Способ получения жидкой стабильной сыворотки

Авторы патента:

Петровский Станислав Викторович (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2584596:

Аваков Анатолий Эдуардович (RU)
Петровский Станислав Викторович (RU)
Трухин Виктор Павлович (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Изобретение представляет собой способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической сальмонеллезной, имеющей способность сохранять функциональную активность антител при их длительном нахождении в водных растворах, с использованием полиглюкина и сорбита, сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную таким способом, и набор для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови, включающий такую сыворотку. Изобретение позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает процесс получения сыворотки. 5 н.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Сальмонеллы (лат. Salmonella) - род неспороносных бактерий, имеющих форму палочек. Род назван в честь американского ветеринара Д.Э. Салмона (англ. Daniel Elmer Salmon; 1850-1914). Сальмонеллы являются грамотрицательными подвижными факультативно анаэробными палочками, которые, как правило, не ферментируют лактозу и патогенны для людей и животных при пероральном введении. Одно из опаснейших заболеваний, которое вызывается серотипами бактерий сальмонеллы, это сальмонеллез. Это заболевание характеризуется разными клиническими симптомами, от совершенно бессимптомного проявления, до тяжелых септических форм. Особенно часто заболевание протекает с сильным поражением органов пищеварения. Другим заболеванием, вызываемым сальмонеллой, является брюшной тиф - острая циклически протекающая кишечная антропонозная инфекция, вызываемая бактериями Salmonella typhi (Salmonella enterica серотип typhi), с алиментарным путем передачи. Заболевание характеризуется лихорадкой, явлениями общей интоксикации с развитием тифозного статуса, розеолезными высыпаниями на коже, гепато- и спленомегалией и специфическим поражением лимфатической системы нижнего отдела тонкой кишки.

При заболевании сальмонеллой можно выделить следующие формы, это субклиническая форма, когда диагностируется заболевание по выделениям сальмонеллы из фекалий, и при этом добавляется титр противосальмонеллезных антител в серологических реакциях. Еще одной формой определения наличия сальмонелл является бактерионосительство, когда отсутствуют клинические симптомы, а сальмонелла выявляется при серологических и бактериологических исследованиях.

Существует и реализуется на настоящий момент множество диагностикумов, позволяющих определить в крови специфические антитела к антигенам сальмонелл. Для выявления антител к сальмонеллам используется реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) (Каральник Б.В. Эритроцитарные диагностикумы, М.: Медицина, 1976). Агглютинация подразделяется на прямую (активную) и непрямую (пассивную). Феномен прямой (активной) агглютинации реализуется при специфическом взаимодействии узнающих антител с собственными структурными антигенами мембран эритроцитов или бактериальных клеток.

Действующим началом диагностикумов, используемых в реакции РПГА, являются антигены сальмонелл, находящиеся на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к сальмонеллам, наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.

В настоящее время выпускается для РПГА несколько видов эритроцитарных диагностикумов (комплексный, групповой и т.д.). Реакцию ставят с парными сыворотками в соответствии с рекомендациями к указанным диагностическим препаратам. Диагностически достоверным показателем, подтверждающим заболевание, является увеличение титра антител не менее чем в 8 раз.

В патентной литературе также описаны эритроцитарные диагностикумы для выявления антител к антигенам сальмонелл (см., например, RU 2257581, 27.07.2005, 95117746, 10.10.1997 и т.д.).

В настоящее время для постановки реакции РПГА, также как и для постановки реакции агглютинации (РА) сухая лиофильно высушенная сальмонеллезная сыворотка требует разведения, например, раствором хлорида натрия. Однако полученный разведенный раствор имеет маленький срок хранения. В лабораториях обычно используется лишь малая часть сыворотки из вскрытой ампулы. Большую часть приходится утилизировать, поскольку в разведенном состоянии сыворотка быстро теряет свою специфическую активность. Таким образом, на настоящий момент существует задача сохранения функциональной активности антител сывороток, т.е. способности к специфическому взаимодействию с соответствующим антигеном при длительном их нахождении в водных растворах.

Ранее были предприняты попытки по увеличению срока годности сывороток. Так, в автореферате Михайловой В.А. «Разработка технологии получения кроличьей холерной агглютинизирующей О-сыворотки», Иркутск, 1998, был изложен способ стабилизации кроличьей холерной О-сыворотки с целью повышения срока ее годности. При поиске стабилизатора диагностических сывороток были исследованы вещества, известные своим стабилизирующим действием на молекулы иммуноглобулинов, прежде всего многоатомные спирты (сорбит), углеводы (сахароза) и аминокислоты (цистеин, глутамин). В качестве стабилизатора испытаны также тиосульфат натрия и глутатион - исходя из предположения, что эти вещества как антиоксиданты могут предотвратить свободнорадикальное окисление.

В результате сравнительных исследований установлено, что наилучший стабилизирующий эффект оказывает смесь сахарозы (в концентрации от 2.2 до 3.0%) и тиосульфата натрия (от 0.75 до 1.0%). Оба компонента стабилизатора растворяют в 0.9% растворе хлористого натрия и вносят в сыворотку в соотношении, зависящем от специфической активности сыворотки. Сыворотку с титром антител 1:3200 и выше разводят 3:1 стабилизатором, содержащим 9% сахарозы и 3% тиосульфата натрия, с титром антител не ниже 1:1600 - 12:1 раствором, содержащим 30% сахарозы и 10% тиосульфата натрия. Конечное содержание стабилизирующих веществ в сыворотке в обоих случаях было одинаково: 3% - сахарозы и 1% - тиосульфата натрия. В результате стабильность экспериментальной сыворотки была выше, чем у контрольной, в 5 и более раз. Кроме того, сахароза и тиосульфат натрия значительно улучшали растворимость препарата. На специфическую активность и растворимость оказывала влияние остаточная влажность препарата: наиболее стабильными были холерные агглютинирующие О-сыворотки с остаточной влажностью не более 2.0-2.2%.

Авторами же настоящего изобретения было обнаружено, что можно получить жидкую сыворотку с длительным сроком хранения вплоть до 3 лет с сохранением ее функциональной активности. Таким образом, получение такой сыворотки позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает и удешевляет процесс получения сыворотки.

Это также приводит к упрощению проведения реакции агглютинации, поскольку жидкие сыворотки не требуют стадии разведения сухой сыворотки раствором для разведения.

Таким образом, технический результат заключается в сохранении функциональной активности антител сыворотки при длительном нахождении в водном растворе, что приводит также и к упрощению способа получения сыворотки, а также к упрощению проведения реакции агглютинации.

Технический результат достигается тем, что в качестве основного разводящего и стабилизирующего раствора исходной жидкой адсорбированной сыворотки использовали растворы, содержащие полиглюкин (ПГ) - международное непатентованное название - декстран (ср. мол. масса 50000-70000)(крупномолекулярный стабилизатор антител) - 60 г; натрия хлорид - 9 г, вода для инъекций - до 1 л; прозрачная бесцветная или слегка желтоватая жидкость, азид натрия в конечной концентрации 0.2% и 0,2% сорбит в конечной концентрации.

Известно, что полиглюкин используют в качестве криопротектра при лиофильном высушивании препаратов, поскольку он оказывает защитное действие на белковые молекулы (см., например, RU 2326655, 20.06.2008, RU 2214836, 27.10.2003, RU 2236866,27.09.2004).

При этом в уровне техники не описана возможность использования полиглюкина для придания сохранения свойств, входящих в состав сывороток антител при нахождении их в водном растворе.

Таким образом, изобретение представляет собой:

1. Набор для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови, включающий:

- диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный, представляющий собой взвесь формалинзированных эритроцитов барана, сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из сальмонелл в буферном растворе,

- стабильную жидкую сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную путем разведения жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации,

- взвесь формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана,

- планшет для иммунологических реакций;

2. Способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической сальмонеллезной, менингококковой, коклюшной или паракоклюшной, включающий разведение соответствующей жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации;

3. Сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную способом, включающим разведение жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации;

4. Применение стабильной жидкой сыворотки, полученной способом по п. 2, в реакции агглютинации (РА);

5. Применение стабильной жидкой сыворотки, полученной способом по п. 2, в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Изобретение осуществляется следующим способом.

В качестве неограничивающего примера осуществления показано получение сальмонеллезной сыворотки и ее использование в реакциях РА и РПГА. Аналогичным образом были протестированы менингококковые, коклюшные и паракоклюшные сыворотки. Полученные результаты показывают, что во всех случаях для всех указанных сывороток применение в качестве разбавляющего именно раствора полиглюкина с азидом натрия и сорбитом позволяет сохранить стабильность сывороток в жидком виде в течение трех лет.

Были приготовлены разводящие растворы для сыворотки.

В 6%-ный полиглюкин был внесен азид натрия в конечной концентрации 0.2% и сорбит в конечной концентрации 0,2%

Исходную жидкую адсорбированную сальмонеллезную сыворотку разбавляют раствором, полученным внесением в полиглюкин 0.2% азида натрия и 0,2% сорбита.

В качестве дополнительных стабилизаторов были использованы - лс-18 - 0,2%, сорбит 2%, глицин 0,2%, глютатион 0,2%, тиосульфат натрия 0,2 и 0,4% (в дальнейшем от использования тиосульфата натрия отказались в связи с резким снижением активности сывороток), красгемодез 8000 (ГД).

Степень разведения сывороток зависит от того, какая сыворотка используется в качестве исходной и для какой реакции (РА или РПГА). Однако вне зависимости от степени разведения сыворотки использование в качестве стабилизирующего и разводящего раствора полиглюкина с 0.2%-ным азидом натрия или раствора красгемодеза 8000 с 0.2%-ным сорбитом и 0.2%-ным азидом натрия позволяет получить жидкую стабильную в течение трех лет диагностическую сыворотку.

Полученные сыворотки были проверены по показателю специфическая активность в реакции РПГА с использованием сальмонеллезных диагностикумов, производимых ООО «Био-Диагностика» - 1,2,12; 1,4,12; 6,7;6,8;1,9,12;3,10; Ви; комплексный в разведении 1/10 и 1/100 и в реакции РА без разведения с использованием тест штаммов- Salmonella paratyphi А №392, S.typhimurium №415, S.enteritidis (gertneri) №921, S.cholerae suis №92, S. newport, S.anatum №61, S. typhi Vi

Были исследованы сыворотки в различных вариантах, а именно:

1. ПГ без добавок	6. ГД без добавок
2. ПГ + лс-18 0,2%	7. ГД + лс-18 0,2%
3. ПГ + сорбит 2%	8. ГД + сорбит 2%
4. ПГ + глютатион 0,2%	9. ГД + глицин 0,2%
5. ПГ + глицин 0,2%

В процессе хранения все сыворотки проверялись в реакциях РПГА и РА. В РПГА все сыворотки использовались в разведении 1/10. В РА сыворотки использовали без разведения.

Реакция РА.

Когда бактериальная культура смешивается с антисывороткой, специфичной строго к компонентам поверхности клеток бактерий, клетки скрепляются вместе благодаря взаимодействию антиген-антитело и формируют агрегаты (происходит агглютинация). Обычно данную реакцию можно наблюдать невооруженным глазом в виде хлопьев в суспензии. Благодаря смешиванию специфичной антисыворотки с культурой микроорганизмов (например, Salmonella), происходит идентификация определяемых антигенов (например, О и Н). На основе наблюдаемой агглютинации образца серотип определяется по схеме Кауффманна-Уайта.

Реакция протекает следующим образом:

1. Готовят клетки микроорганизмов для постановки реакции. Суспензию обезвреженных клеток микроорганизмов разводят физиологическим раствором (0.9% NaCl, рН=6.5-7.2) до концентрации 20-40 МЕ/мл (используя стандарт мутности МакФарланда). Либо исследуемую культуру берут бактериологической петлей, добавляют в лунку планшета к раствору для разведения и растирают ее до получения однородной суспензии бежево-белого цвета мутностью от 20 до 40 МЕ/мл;

2. Используют сыворотку для реакции, учитывая титр антител (если известен). Исходная сыворотка разводится таким образом, чтобы минимальный титр составлял не менее 1/80. То есть при использовании исходной сыворотки с титром 1/320, развести необходимо будет в 4 раза:

k=t/80, где k - коэффициент разведения, t - титр исходной сыворотки.

Исходную жидкую адсорбированную сальмонеллезную сыворотку разбавляют раствором, полученным внесением в полиглюкин 0.2% азида натрия и 0,2» сорбита;

3. В центр лунки 8-луночного планшета для реакции агглютинации вносится 50 мкл исследуемой культуры и рядом 50 мкл разведенной сыворотки. Капли соединяют, наклоняя планшет. Реакцию определяют визуально в течение 2-6 минут. При развитии реакции агглютинации происходит выпадение агрегатов клеток с антителами, при этом раствор становится более прозрачным.

Учет реакции проводится по четырехкрестной системе:

(4+) - отчетливый агглютинат при полном просветлении жидкости;

(3+) - отчетливый агглютинат на фоне мутноватой жидкости;

(2+) - незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости;

(1+) - незначительное количество агглютината на фоне мутной жидкости;

(-) - признаков агглютинации нет. Однородная мутная жидкость.

Положительной считается реакция агглютинации интенсивностью не менее чем на (3+).

Реакция РПГА.

Принцип РПГА заключается в том, что при специфическом взаимодействии антител к различным видам сальмонелл исследуемой сыворотки крови с антигенами, фиксированными на поверхности индикаторных эритроцитов, наблюдается их характерная агглютинация.

Реакция РПГА проводится в соответствии с рекомендациями используемого диагностикума. В состав набора для диагностики входят:

- стабильная жидкая сыворотка диагностическая сальмонеллезная, полученная путем разведения жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0.2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации;

- взвесь формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана,

- планшет для иммунологических реакций.

Учет РПГА проводится по четырехкрестной системе:

(4+) - все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно лунки в виде "зонтика";

(3+) - агглютинированы почти все эритроциты, на фоне их имеется малозаметное кольцо из осевших неагглютинированных эритроцитов;

(2+) - наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок в виде маленького " колечка " или "пуговки";

(1+) - большинство эритроцитов не агглютинировано и осело в виде маленького "колечка" в центре дна лунки;

(-) - признаков агглютинации нет. Эритроциты осели в виде "пуговки" или "колечка".

Результаты исследований представлены в таблице 1.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что все сальмонеллезные сыворотки рекомендовано разбавлять полиглюкином с натрия азидом 0,2% и с сорбитом 0.2%. Это позволяет сделать сыворотку в жидком виде стабильной в течение длительного времени (до трех лет).

Аналогичным образом были получены и протестированы жидкие диагностические менингокковые, коклюшные и паракоклюшные сыворотки. В результате проведенных опытов было установлено, что менингокковые, коклюшные и паракоклюшные сыворотки для придания им стабильности в жидком виде, также как и сальмонеллезные сыворотки, следует разбавлять полиглюкином с натрия азидом 0,2% и с сорбитом 0.2%. Такие сыворотки также сохраняют свою стабильность в течение трех лет.

Таким образом, в результате осуществления изобретения было подтверждено, что можно получить жидкую сыворотку с длительным сроком хранения вплоть до 3 лет с сохранением ее функциональной активности.

1. Набор для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови, включающий:
- диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный, представляющий собой взвесь формалинзированных эритроцитов барана, сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из сальмонелл в буферном растворе,
- стабильную жидкую сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную путем разведения жидкой адсорбированной сальмонеллезной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации,
- взвесь формалинзированных несенсибилизированных эритроцитов барана,
- планшет для иммунологических реакций.

2. Способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической сальмонеллезной, менингококковой, коклюшной или паракоклюшной, включающий разведение соответствующей жидкой адсорбированной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации.

3. Стабильная жидкая сыворотка диагностическая сальмонеллезная, полученная способом, включающим разведение жидкой адсорбированной сальмонеллезной сыворотки 6% полиглюкином, содержащим 0,2% азида натрия в конечной концентрации и 0,2% сорбит в конечной концентрации.

4. Применение стабильной жидкой сыворотки, полученной способом по п.2, в реакции агглютинации (РА).

5. Применение стабильной жидкой сыворотки, полученной способом по п.2, в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемаггютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА).

Способ диагностики онихомикоза // 2584035

Изобретение относится к области молекулярной генетики и микологии и предназначено для диагностики онихомикоза. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала ногтей, проведение ПЦР и детекцию полученных результатов с помощью электрофореза в агарозном геле.

Способ диагностики нарушений анаэробного метаболизма глюкозы у работников химической и нефтехимической промышленности // 2583946

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы.

Способ мультиплексной пцр-детекции atopobium vaginae, leptotrichia amnionii, sneathia sanguinegens и eggerthella spp. в клиническом материале // 2583924

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале.

Способ исследования операционного материала при карциноме ампулярной области // 2583887

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано для исследования резецированного органокомплекса по поводу ампулярной карциномы.

Способ определения полисорбата // 2583132

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения полисорбата в пробе, содержащей белок. Способ по настоящему изобретению включает предварительную обработку пробы посредством щелочного гидролиза с последующим колориметрическим определением на основе металлокомплекса, определяемого при анализе вещества с тиоцианатным реагентом, при этом указанный комплекс экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем.

Способ прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания цисплатином // 2582968

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA).

Способ выявления мутации p.q368x в гене миоцилина (myoc), вызывающей развитие первичной открытоугольной глаукомы // 2582956

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ выявления мутации p.Q368X (с.1102С>Т) в гене MYOC, сопровождающейся развитием наследственной формы первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ).

Срочная флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика метастатического поражения лимфатических узлов // 2582275

Изобретение относится к флуоресцентной иммуноцитохимической диагностике метастатического поражения лимфатических узлов. Сущность способа состоит в том, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из растворов: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки с питательной средой, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флуоресцентную микроскопию.

Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом пцр в реальном времени // 2581952

Изобретение относится к биохимии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом ПЦР в реальном времени.

Способ прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей // 2585100

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, и предназначено для прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей. Осуществляют выделение ДНК, проводят анализ полиморфизмов гена TGFβ1 и гена EGFR. При выявлении генотипа -25Pro/Pro гена TGFβ1 и генотипа -2073Т/Т гена EGFR прогнозируют вероятность развития нарушения консолидации перелома. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования течения рассеянного склероза // 2585120

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования, что способствует выбору соответствующей стратегии лечения. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности // 2585382

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы (ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ. Сущность способа состоит в том, что осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизмов генов -308G/А TNFα, +250А/G Ltα, +1663А/G TNFR2 и их сочетаний. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов с наследственной отягощенностью при наличии аллеля +1663G TNFR2 или сочетания аллеля +1663G TNFR2 с аллелем -308G TNFα. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности при наличии аллеля -308А TNFα или сочетания аллеля +250G Ltα с аллелем +1663 G TNFR2 или сочетания аллеля -308 А TNFα с аллелем +250 G Ltα. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью спрогнозировать риск формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности. 4 пр., 2 ил.

Способ оценки степени фиброза печени у детей раннего возраста с помощью индекса apri // 2585387

Изобретение относится к медицине, к актуальной проблеме современного здравоохранения, разделу педиатрии и может быть использовано для оценки тяжести поражения гепато-билиарной системы у младенцев и детей раннего возраста и степени выраженности фиброза печени. Сущность способа оценки выраженности фиброза состоит в том, что у обследуемого ребенка утром натощак из периферической вены берут кровь с целью определения уровня фермента АсАТ и количества тромбоцитов. Далее вычисляют индекс APRI по формуле (1), при этом уже известен показатель верхнего нормального значения АсАТ у детей раннего возраста, который составляет 43,88 ед/л. В клинических исследованиях методом дискриминантного анализа было установлено, что показатель индекса APRI достоверно коррелирует с высокой степенью фиброза (F3) у детей первого года жизни, которым была проведена гепатобиопсия под наркозом, которая расценивается как диагностическое оперативное вмешательство. Установлено, что показатель индекса APRI у младенцев с циррозом печени (F4) принимал достоверно высокие значения более 2,45. У детей же без цирроза печени индекс APRI имел значения менее 1,5. Изобретение позволяет вычислять индекс APRI у детей раннего возраста, с помощью которого можно неинвазивным способом без проведения биопсии печени максимально точно, доступно и недорого мониторировать прогрессирование фиброза, прогнозировать исходы, своевременно назначать лечение и контролировать результаты терапии. 3 табл., 3 пр., 2 ил.

Способ иммунологического прогнозирования малых повреждений миокарда // 2585391

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего иммунологического прогнозирования возникновения «малых повреждений миокарда» (МПМ) в послеоперационный период после проведения чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ) и стентирования коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС). Для этого путем биохимического тестирования сыворотки крови на тропонин Т, креатинфосфокиназу-МВ, миоглобин: на 1-е сутки после выполнения чрескожных коронарных вмешательств и стентирования коронарных артерий у пациентов со стабильной ИБС определяют клинико-биохимические изменения показателей в сыворотке крови. При уровне содержания тропонина Т 0-0,030 нг/мл, КФК-МВ 0,10-4,94 нг/мл, миоглобина 25,0-72,0 нг/мл прогнозируют благоприятное клиническое течение послеоперационного периода без развития малых повреждений миокарда. При уровне содержания тропонина Т 0,031-0,090 нг/мл, КФК-МВ 4,95-14,82 нг/мл, миоглобина 72,1-216,0 нг/мл прогнозируют неблагоприятное течение послеоперационного периода с развитием малых повреждений миокарда. Использование данного способа позволяет проводить прогнозирование возникновения «малых повреждений миокарда» в 1-е сутки после ЧКВ и стентирование коронарных артерий, что позволяет проводить своевременные лечебные мероприятия. 4 пр., 1 табл.

Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи // 2585960

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи. Сущность способа состоит в том, что из венозной крови осуществляют выделение генетического материала. Проводят полимеразную цепную реакцию синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина. При проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-AC3'. Детекцию нуклеотидной последовательности осуществляют с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями. При выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. При выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия. 2 ил., 1 табл., 2пр.

Способ получения продукта, содержащего иммуноглобулины g,a,m // 2586255

Изобретение относится к медицине и касается способа получения продукта, содержащего иммуноглобулины G, A, M, при котором в качестве исходного сырья используют осадки фракции Кона, которые гомогенизируют с получением суспензии, которую обрабатывают хлороформом, перемешивают, выдерживают, центрифугируют, формируют осадок с последующим удалением балластных фракций дополнительным центрифугированием, выделяют целевой продукт с последующим розливом, замораживанием и высушиванием. Формирование осадка и удаление балластных фракций осуществляют введением ионов меди Cu2+ в концентрации 1,5-15 мкмоль при величине рН 4,5-5,5 и температуре 0-5°C. Изобретение обеспечивает повышение специфической активности выделяемых иммуноглобулинов и расширение сырьевой базы. 9 пр.

Способ диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации // 2586304

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к ЦМВ, содержание в периферической крови глутаматтрансферазы, активность белка теплового шока Hsp в гомогенате плаценты, а на гистологических срезах гистохимически определяют активность глутаматдегидрогеназы. При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении содержания в периферической крови глутаматтрансферазы до 28,3±0,98 Ед/л, снижении активности в гомогенате плаценты белка теплового шока Hsp-70 до 30,5±1,7 нг/мл, снижении глутаматдегидрогеназы на гистологических срезах до 39,7±1,9 усл. ед. нарушается трансаминирование глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты, что создает угрозу нарушения белкового обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. 2 ил.

Способ оценки риска возникновения патологии беременности // 2586412

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки риска развития патологии беременности. Сущность способа состоит в том, что в качестве биомаркеров оценки риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент, регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Вычисляют концентрации. При концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии, а при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0,9 - о риске развития преждевременных родов. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки риска развития патологии беременности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание пальмитиновой кислоты в периферической крови и гомогенате плаценты беременных, перенесших в третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции // 2586771

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной системы и развития плода на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Способ включает определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, газохроматографическое определение содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной и гомогенате плаценты роженицы, подсчет ядер в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. При титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, повышении содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной на третьем триместре гестации до 30,30±0,27%, а в гомогенате плаценты роженицы до 34,50±0,46% и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты в состоянии апоптоза до 3,5±0,02% создается угроза формирования фетоплацентарной системы и развития плода.