Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2585382:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы (ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ. Сущность способа состоит в том, что осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизмов генов -308G/А TNFα, +250А/G Ltα, +1663А/G TNFR2 и их сочетаний. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов с наследственной отягощенностью при наличии аллеля +1663G TNFR2 или сочетания аллеля +1663G TNFR2 с аллелем -308G TNFα. Прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности при наличии аллеля -308А TNFα или сочетания аллеля +250G Ltα с аллелем +1663 G TNFR2 или сочетания аллеля -308 А TNFα с аллелем +250 G Ltα. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью спрогнозировать риск формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности. 4 пр., 2 ил.

 

Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности

Истинная экзема - повсеместно встречающееся, рецидивирующее заболевание кожи, которое характеризуется полиморфизмом морфологических элементов и возникает в любом возрасте [Клиническая дерматовенерология: руководство для врачей: в 2-х т. /под ред. Ю. К. Скрипкина, Ю. С. Бутова. - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т. 2. - 921 с.]. Название данного заболевания можно объяснить свойством везикул быстро вскрываться, подобно пузырькам кипящей воды (по-гречески eczeo - вскипать). Важный признак острой экземы - наличие сгруппированных, многочисленных и быстро вскрывающихся мелких пузырьков, образующих серозные «колодцы», сходных с пузырьками на поверхности кипящей воды [Оспанова С.А. Совершенствование терапии экземы с учетом эндогенной интоксикации: автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.00.11 /С.А. Оспанова; Казах. науч.-исслед. кож.-венерол. ин-т М-ва здравоохранения Респ. Казахстан. - Алматы, 2008. - 21 с.].

На разных этапах развития учений об экземе важное значение в этиологии и патогенезе экземы придавали неврогенной и аллергической теориям, роли эндокринной системы, наследственным факторам.

По мнению большинства исследователей экзему следует относить к мультифакториальным заболеваниям с полигенным типом наследования с пороговым эффектом. При сочетании определенных генетических дефектов и средовых факторов достигается пороговое значение, при котором и появляется клиническая картина заболевания. Существует большое количество фенотипически здоровых людей с высоким риском формирования аллергических заболеваний в неблагоприятных условиях внешней среды.

При вовлеченности большого числа генов-кандидатов в подверженность к истинной экземе достаточно воздействия незначительных средовых факторов, чтобы очень быстро предрасположенность к развитию аллергического заболевания реализовалась в виде заболевания. И наоборот, агрессивные факторы внешней среды даже при минимальных генетических факторах подверженности могут привести к быстрому формированию экземы [Cytokines and chemokines orchestrate atopic skin inflammation /B. Homey, M. Steinhoff, T. Ruzicka [et al.] //J. Allergy. Clin. Immunol. - 2006. - Vol. 118, №1. - P. 178-189].

В современной литературе собрано большое количество наблюдений, указывающих на связь аллергических заболеваний у родителей или родственников больного с появлением каких-либо аллергических проявлений у детей. Если оба родителя ребенка страдают аллергическим заболеванием, то риск формирования экземы по разным данным составляет от 50% до 80%, если наследственность отягощена по материнской линии, то риск развития аллергического заболевания составляет от 30% до 50%.

У индивидуумов, c наследственной предрасположенностью, которая подтверждается положительной ассоциацией антигенов системы гистосовместимости (В22 и Cw1), усиливается синтез простагландина F2a, что вызывает стимуляцию выработки циклического гуанозинмонофосфата, активирующего синтез серотонина, гистамина и других медиаторов аллергии, что способствует развитию воспалительных и аллергических реакций и повышает проницаемость сосудов [Дегтяр Ю.С. Особенность гормонального статусаа у больных экземой и другими дерматозамии в условиях Севера /Ю.С. Дегтяр, Л.К. Добродеева //Вестник дерматологии и венерологии. - 2000. - №5. - С. 50-53]. Одновременно с увеличением образования простагландина F2a повышается синтез простагландина E1, но его концентрация значительно снижена по отношению к увеличивающейся концентрации простагландина F201. Недостаток содержания простагландина Е1, нарушение его соотношения с содержанием простагландина F2a приводит к недостаточной стимуляции синтеза циклического аденозинмонофосфата, подавляющего формирование аллергических и воспалительных реакций, выработку медиаторов аллергии [Дикова О.В. Состояние эндотоксикоза у больных экземой / О.В. Дикова, С.В. Селиванова, Е.Ю. Кочеткова //Вестник последипломного медицинского образования. - 2001. - №1. - С. 31. - (Новое в дерматовенерологии, андрологии и гинекологии: наука и практика: материалы VI междисциплинар. симп., Москва, 15-16 марта 2001 г.)].

Таким образом, у больных экземой в результате повышения содержания F2a и нарушения соотношения ПГЕ1/ПГФ2а и цАМФ/цГМФ происходит преобладание простагландина F2a и циклического гуанозинмонофосфата, что является одной из причин развития заболевания [Мазитова Л.П. Современные аспекты патогенеза излечения аллергодерматозов у детей /Л.П. Мазитова //Русский медицинский журнал. - 2001. - Т. 9, №11. - С. 457-460].

В тромбоцитах периферической крови больных экземой установлено усиление синтеза и экскреции серотонина в кровяное русло. Реакция высвобождения тромбоцитов, в результате которой серотонин поступает в кровь, регулируется простагландинами. Простагландин Е1 ее подавляет, а простагландин F2a провоцирует [Емельянов А.В. Топические кортикостероиды в терапии аллергодерматозов: значения внегеномного эффекта /А. В. Емельянов, К. Н. Монахов //Вестник дерматологии и венерологии. - 2002. - №3. - С. 59-61]. Преобладание простагландина F2a обусловливает повышение содержания в крови серотонина, что усугубляет аллергические реакции. Гормон щитовидной железы тиреокальцитонин стимулирует активность аденилатциклазы - фермента, катализирующего синтез циклического аденозинмонофосфата из АТФ. Повышение содержания тиреокальцитонина у больных экземой, возможно, и есть проявление защитных реакций организма. Изменения иммунного статуса повышают аллергическую реактивность и наряду с циклическими нуклеотидами и простагландинами приводят к формированию экземы.

По современным представлениям, в развитии экземы главную роль играют Т-лимфоциты, которые несут на своей поверхности специфические рецепторы к антигену и выделяют ряд провоспалительных цитокинов: ИЛ-1, ИЛ-2, ФНО-α [Павлова О.В. Экзема: этиология, патогенез, клиника, диагностика и лечение /О.В. Павлова. - Москва: URSS Либроком, 2010. - 61 с.]. Выброс биологически активных веществ вызывает развитие тканевых реакций воспаления, что клинически проявляется аллергической реакцией в виде отека, гиперемии, зуда.

Провоспалительные цитокины вызывают индукцию экспрессии молекул адгезии на эндотелиальных клетках и лейкоцитах, вследствие чего путем трансэндотелиальной миграции усиливается приток в очаг воспаления лейкоцитов из сосудистого русла [Interleukin-16 stimulates the expression and production of pro-inflammatory cytokines by human monocytes /N. L. Mathy, W. Scheuer, M. Lanzendörfer [et al.] //Immunology. - 2000. - Vol. 100, №1. - P. 63-69]. Дальнейшее накопление и продвижение иммунокомпетентных клеток в очаге воспаления контролируют хемокины, которые продуцируются эндотелиальными клетками и макрофагами. Клеточный инфильтрат в очаге воспаления, состоящий из макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов, способствует развитию аллергического воспаления. Полиморфный инфильтрат в коже при экземе - результат действия образовавшихся провоспалительных цитокинов, в том числе ФНО-α.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2013 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы по генетическим данным в зависимости от наследственной отягощенности.

За прототип выбрана выявленная в научно-медицинской литературе статья Ассоциация полиморфизма лимфотоксина α (+250 A/G Ltα) с формированием хронической истинной экземы [Я. Е. Денисова, М. И. Чурносов //Современные проблемы науки и образования. - 2014. - №3. - Режим доступа: http://www.science-education.ru/117-13677]. Способ включает забор венозной крови, выделение геномной ДНК из периферической крови и анализ локуса +250 A/G Ltα методом полимеразной цепной реакции (далее ПЦР) синтеза ДНК. Установлены особенности ассоциаций генетического полиморфизма +250G Lt α с формированием хронической истинной экземы (далее ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности. В группе больных ХИЭ, без отягощенного семейного анамнеза, +250A/G Ltα вносит значимый вклад в подверженность к ХИЭ: факторами риска формирования ХИЭ являются генетические варианты +250G Ltα и +250GG Ltα .

Недостатком известного способа является его ограниченность, т.к. для прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности рассматриваются только генетические полиморфизмы +250 A/G Ltα .

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска формирования ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ в зависимости от наличия наследственной отягощенности по данным о генетических полиморфизмах -308G/A TNFα и +1663A/G TNFR2 и их сочетаний, в том числе с +250A/G Ltα.

Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска формирования хронической истинной экземы в зависимости от наследственной отягощенности по данным о генетических полиморфизмах -308G/A TNFα и +1663A/G TNFR2 и их сочетаний с полиморфным вариантом +250A/G Ltα.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, в зависимости от наследственной отягощенности, включающий:

- забор венозной крови,

- выделение геномной ДНК из периферической крови методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК,

- анализ локуса +250A/G Ltα,

в который внесены следующие новые признаки:

- анализ полиморфизмов генов фактора некроза опухоли α (-308G/A TNFα) и рецептора фактора некроза опухоли 2 типа (+1663A/G TNFR2);

- прогнозирование риска развития ХИЭ у индивидуумов с наследственной отягощенностью при наличии аллеля+1663G TNFR2 или сочетания аллеля +1663G TNFR2 с аллелем -308G TNFα;

- прогнозирование риска развития ХИЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности при наличии аллеля -308А TNFα или сочетания аллеля +250G Ltα с аллелем +1663 G TNFR2 или сочетания аллеля -308 А TNFα с аллелем +250 G Ltα.

Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что впервые установлена вовлеченность генетических полиморфизмов фактора некроза опухоли α (-308 G/A TNF α) и рецептора фактора некроза опухоли 2-го типа (+1663А/G ТNFR2) и их сочетаний, в том числе с полиморфным вариантом +250A/G Ltα в формировании хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности.

Способ осуществляют следующим образом.

Выделение геномной ДНК осуществляют стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. 1-ый этап: к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, который содержит 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х -100, 5 мМ MgCl2 и 10 мМ трис-НCl (pH=7,6).Полученную смесь при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут перемешивают и центрифугируют. После центрифугирования сливают надосадочную жидкость, к полученному осадку добавляют 4 мл раствора, с 25 мM ЭДТА (рН=7,8) и 75 мМ NaCl, затем ресуспензируют. После этого прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы K (10 мг/мл) и в течение 16 часов при 37ºС инкубируют образец.

На 2-м этапе в течение 10 минут при 4000 об/мин из полученного лизата последовательно экстрактируют ДНК равными частями фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием. Производят отбор водной фазы после каждого центрифугирования. Из раствора 2-мя объемами охлажденного 96% этанола осаждают ДНК. Полученную ДНК растворяют в деионизованной, бидистиллированной воде и хранят при t=-20 0С. Выделенную ДНК используют для полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК.

Анализ -308G/А TNFα, +250G/A Ltα, +36A/G TNFR1, +1663A/G TNFR2 осуществлялся методами ПЦР синтеза ДНК на CFX 96 с системой ПЦР в режиме real time. Использовали ДНК-полимеразу Thermus aquaticus (производитель фирма «Силекс-М») и олигонуклеотидные праймеры и зонды (синтезированные фирмой «Синтол»).

Реакционная смесь (объем 25 мкл) включает: 67 мМ трис-НCl (pН=8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пмоль каждого зонда, по 200 мкM dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. Для каждой пары праймеров рассчитывали оптимальный температурный и временной режим отжига и подбирали соответствующую концентрацию MgCl2.

Генотипирование производят по методу Tag Man зондов на основании данных значений RFU (уровень относительной флуоресценции) для каждого зонда при проведении ПЦР в амплификаторе IQ5.

Изобретение характеризуется:

Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин УОФ (далее уровень относительной флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса -308 G/A TNFα, где

○ -308АА TNFα, □ -308GG TNFα, Δ -308GA TNFα, ◊ - контрольный образец.

Фиг.2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин УОФ каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса +1663A/G TNFR2, где ○ - +1663GG TNFR2, □ - +1663AA TNFR2, Δ -+1663AG TNFR2, ◊ - контрольный образец.

На фигурах 1-2 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием УОФ для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю A, зонд с красителем FAM - аллелю G.

Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (GA).

Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю A (УОФ аллеля A отложены по оси y).

Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю G (УОФ аллеля G отложены по оси x).

Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.

Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития хронической истинной экземы в зависимости от наследственной отягощенности подтверждает анализ результатов обследования 552 индивидуумов: отягощенный семейный анамнез по заболеванию был выявлен у 80 больных (34,78%), 150 больных ХИЭ (65,22%) не имели наследственной отягощенности и 322 человек контрольной группы.

В исследуемые группы включались лица русской национальности, которые являлись уроженцами Центрального Черноземья Российской Федерации и не имели родства между собой. Клиническое и клинико-лабораторное обследование больных проводили на базе поликлинического отделения ОГБУЗ «Кожно-венерологический диспансер».

Средний возраст больных хронической истинной экземой составил 45,91±2,68 (варьировал от 18 лет до 86 лет), контрольной выборки - 43,62±3,46 (варьировал от 20 до 76 лет) (р>0,05). Следовательно, группа больных не отличалась от группы контроля по возрасту, месту рождения и национальности.

С целью решения проблемы множественных сравнений, связанной с получением ложноположительных результатов (ошибка 1-го рода), вводили поправку Бонферрони, т.е. производили перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: рcor=р·n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали рcor≤0,05. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ХИЭ проведен с помощью программного обеспечения APSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующий метод Монте-Карло марковских цепей и байесовскую непараметрическую статистику. Уровень р, полученный после пермутационного теста рреrm ≤0,05 (выполнено 100 пермутаций), принимали за статистически значимый.

В группе больных ХИЭ, без отягощенного семейного анамнеза, значимый вклад в подверженность к ХИЭ вносит генетический полиморфизм -308G/A TNFα. В этой группе пациентов концентрации генетического варианта -308A TNFα (15,44%) достоверно выше, чем в контрольной группе, где этот показатель составил 10,47% (χ2=4,03, р=0,04, OR=1,56, 95% CI 1,01-2,41).

Среди больных ХИЭ, имеющих наследственную отягощенность, предрасположенность к ХИЭ связана с генетическим полиморфизмом +1663A/G TNFR2: частота генетического варианта +1663G TNFR2 в группе больных (66,67%) в 1,2 раза превышает аналогичный показатель контрольной группы (55,95%, χ2=5,08, р=0,025, OR=1,58, 95% CI 1,06-2,35).

В формировании значимых комбинаций генетических вариантов, отличающих больных ХИЭ с отягощенным семейным анамнезом от контрольной группы, участвуют полиморфные маркеры: -308G/A TNFα и +1663A/G TNFR2. Сочетание генетических вариант -308G TNFα с +1663 G TNFR2 (78,75%) у больных ХИЭ с отягощенным семейным анамнезом встречается чаще, чем в контрольной группе (74,84%). Отношение шансов равно - 2,54 (95% CI 1,11-5,80), при рperm=0,04.

Выявлены достоверные различия в концентрациях сочетания аллелей +250 G Ltα с+1663 G TNFR2 между больными ХИЭ с неотягощенным семейным анамнезом (40,00%) и контролем (32,30%, OR=1,68, 95%CI 1,11-2,55).

Наряду с этим, зарегистрированы различия в распределении сочетания двух генетических маркеров -308A TNFα с +250G Ltα между больными ХИЭ без наследственной отягощенности (25,33%) и контрольной группой (18,01%, OR=1,77, 95%CI 1,11-2,83). Данные комбинации полиморфных вариантов генов-кандидатов являются факторами риска развития ХИЭ у больных без отягощенного семейного анамнеза (рperm=0,04 для обоих сочетаний).

Примеры, подтверждающие осуществимость предложенного изобретения у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ.

1. У пациента А. с неотягощенным семейным анамнезом выявлен аллель -308А TNFα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.

2. У пациента Ж. с неотягощенным семейным анамнезом выявлена комбинация +250G Ltα с +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.

3. У пациента З. с неотягощенным семейным анамнезом выявлена комбинация -308А TNFα с +250G Ltα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.

4. У пациента И. с отягощенным семейным анамнезом выявлен генотип +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.

5. У пациента Ф. с отягощенным семейным анамнезом выявлена комбинация +1663G TNFR2 с -308G TNFα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.

Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы (ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, включающий выделение геномной ДНК из периферической крови методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, анализ локуса +250A/G Ltα, отличающийся тем, что дополнительно проводят анализ генетических полиморфизмов -308G/А TNFα и +1663А/G TNFR2, прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов с наследственной отягощенностью при наличии аллеля +1663G TNFR2 или сочетания аллеля+1663G TNFR2 с аллелем -308G TNFα, прогнозируют риск развития ХИЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности при наличии аллеля -308А TNFα или сочетания аллеля +250G Ltα с аллелем +1663 G TNFR2 или сочетания аллеля -308 А TNFα с аллелем +250 G Ltα.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза.

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, и предназначено для прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей.

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА).

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемаггютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА).

Изобретение относится к области молекулярной генетики и микологии и предназначено для диагностики онихомикоза. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала ногтей, проведение ПЦР и детекцию полученных результатов с помощью электрофореза в агарозном геле.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано для исследования резецированного органокомплекса по поводу ампулярной карциномы.

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения полисорбата в пробе, содержащей белок. Способ по настоящему изобретению включает предварительную обработку пробы посредством щелочного гидролиза с последующим колориметрическим определением на основе металлокомплекса, определяемого при анализе вещества с тиоцианатным реагентом, при этом указанный комплекс экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA).

Изобретение относится к медицине, к актуальной проблеме современного здравоохранения, разделу педиатрии и может быть использовано для оценки тяжести поражения гепато-билиарной системы у младенцев и детей раннего возраста и степени выраженности фиброза печени. Сущность способа оценки выраженности фиброза состоит в том, что у обследуемого ребенка утром натощак из периферической вены берут кровь с целью определения уровня фермента АсАТ и количества тромбоцитов. Далее вычисляют индекс APRI по формуле (1), при этом уже известен показатель верхнего нормального значения АсАТ у детей раннего возраста, который составляет 43,88 ед/л. В клинических исследованиях методом дискриминантного анализа было установлено, что показатель индекса APRI достоверно коррелирует с высокой степенью фиброза (F3) у детей первого года жизни, которым была проведена гепатобиопсия под наркозом, которая расценивается как диагностическое оперативное вмешательство. Установлено, что показатель индекса APRI у младенцев с циррозом печени (F4) принимал достоверно высокие значения более 2,45. У детей же без цирроза печени индекс APRI имел значения менее 1,5. Изобретение позволяет вычислять индекс APRI у детей раннего возраста, с помощью которого можно неинвазивным способом без проведения биопсии печени максимально точно, доступно и недорого мониторировать прогрессирование фиброза, прогнозировать исходы, своевременно назначать лечение и контролировать результаты терапии. 3 табл., 3 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего иммунологического прогнозирования возникновения «малых повреждений миокарда» (МПМ) в послеоперационный период после проведения чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ) и стентирования коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС). Для этого путем биохимического тестирования сыворотки крови на тропонин Т, креатинфосфокиназу-МВ, миоглобин: на 1-е сутки после выполнения чрескожных коронарных вмешательств и стентирования коронарных артерий у пациентов со стабильной ИБС определяют клинико-биохимические изменения показателей в сыворотке крови. При уровне содержания тропонина Т 0-0,030 нг/мл, КФК-МВ 0,10-4,94 нг/мл, миоглобина 25,0-72,0 нг/мл прогнозируют благоприятное клиническое течение послеоперационного периода без развития малых повреждений миокарда. При уровне содержания тропонина Т 0,031-0,090 нг/мл, КФК-МВ 4,95-14,82 нг/мл, миоглобина 72,1-216,0 нг/мл прогнозируют неблагоприятное течение послеоперационного периода с развитием малых повреждений миокарда. Использование данного способа позволяет проводить прогнозирование возникновения «малых повреждений миокарда» в 1-е сутки после ЧКВ и стентирование коронарных артерий, что позволяет проводить своевременные лечебные мероприятия. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи. Сущность способа состоит в том, что из венозной крови осуществляют выделение генетического материала. Проводят полимеразную цепную реакцию синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина. При проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-AC3'. Детекцию нуклеотидной последовательности осуществляют с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями. При выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. При выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия. 2 ил., 1 табл., 2пр.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения продукта, содержащего иммуноглобулины G, A, M, при котором в качестве исходного сырья используют осадки фракции Кона, которые гомогенизируют с получением суспензии, которую обрабатывают хлороформом, перемешивают, выдерживают, центрифугируют, формируют осадок с последующим удалением балластных фракций дополнительным центрифугированием, выделяют целевой продукт с последующим розливом, замораживанием и высушиванием. Формирование осадка и удаление балластных фракций осуществляют введением ионов меди Cu2+ в концентрации 1,5-15 мкмоль при величине рН 4,5-5,5 и температуре 0-5°C. Изобретение обеспечивает повышение специфической активности выделяемых иммуноглобулинов и расширение сырьевой базы. 9 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к ЦМВ, содержание в периферической крови глутаматтрансферазы, активность белка теплового шока Hsp в гомогенате плаценты, а на гистологических срезах гистохимически определяют активность глутаматдегидрогеназы. При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении содержания в периферической крови глутаматтрансферазы до 28,3±0,98 Ед/л, снижении активности в гомогенате плаценты белка теплового шока Hsp-70 до 30,5±1,7 нг/мл, снижении глутаматдегидрогеназы на гистологических срезах до 39,7±1,9 усл. ед. нарушается трансаминирование глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты, что создает угрозу нарушения белкового обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки риска развития патологии беременности. Сущность способа состоит в том, что в качестве биомаркеров оценки риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент, регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Вычисляют концентрации. При концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии, а при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0,9 - о риске развития преждевременных родов. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки риска развития патологии беременности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной системы и развития плода на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Способ включает определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, газохроматографическое определение содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной и гомогенате плаценты роженицы, подсчет ядер в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. При титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, повышении содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной на третьем триместре гестации до 30,30±0,27%, а в гомогенате плаценты роженицы до 34,50±0,46% и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты в состоянии апоптоза до 3,5±0,02% создается угроза формирования фетоплацентарной системы и развития плода.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа обнаружения наличия микробной биомассы земного типа. Сущность способа заключается в том, что получают тестируемый образец, о котором известно, что он содержит или может содержать микроорганизмы, помещают тестируемый образец в контейнер, отделяют от тестируемого образца компоненты тестируемого образца с микроорганизмами, проводят масс-спектрометрическое исследование компонентов тестируемого образца с микроорганизмами. В качестве тестируемого образца используют полученный при исследованиях грунт космических тел, измельчают тестируемый образец и помещают его в бортовое устройство с герметичным объемом 10 см3, затем в него добавляют дистиллированную очищенную воду, перемешивают тестируемый образец с водой и отделяют сливом верхний слой с микрочастицами и десорбированными в воду от тестируемого образца грунта микроорганизмами, причем верхний слой с микроорганизмами сливают в картридж, в котором его пропускают через смешанный слой ионообменных смол анионита АВ-17 и катионита КУ-2. После этого очищенную воду с микроорганизмами подают на металлическую подложку мишени для масс-спектрометрического исследования, где испарением воды формируют на металлической подложке слой микроорганизмов и оставшихся в воде микрочастиц, а затем полученную мишень вводят в масс-спектрометр для лазерного воздействия, при этом в ходе масс-спектрометрического исследования вывод о наличии микроорганизмов земного типа делают по величинам массовых пиков химических элементов, относящихся к исследуемым биомаркерам N, C и соотношению биомаркеров: P/S и Ca/K, составляющим для соотношения P/S от 0,15 до 3, для соотношения Ca/K от 0,3 до 5 и для концентраций N и C более 1% и 10% соответственно. Использование способа позволяет определить микробную массу земного типа, наример в космических объектах. 2 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и молекулярной биологии, и предназначено для диагностики плоскоклеточного рака легкого (ПКРЛ). Осуществляют получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй - из прилегающей гистологически нормальной ткани, выделение и очистку препаратов РНК, синтез кДНК на матрице РНК, амплификацию фрагмента гена CALL и сравнение количества амплифицированного фрагмента ДНК CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани. Уменьшение содержания мРНК гена CALL от 3 до 44 раз служит диагностическим признаком ПКРЛ. Изобретение обеспечивает раннюю диагностику ПКРЛ. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 6 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для лабораторной оценки эффективности лечения фондапаринуксом у кардиохирургических больных с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией. Сущность способа: кардиохирургическим больным с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией вводят фондапаринукс подкожно 1 раз в сутки в дозе 2,5-7,5 мг и через 3 часа после его введения определяют остаточную активность Ха фактора и активность антитромбина III в плазме крови. При остаточной активности Ха в диапазоне 0,4-0,7 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом эффективна - отсутствует риск развития кровотечений или тромбозов. При остаточной активности Ха ниже 0,4 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития тромбозов, рекомендуется увеличение дозы фондапаринукса. При остаточной активности Ха фактора ниже 0,4 мг/мл и активности антитромбина III ниже 60% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития тромбозов, рекомендуется увеличение активности антитромбина III в плазме крови с помощью введения свежезамороженной плазмы или препаратов антитромбина. При остаточной активности Ха выше 0,7 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития кровотечения, рекомендуется уменьшение дозы фондапаринукса. Изобретение направлено на повышение эффективности лечения фондапаринуксом у кардиохирургических больных с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией. 2 пр.
Наверх