Производные диарилпиридазинона, их получение и применение для лечения людей

Изобретение относится к производным диарилпиридазинона, которые блокируют калиевые Kv каналы (в частности, Kv1.5, Kv4.3 и Kv11.1 каналы), и их использованию для лечения и/или профилактики фибрилляции предсердий и/или желудочковой сердечной аритмии, рака или хронического воспаления. Вышеупомянутые соединения имеют общую формулу (I), где R1 и R2 одновременно или независимо представляют одну или несколько групп, выбранных из галогенов, таких как F, Br, Cl, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкокси, фенилсульфонамида, где фенил может быть замещен линейным или разветвленным C₁-C₄ алкилом или нитрилом. Изобретение включает различные энантиомеры соединений формулы (I) и их смеси в любых пропорциях и их фармацевтически приемлемые соли. Изобретение также относится к способу получения соединений формулы (I) и фармацевтической композиции их содержащей. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл., 11 пр.

 

Изобретение относится к производным диарилпиридазинона, их приготовлению и их использованию для лечения людей в качестве блокаторов калиевых Kv каналов, более конкретно Kv 1.5, Kv 4.3 и Kv 11.1 каналов.

Калиевые каналы представляют собой самое большое семейство ионных каналов в геноме человека с приблизительно 80 генами (Tamargo et al., Cardiovasc. Res. 2004, 62: 9-33). Эти калиевые каналы могут быть разделены на 3 подсемейства: потенциал-, или напряжение-зависимые каналы (K_v каналы), и кальций-активируемые каналы (K_Ca каналы), каналы внутреннего выпрямления (K_ir) и 2-поровые калиевые каналы (К_2р). Подсемейство потенциал-зависимых каналов является наиболее распространенным в организме человека с фактически повсеместным распределением в возбудимых клетках (сердечные клетки, нейроны, поперечнополосатые или гладкомышечные клетки) и невозбудимых клетках, таких как клетки поджелудочной железы, паращитовидной железы, и т.д. (Gutman G. et al., Pharmacol. Rev. 2005, 57: 473-508).

Основной функцией Kv калиевых каналов в возбудимых клетках является контроль остаточного потенциала мембраны и длительности потенциала действия (Nerbonne et Kass, Physiol. Rev. 2005; 85: 1205-1253). В связи с этим некоторые Kv каналы вовлечены в этот контроль и в предсердиях сердца, и в его желудочках. Kv4.3 каналы в сочетании с KChIP 2 субъединицами устанавливают электрический ток I_to, который вовлечен в раннюю фазу реполяризации потенциала действия (ПД); KVLQT1/MinK и hERG каналы вовлечены в позднюю фазу реполяризации ПД (соответственно генерируя электрические токи I_Ks и I_Kr). Вышеупомянутые каналы равномерно распределены между предсердиями и желудочками сердца. Два других типа калиевых каналов, однако, демонстрируют распределение исключительно в предсердиях. Потенциал-зависимые калиевые каналы (K_v1.5) ответственны за ток I_Kur и каналы внутреннего выпрямления активируются ацетилхолином (Kir3.1 и Kir3.4 ответственны за ток I_K-Ach).

Изменения в электрической активности мембран наблюдаются при многих заболеваниях, особенно сердечных расстройствах, включая аритмию. Среди последних фибрилляция предсердий (ФП) является серьезной аритмией, включающей полностью десинхронизированную активность миоцитов предсердий, приводящую к непрерывной, быстрой и нерегулярной электрической активности. ФП вызывается появлением замкнутого электрического контура в ткани предсердия (Miyasaka Y. et al., Circulation 2006, 114: 119-125). В настоящее время не существует специфичного антиаритмического лечения на уровне предсердий для того, чтобы уменьшить распространение ФП, что, следовательно, представляет значительную медицинскую потребность (Page et Roden, Nat. Rev. Drug Discov. 2005, 4: 899-910).

Присутствие большого числа одновременно активируемых микрозамкнутых контуров объясняет беспорядочную природу электрической активности, наблюдаемой как при внутриполостных исследованиях, так и на ЭКГ. Эта аритмия обычно развивается во внутренних отделах миокарда предсердий, которые патологичны с электрофизиологической точки зрения, рефракторная фаза которых является слишком короткой и достаточно нерегулярной по отношению друг к другу, и следовательно, высоко уязвимы к малейшим экстрасистолиям. Эти нарушения находятся в пределах связи с феноменом миокардиального ремоделирования вследствие перегрузки давления или растягивания, вызывающих морфологические изменения (гипертрофию, расширение, фиброз) в дополнение к модификациям в регуляции трансмембранного ионного тока, изменяя электрофизиологические характеристики миоцитов предсердий. При условии, что каждый приступ ФП поддерживает или даже ухудшает этот процесс механического и электрофизиологического ремоделирования, становится понятным, что ФП обладает высоким потенциалом к повторениям, и ее естественное развитие идет по направлению к хроническому течению. С другой стороны, недавно были идентифицированы случаи ФП очагового типа, возникающие в определенной точке, которая, как почти всегда наблюдается, является выступающей частью миокарда предсердий в легочные вены. Эти безусловно редкие случаи ФП принимают четко мономорфный характер, во всяком случае сопоставимый с экстрасистолией предсердий в начале приступа или периодически наблюдаемый между приступами. Во всех случаях потеря систолы предсердий дает в результате уменьшение минутного сердечного выброса, варьирующее между 20 и 30% и все более выраженное в дальнейшем сокращение основного режима работы. Параллельно наличие застоя крови в полостях предсердий, особенно в некоторых слепых мешках, таких как предсердия, приводят к тромбоэмболическому риску. Однако риск эмболии только частично находится под влиянием только наличия ФП, с застоем в предсердиях также связано увеличение внутриполостного давления (систолическая или диастолическая дисфункция левого желудочка, вульвулопатия или искусственный клапан).

Поэтому электрическое ремоделирование составляет главную основу развития ФП; оно является результатом снижения активности кальциевых каналов L-типа, позволяя Kv1.5 калиевым каналам полностью осуществить свою роль реполяризации с помощью ультрабыстрого тока калия (Bhakta et Miller, Expert Opin. Ther. Targets 2007, 11: 1161-1178). Результатом является драматичное уменьшение рефракторного периода, которое представляет ускоряющий фактор для микрозамыканий. Со знанием того, что Kv1.5 калиевые каналы не выражены функционально на уровне желудочков, блокаторы таких каналов будут, следовательно, представлять селективный антиаритмический агент на уровне предсердий без воздействия на электрофизиологию желудочков. Их фармакологический эффект обнаруживается в увеличении времени рефракторного периода и, следовательно, уменьшении эффекта микрозамкнутых контуров. Множество экспериментальных данных, полученных с упоминаемыми препаратами, подтверждают ценность Kv1.5 блокады как терапевтической мишени (Gögelein et al., Naunyn Schmiedeberg′s Arch Pharmacol. 2004, 370: 183-192, Regan et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2008, 324: 322-330).

Быстрые изменения мембранного потенциала широко известны в возбудимых клетках, но медленные колебания потенциала наблюдаются во всех клетках и ассоциированы с контролем клеточного цикла. Клеточный цикл является ключевым параметром в поведении клетки, который нуждается в регулировке и координации для развития, регенерации тканей и клеточной пролиферации (Pardo, Physiology, 2004; 19: 285-292; Blackistion et al., Cell Cylce, 2009; 8-21: 3527-3536). В общих чертах, блокирование калиевых каналов ведет к снижению пролиферации на физиологических моделях (таких как лимфоциты) и патологических моделях (рак). Роль калиевых каналов в регуляции клеточного цикла была продемонстрирована на многих клеточных типах и на обеих моделях - физиологической и патологической (раковые линии или опухоли), происходящих из человеческой меланомы, рака легких, лимфомы, мезотелиомы, гепатокарциномы, лимфоцитов и моноцитов (Pardo et al., J. Membr. Biol, 2005; 205: 115-124).

Как было использовано выше, термин "Kv" относится к семейству потенциал-зависимых калиевых каналов и включает в себя различные подсемейства (Kv1., Kv2., Kv3.…), среди которых были обнаружены Kv1.1, Kv1.2 и Kv1.3 … каналы.

"Блокатор Kv каналов" обозначает молекулу, которая снижает или блокирует ток ионов K⁺ через канал.

Используемый здесь термин «соли» относится к солям соединений изобретения, полученным присоединением неорганических кислот и оснований. Соли предпочтительно являются фармацевтически приемлемыми, т.е. они не токсичны для пациента, которому они предназначены. Термин «фармацевтически приемлемый» относится к молекулам и композициям, которые не приводят к каким-либо неблагоприятным или аллергическим эффектам или любой другой нежелательной реакции при назначении животным или людям. Как здесь используется, термин «фармацевтически приемлемый эксципиент» включает любой разбавитель, адъвант или вспомогательное средство, такие как консервирующие агенты, уплотнители, дезинтегранты, увлажнители, эмульгаторы, диспергирующие агенты, антибактериальные или антигрибковые агенты или подобные агенты, позволяющие задержать абсорбцию или поглощение в кишечнике или пищеварительной системе. Использование таких сред или векторов широко известно в данной области знаний. Если агент не является химически несовместимым с производными диарилпиридазинона, предусматривается его использование в фармацевтической композиции с соединениями согласно изобретению. В пределах контекста изобретения термин «лечение», как здесь используется, подразумевает предотвращение или подавление возникновения или прогрессирования заболевания, к которому применим данный термин, или фактически одного или нескольких симптомов данного заболевания.

Объектом изобретения являются производные диарилпиридазинона, которые блокируют калиевые Kv каналы (более конкретно Kv1.5, Kv4.3 и Kv11.1 каналы) и их последующее использование для лечения людей.

Эти соединения соответствуют общей формуле I

где R1 и R2 одновременно или независимо представляют одну или несколько групп, выбранных из галогенов, таких как F, Br, Cl, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкокси, нитрил или арилсульфонамидо, где арил возможно замещен линейной или разветвленной С₁-С₄ алкильной группой, также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

В пределах изобретения арильная группа определяется как углеводные ароматические 5- или 6-членные моноциклы.

Согласно осуществлению изобретения соединениями общей формулы I являются те, для которых

R1 представляет гидрокси, метокси или цианогруппу; R2 представляет несколько групп, выбранных из галогенов, таких F, Br, Cl, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкокси, нитрилов; также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

Согласно другому осуществлению изобретения соединениями общей формулы I являются те, для которых

R1 представляет гидроксигруппу; R2 представляет несколько групп, выбранных из галогенов, таких F, Cl, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных С₁-С₄ алкокси, нитрилов; также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

Согласно другому осуществлению изобретения соединениями общей формулы I являются те, для которых:

R1 представляет гидроксигруппу, расположенную в параположении (положение 4) на фениле, который она замещает, R2 представляет несколько групп, выбранных из Cl, метил, гидрокси, метокси, нитрил; также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

Изобретение относится к соединениям общей формулы I, отличающимся тем, что они выбраны из следующих:

1. 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он

2. 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((S)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он

3. 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((R)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он

4. 2,2′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрил

5. 3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрил

6. 4,5-Бис-(4-метокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он

7. N,N′-(3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)бис(3,1-фенил))бис(4-метилбензолсульфонамид)

8. 3-(5-(4-метоксифенил)-6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)бензонитрил

9. 2-[5-(4-метокси-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-бензонитрил

10. N-{3-[5-(3,4-Диметил-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-фенил}-4-метил-бензолсульфамид

11. 4,5-Бис-(3,4-дихлоро-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он

Изобретение также относится к различным энантиомеры соединений общей формулы I, также как и их смеси в любых пропорциях.

Смеси энантиомеров в любых пропорциях также включают рацемические смеси.

Предмет изобретения касается таким же образом различных энантиомеров и их смесей в любых пропорциях соединений общей формулы I, также как и фармацевтически приемлемых солей.

Изобретение также относится к процессам химического приготовления соединений общей формулы I, также как и различных энантиомеров и их смесей в любых пропорциях.

Два энантиомера могут быть приготовлены энантиоселективно из (R)- или (S)-1-фениловых этанолов соответственно. Более того, из рацемической смеси возможно получить оба энантиомера с помощью проведения ВЭЖХ разделения на хиральной колонке (например, Chiralpack AD-H, растворитель: гептан/EtOH/диэтиламин).

Изобретение также относится к соединениям общей формулы I, а также различным энантиомерам и их смесям во всех пропорциях и их фармацевтически приемлемым солям для их использования как блокаторов калиевых Kv каналов, и более конкретно Kv1.5, Kv4.3 и Kv11.1 каналов.

Изобретение также относится к соединениям общей формулы I, а также различным энантиомерам и их смесям во всех пропорциях и их фармацевтически приемлемым солям для их использования в качестве лекарственных средств.

Изобретение также относится к соединениям общей формулы I, а также различным энантиомерам и их смесям во всех пропорциях и их фармацевтически приемлемым солям для их использования в качестве лекарственных средств, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний, при которых необходимы блокаторы калиевых Kv каналов, и более конкретно Kv1.5, Kv4.3 и Kv11.1 каналов.

Изобретение также относится к соединениям общей формулы I, а также различным энантиомерам и их смесям во всех пропорциях и их фармацевтически приемлемым солям, для использования их в качестве лекарств, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний, таких как фибрилляция предсердий и предсердечная и/или желудочковая аритмия сердца, а также заболеваний, при которых клеточный цикл, клеточная пролиферация и регенерация являются нарушенными (рак, хроническое воспаление).

Изобретение также охватывает соединения, которые содержат в качестве активного вещества соединения общей формулы I, или одного из его энантиомеров и их смеси во всех соотношениях, или одну из его фармацевтически приемлемых солей.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, котрая содержит соединение общей формулы I, или одного из его энантиомеров и их смеси во всех соотношениях, или одну из его фармацевтически приемлемых солей в сочетании с любым фармацевтически приемлемым наполнителем.

Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть применены орально, подъязычно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, трансдермально, местно или ректально. В этом случае активная субстанция может быть применена в цельных формах введения, в виде смеси с общепринятыми фармацевтическими носителями, животным или людям. Соответствующие цельные формы введения включают формы для орального применения, такие как таблетки, капсулы, порошки, гранулы или оральные растворы или суспензии, подъязычные и буккальные формы применения, подкожные, местные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы применения и ректальные формы применения. Соответствующие рецептуры приготовления препаратов для выбранной формы применения известны квалифицированному в данной области знаний персоналу (Remington, The science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995, Mack Publishing Company).

Дозировка соединений формулы I в композициях изобретения может быть подобрана для того, чтобы получить количество активной субстанции, которая является эффективной для получения желаемого терапевтического ответа для композиции, специфичной для метода применения. Эффективная доза соединения согласно изобретению варьирует в зависимости от большого числа параметров, таких как, например, выбранный способ применения, вес, возраст, пол и природа заболевания в дополнение к индивидуальной чувствительности подвергаемого лечению человека. Поэтому оптимальная доза нуждается в определении специалистом в данной области как функция считающихся уместными параметров.

Синтез

Соединения по изобретению могут быть синтезированы с использованием способов синтеза описанных ниже или методами синтеза, известными специалистам в данной области знаний.

Этот способ синтеза соединений общей формулы I (схема 1), отличается тем, что конденсируют дибромо- или дихлоро-пиридазинон общей формулы II, где X представляет собой или атом хлора, или атом брома,

с производными общей формулы III

где

- когда А представляет атом галогена, такой как атом хлора или атом брома, основание, такое как Cs₂CO₃, используется в растворителе, таком как диметилформамид,

- когда А представляет ОН, условия реакции Мицунобу поддерживаются в присутствии как этил диэтилазодикарбоксилата, так и трифенилфосфина в растворителе, таком как ТГФ. Эти условия, в частности, применимы к энантиоселективному синтезу соединений общей формулы I с (R) или (S)-1-фенилэтанолом.

Полученный промежуточный продукт IV

затем подвергают реакции сочетания (шаг 1) с производным бора V

где R1 определен в общей формуле I и U представляет

В(ОН)₂ или

в смеси растворителей, таких как толуол/этанол или вода/ацетонитрил или диоксан/вода в присутствии основания, такого как карбонат натрия или калия и катализатора, такого как тетракис(трифенилфосфин)палладий или PdCl₂/2PPh₃.

Такие условия реакции, главным образом, приводят к образованию соединения VI и минимально приводят к образованию соединения VII.

Промежуточный продукт VI затем снова подвергают взаимодействию (шаг 2):

- либо с производным бора V в условиях реакции сочетания, описанных выше, с получением соединения VII,

- либо с производным бора VIII

где R2 определен в общей формуле I и U определен выше в условиях реакции сочетания, описанных для шага 1, с получением соединения IX.

Схема 1

Промежуточные и конечные соединения могут, если требуется, быть очищены в соответствии с одним или несколькими способами очистки, выбранными из экстракции, фильтрации, хроматографии на силикагеле с нормальной фазой или с обращенной фазой или хиральной препаративной ВЭЖХ и кристаллизации.

Исходные материалы, используемые в процессах, описанных выше, являются доступными для приобретения или легко доступны специалистам в данной области знаний в соответствии с процессами, описанными в литературе.

Элементные анализы и масс- и ЯМР-спектры подтверждают структуру соединений.

Примеры

А) Промежуточные соединения

Промежуточные соединения 1:

а) 4,5-дихлоро-2-(1-фенилэтил)пиридазин-3(2Н)-он (1а)

4,5-дихлоропиридазин-3(2Н)-он (20 г, 121 ммоль) помещается в присутствии 1-бромэтил)бензола (33.7 г, 182 ммоль) и карбоната цезия (47.4 г, 145 ммоль) в 100 мл ДМФА при комнатной температуре на 4 ч. После концентрирования досуха осадок обрабатывается водой и экстрагируется этилацетатом. Органические слои сушатся и затем концентрируются досуха. Полученный осадок очищается флэш-хроматографией на силикагеле (Петролейный эфир-AcOEt: 95-5). Получается 31 г чистого масла (выход 95%). ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир - AcOEt: 90-10, Rf=0.50.

б) 4,5-Дихлоро-2-((S)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (1б)

4,5-дихлоропиридазин-3(2Н)-он (1.35 г, 8.2 ммоль) помещается в 30 мл ТГФ в присутствии (R)-1-фенилэтанола (1 г, 8.2 ммоль) трифенилфосфина (2.15 г, 8.2 ммоль), к которому добавлен этил диэтилазодикарбоксилат (1.71 г, 9.82 ммоль). Реакционная смесь перемешивается в течение ночи при комнатной температуре и затем концентрируется досуха. Остаток обрабатывается водой и экстрагируется дихлорметаном на колонке SPE (диатомит). Органические слои концентрируются досуха и полученный остаток очищается флэш-хроматографией на силикагеле (CH₂Cl₂). Изолируется 2.1 г желтого масла (выход 80%). ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH:95-5, Rf=0.66.

в) 4,5-дихлоро-2-((R)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (1в)

Промежуточное соединение 1в (масло) готовится из (S)-1-фенилэтанола согласно методу работы, описанному для промежуточного соединения 1б (77%). ТСХ силикагель 60 F 5 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH:90-10, Rf=0.82.

Б) Соединения согласно изобретению

Пример 1: 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (1)

Соединение 1 получают согласно следующему методу синтеза:

Шаг 1: промежуточное соединение 1а (8.7 г, 32.3 ммоль) помещается в присутствии тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (1.12 г, 0.97 ммоль) и карбоната натрия (6.85 г, 64.7 ммоль) в смесь 50 мл толуола и 50 мл этанола и смесь нагревается до 80°C. Добавляется 1.2 эквивалента 4-гидроксифенилборной кислоты и смесь нагревается с обратным течением в течение 5 ч и добавляется 1.2 дополнительного эквивалента 4-гидроксифенилборной кислоты, и дефлегмация поддерживается в течение ночи. После концентрирования досуха осадок обрабатывают водой и экстрагируют с помощью AcOEt. После сушки органических слоев и концентрирования досуха полученный осадок очищается с помощью флэш-хроматографии (CH₂Cl₂-MeOH, градиент 100-0 до 97-3 через 40 мин). Получается 0.7 г минорного соединения 1 и 8.2 г твердой фазы, соответствующей замещенному моно-продукту 4-хлоро-5-(4-гидроксифенил)-2-(1-фенилэтил)-пиридазин-3(2Н)-он (выход: 78%).

Шаг 2: этот замещенный моно-продукт снова реагирует в условиях, описанных для шага 1 (2.4 эквивалента 4-гидроксифенилборной кислоты, дефлегмация в течение ночи). После обработки реакционной смеси полученный остаток очищается с помощью флэш-хроматографии (CH₂Cl₂-МеОН, градиент 100-0 до 98-2 через 20 мин). Остаток растирается в порошок в смеси диэтиловый эфир-CH₂Cl₂-МеОН: 40-5-2 и полученное соединение 1 (твердое) выделяют с помощью фильтрации (7.2 г, выход 78%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH: 95-5, Rf=0.35. F=160°C

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 9.56 (m, 2Н), 8.02 (s, 1Н), 7.39 (m, 5Н), 6.96 (m, 4Н), 6.63 (m, 4Н), 6.24 (m, 1Н), 1.72 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 385 (МН+)

Пример 2: 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((S)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (2)

Соединение 2 получают согласно методу синтеза, описанному для примера 1, из промежуточного соединения 1в (выход: 85%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH: 90-10, Rf=0.60.

F=168°C

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 9.70 (s, 1Н), 9.54 (s, 1Н), 8.02 (s, 1Н), 7.39 (m, 5Н), 6.97 (m, 4Н), 6.63 (m, 4Н), 6.24 (m, 1Н), 1.72 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 385 (МН+)

α_calc(МеОН)=-256.5°

Хиральная ВЭЖХ: Хиральная колонка AD-H 250*4.6 мм DAI, растворитель (1 мл/мин): гептан/EtOH/диэтиламин: 80/20/0.1, время удержания: 8.92 мин.

Пример 3: 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((R)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (3)

Соединение 3 получают согласно методу синтеза, описанному для примера 1, из промежуточного соединения 16 (выход: 43%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH: 90-10, Rf=0.60.

F=222°C

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 9.70 (s, 1Н), 9.54 (s, 1Н), 8.02 (s, 1Н), 7.39 (m, 5Н), 6.97 (m, 4Н), 6.63 (m, 4Н), 6.24 (m, 1Н), 1.72 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 385 (MH+)

α_calc(MeOH)=272.2°

Хиральная ВЭЖХ: Хиральная колонка AD-H 250*4.6 мм DAI, растворитель (1 мл/мин.): гептан/EtOH/диэтиламин: 80/20/0.1, время удержания: 7.23 мин.

Пример 4: 2,2′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрил (4)

Соединение 4 получают из промежуточного соединения 1а и 2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксоборолан-2-ил)бензонитрила согласно шагу 1 метода синтеза с использованием PdCl₂/2PPh₃, Na₂CO₃ и смеси вода/ацетонитрил: 1/1. Образующийся минорный продукт соответствует соединению 4 (выход: 3.4%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂, Rf=0.23.

F=200°C

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 8,19 (s, 1Н), 7.80 (d, 2Н), 7.75 (d, 2Н), 7.36 (m, 9Н), 6.27 (q, 1Н), 1.76 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 403 (MH+)

Пример 5: 3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрил (5)

Соединение 5 получают из промежуточного соединения 1а и 3-цианофенилбороновой кислоты в условиях, описанных для примера 4. Образующийся минорный продукт (твердый) соответствует соединению 4 (выход: 7.4%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂, Rf=0.11.

F=202°C

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 8.23 (s, 1Н), 7.78 (m, 3Н), 7.72 (s, 1H), 7.40 (m, 9H), 6.28 (q, 1H), 1.77 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 403 (MH+)

Пример 6: 4,5-Бис-(4-метокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (6)

Соединение 6 получают из промежуточного соединения 1а и 4-метоксифенилбороновой кислоты в условиях, описанных для примера 1, с использованием тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), K₂CO₃ и смеси диоксан/вода: 3/1. Соединение 6 выделяется в твердой форме (выход: 71%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt:80-20, Rf=0.20.

ЯМР ¹Н (CDC1₃) ppm: 7.88 (s, 1Н), 7.53 (d, 2Н), 7.37-7.31 (m, 2Н), 7.30-7.26 (m, 1Н), 7.14-7.13 (d, 2Н), 7.06-7.02 (d, 2Н), 6.80-6.75 (m, 4Н), 6.47-6.40 (m, 1Н), 3.78 (s, 3Н), 3.77 (s, 3Н), 1.83 (s, 3Н).

MS (+ESI) m/z 413 (MH+)

Пример 7: N,N′-(3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)бис(3,1-фенилен))бис(4-метилбензолсульфонамид) (7)

Соединение 7 получают из промежуточного соединения 1а и 4-метил-N-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксоборолан-2-ил)фенил)бензолсульфонамида в условиях, описанных для примера 6. Соединение 7 выделяется в твердой форме (выход: 74%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 50-50, Rf=0.46.

F=202°C

ЯМР ¹Н (ДМСО) ppm: 10.26 (s, 1Н), 10.14 (s, 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.53 (d, 4Н), 7.42-7.25 (m, 9Н), 7.08-6.88 (m, 6Н), 6.52 (dd, 2Н), 6.26-6.18 (m, 1Н), 2.31 (s, 6Н), 1.74 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 691 (МН+)

Пример 8: 3-(5-(4-метоксифенил)-6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)бензонитрил (8)

Соединение 8 получают из промежуточного соединения 1а и 3-цианофенилбороновой кислоты согласно шагу 1 метода синтеза с использованием PdCl₂/2PPh₃, Na₂CO₃ и смеси вода/ацетонитрил: 1/1. Получаемый основной продукт (1.96 г, 3-(5-хлоро-6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)бензонитрил, выход: 19%) выделяется и впоследствии вводится в шаг 2 метода синтеза с использованием 4-метоксифенилбороновой кислоты с тетракис(трифенилфосфин)палладием(0), K₂CO₃ и смеси диоксан/вода: 2/1. Соединение 8 выделяется в твердой форме (выход: 62%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 50-50, Rf=0.53.

F=198°C

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 50-50, Rf=0.53.

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 8.13 (s, 1Н), 7.77 (m, 2Н), 7.38 (m, 7Н), 7.09 (d, 2Н), 6.81 (d, 2Н), 6.28 (q, 1Н), 3.71 (s, 3Н), 1.75 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 408 (MH+)

Пример 9: 2-[5-(4-Метокси-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидро-пиридазин-4-ил]-бензонитрил (9)

Соединение 9 получают из промежуточного соединения 1а и 2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензонитрила согласно шагу 1 метода синтеза с использованием PdCl₂/2PPh₃, Na₂CO₃ и смеси вода/ацетонитрил: 1/1. Получаемый основной продукт (1.5 г, 2-(5-хлоро-6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)бензонитрил, выход: 16%) выделяется и впоследствии вводится в шаг 2 метода синтеза с использованием 4-метоксифенилбороновой кислоты с тетракис(трифенилфосфин)палладием(0), K₂CO₃ и смеси диоксан/вода: 2/1. Соединение 9 выделяется в твердой форме (выход: 71%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 70-30, Rf=0.45.

F=176°C

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 50-50, Rf=0.53.

ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆) ppm: 8.09 (s, 1Н), 7.79 (d, 2H), 7.40 (m, 7H), 7.08 (d, 2H), 6.81 (d, 2H), 6.28 (q, 1H), 3.71 (s, 3Н), 1.75 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 408 (MH+)

Пример 10: N-{3-[5-(3,4-Диметил-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-фенил}-4-метил-бензолсульфамид (10)

Соединение 10 получают из промежуточного соединения 1а и 24-метил-N-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)бензолсульфамида согласно шагу 1 метода синтеза с использованием PdCl₂/2PPh₃, Na₂CO₃ и смеси вода/ацетонитрил: 1/1. Получаемый основной продукт (-N-(3-(5-хлоро-6-оксо-1-(5 г, 1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)фенил)-4-метиленбензенсульфонамид, выход: 62%) выделяется и впоследствии вводится в шаг 2 метода синтеза с 3,4-диметилфенилбороновой кислотой с использованием тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), K₂CO₃ и смеси диоксан/вода: 2/1. Соединение 10 выделяется в твердой форме (выход: 67%).

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, CH₂Cl₂-MeOH: 97.5-2.5, Rf=0.65.

ЯМР ¹Н (ДМСО) ppm: 10.24 (s, 1Н), 7.92 (s, 1Н), 7.54 (d, 2Н), 7.41-7.26 (m, 7Н), 7.10 (t, 1Н), 7.04 (s, 1Н), 6.96-6.91 (m, 2Н), 6.88 (d, 1Н), 6.72 (d, 1Н), 6.62 (d, 1Н), 6.27-6.20 (m, 1Н), 2.34 (s, 3Н), 2.15 (s, 3Н), 2.06 (s, 3Н), 1.73 (d, 3Н).

MS (+ESI) m/z 550 (МН+)

Пример 11: 4,5-Бис-(3,4-дихлоро-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-он (11)

Соединение 11 получают из промежуточного соединения 1а и 3,4-дихлорофенилбороновой кислоты в условиях, описанных для примера 1 с использованием тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), K₂CO₃ и смеси диоксан/вода: 7/3. Соединение 11 выделяется в твердой форме (выход: 54%).

F=92°C

ТСХ силикагель 60 F 254 Merck, Петролейный эфир-AcOEt: 80-20, Rf=0.54.

ЯМР ¹Н (ДМСО) ppm: 8.19 (s, 1Н), 7.64 (d, 1Н), 7.61-7.57 (m, 2Н), 7.54 (d, 1Н), 7.44-7.26 (m, 5Н), 7.13 (dd, 1Н), 7.07 (dd, 1Н), 6.30-6.22 (m, 1Н), 1.75 (d, 3Н)

MS (+ESI) m/z 491 (MH+)

В) Фармакологическая оценка

Фармакологическая оценка влияния соединений на Kv1.5 калиевые каналы была произведена в 96-луночных плашках по технологии FLIPR с помощью измерения ионов таллия.

Клетки HEK293, стабильно трансфицированные человеческой изоформой Kv1.5 каналов, были рассеяны за 24 ч до эксперимента в 96-луночных плашках (15·10⁶ клеток/плашка, 200 мкл/лунка), полилизинированные в следующей питательной среде: ДМЕМ, 10% ЭКС, Пенициллин/Стрептомицин, G418 в качестве селективного антибиотика.

Экспериментирование в FLIPR было выполнено с использованием «FLIPR Potassium Ion Channel Assay Kit» в соответствии с указаниями изготовителя (Molecular Devices).

Вкратце, культуральная среда заменяется раствором, содержащим маркер таллий, на 90 мин при 37°C. После этой стадии тестируемые соединения добавляются до конечной концентрации 10 мкМ в лунке на 15 мин при 37°C. В дальнейшем считывается базовая флуоресценция в течение 60 с. Добавление деполяризационной среды (20 мМ калия и 3 мМ конечного таллия) открывает калиевые каналы и приводит к увеличению флуоресценции флуорофора таллия, обозначая протекание ионов таллия через hKv1.5 каналы. Измерение производится через 30 с после введения деполяризующего раствора. Применение 10 мкМ ДФО (Tocris, блокатор Kv1.5 каналов) позволяет нормализовать флуоресценцию.

Таблица 1
Примеры	% ингибирования при 10 мкМ
BMS394136	99.6
1	100
2	100
3	43.3
4	54.9
5	93.6
6	94.2
7	54.9
8	88
9	60.1
* BMS394136 является блокатором Kv1.5 каналов, разработанный в Bristol Myers Squibb (Реферат, D. Xing et al. Circulation 2009, 120 (18S3): 2515).

Полученные результаты показывают, что соединения общей формулы (I) блокируют Kv1.5 каналы.

Соединения общей формулы (I) могут быть использованы как блокаторы Kv1.5 каналов.

Сокращения

ТСХ Тонкослойная хроматография

ДМФА Диметилформамид

ДМСО Диметилсульфоксид

ДФО (2-изопропил-5-метил-циклогексил)дифенилфосфин оксид

ВЭЖХ Высокоэффективная жидкостная хроматография

Rf значение Rf (Reference front)

ЯМР Ядерный магнитный резонанс

ТГФ Тетрагидрофуран

1. Соединения общей формулы I

где R1 и R2 одновременно или независимо представляют одну или несколько групп, выбранных из галогенов, таких как F, Br, Cl, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкокси, нитрил или фенилсульфонамидо, где фенил может быть замещен линейной или разветвленной C₁-С₄ алкильной группой, а также различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединения общей формулы I по п. 1, отличающиеся тем, что

R1 представляет гидрокси, метокси или цианогруппу;
R2 представляет несколько групп, выбранных из галогенов, таких F, Br, Cl, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкокси, нитрилов;
также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

3. Соединения общей формулы I по п. 1, отличающиеся тем, что

R1 представляет гидроксигруппу;
R2 представляет несколько групп, выбранных из галогенов, таких как F, Cl, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкилов, гидрокси, линейных или разветвленных C₁-C₄ алкокси, нитрилов;
также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

4. Соединения общей формулы I по п. 1, отличающиеся тем, что

R1 представляет гидроксигруппу, расположенную в параположении (положение 4) на фениле, который она замещает;
R2 представляет несколько групп, выбранных из Cl, метил, гидрокси, метокси, нитрила;
также как и различные энантиомеры и их смеси в любых пропорциях, и их фармацевтически приемлемые соли.

5. Соединения общей формулы I по п. 1, отличающиеся тем, что они выбраны из:
1) 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-она
2) 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((S)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-она
3) 4,5-Бис-(4-гидрокси-фенил)-2-((R)-1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-она
4) 2,2′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрила
5) 3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)дибензонитрила
6) 4,5-Бис-(4-метокси-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-она
7) N,N′-(3,3′-(6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4,5-диил)бис(3,1-фенил))бис(4-метилбензолсульфонамида)
8) 3-(5-(4-метоксифенил)-6-оксо-1-(1-фенилэтил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил)-бензонитрила
9) 2-[5-(4-Метокси-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-бензонитрила
10) N-{3-[5-(3,4-диметил-фенил)-6-оксо-1-(1-фенил-этил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-фенил}-4-метил-бензолсульфамида
11) 4,5-Бис-(3,4-дихлоро-фенил)-2-(1-фенил-этил)-2Н-пиридазин-3-она.

6. Способ получения химических соединений общей формулы I по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что конденсируют дибромо- или дихлоро-пиридазинон общей формулы II, где X представляет либо атом хлора, либо атом брома,

с производными общей формулы III

где
- когда А представляет атом галогена, такой как атом хлора или атом брома, основание, такое как Cs₂CO₃, используется в растворителе, таком как диметилформамид.
- когда А представляет ОН, условия реакции Мицунобу поддерживаются как в присутствии этил диэтилазодикарбоксилата, так и трифенилфосфина в растворителе, таком как ТГФ;
полученное промежуточное соединение IV

далее подвергают реакции сочетания (шаг 1) с производными бора V

где R1 определен, как в общей формуле I, и U представляет В(ОН)₂ или

в смеси растворителей, таких как толуол/этанол или вода/ацетонитрил или диоксан/вода в присутствии основания, такого как карбонат натрия или калия и катализатора, такого как тетракис(трифенилфосфин)палладий или PdCl₂/2PPh₃;
так что главным образом происходит образование соединения VI

и минимально происходит образование соединения VII;
затем промежуточное соединение VI снова подвергают взаимодействию (шаг 2):
- либо с производным бора V в условиях сочетания, описанных ранее, с получением соединения VII

R1=R2
- либо с производным бора VIII

где R2 определен, как в общей формуле I, и U определен выше в условиях сочетания, ранее описанных для шага 1 с получением соединения IX

R1 отличается от R2

7. Соединения по пп. 1-5 для применения в качестве блокаторов калиевых каналов, более конкретно Kv 1.5, Kv4.3 и Kv 11.1 каналов.

8. Соединения по пп. 1-5 для применения в качестве лекарств, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний, требующих блокаторов калиевых каналов, более конкретно Kv 1.5, Kv4.3 и Kv 11.1 каналов.

9. Соединения по п. 8 для применения в лечении и/или профилактике фибрилляции предсердий, предсердечной и/или желудочковой сердечной аритмии и заболеваний, в которых клеточный цикл и/или клеточная пролиферация и/или регенерация являются нарушенными, таких как рак или хроническое воспаление.

10. Фармацевтическая композиция, блокирующая калиевые каналы, такие как Kv 1.5, Kv4.3 и Kv 11.1 каналы, включающая соединение общей формулы I по любому из пп. 1-5 в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.