Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных



Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных
Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных

 


Владельцы патента RU 2583950:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к экспериментальной медицине, онкологии и может быть использовано для прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных. При росте содержания цистатина С у молодых самцов в 1,7 раза, у старых самок в 1,3 раза и/или при росте содержания L-FABP у молодых самцов в 1,8 раз, у старых самок в 5,8 раз при длительности ишемии 15 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности. При росте содержания цистатина С в 1,2 раза у молодых самок и в 1,5 раза у старых самцов и/или при росте содержания L-FABP в 1,6 раза у старых самцов при длительности ишемии 25 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности. Способ позволяет доступно провести прогнозирование развития острой почечной недостаточности за счет оценки уровня цистатина С, L-FABP в зависимости от возраста и пола животных и длительности тепловой ишемии. 2 табл.

 

Краеугольным камнем при резекции почки остается время тепловой ишемии. Изучение результатов резекций почек, выполненных в условиях тепловой ишемии и без нее, показало, что вероятность развития острой почечной недостаточности была значительно выше в группе пациентов, перенесших вмешательство в условиях ишемии, причем каждая минута пережатия почечных сосудов усиливала этот риск (см. Thompson R.H. Every minute counts when the renal hilum is clamped during partial nephrectomy / R.H. Thompson [et al.] // European Urology. - 2010. - Vol. 58. - P. 340-345; см. Thompson R.H. comparison of warm ischemia versus no ischemia during partial nephrectomy on a solitary kidney / R.H. Thompson [et al.] // European Urology. - 2010. - Vol.58. P. 331-336).

Имеются данные, указывающие, что продолжительная тепловая ишемия почки вызывает стойкое снижение скорости клубочковой фильтрации уже через 3 месяца после операции, без тенденции к дальнейшему ухудшению. Причем среди пациентов с исходной скоростью клубочковой фильтрации >30 мл/мин/1,73 м2 и резекцией почки, выполненной с тепловой ишемией, риск развития хронической болезни почек тяжелой стадии в течение 3 лет после операции был гораздо выше (см. Porpiglia F. Long-term functional evaluation of the treated kidney in a prospective series of patients who underwent laparoscopic partial nephrectomy for small renal tumors / F. Porpiglia [et al.] // European Urology. - 2012. - Vol. 62. - P. 130-135).

На сегодняшний день рекомендованная максимальная продолжительность тепловой ишемии год от года становится все меньше, и рассчитывать на хорошие ранние и отдаленные функциональные результаты резекции можно, если продолжительность тепловой ишемии не превышает 20 минут (см. Becker et al. Assessing the impact of ischaemia time during partial nephrectomy // European Urology. - 2009. - Vol. 56. - P. 625-635).

Была исследована связь между шкалами оценки опухоли и временем тепловой ишемии в ходе открытой резекции почки. По данным КТ опухоли 78 пациентов были охарактеризованы с использованием трех систем: нефрометрической шкалы R.E.N.A.L.1, PADUA и С index. Средние значения для трех систем составили соответственно 7, 8 и 3,9. Среднее время тепловой ишемии равнялось 23,4 мин. Диаметр опухоли, близость к полостной системе, передняя/задняя локализация, медиальная/латеральная локализация и вовлечения полостной системы были чрезвычайно связаны с продолжительностью ишемии. Со временем ишемии были значительно связаны только высокие значения R.E.N.A.L. и PADUA, но не С index (см. Lavallee L.T. The association between renal tumour scoring systems and ischemia time during open partial nephrectomy / L.T. Lavallee [et al.] // Can Urol Assoc J. - 2012. - Vol. 15. - P.1 - 8.1).

В другом исследовании была показана ценность шкалы R.E.N.A.L. для прогноза времени тепловой ишемии, объема кровопотери и интраоперационного повреждения полостной системы почки в ходе лапароскопической и робот-ассистированной резекции (см. Mayer W.A. Higher RENAL Nephrometry Score is predictive of longer warm ischemia time and collecting system entry during laparoscopic and robotic-assisted partial nephrectomy / W.A. Mayer [et al.] // Urology. - 2012. - Vol. 79 (5). - P. 1052-1056). Авторы делают вывод, что шкала R.E.N.A.L. в целом, а также уровни N и R могут помочь спрогнозировать время тепловой ишемии и вероятность нарушения целостности полостной системы почки в ходе указанных операций, что позволит спланировать ход оперативного вмешательства.

Интересно, что опыт хирурга, размер и другие анатомические характеристики опухоли, определенные по шкале PADUA, а также необходимость восстановления полостной системы почки являются независимыми предикторами времени тепловой ишемии >20 мин.

Аналогично, опыт хирурга, размер опухоли, другие анатомические характеристики опухоли, определенные по шкале PADUA, являются независимыми предикторами осложнений в целом (см. Ficarra V. Predictors of warm ischemia time and perioperative complications in a multicenter, international series of robot-assisted partial nephrectomy / V. Ficarra [et al.] // European Urology. - 2012. - Vol. 61 (2). - P. 395-402).

Таким образом, не определен безопасный порог времени тепловой ишемии, т.к. каждая ее минута вносит свой вклад в развитие острого повреждения почки (ОПП) и снижение почечной функции.

Необходимо выявлять повреждение почки на самом раннем этапе, чтобы предотвращать развитие острой, а затем и хронической почечной недостаточности (см. Мосоян М.С., Аль-Шукри С.Х., Есаян A.M., Ильин Д.М., Корза С.В. Резекция почки в условиях регионарной ишемии// Вестник Национального медико-хирургического центра им. Н.И. Пирогова, 2013. - Т. 8. - №2. - С. 43-47). Для этого необходимо изучение на этапах ишемии основных функциональных показателей повреждения почек. Неоценимую помощь в этом вопросе может дать эксперимент.

На сегодняшний день совершенствование методов диагностики и прогноза развития ОПП связывают с определением биологических маркеров, не зависящих от фильтрационной функции почек и связанных с ранней стадией развития ОПП (см. Devarajan P. Emerging urinary biomarkers in the diagnosis of acute kidney injury // Expert. Opin. Med. Diag. 2008; 2 (4): 387-398). К ним относятся липокалин-2 (neutrophil gelatinase-associated lipocalin-NGAL), интерлейкин-18 (ИЛ-18), молекула почечного повреждения-1 (Na+/H+ обменник типа 3 - NHE-3), ряд ферментов, обычно локализующихся в щеточной кайме проксимальных канальцев, и другие показатели (см. Melnikov V.Y., Molitoris В.A. Improvements in the diagnosis of acute kidney injury // Saudi J Kidney Dis Transpl. 2008; 19 (4): 537-544; Waikar S.S., Liu K.D., Chertow G.M. Diagnosis, epidemiology and outcomes of acute kidney injury // Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2008; 3 (3): 844-861).

Техническим результатом является прогнозирование развития острой почечной недостаточности в зависимости от длительности тепловой ишемии, возраста и пола животныхт

Технический результат достигается тем, что при росте содержания цистатина С у молодых самцов в 1,7 раза, у старых самок в 1,3 раза и/или при росте содержания L-FABP у молодых самцов в 1,8 раз, у старых самок в 5,8 раз при длительности ишемии 15 минут; при росте содержания цистатина С в 1,2 раза у молодых самок и в 1,5 раза у старых самцов и/или при росте содержания L-FABP в 1,6 раза у старых самцов при длительности ишемии 25 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности.

Способ осуществляется следующим образом.

Моделирование ишемического повреждения проводят на правой почке. Наркотизированных животных размещают в положении «на спине». Шерсть на животе удаляют, операционное поле обрабатывают антисептиками (хлоргексидин и 70% этанол).

Разрез проводят вдоль белой линии живота от мечевидного отростка грудины до лобка, рассекают кожу и соединительную ткань.

Выделяют почечную ножку, подводят под нее шелковую лигатуру, затягивают простым узлом.

Рану на протяжении периода ишемии прикрывают салфеткой, смоченной антисептиками.

Через определенные промежутки времени животных забивают декапитацией, не выводя из наркоза.

Для исследования забирают правую (ишемизированную) почку.

100 мг ткани промывают 1х фосфатно-солевым буфером (PBS), гомогенизируют в 1 мл lx PBS и оставляют на ночь при -20 C.

Для полного разрушения клеточных мембран проводят два цикла замораживания-оттаивания. Полученную суспензию центрифугируют 5 мин при 5000g (2-8°C).

Супернатант отбирают, делят на аликвоты и хранят при -20°C или -80°C.

Перед измерением размороженные образцы центрифугируют.

Исследование проводят в ткани коркового вещества ишемизированной почки методом ИФА с применением стандартных тест-систем изучают уровень цистатина С, нг/г тк (BioVendor, Чехия), L-FABP, нг/г тк (HycultBiotechnology, Нидерланды).

При росте содержания цистатина С у молодых самцов в 1,7 раза, у старых самок в 1,3 раза и/или при росте содержания L-FABP у молодых самцов в 1,8 раз, у старых самок в 5,8 раз при длительности ишемии 15 минут; при росте содержания цистатина С в 1,2 раза у молодых самок и в 1,5 раза у старых самцов и/или при росте содержания L-FABP в 1,6 раза у старых самцов при длительности ишемии 25 мин прогнозируют развитие острой почечной недостаточности.

Были исследованы 170 белых беспородных крыс обоего пола массой 180-200 г (молодые животные) и 300-350 г (старые животные).

Из них интактную группу составили 40 животных соответствующего возрата (по 10 животных на каждую возрастную группу).

Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета Statistica 6,0 (Stat-Soft, 2001).

Оценку достоверности производили с использованием t-критерия Стьюдента. Уровень р<0,05 принимали как значимый.

Результаты содержания цистатина С и L-FABP в тканях почки, подвергнутой острой ишемии, представлены в табл. 1-2.

Через 15 мин ишемии в корковом веществе ишемизированной почки обнаружено повышение уровня цистатина С в 1,7 раза относительно интактных групп животных у молодых самцов и в 1,3 раза у старых самок.

В ткани ишемизированной почки молодых самок и старых самцов исследуемый маркер оставался на уровне интактной ткани.

Через 20 мин ишемии уровень маркера продолжал достоверно повышаться у старых самок (в 1,5 раза) и у молодых самцов (в 1,7 раза - так же, как и в предыдущем сроке).

В ткани ишемизированной почки молодых самок и старых самцов исследуемый маркер оставался на уровне интактной ткани.

Через 25 мин ишемии наблюдалось продолжающееся повышение роста содержания цистатина С у старых самок (в 1,6 раза). У молодых самцов этот показатель сохранялся на том же повышенном уровне.

Однако, в ткани ишемизированной почки молодых самок наблюдался рост этого показателя в 1,2 раза и у старых самцов в 1,5 раз, по сравнению с интактными животными.

Такие изменения содержания цистатина С свидетельствуют о нарушении его метаболизма вследствие ишемии почек: у молодых самцов и у старых самок уже через 15 мин ишемии, а у молодых самок и старых самцов через 25 мин.

В процессе ишемизации обнаружена различная динамика маркера, также зависящая от пола и возраста животных.

Через 15 мин ишемии в корковом веществе ишемизированной почки молодых самцов наблюдалось повышение этого показателя (в 1,8 раз) с той же динамикой через 20 мин и 25 мин тепловой ишемии (табл. 2).

У старых самок через 15 мин ишемии в 5,8 раза возрастало содержание L-FABP с последующим, хотя и незначительным, нарастанием в сроки 20 мин (в 6,7 раза) и 25 мин (в 6,7 раза).

Иная динамика содержания L-FABP обнаружена в тканях ишемизированных почек старых самцов и молодых самок. Так, в корковом веществе ишемизированной почки старых самцов повышение уровня маркера в 1,6 раза зарегистрировано лишь через 25 мин.

Не найдено увеличение содержания L-FABP в корковом веществе ишемизированной почки молодых самок. Поскольку считается, что увеличение содержания L-FABP в моче при ОПП происходит преимущественно за счет повреждения проксимальных канальцев, логично предположить более раннее развитие событий в почках старых самок и молодых самцов, наступающее уже через 15 мин ишемии.

Изобретение «Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных» является промышленно применимым, так как может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях онкологического профиля для воспроизведения экспериментальной модели прогнозирования развития острой почечной недостаточности с целью разработки методов экспериментальной терапии этой патологии.

Способ экономичен, доступен, обеспечивает возможность прогнозирования развития острой почечной недостаточности в зависимости от длительности тепловой ишемии.

Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных, характеризующийся тем, что при росте содержания цистатина С у молодых самцов в 1,7 раза, у старых самок в 1,3 раза и/или при росте содержания L-FABP у молодых самцов в 1,8 раз, у старых самок в 5,8 раз при длительности ишемии 15 минут; при росте содержания цистатина С в 1,2 раза у молодых самок и в 1,5 раза у старых самцов и/или при росте содержания L-FABP в 1,6 раза у старых самцов при длительности ишемии 25 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области профилактической медицины и предназначено для прогнозирования сенсибилизации организма к формальдегиду у подростков. Предложен способ, включающий определение в крови относительного количества эозинофилов, относительного содержания ауто-АТ к мембранным антигенам паренхимы легких и расчет диагностического коэффициента у по формуле.
Изобретение относится к медицине и касается способа определения состава индивидуальных внеклеточных везикул в крови человека, заключающегося в том, что кровь пациента берут из периферической вены, центрифугируют, получают плазму, обедненную тромбоцитами, хранят в замороженном виде, после размораживания проводят связывание EVs с МНЧ, предварительно конъюгированными с антителами, специфичными к различным поверхностным антигенам везикул, и меченными флуоресцентным Fab-фрагментом иммуноглобулина G; окрашивают полученный раствор МНЧ-EVs, к половине растворов с комплексами МНЧ-EVs добавляют флуоресцентные изотипические контроли; проводят иммобилизацию комплексов МНЧ-EVs-антитело с помощью магнитных колонок и промывание магнитных колонок, растворяют в буфере и фиксируют; к полученному раствору добавляют полистереновые частицы; полученные МНЧ-EVs комплексы, меченные антителами, анализируют на проточном цитометре.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики различных форм адренокортикальной карциномы (АКК), синдрома Иценко - Кушинга (СИК) и гормонально-неактивных аденом (ГНА) коры надпочечников.

Изобретение относится к областям биологии и генетической инженерии. Предложен выделенный пептид для терапевтических целей, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную SEQ ID NO:4 (GG00444), или его фрагмент или вариант, способные связываться со слизью кишечника человека, а также содержащая его ворсинчатая структура, пищевой продукт, фармацевтическая композиция, полинуклеотид, экспрессионный вектор, клетка-хозяин, кластер генов, антитело, способ лечения и способ скрининга пробиотических бактериальных штаммов.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено выделенное моноклональное антитело к FcRH5, охарактеризованное последовательностями HVR.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен диагностикум для индикации специфических антител к F1 антигену чумного микроба, который представляет собой взвесь композитных частиц, состоящих из углеродной метки размером не более 500 нм, заключенных в полимерную матрицу, представляющую собой привитой сополимер бычьего сывороточного альбумина с чумным капсульным антигеном F1, при соотношении компонентов, мг/мл: углеродная метка - 20-30, бычий сывороточный альбумин - 5-10, антиген F1 - 0,2-1,0; при этом полученные частицы композита стабилизированы в забуференном физиологическом растворе рН 7,0-7,4 высокомолекулярными полимерами и неионными детергентами.
Изобретение относится к медицинской аллергологии, иммунологии, медицинской лабораторной диагностике. Сущность способа состоит в том, что в периферической крови обследуемых лиц определяют концентрацию IgE и абсолютное содержание лимфоцитов СD23+.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов. Для этого используют бруцеллин для специфической активации лимфоцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики меланомы хориоидеи. Сущность способа состоит в том, что у пациента с подозрением на меланому хориоидеи осуществляют забор слезной жидкости из обоих глаз, далее определяют концентрацию в слезной жидкости интерлейкина-8 и при значении этого показателя выше 17,7 пг/мл диагностируют меланому хориоидеи.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для патоморфологической диагностики хронического аппендицита. Способ заключается в следующем: образец ткани фиксируют, изготавливают срезы, инкубируют с реагентом и проводят обработку проявляющим агентом, дегидратацию и заключение в среду.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы. Cущность способа прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы состоит в том, что определяют наличие родственников с аллергической реакцией, наличие в анамнезе ринита, крапивницы либо другой аллергической реакции, бытовой, пищевой и лекарственной аллергической реакции, профессиональной вредности, при этом дополнительно определяют концентрацию общего IgE в сыворотке крови, в качестве профессиональной вредности определяют «симптомы элиминации», «экспозиционный тест», «эффект реэкспозиции» каждый признак оценивают в баллах.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, нейропсихологии и профессиональной патологии. Проводят нейропсихологическое исследование состояния высших психических функций у стажированных работников химических предприятий, контактирующих с винилхлоридом (ВХ), и определяют следующие показатели по схеме А.Р.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Измеряют толщину комплекса интима-медиа общей сонной артерии слева.

Группа изобретений относится к области медицины. Способ передачи тревожного сигнала, содержащий этапы, на которых: устанавливают линию связи между многорежимным устройством мониторинга пациента и одной или более точками доступа по одной или более сетям, по которым устройство мониторинга пациента осуществляет связь, с использованием больничной сети, поддерживающей Интернет-протокол (IP), через одну или более точку доступа с использованием протокола IP; обрабатывают физиологические данные, собранные устройством мониторинга пациента, для определения того, дает ли состояние пациента основание для генерации тревожного сигнала; выполняют попытки передать тревожный сигнал с использованием первичной линии между устройством мониторинга пациента и одной или более точками доступа; и передают тревожный сигнал с использованием вторичной линии между монитором пациента и одной или более точками доступа в ответ на сбой попыток передачи тревожного сигнала с использованием первичной линии.

Изобретение относится к медицине, а именно к функциональной диагностике, и может быть использовано для диагностики склонности к ангиоспазму периферического сосудистого русла.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития железодефицитной анемии во время беременности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к измерительным и регистрирующим приборам. Технический результат - определение размеров кровеносных сосудов человека без заметного их травмирования.

Изобретение относится к медицине, диагностике. Способ дифференциальной диагностики язвы желудка и двенадцатиперстной кишки состоит в определении линии соединения слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, ее уровня локализации.

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской психологии, и может использоваться для определения степени интенсивности психогенной боли в структуре хронического болевого синдрома различной этиологии.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования развития ретинопатии недоношенных. Проводят непрямую офтальмоскопию глазного дна в условиях медикаментозного мидриаза.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Пациенту проводят нагрузочное тестирование. Определяют исходный уровень толерантности к физической нагрузке (Τ1, Вт). Рассчитывают ожидаемый прирост толерантности к физической нагрузке через 6 месяцев по формуле. Составляют индивидуальную программу реабилитации, включающую прием лекарственных средств и занятия лечебной физической культурой. Затем через 6 месяцев проводят повторное тестирование и определяют толерантность к физической нагрузке (Т2, Вт). Рассчитывают фактический прирост (ПТФ, Вт) толерантности к физической нагрузке по формуле. Далее рассчитывают разницу между ожидаемым и фактическим приростом толерантности по формуле. При разнице менее 10% реабилитацию считают эффективной. Способ позволяет оценить эффективность физической реабилитации пациентов-ветеранов спорта с ишемической болезнью сердца. 2 пр.
Наверх