Способ размножения растений фритиллярий методом культуры in vitro


 


Владельцы патента RU 2584581:

Кульханова Динара Серыкбаевна (RU)
Эрст Анна Алексеевна (RU)

Изобретение относится к области декоративного садоводства. Изобретение представляет собой способ размножения растений фритиллярий методом in vitro, включающий стерилизацию эксплантов, разделение их на части, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию, отличающийся тем, что после разделения эксплантов их помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара с добавлением - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, после культивирования на данной среде микролуковицы размножают на безгормональной среде Данстена и Шорта в течение 4 недель при освещении 3 клк 16 ч свет/ 8 ч темнота при температуре 24°C, укореняют и адаптируют в контейнерах со сфагновым мхом, в темноте, при температуре 7°C, в течение 2 месяцев. Изобретение позволяет получить высокий выход посадочного материала представителей рода фритиллярия при минимальных затратах регуляторов роста. 2 табл.

 

Изобретение относится к области декоративного садоводства и может быть использовано для массового размножения растений рода фритиллярия.

Известен способ размножения фритиллярий in vitro (Paek K.Y., Murthy H.N. High frequency of bulblet regeneration from bulb scale sections of Fritillaria thunbergii //Plant Cell, Tiss. and Org. Cult. 2002. - №68. - p. 247-252). В качестве первичного экспланта использовали луковичные чешуи, которые культивировали на среде Мурасиге и Скуга с добавлением 1,62 мкМ α-нафтилуксусной кислоты и 4,65 мкМ кинетина. Затем микролуковицы культивировали при 5°С в течение 5 недель. Для адаптации микролуковицы переносили в смесь сфагнового мха, перлита и вермикулита в соотношении 1:1:1. Недостатком данного способа является необходимость постоянного использования регуляторов роста для получения максимального коэффициента размножения.

Технический результат заключается в постоянном высоком выходе растительного материала при минимальных воздействиях регуляторов роста.

Технический результат достигается тем, что в способе размножения фритиллярий in vitro, включающем стерилизацию эксплантов, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию в сфагновом мхе, регуляторы роста для индукции побегообразования применяются только на начальных этапах культивирования, экспланты культивируют на среде Данстена и Шорта с добавлением регуляторов роста 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, затем отделяют микролуковицы от экспланта и культивируют на среде Данстена и Шорта без регуляторов роста при температуре 24°С, укореняют и адаптируют полученные микролуковицы в пластиковых контейнерах с крышками в сфагновом мхе в темноте при температуре 7°С.

Способ осуществляется следующим образом.

Луковицы фритиллярий разделяют на чешуи, которые используют в качестве эксплантов. После этого чешуи луковиц стерилизуют, разрезают на четыре части и помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара, 30 г/л сахарозы и регуляторы роста - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты. Последующее культивирование микролуковиц осуществляют на среде Данстена и Шорта без регуляторов роста. Подобранная экспериментально питательная среда обеспечивает оптимальные условия для массового размножения микролуковиц (табл.1). Культивирование осуществляют при освещении 3 клк 16 ч свет/8 ч темнота при температуре 24°С. Выращивание эксплантов на агаризованной питательной среде Данстена и Шорта без добавления регуляторов роста в течение 4 недель культивирования обеспечивает максимальное число микролуковиц 4,1 шт/эксплант и высокий процент регенерации 47,7%.

Полученные микролуковицы разделяют друг от друга и помещают в пластиковые контейнеры, заполненные сфагновым мхом, содержат в холодильнике в течение двух месяцев при температуре 7°С. Эти условия были выбраны как наиболее оптимальные для укоренения и адаптации микролуковиц (табл.2). После укоренения и холодовой обработки растения переносят в почву и выращивают обычным способом.

Таблица 1

Регуляторы роста Регенерация,
%
Количество побегов на эксплант, шт.
Без регуляторов роста 47,7 4,1±0,2
5 мкМ 6-бензиламинопурина 40,5 3,3±0,6
5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты 37 4,2±0,6
10 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты 47,1 3,1±0,5
5 мкМ тидиазурона и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты 30,3 3,9±1,4
10 мкМ тидиазурона и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты 42,9 3,6±1,2

Таблица 2

Способ выращивания Температура,°С Процент укоренения
Культивирование in vitro 24 70
Культивирование in vitro 7 85
Культивирование в сфагновом мхе 24 15
Культивирование в сфагновом мхе 7 90

В результате использования предложенного способа удается достигнуть высоких показателей размножения растительного материала при минимальном воздействии регуляторов роста. Инициацию побегообразования достигали на среде Данстена и Шорта с содержанием регуляторов роста 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты. Дальнейшее культивирование микролуковиц на среде без регуляторов роста при температуре 24°С обеспечивает высокие показатели размножения, выращивание микролуковиц в сфагновом мхе в темноте при температуре 7°С приводит к 100% укоренению растений.


Способ размножения растений фритиллярий методом in vitro, включающий стерилизацию эксплантов, разделение их на части, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию, отличающийся тем, что после разделения эксплантов их помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара с добавлением - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, после культивирования на данной среде микролуковицы размножают на безгормональной среде Данстена и Шорта в течение 4 недель при освещении 3 клк 16 ч свет/ 8 ч темнота при температуре 24°C, укореняют и адаптируют в контейнерах со сфагновым мхом, в темноте, при температуре 7°C, в течение 2 месяцев.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ культивирования лимона in vitro, заключающийся в том, что стерильные пазушные почки предварительно культивируют до появления микропобегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, затем вычленяют из них меристемы размером 0,4-0,6 мм с 2-3 примордиями и прививают их на подвой, выращенный in vitro на среде WPM, дополненной БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%, микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л.

Изобретение относится к биотехнологии. Представлен способ получения моноклональной линии растительных клеток от гетерологичной популяции растительных клеток, включающий следующие стадии.

Изобретение относится к области биохимии. Предложена система контроля фотосинтетического и дыхательного СО2-газообмена в культуре in vitro.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba L.) в условиях гидропоники, включающий использование черенков материнских растений, размножение и выращивание, где в качестве эксплантов используются черенки материнских растений, которые высаживают на питательную среду по прописи Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают для микроразмножения на питательную среду Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП+0,25 мкМ ИМК+0,05 мкМ ГК, укореняют побеги на агаризированной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мкМ НУК, затем растения-регенеранты вынимают из культуральных сосудов, отмывают корни в дистиллированной воде от агара, закрепляют в кассетах и помещают в гидропонную установку на 90 суток для адаптации и выращивания растительного лекарственного сырья на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей 1/4 состава макросолей, 1/4 состава микросолей, полный набор витаминов, хелата железа и кальция хлористого, при температуре 24-26°C, режим освещения: 16 часов день, 8 часов ночь.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности картофелеводства. В способе выращивают мини-клубни оздоровленного картофеля в защищенном грунте, полученные от пробирочных растений.

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйстве. Изобретение представляет собой способ подготовки микропобегов in vitro ясеня, осины, ивы для последующего укоренения в условиях ex vitro, включающий перенос растений после стадии мультипликации на питательную среду WPM для элонгации, с добавлением сахарозы 30 г/л, агар-агара 9 г/л, инозитола 100 мг/л, пиридоксина 0,1 мг/л, тиамина 0,1 мг/л и никотиновой кислоты 0,5 мг/л, где в среду для элонгации добавляют глутамин в концентрации 0,5 или 1,0 ммоль/л, при этом культивирование растений осуществляется при повышенной освещенности - от 5 до 8 тыс.

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйству. Изобретение представляет собой способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины, заключающийся в изоляции пазушных почек, предварительном их обезвоживании в средах, содержащих осмолитики, переносе почек в криопробирки, криоконсервации криопробирок с почками в жидком азоте, оттаивании почек и посткриогенной регенерации из них растений, отличающийся тем, что на этапе обезвоживания перед быстрым замораживанием сначала почки помещают в раствор I, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM с добавлением к сахарозе (0,2-0,5М) глицерола (1,7-2,5М)), затем почки переносят в раствор II, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM, сахароза (0,2-0,5М), глицерол (2,5-3,5М), этиленгликоль (1-1,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)), с последующим переносом в жидкость для замораживания (WPM, содержащая сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (3,5-4М), этиленгликоль (1,5-2,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)).

Изобретение относится к области биотехнологии и растениеводства. Изобретение представляет собой способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.), заключающийся в том, что растения помещают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, модифицированную 6% сахарозы, 10-12 г/л агар-агара, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-0,5 мг/л паклобутразола, 6 мМ глюконата кальция, а на ее поверхность выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра, закрывают пробирки и переносят их в условия при температуре от 1 до 10°С, 6-часовом световом дне и освещенности 0,5-0,8 клк.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения пеперомии in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, где при микроразмножении экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 10 г/л глюкозы и 0,1 мг/л Рибав-Экстра и культивируют в течение 4 недель, затем сформировавшиеся растения-регенераты с корнями замачивают в растворе 3 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси торфа и песка 1:1.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения хризантемы, включающий микрочеренкование растительных побегов, стерилизацию растительных эксплантов с последующей их высадкой на безгормональную питательную среду Мурасига и Скуга, размножение микроклонов, укоренение вновь образованных in vitro побегов и адаптацию растений-регенерантов к почвенным условиям, где на этапе стерилизации растительных эксплантов используют обработку микрочеренков водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03% в течение 10 мин, без последующего промывания стерильной дистиллированной водой, на этапе микроразмножения проводят обработку микрочеренков раствором католита в течение 3 мин, на этапе адаптации почвенный субстрат обрабатывают водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03%, а микрорастения обрабатывают раствором католита в течение 10 мин.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ сохранения качественных характеристик культуры in vitro некоторых древесных видов растений (лимонник китайский, рододендрон, сирень, береза повислая), включающий размножение микропобегов на искусственных питательных средах, где через 7-10 дней после культивирования в стандартных условиях побеги помещают в условия с температурой 4-8°С и уровнем освещенности 500-1000 люкс на срок до 8 (лимонник китайский, береза повислая) или до 12 месяцев (рододендрон, сирень). Изобретение позволяет повысить сохранность качественных характеристик культуры in vitro Лимонника китайского и Березы повислой. 3 табл.
Наверх