Способ лабораторной диагностики стадии фиброза печени при хроническом вирусном гепатите с


 


Владельцы патента RU 2583939:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) (RU)

Изобретение относится к медицине и предназначено для уточнения стадии фиброза печени в клинико-лабораторных условиях. В качестве определяемых белковых продуктов используют цитокины CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α. Их концентрацию определяют в плазме крови и по соответствию концентрации маркера пороговым значениям диагностируют степень фиброза печени. Пороговые значения для дифференциальной диагностики F1 и F2: CXCL11/ITAC - 166,5 пг/мл, TNFα - 15,7 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 10,6 пг/мл; для дифференциальной диагностики F2 и F3: TNFα - 15,8 пг/мл, CXCL11/ITAC - 301,8 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 15,5 пг/мл. Способ позволяет сократить количество измеряемых показателей с одновременным повышением чувствительности метода до 67-91% и сохранением требуемой специфичности. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам лабораторной диагностики заболеваний печени, и может найти применение для уточнения стадии фиброза печени в клинико-лабораторных условиях.

Характерной особенностью вирусного гепатита С является высокая частота хронизации инфекции, длительная персистенция вируса, риск развития цирроза, рака печени и тяжелых внепеченочных проявлений хронического гепатита [Alter H.J., Seff L.B. Recovery, persistence, and sequelae in hepatitis С virus. Seminars in liver disease. 2000; 20 (1): 17-35]. Формирование цирроза и рака печени происходит приблизительно у 15-20% людей инфицированных вирусом гепатита С, именно эти пациенты относятся к группе максимального риска по неблагоприятному развитию заболевания. Раннее выявление и уточнение стадии фиброза позволяет своевременно начать лечение, направленное на уменьшение темпов прогрессирования фиброза и предотвращение развития цирроза и рака печени. Известно, что при выраженном фиброзе печени лечение не столь эффективно и может потребоваться продление сроков терапии и увеличение доз препаратов. Кроме того, на фоне проводимой терапии существует возможность обратного развития фиброза печени [Ismail М.Н., Pinzani М. Reversal of Liver Fibrosis Saudi J. Gastroenterol. 2009; 15 (1): 72-79. ]. Актуальной задачей является точная диагностика стадий фиброза печени с применением малоинвазивных лабораторных методов с использованием биомаркеров крови, которые дают возможность более точно диагностировать стадию заболевания, наблюдать за темпами прогрессирования фиброза и проводить исследования в динамике лечения ХВГС.

В настоящее время наиболее достоверным методом определения степени фиброза/цирроза печени остается гистологическое исследование материала, получаемого при проведении пункционной биопсии печени [Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике. - СПб.: ТЕЗА, 1998. - 331 с.]. Гистологическое исследование позволяет уточнить причину заболевания печени, а также оценить стадию фиброза и индекс гистологической активности, принять решение о тактике ведения больного, оценить естественное течение или эффективность проведенного лечения. Наиболее распространенными и общепринятыми являются полуколичественные способы оценки выраженности индекса фиброза по шкале METAVIR [Poynard Т., Bedossa P., Opolon P. Natural history of liver fibrosis progression in patients with chronic hepatitis C. The OBSVIRC, METAVIR, CLINIVIR and DOSVIRC groups. Lancet. 1997; 349 (9055): 825-832]. Согласно этой шкале выделяют 5 стадий фиброза (F 0-4), где F0 соответствует отсутствию фиброза, a F4 - циррозу печени. К сожалению, биопсия печени, оставаясь «золотым стандартом» определения стадии фиброза, все-таки является инвазивным методом с определенным процентом осложнений, проводится в госпитальных условиях и имеет ряд противопоказаний. Трудности трактовки результатов исследования биоптатов печени связаны с очень небольшим объемом исследуемого материала, не обязательно характеризующим изменения печени в целом, а также с неоднозначными оценками одного и того же препарата, которые дают разные морфологи. Динамическое наблюдение за фиброзом печени с помощью биопсии затруднено ввиду инвазивности метода.

Широко применяют аппаратно-инструментальные методы исследования (УЗИ, МРТ), которые позволяют оценить форму, размеры, структуру органа, наличие или отсутствие объемных образований, провести исследования для косвенной оценки плотности и эластичности ткани печени. Одним из таких методов является ультразвуковая эластография печени. Метод позволяет оценить наличие фиброза печени, генерируя вибрационные импульсы, и по результатам компьютерного анализа судить об изменении эластических свойств печени [Павлов Ч.С., Глушенков Д.В., Ивашкин В.Т. Современные возможности эластометрии, Фибро- и АктиТеста в диагностике фиброза печени «Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии» 2008; 16 (4): 43-52]. Однако даже эластография печени, позволяющая с высокой точностью дифференцировать выраженные и тяжелые степени фиброза/цирроза печени, не обладает достаточной чувствительностью при определении и дифференцировании ранних стадий фиброза при ХВГС умеренной и низкой активности, а также не всегда адекватно отражает активизацию процесса. Кроме того, для проведения эластографии требуется специализированное дорогостоящее оборудование.

Известен лабораторный способ оценки фиброза печени у больных ХВГС с определением количества различных субпопуляций лимфоцитов крови [Способ оценки фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С (RU 2416794), опубликован 2009 год]. Суть метода заключается в определении процентного содержания CD56+ лимфоцитов крови с фенотипом CD3+/CD56+, CD3+/CD56+/CD4+, CD3+/CD56+/CD8+, CD56+/CD94+, CD56+/NKG2D+ и CD56+/CD107a+ и по диапазону полученных значений устанавить третью стадию фиброза (предцирротическую) или цирроз печени. Данный метод не применим для дифференциальной диагностики начальных стадий фиброза печени, а позволяет определять только поздние стадии фиброза или цирроз печени, когда лечение не столь эффективно.

Известен способ определения степени фиброза печени с использованием цитокинов [Способ мониторинга фиброза печени у больных хроническим гепатитом С (ХГС), RU 2309406, опубликован 2007 год], позволяющий установить наличие выраженного фиброза печени по значениям концентраций цитокинов IL-4, IL-10, IL-12p70, TNFα в плазме крови. Недостатком данного метода является невозможность разделить стадии фиброза печени, он может быть использован только для мониторинга фиброза печени.

Наиболее близким по своей сущности к методу, предлагаемому в данном изобретении, является алгоритм оценки степени фиброза печени с использованием маркеров сыворотки крови [Assessment of liver fibrosis scoring with serum marker algorithms, WO 0186304 (A2) - 2001, 6304A2&KC=A2&FT=D&ND=3&date=20011115&DB=EPODOC&locale=ru_ru]. Способ основан на определении в сыворотке крови содержания белков внеклеточного матрикса и матриксных металлопротеиназ: PIIINP, коллагенов IV и VI, тенасцина, ламинина, гиалуроновой кислоты, ММР-2, TIMP-1 и MMP-9/TIMP-1 с последующим проведением ступенчатого дискриминантного анализа, позволяющего диагностировать степень фиброза печени в соответствии с различными шкалами оценки фиброза печени.

Основным недостатком этого метода является большое количество измеряемых показателей и сложность математической обработки полученных данных.

Задача настоящего изобретения заключается в разработке способа диагностики стадии фиброза печени при ХВГС, который позволяет сократить количество измеряемых показателей, что упрощает процедуру диагностики с одновременным повышением чувствительности и сохранением требуемой специфичности. Изобретение обеспечит более точную диагностику фиброза печени на ранних стадиях заболевания, что позволит подобрать адекватную терапию и тактику ведения больного, а также оперативно выявить группы риска.

Поставленная задача достигается тем, что производится взятие образца периферической крови пациента, центрифугирование пробы с отделением плазмы с последующим диагностированием стадии фиброза печени по содержанию белковых продуктов в плазме крови. Авторами предложено в качестве определяемых белковых продуктов использовать цитокины CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α. Их концентрацию определяют в плазме крови и по соответствию концентрации маркера пороговым значениям диагностируют степень фиброза печени. Для оценки диагностической ценности анализируемых биомаркеров был проведен анализ характеристической кривой (receiver-operating-characteristic curve-ROC). Были рассмотрены графические изображения характеристических кривых и определены значения площади под кривой - AUC (Area Under the Curve). Данные анализа показали, что самостоятельно ни один из выделенных показателей не обладает высокой чувствительностью, что исключает возможность их изолированного использования с диагностической целью. В результате был применен метод построения деревьев решений в программе JMP 11.0, на основе полученных результатов которого было установлено, что совместное определение трех маркеров CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α является достаточным для оценки степени фиброза печени у больных ХВГС. Значения AUC для трех цитокинов были более 0,8, что говорит об очень хорошем качестве выбранной модели. В результате анализа были получены следующие пороговые значения для дифференциальной диагностики F1 и F2: CXCL11/ITAC - 166,5 пг/мл, TNFα - 15,7 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 10,6 пг/мл; для дифференциальной диагностики F2 и F3: TNFα - 15,8 пг/мл, CXCL11/ITAC - 301,8 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 15,5 пг/мл. Использование данного алгоритма для диагностики стадий фиброза печени позволяет достигнуть чувствительности метода 67-91% при достаточной специфичности.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фигуре 1 представлено дерево решений для разделения групп больных ХВГС с F1 и F2, а на фигуре 2 представлено дерево решений для разделения групп больных ХВГС с F2 и F3.

Изобретение реализуется следующим способом.

Пример 1. Выбор порогового значения содержания цитокинов.

Для расчетов пороговых значений использовали значения содержания цитокинов CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α в группах больных ХВГС с различными стадиями фиброза печени (F1, F2 и F3). Образцы периферической крови забирали в вакуумную пробирку с антикоагулянтом K2 ЭДТА, центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин для отделения плазмы, которую отбирали в пробирки типа «Эппендорф», замораживали и хранили при -80°С до проведения эксперимента. Для определения содержания цитокинов в плазме крови использовали технологию мультиплексного иммуноферментного анализа по стандартным методикам согласно инструкциям производителя (Millipore, США). Статистическую обработку проводили с применением программ GRAPH Pad Prism 6.02 и GMP 11.0. Для оценки диагностической ценности анализируемых цитокинов был применен метод построения деревьев решений, на основе полученных результатов которого было установлено, что совместное определение трех маркеров CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α является достаточным для оценки степени фиброза печени у больных ХВГС. Первую степень фиброза печени диагностируют, если концентрация CXCL11/ITAC <166,5 пг/мл. Если содержание CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл дополнительно определяют TNFα, при значениях которого ≥15,7 пг/мл также диагностируют первую степень фиброза печени. Если CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл и TNFα <15,7 пг/мл, то дополнительно определяют CCL20/MIP-3α, при значениях которого <10,6 пг/мл также диагностируют первую степень фиброза печени. Если концентрации биомаркеров выходят за пороговые значения, характерные для первой степени фиброза печени, то проводят дополнительный анализ данных для дифференциальной диагностики второй и третьей стадий фиброза печени. Если при этом TNFα <15,8 пг/мл и CXCL11/ITAC ≥301,8 пг/мл, то диагностируют вторую степень фиброза печени, если TNFα <15,8 пг/мл и CXCL11/ITAC <301,8 пг/мл, то дополнительно оценивают значение CCL20/MIP-3α, при значениях которого <15,5 пг/мл также диагностируют вторую степень фиброза печени. Если значения маркеров не попадают в указанные интервалы для второй степени фиброза печени, то диагностируют третью степень фиброза печени.

Пример 2. Диагностика стадии фиброза печени на основе предлагаемого метода.

Больной Ж., 34 года.

Диагноз: хронический вирусный гепатит С (анти - HCV «+», РНК HCV «+», генотип 1), с минимальной степенью морфологической активности. Из анамнеза известно, что впервые антитела к вирусу гепатита С обнаружены в 2007 году. Противовирусную терапию не получал. В апреле 2013 года впервые произведена пункционная биопсия печени, при гистологическом исследовании был выявлен фиброз печени первой стадии (F1) по шкале METAVIR. В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров: CXCL11/ITAC - 153,2 пг/мл, TNFα - 15,6 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 6,2 пг/мл. Таким образом, у больного значение CXCL11/ITAC <166,5, что соответствует первой степени фиброза печени и совпадает с данными гистологического исследования.

Больной Б., 42 года.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С (анти - HCV «+», РНК HCV «+», генотип 1). Сопутствующие заболевания: язвенная болезнь 12-перстной кишки, ремиссия. При стационарном обследовании в мае 2009 года выявлены антитела к вирусу гепатита С и диагностирован хронический гепатит С минимальной активности. В декабре 2011 года начата противовирусная терапия альфафероном и рибавирином. Госпитализирован в клинику инфекционных болезней с целью комплексного обследования и оценки эффективности проводимого лечения. При гистологическом исследовании был выявлен фиброз печени второй стадии (F2) по шкале METAVIR. В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров: CXCL11/ITAC - 246,4 пг/мл, TNFα - 13,1 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 15,3 пг/мл. Таким образом, у больного значения CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл, TNFα <15,7 пг/мл и CCL20/MIP-3α ≥10,6 пг/мл и TNFα <15,8 пг/мл, CXCL11/ITAC <301,8 пг/мл и CCL20/MIP-3α <15,5 пг/мл, что соответствует второй степени фиброза печени и совпадает с данными гистологического исследования.

Больной П., 36 лет.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С (анти - HCV «+», РНК HCV «+», генотип 1b), слабовыраженная активность, тяжелый фиброз. Из анамнеза известно, что впервые антитела к вирусу гепатита С обнаружены в 2007 году. Противовирусную терапию не получал, пункционная биопсия печени не проводилась. В сентябре 2013 года произведена эластография печени, по данным которой средний показатель эластичности печени составил 11,4 кПа, что соответствует третьей степени фиброза печени (F3). В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров: CXCL11/ITAC - 217,1 пг/мл, TNFα - 15,2 пг/мл, CCL20/MIP-3α - 48,0 пг/мл. Таким образом, у больного значения CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл, TNFα <15,7 пг/мл и CCL20/MIP-3α ≥10,6 пг/мл и TNFα <15,8 пг/мл, CXCL11/ITAC <301,8 пг/мл и CCL20/MIP-3α ≥15,5 пг/мл, что соответствует третьей степени фиброза печени и совпадает с данными эластографии.

Способ лабораторной диагностики стадии фиброза печени при хроническом вирусном гепатите C с использованием биомаркеров, концентрацию которых измеряют в плазме крови и определяют степень фиброза печени на основе математического алгоритма, отличающийся тем, что измеряют значения трех биомаркеров, в качестве которых используют цитокины CXCL11/ITAC, TNFα и CCL20/MIP-3α, причем математический алгоритм анализа полученных результатов включает от одной до трех стадий, в зависимости от полученных значений концентраций биомаркеров, а стадию фиброза печени устанавливают путем сопоставления полученной концентрации биомаркеров с пороговыми значениями по следующему алгоритму: для диагностики первой степени фиброза печени необходимо оценить CXCL11/ITAC, при значениях которого <166,5 пг/мл однозначно диагностируют первую степень фиброза печени, а при CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл дополнительно определяют TNFα, при значениях которого ≥15,6 пг/мл также диагностируют первую степень фиброза печени, если CXCL11/ITAC ≥166,5 пг/мл и TNFα <15,6 пг/мл, то дополнительно определяют CCL20/MIP-3α, при значениях которого <10,6 пг/мл также диагностируют первую степень фиброза печени, а если концентрации биомаркеров выходят за пороговые значения, характерные для первой степени фиброза печени, то проводят дополнительный анализ данных для дифференциальной диагностики второй и третьей стадий фиброза печени: если при этом TNFα <15,8 пг/мл и CXCL11/ITAC ≥301,8 пг/мл, то диагностируют вторую степень фиброза печени, если TNFα <15,8 пг/мл и CXCL11/ITAC <301,8 пг/мл, то дополнительно оценивают значение CCL20/MIP-3α, при значениях которого <15,5 пг/мл также диагностируют вторую степень фиброза печени; если значения маркеров не попадают в указанные интервалы для второй степени фиброза печени, то диагностируют третью степень фиброза печени.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования тяжести течения гломерулонефрита. Сущность способа состоит в том, что больному с гломерулонефритом проводят иммуноферментный анализ сыворотки крови на содержание тиреотропного гормона (ТТГ).

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для бесконтактного манипулирования, концентрирования и сортировки бактериальных клеток E.coli и/или диамагнитных микрочастиц в микрофлюидных системах.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу исследования реакции организма человека при трансфузии эритромассы путем анализа кислорода в крови. Сущность способа состоит в том, что предварительно определяют артериовенозные разницы содержания по кислороду до и после трансфузии эритромассы с получением коэффициента Р.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода, включающий выделение внеклеточной ДНК из образца крови беременной женщины, приготовление геномных библиотек и их обогащение регионами генома, секвенирование, картирование полученных чтений на референсный геном, корректировку полученного значения покрытия для каждого региона генома на общее покрытие генома, сравнение скорректированного значения покрытия со значениями покрытий, полученных для обучающей выборки и определение наличия анеуплоидий плода.

Изобретение относится к областям биологии и генетической инженерии. Предложен выделенный пептид для терапевтических целей, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную SEQ ID NO:4 (GG00444), или его фрагмент или вариант, способные связываться со слизью кишечника человека, а также содержащая его ворсинчатая структура, пищевой продукт, фармацевтическая композиция, полинуклеотид, экспрессионный вектор, клетка-хозяин, кластер генов, антитело, способ лечения и способ скрининга пробиотических бактериальных штаммов.

Группа изобретений относится к биосенсорам с системой распознавания недостаточного заполнения. Способ оценки объема образца в биосенсоре содержит подачу регулярной последовательности опроса, обнаружение наличия образца, подачу расширенной последовательности опроса и определение того, является ли объем образца достаточным для анализа.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано для уточнения стадий распространенного рака шейки матки. Для этого у пациентки определяют стадию заболеванию по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят его к Ib-IIa или IIb-IV клинической стадии по уровню IL-1β в плазме крови.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA).
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики трематодозов. При лабораторном исследовании к 2 г фекалий добавляют 10 мл 5%-ной уксусной кислоты.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, может быть использовано при подготовке детей раннего возраста к АВО-несовместимой трансплантации печени.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики у детей гломерулярного и тубулоинтерстициального заболеваний почек нетоксической природы и ассоциированных с токсическим действием Cd, Pb, Cr и фенола, характеризующийся тем, что при содержании указанных веществ в крови выше референтного значения осуществляют генетическое исследование, при наличии полиморфизма генов CYPOX, RCYT 450, SULTA1 проводят ультразвуковое исследование, при установлении обеднения кровотока в подкапсульной зоне почек, отклонений показателей спектрограммы импульсно-волнового допплера и повышения эхогенности паренхимы почек, осуществляют дополнительные исследования, и при отклонении относительно физиологической возрастной нормы 65% или более из следующих показателей: содержание ОАС, Cu/Zn-СОД, ГлПО; повышение уровня каталазы, гидроперекисей липидов, МДА; и снижении абсолютного фагоцитоза и фагоцитарного числа диагностируют заболевание, ассоциированное с токсическим действием, а при отсутствии таких отклонений - заболевание нетоксической природы. Изобретение обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы. Cущность способа прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы состоит в том, что определяют наличие родственников с аллергической реакцией, наличие в анамнезе ринита, крапивницы либо другой аллергической реакции, бытовой, пищевой и лекарственной аллергической реакции, профессиональной вредности, при этом дополнительно определяют концентрацию общего IgE в сыворотке крови, в качестве профессиональной вредности определяют «симптомы элиминации», «экспозиционный тест», «эффект реэкспозиции» каждый признак оценивают в баллах. Далее баллы суммируют и при их сумме менее 15 прогнозируют низкую степень риска профессиональной бронхиальной астмы, 16-30 баллов - среднюю степень риска, 31 балл и более - высокую степень риска. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики степени тяжести пародонтита у больных бронхиальной астмой. Для чего определяют зрелые (EN-PO) и ранние (DPOH) нейтрофилы в слюне и смыве из полости рта пациентов, не принимающих и принимающих гормональные препараты. При этом для пациентов, не принимающих гормональные препараты, при уменьшении EN-PO на 1,1-1,5% по отношению к норме и увеличении DPOH на 2,0-4,1% по отношению к норме диагностируют легкую степень пародонтита, среднюю степень - при уменьшении EN-PO на 6,4-10,4% по отношению к норме и увеличении DPOH на 6,7-10,2% по отношению к норме, тяжелую степень пародонтита - при уменьшении EN-PO на 11,4-14,2% по отношению к норме и увеличении DPOH на 12,5-17,0% по отношению к норме, для пациентов, принимающих гормональные препараты, диагностируют легкую степень при уменьшении EN-PO на 5,2-9,2% по отношению к норме и увеличении DPOH на 5,0-7,9% по отношению к норме, среднюю - при уменьшении EN-PO на 10,6-14,6% по отношению к норме и DPOH на уровне нормы, а тяжелую - при уменьшении EN-PO на 16,7-20,2% по отношению к норме и уменьшении DPOH на 10,7-12,7% по отношению к норме. Изобретение позволяет оценить тяжесть течения пародонтита у пациентов с бронхиальной астмой. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения щелочной фосфатазы плацентарного типа. Способ выделения щелочной фосфатазы плацентарного типа путем гомогенизации ткани плаценты до однородной массы, экстракции трис-HCl буфером, содержащим бутанол, через сутки указанную смесь центрифугируют с диэтиловым эфиром, собирают водную фазу и далее проводят аффинную хроматографию щелочной фосфатазы плацентарного типа на иммобилизованном лектине бодяги речной, после чего промывают раствором NaCl, забуференным трис-HCl буфером, и элюируют связанную на колонке щелочную фосфатазу плацентарного типа раствором лактозы в боратном буфере при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет упростить и ускорить выделение щелочной фосфатазы плацентарного типа, а также увеличить выход и степень её чистоты. 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к молекулярной биологии, вирусологии и медицине. Изобретение раскрывает способ выделения нуклеиновых кислот с использованием изопропанола на этапе преципитации и осаждения ДНК, отличающийся тем, что при начальной обработке биологического материала используют гидрохлорид гуанидина и детергент в натрий-ацетатном буфере, а в качестве соосадителя нуклеиновых кислот применяют 0,05% линейный полиакриламид. Выделенная данным способом нуклеиновая кислота может быть использована при постановке полимеразной цепной реакции, также в практической медицине и ветеринарии для диагностики наследственных заболеваний человека и животных, судебной медицине, генной дактилоскопии, диагностике возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных, в том числе заболеваний передающихся половым путем. Преимуществом способа является упрощение выделения НК из крови и тканей человека и животных, что весьма актуально при проведении массовых анализов различных образцов в процессе диагностики инфекционных заболеваний. Использование в изобретении линейного полиакриламида ЛПАА в качестве соосадителя позволяет повысить выход НК из образца. 1 ил., 3 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для диагностики постнагрузочного бронхоспазма у больных бронхиальной астмой (БА). Диагностику проводят у больных БА легкой и средней степени тяжести во внеприступный период. Определяют пиковую объемную скорость форсированного выдоха в процентах от должной величины (ПОС, в %) с помощью спирографии. Определяют уровень насыщения крови кислородом (SaO2, в %) посредством транскутанной пульсоксиметрии. Определяют фракцию изгнания левого желудочка сердца (ФИ, в %) и толщину межжелудочковой перегородки в диастолу (МЖПд, см) с помощью метода эхокардиографии. Определяют процентное содержания эозинофилов в периферической крови (Эоз, в %) с помощью гематологического анализатора (в клиническом анализе крови). Рассчитывают дискриминантную функцию (D) по формуле. Граничное значение D равно 90,40. При D, равной или больше граничного значения, диагностируется отсутствие синдрома постнагрузочного бронхоспазма. При D меньше граничного значения диагностируется наличие синдрома постнагрузочного бронхоспазма. Способ позволяет точно провести диагностику синдрома постнагрузочного бронхоспазма за счет использования результатов наиболее значимых методов обследования больных БА. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологическим методам экспериментального моделирования процессов, протекающих в полости рта человека, в частности образования зубного камня. Для этого предложен способ моделирования процесса образования зубного камня из аналога раствора слюны человека, основанный на синтезе зубного камня в искусственно созданной модельной среде, при котором готовят модельную среду указанного состава: NaCl - 9,00 ммоль/л, K2CO3 - 5,00 ммоль/л, (NH4)2HPO4 - 5,60 ммоль/л, NH4Cl - 29,49 ммоль/л, NH4F - 0,01 ммоль/л, KCl - 25,00 ммоль/л, CaCl2·H2O - 6,90 ммоль/л, MgCl2·6H2O - 3,00 ммоль/л. Синтез проводят при значении pH=6,95±0,05 и температуре 37.0±0.5°C, при этом через 60 дней образуется фаза в виде брушита, а через 90 дней из модельной системы образуется гидроксилапатит, который является основным компонентом зубных камней человека. Изобретение позволяет обнаружить предрасположенность к заболеванию и выработать профилактические меры для предотвращения роста зубного камня. 5 ил., 2 табл.,1 пр.

Настоящее изобретение относится к области биоаналитических исследований и представляет собой способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), включающий подготовку митохондрий и их нанесение на подложку на основе диэлектрического химически инертного материала с наноструктурированным покрытием толщиной 1-10 мкм в виде кольцевых наноструктур серебра, при этом ободки серебряных колец состоят из сообщающихся друг с другом пористых агрегатов серебра, на поверхности которых расположены округлые наночастицы серебра размером 2-90 нм, с последующей иммобилизацией митохондрий на данные наноструктурированные покрытия, детектирование спектров ГКР с последующей расшифровкой характеристических колебаний анализируемой пробы спектров ГКР с использованием стандартного программного обеспечения. Осуществление изобретения позволяет расширить область применимости ГКР и проводить исследования в интактных функционирующих митохондриях. 11 з.п. ф-лы, 4 пр., 1 ил.

Настоящее изобретение относится к области биоаналитических исследований и представляет собой способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), включающий подготовку митохондрий и их нанесение на подложку на основе диэлектрического химически инертного материала с наноструктурированным покрытием толщиной 1-10 мкм в виде кольцевых наноструктур серебра, при этом ободки серебряных колец состоят из сообщающихся друг с другом пористых агрегатов серебра, на поверхности которых расположены округлые наночастицы серебра размером 2-90 нм, с последующей иммобилизацией митохондрий на данные наноструктурированные покрытия, детектирование спектров ГКР с последующей расшифровкой характеристических колебаний анализируемой пробы спектров ГКР с использованием стандартного программного обеспечения. Осуществление изобретения позволяет расширить область применимости ГКР и проводить исследования в интактных функционирующих митохондриях. 11 з.п. ф-лы, 4 пр., 1 ил.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования, что способствует выбору соответствующей стратегии лечения. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.
Наверх