксиметилцеллюлозы и от 0,01 до 0,5% по массе полиакрилата, и орально приемлемый водный носитель, где значение показателя скорости течения композиции составляет меньше 0,85.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и гинекологии, и касается лечения рака яичников. Для этого вводят индол-3-карбинол в суточной дозе 400 мг и более.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, биотехнологии и медицины, а именно к способу получения композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия и ее применению в различных областях медицины, ветеринарии и косметологии.

Изобретение относится к лекарственному средству, обладающему гипохолестеринемическим и гиполипидемическим действием. Указанное средство содержит 0,1-1,0 мас.% бетулоновой кислоты и/или диацетата бетулиновой кислоты, 0,05-1,0 мас.% тимола и 98,0-99,85 мас.% масла семян тыквы.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для лечения хронических заболеваний, отягощенных герпетической вирусной латентной инфекцией.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к пластырю с экстрактом перца, содержащему термоплавкий клей, экстракт перца, камфару и ланолин при определенном соотношении компонентов, и к пластырю с экстрактом перца, содержащему термоплавкий клей, экстракт гвоздики, экстракт перца, экстракт имбиря, борнеол, камфару, ланолин и ментол при определенном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области косметологии и представляет собой стик детский косметический для губ и лица, включающий карнаубский воск, канделильский воск, пчелиный воск, масло семян дерева ши, масло абрикосовых косточек, масло жожоба, миндальное масло, ацетат токоферола и отдушку, причем компоненты в стике находятся в определенном соотношении, в мас.

Изобретение относится к новым производным инданона, формулы I, где радикалы A1-A4, D, E, X и G1-G4 имеют значения, указанные в описании, их фармацевтически приемлемым солям или энантиомерам, а также к способам их получения и фармацевтической композиция для профилактики или лечения вирусного заболевания, содержащая эти соединения в качестве активного ингредиента.
Наверх