Способ получения действующего вещества из пантов марала


 


Владельцы патента RU 2587755:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр Российской Федерации - Федеральный Медицинский биофизический центр имени А.И. Бурназяна Федерального Медико-биологического агентства" (ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России) (RU)

Изобретение относится к способу получения действующего вещества из пантов марала. Способ получения действующего вещества из пантов марала включает выделение стволовых клеток и их культивирование, в качестве источника стволовых клеток используют панты марала, которые мелко диспергируют и обрабатывают в коллагеназе II типа, клетки культивируют в рабочей среде DMEM, FBS, L-глутамина, пенициллина и стрептомицина, при достижении культурой 75-80% монослоя проводят смену среды и культивируют повторно, полученную кондиционированную среду очищают и фильтруют при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет эффективно выделить стволовые клетоки из пантов марала, получить в короткие сроки кондиционированную среду с высокой концентрацией активных биомолекул, очистить и концентрировать фракции действующего вещества.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и представляет собой фармакологическую композицию, содержащую очищенную и концентрированную фракцию действующих веществ из кондиционированной среды, полученной при культивировании стволовых клеток пантов марала.

Панты марала характеризуются быстрым ростом, до 2 мм в сутки, имеют трубчатую неороговевшую структуру с сетью кровеносных сосудов. Панты марала растут, получая максимальное количество питательных веществ и макро-/микроэлементов. Из 22 аминокислот в пантах содержится от 20 до 16, в зависимости от вида. Кроме того, панты содержат фосфолипиды, эфиры ненасыщенных жирных кислот, макро- и микроэлементы (Fe, Mn, Mg, Со, Zn. Cu, Са, F, I), сбалансированный набор жиро- и водорастворимых витаминов, регуляторы действия гормонов и пептидов, нормализующих реактивность иммунной системы [Шеина Н.Е. Возобновляемое биосырье Якутии: состав, свойства, биотехнологические аспекты переработки (обзор). Часть 1. Разработка на основе животного сырья, 2011].

Применение пантов в научной медицинской практике в России относится к началу XVIII в. Перечень форм лечебных препаратов, в которых используются панты, достаточно широк [И.В. Чернова. Панты и кровь в народной медицине населения саяно-алтайского региона в конце XIX-XX вв., 2009]. В России официально утверждены для лечебно-профилактического применения 4 препарата: пантов марала спиртовой экстракт «пантокрин», таблетки и водный экстракт в ампулах, «пантогематоген» (на основе крови маралов); из пантов северного оленя - «рантарин» в таблетках и спиртовой экстракт «велкорнин» [И.Н. Винокуров. Маркетинговая деятельность продвижения пантовой продукции оленеводства в России и PC (Я), 2014]. Кроме того, препараты из пантов марала также используются как наружное средство, в частности пантовые ванны.

В последние годы активно развиваются клеточные технологии, некоторые методы успешно внедрены в клиническую практику. Применение стволовых клеток пантов в чистом виде, как клеточного продукта, ограничено этическими соображениями и законодательными запретами на применение у человека ксеногенных клеток. Вместе с тем, возможно применение отдельных ростовых факторов и пептидов, продуцируемых этими клетками. Указанную фармакологическую композицию можно применять для стимуляции и регуляции регенерации органов и тканей. Состав питательной среды, используемой для культивирования стволовых клеток, включает в себя большинство незаменимых аминокислот, микроэлементы, нуклеиновые кислоты, витамины и минералы [Р.Я. Фрешни. Культура животных клеток. Практическое руководство, 2011]. В процессе культивирования клеточная культура продуцирует и секретирует в питательную среду ростовые факторы, которые функционируют как сигнальные молекулы, обеспечивая взаимодействия между клетками, за счет чего и происходит стимуляция роста и пролиферации клеток.

Известен способ консервирования пантов марала [Луницын В.Г. Способ консервирования пантов марала. Патент №2314688, 14.09.2006]. Способ консервирования включает групповую варку пантов, закрепленных на вешалах, в воде с температурой 96-98°С при 9-кратном их погружении, ветровые сушки после каждой варки и жаровой сушки при температуре 70-80°С, при этом комли пантов после срезки затирают порошком сухой глины и без сортировки их по весовым категориям производят варку два дня путем погружения пантов, закрепленных на вешалах в положении комлем вниз, в воду с длительностью погружения 1,5 минуты и остыванием между погружениями 3 минуты, при этом ветровые и жаровые сушки проводят в позиции первоначального закрепления пантов на вешалах. Недостатком данного способа является термическая обработка пантов, которая приводит к разрушению термолабильных веществ, в связи с чем из действующих веществ в конечном продукте остаются только макро- и микроэлементы.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является способ получения композиции для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек [Колесникова А.И. Композиция для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек. Патента №2455354, 10.07.2012]. Способ получения композиции для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек включает в себя культивирование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (КмМСК) человека в питательной среде. Культивирование проводят в атмосфере газовой смеси, содержащей 5% углекислого газа и 95% воздуха, при 37°С.

Недостатком этого способа является низкий пролиферативный потенциал КмМСК человека по сравнению со стволовыми клетками пантов марала, и, как следствие, получение кондиционированной среды занимает больше времени, а концентрация активных веществ в ней значительно ниже по сравнению с любыми продуктами пантового производства. Кроме того, помимо факторов роста, продуцируемых клетками, в составе композиции присутствуют добавки (антибиотик/антимикотик, фетальная бычья сыворотка), которые могут повлиять на развитие нежелательных явлений в ходе лечения.

Техническим результатом предлагаемого способа получения действующего вещества из пантов марала является выделение стволовых клеток из пантов марала, получение в короткие сроки кондиционированной среды с высокой концентрацией активных биомолекул, очищение и концентрирование фракции действующего вещества.

Указанный технический результат достигается тем, что для выделения стволовых клеток мелко нарезанные панты марала обрабатывают в 0,15% коллагеназе II типа в течение 2 часов при 37°С, клетки культивируют в среде DMEM с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. При достижении культурой 75-80% монослоя проводят смену среды и культивируют в течение 4 дней, полученную кондиционированную среду очищают и фильтруют при помощи фильтрационной системы Lab Scale через мембраны 10 и 50 кДа.

Описание способа.

Забор биоматериала (пантов марала) проводят в питомнике, имитирующем естественную среду обитания животных. При помощи одноразового скальпеля биоматериал делят на равные части, размером 2×2 см, и помещают в стерильные пробирки со средой с повышенным содержанием антибиотиков (DMEM с добавлением 2% FBS, 2 мМ L-глутамина, 200 ед./мл пенициллина и 200 мкг/мл стрептомицина, 200 ед./мл амфотерицина, 100 ед./мл гентамицина). Материал доставляют в лабораторию в течение 6 часов после забора.

При помощи одноразовых скальпелей панты мелко диспергируют. Полученный гомогенизат инкубируют в 0,15% коллагеназе II типа при 37°С в течение 2 ч. Фермент инактивируют 10 мл среды DMEM с добавлением 2% FBS, гомогенизат осаждают при 300g 7 мин, удаляют супернатант. Подсчет и оценку жизнеспособности клеток проводят на автоматическом счетчике клеток Countess (Invitrogen, США). После подсчета клетки переносят в культуральный флакон, из расчета 5×105 клеток/см2, и культивируют в среде DMEM с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Экспансию клеток проводят по стандартной методике культивирования КмМСК. Клетки культивируют до 2 пассажа со сменой среды один раз в три дня. Криоконсервирование клеточной культуры проводят по стандартной методике.

Для получения кондиционированной среды размораживают по стандартной методике необходимое количество клеток, после чего пассируют на культуральный пластик из расчета 10×103 клеток/см2. Смену среды проводят при достижении культурой 75-80% монослоя. Клетки культивируют в течение 4 дней. Кондиционированную среду собирают в стерильную бутыль.

Для получения действующего вещества используют фильтрационную систему Lab Scale (Millipore, США), мембраны Pellicon XL (Millipore, США) размером 10 и 50 кДа. Фильтрацию производят в соответствии с инструкцией производителя. После фильтрации получают композицию из действующего вещества размером 10-50 кДа и аминокислот, нуклеиновых кислот, микроэлементов, витаминов, содержащихся в ростовой среде. Полученную композицию концентрируют в 2 раза.

Применение заявляемого способа позволяет получить в короткие сроки культуру стволовых клеток пантов марала, используя сравнительно небольшое количество биоматериала, и выделить фармакологическую субстанцию из кондиционированной среды, содержащую проангиогенные, противовоспалительные, иммуномодулирующие и стимулирующие регенерацию цитокины.

Разработанный способ позволяет создать композицию действующего вещества для применения с целью восстановления и повышения работоспособности лиц, работающих или проживающих на экологически загрязненных территориях, подвергающихся чрезмерным эмоционально-психическим нагрузкам на фоне снижения физических нагрузок, работающих в условиях больших физических перегрузок, больных с хроническими воспалительными заболеваниями (в том числе со скрытым течением), послеоперационных больных.

Источники информации

1. Винокуров И.Н., Алексеев Е.Д., Мандаров А.Е. Маркетинговая деятельность продвижения пантовой продукции оленеводства в России и PC (Я). Современные проблемы науки и образования. 2014. №1. С. 382.

2. Чернова И.В. Панты и кровь в народной медицине населения саяно-алтайского региона в конце XIX-XX вв. Известия Алтайского государственного университета. 2009. №4-3. С. 250-252.

3. Шеина Н.Е., Шеин А.А., Кузьмина В.Ф., Ведекинд В.Α., Кершенгольц Б.М. Возобновляемое биосырье Якутии: состав, свойства, биотехнологические аспекты переработки (обзор). Часть 1. Разработка на основе животного сырья. 2011. №4. С. 59-64.

4. Фрешни Р.Я. Культура животных клеток. Практическое руководство, 2011.

5. Луницын В.Г. Способ консервирования пантов марала. Номер патента 2314688, 14.09.2006.

6. Колесникова А.И. Композиция для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек. Номер патента 2455354, 10.07.2012.

Способ получения действующего вещества из пантов марала, включающий выделение стволовых клеток и их культивирование, отличающийся тем, что в качестве источника стволовых клеток используют панты марала, которые мелко диспергируют и обрабатывают в 0,15% коллагеназе II типа в течение 2 часов при 37°С, клетки культивируют в рабочей среде DMEM, 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, при достижении культурой 75-80% монослоя проводят смену среды и культивируют в течение 4 дней, полученную кондиционированную среду очищают и фильтруют при помощи фильтрационной системы Lab Scale через мембраны 10 и 50 кДа.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к клеточным технологиям. Описана клеточная популяция клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической энтодермы, где указанная изолированная популяция клеток человека получена путем культивирования линии эмбриональных стволовых клеток человека, выбранной из группы, включающей H1 (код NIH: WA01), Н7 (код NIH: WA07) и Н9 (код NIH: WA09) (WiCell Research Institute (WiCell)) в среде, дополненной активатором протеинкиназы С, причем более 60% клеток в популяции клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической энтодермы, одновременно экспрессируют PDX1 и NKX6.1, и где клетки в популяции клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической энтодермы, экспрессируют CDX2.
Изобретение относится к области генетической инженерии, молекулярной биологии и медицины. Предложен способ увеличения экспрессии NGN3 и NKX6.1 в популяции клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для эндокринной линии поджелудочной железы.

Изобретение относится к биохимии. Описано выделение раковой клетки, которая резистентна к химиотерапевтическому агенту и обладает свойствами стволовой клетки, включая экспрессию ОСТ4.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ получения клеток, производных от кардиальной ткани человека, которые не экспрессируют теломеразу и Isl-1 и экспрессируют CD117.

Мыши adam6 // 2582261
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Предложены мыши со сниженной или отсутствующей активностью ADAM6, обеспечиваемой эндогенным локусом ADAM6, либо с отсутствующим эндогенным локусом, кодирующим белок ADAM6 мыши, отличающиеся тем, что у указанных мышей присутствует последовательность, кодирующая ADAM6, либо его ортолог, гомолог или фрагмент, функциональный у мышей-самцов.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения мультипотентных стволовых клеток/клеток-предшественников млекопитающего, а также к применению клеток, полученных данным способом.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуногенным эпитопам MELK, и может быть использовано в медицине для лечения пациента, страдающего раком или эндометриозом.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в регенеративной медицине. Выделяют взвесь неадгезирующих мононуклеаров клеток из ткани поджелудочной железы при сахарном диабете, в полученной взвеси оценивают количество мультипотентных прогениторных клеток, олигопотентных прогениторных клеток и инсулин-продуцирующих β-клеток.

Изобретение относится к гистологии. Раскрыт способ получения органоида печени.

Изобретение относится к композиции для поддержания функции тромбоцитов, где композиция в качестве активного ингредиента содержит соединение, представленное общей формулой (I), или его фармацевтически приемлемую соль: где соединение, представленное общей формулой (I), представляет собой любое из N-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(4-диэтиламинометилфенил)этил]-N-гидроксиформамида и N-{4-[2-(4-бут-2-инилоксибензолсульфонил)-1-(формилгидроксиамино)этил]бензил}метансульфонамида.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, ортопедии, восстановительной и спортивной медицине, и предназначено для лечения больных с дорсопатией. Проводят инъекционное введение в область спины диспергированного биоматериала Аллоплант.

Изобретение относится в области нанотехнологии, в частности к способу получения нанокапсул антисептика-стимулятора Дорогова (АСД) 2 фракция в оболочке натрий карбоксиметилцеллюлозе, характеризующемуся тем, что АСД 2 фракция диспергируют в суспензию натрий карбоксиметилцеллюлозы в бензоле в присутствии препарата Е472с, приливают ацетонитрил в качестве осадителя, полученную суспензию отфильтровывают и сушат при комнатной температуре.

Группа изобретений относится к медицине и касается лечения заболеваний печени. Предложены варианты способа лечения и тканевый трансплантат для этого.

Изобретение относится к экспресс-методу оценки порошка из пантов оленей и может быть использовано для предпродажной оценки качества пантового порошка. Для этого оценку качества осуществляют по трем показателям: цвету порошка, зольности и показателю экстенции, соответствующих 1, 2 и 3 сорту пантового порошка.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения подострой субинволюции матки у коров. Способ включает введение терапевтических средств животным по следующей схеме.
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для превентивной и интенсивной терапии очаговых гнойно-септических и желудочно-кишечных заболеваний, стимуляции системы иммунитета и метаболических процессов у животных.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к биологически активной композиции для ухода за кожей. Биологически активная композиция для ухода за кожей, содержащая гиалуроновую кислоту, Д-пантенол, молочко маточное пчелиное, убихинон (коэнзим Q10), витамин Е, экстракт лимона и/или экстракт зеленого чая и основу, при определенном соотношении компонентов.

Представленная группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способов сбора функциональных клеток (варианты). Охарактеризованные решения заключаются в имплантации имплантируемой медицинской емкости под кожу на срок не более двух недель, где популяция клеток мобилизована в емкость с помощью любого из белков HMGB1, HMGB2, HMGB3, S100A8, S100A9 или гиалуроновой кислоты или смеси любых двух или более из указанных.

Изобретение относится к медицине, в частности к остеологии, и касается наращивания объема костной ткани в зонах дефекта альвеолярного отростка челюсти. Способ включает забор из передней брюшной стенки методом липосакции жировой ткани, последующую ее ферментизацию с добавлением коллагеназы, центрифугирование и получение стромально-васкулярной фракции.
Изобретение относится к медицине, в частности к терапии хронических воспалительных повреждений кожи и копыт некробактериоза у животных. Изобретение представляет собой способ получения антисептика-стимулятора, в котором за исходный продукт берут антисептик- стимулятор Д-3 фракции, полученный сухой возгонкой органических веществ, например мясокостной муки с содержанием массовой доли жира от 10 до 20%, массовой доли влаги до 9%, массовой доли золы до 26%, клетчатки до 2%, подвергая их термической обработке в течение 12 часов при температуре от 200 до 550°C, летучие фракции конденсируют охлаждением и отстаивают до расслоения на две фракции с последующим отделением фракции 3, которую расфасовывают в виде спрея в аэрозольные жестяные, алюминиевые, пластиковые баллоны вместимостью от 10-1000 мл с распылительной головкой и трубкой длиной до 50 см.
Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано для лечения экссудативного среднего отита. Для этого осуществляют фармакопунктурное воздействие на корпоральные точки: IG4(вань-гу), IG17(тянь-жун), VB2(тин-хуэй), VB8(шуай-гу), VB10(фу-бай), VB11(тоу-цяо-инь), VB12(вань-гу), Т14(да-чжуй), Т20(бай-хуэй), Т22(синь-хуэй), GI4(хэ-гу), Е36(цзу-сань-ли), TR20(цзяо-сунь), TR21(эр-мэнь). Диспергированный биоматериал Аллоплант разводят в физиологическом растворе в соотношении 50 мг биоматериала на 10-15 мл физиологического раствора. Инъекции осуществляют 3-12 сеансами с периодичностью 1-7 суток между ними. Используют по 0,3-0,5 мл препарата на каждую инъекцию. Способ обеспечивает эффективное лечение и предотвращение хронизации процесса за счёт оптимального нейрорегуляторного эффекта, нормализации локального иммунитета, предотвращения образования вязкого экссудата и спаечного процесса в полости уха. 2 пр.
Наверх