Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи



Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи
Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2585960:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт медицины труда" (ФГБНУ "НИИ МТ") (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи. Сущность способа состоит в том, что из венозной крови осуществляют выделение генетического материала. Проводят полимеразную цепную реакцию синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина. При проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-AC3'. Детекцию нуклеотидной последовательности осуществляют с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями. При выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. При выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия. 2 ил., 1 табл., 2пр.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи.

Известен способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи, включающий забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 гена филаггрина (см. Хантимерова Э.Ф., Нуртдинова Г.М., Карунас А.С., Гималова Г.Ф. Клинико-генетическая характеристика больных атопическим дерматитом и крапивницей с мутациями в гене филаггрина // Фундаментальные исследования. - 2014. - №10 (4). - С. 752-756).

Однако данный способ имеет низкую пропускную способность ввиду невысокой скорости проведения обследования пациентов (время анализа 1-2 дня), ввиду сложности, трудоемкости используемых лабораторных технологий, являющихся вредными для медицинского персонала, проводящего их. Это затрудняет определение наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.

Задачей настоящего изобретения является обеспечение возможности определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи за короткие (сжатые) сроки времени (3÷5) час, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда.

Техническим результатом изобретения является повышение скорости проведения определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия.

Указанная задача достигается тем, что в известном способе определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи, включающем забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина, при проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-AC3' и детекцию нуклеотидной последовательности с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями, после этого при выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи, при выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи.

Проведенные исследования по патентным и научно-техническим информационным источникам показали, что предлагаемый способ неизвестен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Предлагаемый способ может быть применен в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных широко используемым оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.

Следовательно, заявленный способ является доступным и практически применимым.

Таким образом, предложена совокупность приемов, позволяющих обеспечить повышение скорости проведения определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи, что, в свою очередь, позволит повысить достоверность определения низкой наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи при воздействии на организм вредных производственных факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.

В таблице 1 представлена последовательность использованных праймеров.

Предлагаемый способ пояснен на чертеже.

На фиг. 1 изображена пирограмма с вариантом гетерозиготного генотипа по определяемому аллельному варианту, имеющему делецию в положении 2282 (ins/del) (пример 1). На фиг. 2 изображена пирограмма с вариантом гомозиготного генотипа по определяемому аллельному варианту, не имеющему замены делеции, в положении 2282 (ins/ins) в нуклеотидной последовательности - соответствует норме (пример 2).

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

У пациентов осуществляют забор венозной крови. Из 100 мкл цельной крови выделяют ДНК-сорбент однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ 9398-071-01897593-2008) в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.

Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) готовят серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мкл конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами.

Объем смеси для полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом используют реагенты производства ФБУН «Центрального НИИ Эпидемиологии»: «2,5×ПЦР-буфер-2-blue», «Смесь dNTPs», праймеры «FLG2-F1» и «FLG2-R1». Количество праймеров в реакцию - 7 пмоль. Для амплификации исследуемого генетического локуса используют специфические олигонуклеотидные праймеры «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', один из которых мечен биотином (последовательность используемых праймеров представлена в табл. 1). Количество праймеров «FLG-2 Fl» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3' в полимеразной цепной реакции - 7 пмоль.

Реакцию амплификации проводят по следующей программе.

При использовании, например, амплификатора «Т 100 Thermal Cycler» (фирма Bio Rad, США), когда температура достигнет 95°C (режим паузы), ставят пробирки в ячейки амплификатора и выдерживают их при температуре 95°C - 15 мин. Далее выдерживают пробирки 45 циклов 95°C - 15 секунд, 65°C - 15 секунд, 72°C - 20 секунд.

После проведения амплификации осуществляют пробоподготовку образцов для секвенирования. Продукт амплификации иммобилизируют с 1 мкл частиц «Streptavidin Sepharose» («GE Healthcare», Швеция) в 40 мкл «Буфера для связывания» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии»). После иммобилизации проводят серию отмывок с помощью станции для пробопродготовки «PyroMark Q24 Workstation)) («Qiagen», Германия) и набора реагентов «Пиро-преп» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии», регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13246 от 19 марта 2012 г.). В результате пробоподготовки получают амплифицированный с биотинилированного праймера одноцепочечный ПЦР-фрагмент, который используют в качестве матрицы в реакции пиросеквенирования.

Пиросеквенирование проводят с использованием праймера «FLG2-S1» в количестве 7,5 пмоль и набора реагентов «PyroMark® Gold Q96 Reagents» («Qiagen», Германия) на приборе «PyroMark Q24» («Qiagen», Германия). Последовательность праймера для секвенирования «FLG-2 S1» следующая: 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-АС3'. Последовательность добавления нуклеотидов в реакцию пиросеквенирования: GACACAGATCAGTGTCA.

Далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности с референсными последовательностями с помощью программного обеспечения «PyroMark Q24 2.0.6» и по полученной пирограмме определяют, какой вариант мутации имеет место в нуклеотидной последовательности (см., например, фиг. 1 и 2).

При выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена FLG и при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи, при выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена FLG и при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи, при которой облегчается проникновение аллергенов и инфекционных агентов через эпидермис, последние инициируют развитие местной и системной аллергической реакции организма, что приводит к развитию профессиональных аллергодерматозов.

Пример 1. Больная Т., 48 лет

При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больная Т. работала с 1986 г. по настоящее время гальваником в контакте с соединениями хрома, никеля, кобальта. Считает себя больной с 1987 г., когда впервые появились высыпания на тыльных поверхностях кистей, сопровождавшиеся зудом. Обращалась к дерматологу по месту жительства, получала лечение с временным эффектом. В выходные дни, во время отпуска отмечает улучшение. Впервые направлена в клинику института ФГБНУ «НИИ МТ» для решения вопроса о связи заболевания кожи с профессией в 2002 г. При обследовании была выявлена повышенная чувствительность к солям хрома, никеля, кобальта и дано заключение о профессиональном характере кожного заболевания.

При биохимическом анализе крови обнаружено умеренное повышение уровня печеночных ферментов АЛТ 56 Ед/л (N 0-35 Ед/л), ACT 45 U/1 (N 0-35 U/1), превышение уровня холестерина в сыворотке крови 6,8 ммоль/л (N 3,0-6,2 ммоль/л). При иммунологическом исследовании было определено умеренное повышенное содержание Ig Е к Trichophyton rubrum 1,42 кЕд/л (N до 0,35 кЕд/л). При изучении состояния барьерной функции кожи с помощью прибора "Skin-o-mat" производства фирмы "Cosmomed GmbH", Германия показатели гидратантности были снижены 25,54 (N от 35), уровень рН повышен 6,54 (N 4,5-5,5), содержание липидов на поверхности кожи снижено 2,83 мкг/см2 (N 6,0-6,5 мкг/см2).

Кровь исследовали согласно предлагаемому способу.

Из 100 мкл цельной крови выделяли суммарную ДНК однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ 9398-071-01897593-2008) в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.

Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1÷3 нг/мкл, добавляли 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для полимеразной цепной реакции. Объем смеси для полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом использовали реагенты производства ФБУН «Центрального НИИ Эпидемиологии»: «2,5×ПЦР-буфер-2-blue», «Смесь dNTPs», праймеры «FLG2-F1» и «FLG2-R1». Количество праймеров в реакцию - 7 пмоль. Для амплификации исследуемого генетического локуса использовали специфические олигонуклеотидные праймеры «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', один из которых мечен биотином (последовательность используемых праймеров представлена в табл. 1). Количество праймеров «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3' в полимеразной цепной реакции - 7 пмоль.

Реакцию амплификации проводили по следующей программе.

При использовании амплификатора «Т 100 Thermal Cycler» (фирма Bio Rad, США), когда температура достигла 95°C (режим паузы), ставят пробирки в ячейки амплификатора и выдерживают их при температуре 95°C - 15 мин. Далее выдерживали пробирки 45 циклов 95°C - 15 секунд, 65°C - 15 секунд, 72°C - 20 секунд.

После проведения амплификации осуществляли пробоподготовку образцов для секвенирования. Продукт амплификации иммобилизировали с 1 мкл частиц «Streptavidin Sepharose» («GE Healthcare», Швеция) в 40 мкл «Буфера для связывания» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии»). После иммобилизации проводили серию отмывок с помощью станции для пробопродготовки «PyroMark Q24 Workstation («Qiagen», Германия) и набора реагентов «Пиро-преп» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии», регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13246 от 19 марта 2012 г.). В результате пробоподготовки получали амплифицированный с биотинилированного праймера одноцепочечный ПЦР-фрагмент, который использовали в качестве матрицы в реакции пиросеквенирования.

Пиросеквенирование проводили с использованием праймера «FLG2-S1» в количестве 7,5 пмоль и набора реагентов «PyroMark® Gold Q96 Reagents» («Qiagen», Германия) на приборе «PyroMark Q24» («Qiagen», Германия). Последовательность праймера для секвенирования «FLG-2 S1» следующая: 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-АС3'. Последовательность добавления нуклеотидов в реакцию пиросеквенирования: GACACAGATCAGTGTCA.

Далее провели сравнение полученной нуклеотидной последовательности с референсными последовательностями с помощью программного обеспечения «PyroMark Q24 2.0.6» и по полученной пирограмме определили делецию в гетерозиготном состоянии в положении 2282 (ins/del) гена филаггрин (см. фиг. 1), т.е. синтез белка филаггрина нарушен.

Вывод: у больной В. был выявлен гетерозиготный вариант 2282 (ins/del) гена филаггрин, имеющий делецию в гетерозиготном состоянии, свидетельствующий о нарушении синтеза белка филаггрина, что приводит к нарушению в процессе конечной дифференцировки эпидермиса, приводящего к выраженному нарушению барьерной функции кожи (снижены 25,54 (N от 35), уровень pH повышен 6,54 (N 4,5-5,5), содержание липидов на поверхности кожи снижено 2,83 мкг/см2 (N 6,0-6,5 мкг/см2)).

Это, в свою очередь, привело к развитию профессионального аллергодерматоза через 1 год от начала работы с веществами раздражающего и сенсибилизирующего действия. Время определения наследственной предрасположенности больной Т. к нарушению барьерной функции кожи составило 4,5 часа.

Пример 2. Больной К., 64 года

При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больной К. работал с 1969 г. по 2007 г. токарем в контакте с соединениями хрома, никеля, кобальта. Считает себя больным с 2005 г., когда впервые появились высыпания на тыльных поверхностях кистей и предплечий, сопровождавшиеся зудом, далее высыпания распространились на голени. Обращался к дерматологу по месту жительства, получал лечение с временным эффектом. В выходные дни, во время отпуска отмечал улучшение. Впервые направлен в клинику института ФГБНУ «НИИ МТ» для решения вопроса о связи заболевания кожи с профессией в 2008 г. При обследовании была выявлена повышенная чувствительность к солям хрома, никеля, кобальта и дано заключение о профессиональном характере кожного заболевания.

При биохимическом анализе крови не было обнаружено отклонений от норм.

При иммунологическом исследовании не было определено повышенное содержание Ig Е к Trichophyton rubrum 0,1 кЕд/л (N до 0,35 кЕд/л).

При изучении состояния барьерной функции кожи с помощью прибора "Skin-o-mat" производства фирмы "Cosmomed GmbH", Германия, показатели гидратантности были в норме 36,05 (N от 35), уровень pH в пределах нормы 5,3 (N 4,5-5,5), содержание липидов на поверхности кожи снижено 5,5 мкг/см2 (N 6,0-6,5 мкг/см2).

Кровь исследовали согласно предлагаемому способу.

Из 100 мкл цельной крови выделяли суммарную ДНК однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В"(ТУ 9398-071-01897593-2008) в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.

Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1÷3 нг/мкл, добавляли 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для полимеразной цепной реакции. Объем смеси для полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом использовали реагенты производства ФБУН «Центрального НИИ Эпидемиологии»: «2,5×ПЦР-буфер-2-blue», «Смесь dNTPs», праймеры «FLG2-F1» и «FLG2-R1». Количество праймеров в реакцию - 7 пмоль. Для амплификации исследуемого генетического локуса использовали специфические олигонуклеотидные праймеры «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3', один из которых мечен биотином (последовательность используемых праймеров представлена в табл. 1). Количество праймеров «FLG-2 F1» 5'Biotin-TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3' и «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3' в полимеразной цепной реакции - 7 пмоль.

Реакцию амплификации проводили по следующей программе.

При использовании амплификатора «Т 100 Thermal Cycler» (фирма Bio Rad, США), когда температура достигла 95°C (режим паузы), ставят пробирки в ячейки амплификатора и выдерживают их при температуре 95°C - 15 мин. Далее выдерживали пробирки 45 циклов 95°C - 15 секунд, 65°C - 15 секунд, 72°C - 20 секунд.

После проведения амплификации осуществляли пробоподготовку образцов для секвенирования. Продукт амплификации иммобилизировали с 1 мкл частиц «Streptavidin Sepharose» («GE Healthcare», Швеция) в 40 мкл «Буфера для связывания» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии»). После иммобилизации проводили серию отмывок с помощью станции для пробопродготовки «PyroMark Q24 Workstation («Qiagen», Германия) и набора реагентов «Пиро-преп» (ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии», регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13246 от 19 марта 2012 г.). В результате пробоподготовки получали амплифицированный с биотинилированного праймера одноцепочечный ПЦР-фрагмент, который использовали в качестве матрицы в реакции пиросеквенирования.

Пиросеквенирование проводили с использованием праймера «FLG2-S1» в количестве 7,5 пмоль и набора реагентов «PyroMark® Gold Q96 Reagents» («Qiagen», Германия) на приборе «PyroMark Q24» («Qiagen», Германия). Последовательность праймера для секвенирования «FLG-2 S1» следующая: 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-АС3'. Последовательность добавления нуклеотидов в реакцию пиросеквенирования: GACACAGATCAGTGTCA.

Далее проводили сравнение полученной нуклеотидной последовательности с референсными последовательностями с помощью программного обеспечения «PyroMark Q24 2.0.6» и по полученной пирограмме определили отсутствие делеции в положении 2282 (ins/ins) гена филаггрин (см. фиг. 2), соответствующего норме, т.е. белок филаггрин синтезируется нормально.

Вывод: у больного К. был выявлен гомозиготный вариант FLG (ins/ins) полиморфизма 2282del4, не имеющий делецию в положении 2282, свидетельствующий о нормальном синтезе этого белка, при этом наблюдали умеренное снижение барьерной функции кожи, которое проявляется лишь в снижении содержания липидов на поверхности кожи, что может быть вызвано большим стажем работы с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия (хром, никель, кобальт). При этом профессиональный аллергодерматоз развился через 38 лет от начала работы с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия (хром, никель, кобальт). Время определения наследственной предрасположенности больного К. к нарушению барьерной функции кожи составило 3,0 часа.

Предлагаемый способ прогнозирования наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи позволяет повысить точность полученных результатов за счет снижения до минимума ошибки при интерпретации результатов путем использования компьютерной обработки полученных результатов и скорость проведения анализа (1-2 дня в известном способе и 3-5 часов в предлагаемом способе) по сравнению с прототипом за счет применения новой лабораторной технологии - метода пиросеквенирования, использование которого позволяет в единицу времени проводить большее количество анализов, по результатам которых определяют наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.

Предложенный способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи может быть использован в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.

Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи, включающий забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфного варианта 2282del4 филаггрина, отличающийся тем, что при проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры: «FLG-2 F1» 5'Biotin -TgA-CCA-gCC-TgT-CCA-Tgg-C3'; «FLG-2 R1» 5'CAA-gTg-CAg-gAg-AAA-gAC-ATg-gAT3", размер ампликона - 205 пар оснований, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера «FLG-2 S1» 5'gAC-ATT-CAg-AAg-ACT-CAg-АС3' и детекцию нуклеотидной последовательности с помощью хемилюминисцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 2282 с референсными последовательностями, после этого при выявлении на полученной пирограмме отсутствия делеции в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют низкую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи, при выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта ins/del в положении 2282 гена филаггрина при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия определяют высокую наследственную предрасположенность к нарушению барьерной функции кожи.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего иммунологического прогнозирования возникновения «малых повреждений миокарда» (МПМ) в послеоперационный период после проведения чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ) и стентирования коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Изобретение относится к медицине, к актуальной проблеме современного здравоохранения, разделу педиатрии и может быть использовано для оценки тяжести поражения гепато-билиарной системы у младенцев и детей раннего возраста и степени выраженности фиброза печени.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы (ХИЭ) в зависимости от наследственной отягощенности у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза.

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, и предназначено для прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей.

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА).

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемаггютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА).

Изобретение относится к области молекулярной генетики и микологии и предназначено для диагностики онихомикоза. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала ногтей, проведение ПЦР и детекцию полученных результатов с помощью электрофореза в агарозном геле.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения продукта, содержащего иммуноглобулины G, A, M, при котором в качестве исходного сырья используют осадки фракции Кона, которые гомогенизируют с получением суспензии, которую обрабатывают хлороформом, перемешивают, выдерживают, центрифугируют, формируют осадок с последующим удалением балластных фракций дополнительным центрифугированием, выделяют целевой продукт с последующим розливом, замораживанием и высушиванием. Формирование осадка и удаление балластных фракций осуществляют введением ионов меди Cu2+ в концентрации 1,5-15 мкмоль при величине рН 4,5-5,5 и температуре 0-5°C. Изобретение обеспечивает повышение специфической активности выделяемых иммуноглобулинов и расширение сырьевой базы. 9 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к ЦМВ, содержание в периферической крови глутаматтрансферазы, активность белка теплового шока Hsp в гомогенате плаценты, а на гистологических срезах гистохимически определяют активность глутаматдегидрогеназы. При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении содержания в периферической крови глутаматтрансферазы до 28,3±0,98 Ед/л, снижении активности в гомогенате плаценты белка теплового шока Hsp-70 до 30,5±1,7 нг/мл, снижении глутаматдегидрогеназы на гистологических срезах до 39,7±1,9 усл. ед. нарушается трансаминирование глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты, что создает угрозу нарушения белкового обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки риска развития патологии беременности. Сущность способа состоит в том, что в качестве биомаркеров оценки риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент, регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Вычисляют концентрации. При концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии, а при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0,9 - о риске развития преждевременных родов. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки риска развития патологии беременности. 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной системы и развития плода на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Способ включает определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, газохроматографическое определение содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной и гомогенате плаценты роженицы, подсчет ядер в состоянии апоптоза в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. При титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, повышении содержания пальмитиновой кислоты в периферической крови беременной на третьем триместре гестации до 30,30±0,27%, а в гомогенате плаценты роженицы до 34,50±0,46% и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты в состоянии апоптоза до 3,5±0,02% создается угроза формирования фетоплацентарной системы и развития плода.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа обнаружения наличия микробной биомассы земного типа. Сущность способа заключается в том, что получают тестируемый образец, о котором известно, что он содержит или может содержать микроорганизмы, помещают тестируемый образец в контейнер, отделяют от тестируемого образца компоненты тестируемого образца с микроорганизмами, проводят масс-спектрометрическое исследование компонентов тестируемого образца с микроорганизмами. В качестве тестируемого образца используют полученный при исследованиях грунт космических тел, измельчают тестируемый образец и помещают его в бортовое устройство с герметичным объемом 10 см3, затем в него добавляют дистиллированную очищенную воду, перемешивают тестируемый образец с водой и отделяют сливом верхний слой с микрочастицами и десорбированными в воду от тестируемого образца грунта микроорганизмами, причем верхний слой с микроорганизмами сливают в картридж, в котором его пропускают через смешанный слой ионообменных смол анионита АВ-17 и катионита КУ-2. После этого очищенную воду с микроорганизмами подают на металлическую подложку мишени для масс-спектрометрического исследования, где испарением воды формируют на металлической подложке слой микроорганизмов и оставшихся в воде микрочастиц, а затем полученную мишень вводят в масс-спектрометр для лазерного воздействия, при этом в ходе масс-спектрометрического исследования вывод о наличии микроорганизмов земного типа делают по величинам массовых пиков химических элементов, относящихся к исследуемым биомаркерам N, C и соотношению биомаркеров: P/S и Ca/K, составляющим для соотношения P/S от 0,15 до 3, для соотношения Ca/K от 0,3 до 5 и для концентраций N и C более 1% и 10% соответственно. Использование способа позволяет определить микробную массу земного типа, наример в космических объектах. 2 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и молекулярной биологии, и предназначено для диагностики плоскоклеточного рака легкого (ПКРЛ). Осуществляют получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй - из прилегающей гистологически нормальной ткани, выделение и очистку препаратов РНК, синтез кДНК на матрице РНК, амплификацию фрагмента гена CALL и сравнение количества амплифицированного фрагмента ДНК CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани. Уменьшение содержания мРНК гена CALL от 3 до 44 раз служит диагностическим признаком ПКРЛ. Изобретение обеспечивает раннюю диагностику ПКРЛ. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 6 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для лабораторной оценки эффективности лечения фондапаринуксом у кардиохирургических больных с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией. Сущность способа: кардиохирургическим больным с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией вводят фондапаринукс подкожно 1 раз в сутки в дозе 2,5-7,5 мг и через 3 часа после его введения определяют остаточную активность Ха фактора и активность антитромбина III в плазме крови. При остаточной активности Ха в диапазоне 0,4-0,7 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом эффективна - отсутствует риск развития кровотечений или тромбозов. При остаточной активности Ха ниже 0,4 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития тромбозов, рекомендуется увеличение дозы фондапаринукса. При остаточной активности Ха фактора ниже 0,4 мг/мл и активности антитромбина III ниже 60% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития тромбозов, рекомендуется увеличение активности антитромбина III в плазме крови с помощью введения свежезамороженной плазмы или препаратов антитромбина. При остаточной активности Ха выше 0,7 мг/мл и активности антитромбина III в диапазоне 60-120% терапия фондапаринуксом не эффективна - высокий риск развития кровотечения, рекомендуется уменьшение дозы фондапаринукса. Изобретение направлено на повышение эффективности лечения фондапаринуксом у кардиохирургических больных с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию. Из клеток периферической венозной крови выделяют ДНК и до наступления цитопенических осложнений программной химиотерапии и манифестации инфекций проводят анализ распределения генотипов полиморфизма Т-1237С гена TLR9. В случае выявления гомозиготы СС Т-1237С TLR9 прогнозируют повышение риска развития инфекций. Изобретение обеспечивает получение новых критериев прогноза развития инфекционных осложнений в ранние сроки полихимиотерапии. 1 ил., 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гнойной хирургии, и может быть использовано для профилактики гипертрофических рубцов при лечении флегмон мягких тканей. Для этого проводят ежедневное гистологическое исследование мазка-отпечатка и лабораторное исследование типа ацетилирования. При ацетилярной активности более 30% и выявлении II фазы раневого процесса, комплекс консервативной терапии включает местное нанесение мази Эгаллохит в течение 5 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 5 дней. При ацетилярной активности от 30 до 20% и при выявлении II фазы раневого процесса комплекс консервативной терапии включает местное нанесение мази Эгаллохит в течение 7 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 7 дней, а затем электрофорез Карипазима 350 ПЕ в течение 7 дней. При ацетилярной активности менее 20% и при выявлении II фазы раневого процесса комплекс консервативной терапии включает введение Лонгидазы по 1,0 мл внутримышечно 1 раз в 3 дня в количестве 10 инъекций, местное нанесение мази Эгаллохит в течение 10 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 10 дней, затем электрофорез Карипазима 350 ПЕ в течение 10 дней, лазеротерапия по 10 минут в течение 5 дней. Способ обеспечивает снижение частоты образования гипертрофических рубцов за счёт предупреждения избыточного рубцевания, ликвидации воспаления и стимуляции регенерации с учётом индивидуальных особенностей больного в отношении избыточного рубцевания. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ дифференциальной диагностики стадий гонартроза, включающий исследование крови и определение в ее плазме концентрации мочевой кислоты (МК), в мкМ/л, отличающийся тем, что в мононуклеарной фракции крови также определяют активность миелопероксидазы (МПО), в у.е./мин·мг, и активность ксантиноксидоредуктазы (КОР), в МЕ/г, после чего рассчитывают суммарный коэффициент диагностики К по формуле: при выполнении условия 3.1≤К<3.4 диагностируют I стадию; при выполнении условия 3.4≤К<3.9 диагностируют II стадию; при выполнении условия 3.9≤К<5.2 диагностируют III стадию; при выполнении условия К≥5.2 диагностируют IV стадию гонартроза по шкале Kellgren-Lawrence. Осуществление изобретения обеспечивает повышение надежности дифференциальной диагностики стадии гонартроза. 4 пр.
Наверх