Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию



Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию
Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию
Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию
Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2587757:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию. Из клеток периферической венозной крови выделяют ДНК и до наступления цитопенических осложнений программной химиотерапии и манифестации инфекций проводят анализ распределения генотипов полиморфизма Т-1237С гена TLR9. В случае выявления гомозиготы СС Т-1237С TLR9 прогнозируют повышение риска развития инфекций. Изобретение обеспечивает получение новых критериев прогноза развития инфекционных осложнений в ранние сроки полихимиотерапии. 1 ил., 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями (ЗЛПЗ), получающих программную полихимиотерапию (ПХТ) и комбинированную антибактериальную терапию.

Опухоли лимфатической системы с быстропрогрессирующим течением патологического процесса представляют собой гетерогенную группу новообразований, различающуюся по морфологическим, молекулярно-биологическим, иммуногистохимическим, иммунофенотипическим и клиническим характеристикам [1].

В настоящее время внедрены протоколы лечения опухолей высокой степени злокачественности, а также разработаны основы профилактики и терапии осложнений инфекционно-воспалительного генеза, возникающих в процессе ПХТ вследствие развития цитостатического агранулоцитоза [2]. Несмотря на это, довольно часто встречаются случаи активизации инфекций даже на фоне адекватной их антимикробной профилактики, что, несомненно, отражается на тяжести течения и прогнозе заболевания.

К числу наиболее часто встречающихся ЗЛПЗ относятся: диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ), на долю которой приходится до 30% от всех случаев неходжкинских лимфом, лимфома из клеток мантийной зоны (МКЛ - 6%) и множественная миелома (ММ: 10-15% от всех гемобластозов человека) [3].

Известно, что толл-подобные рецепторы (Toll-like receptors - TLRs) относятся к эволюционно консервативным структурам врожденного иммунитета и играют важную роль в В-клеточной активации, созревании и образовании клеток-памяти, поэтому могут быть вовлечены в патогенез ЛПЗ. В соответствии с имеющимися современными данными, TLRs при данных опухолях причастны к злокачественной трансформации, опухолевой прогрессии и к процессу ускользания опухоли от иммунного надзора [4]. TLRs также играют важную роль в распознавании и внедрении микроорганизмов, участвуя в патофизиологии инфекционных и воспалительных заболеваний [5]. Большинство TLRs относятся к I типу трансмембранных протеинов, то есть внутриклеточно располагается терминальный участок С, внеклеточно-терминальный участок N с единственным трансмембранным доменом (TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6). Однако существует несколько исключений - это TLR3, TLR7, TLR8 и TLR9, которые локализованы во внутриклеточных структурах, таких как эндосомы и эндоплазматический ретикулум. Среди них, TLR9 - способен распознавать специфические нуклеиновые кислоты бактерий, вирусов и грибов. Кроме того, TLR9 совместно с В-клеточным рецептором (BCR) может также отвечать на аутоантигены [6].

Описано, что у некоторых индивидуумов повышена чувствительность к инфекционно-воспалительным заболеваниям из-за нарушения процессов адекватного реагирования TLRs вследствие однонуклеотидных точечных мутаций (single-nucleotide polymorphisms - SNPs) в их генах [5]. Данные генетические полиморфизмы могут приводить к аминокислотным заменам с последующим изменением функции рецептора, а также сигнальной трансдукции в клеточных элементах врожденного иммунитета, влияя на распознавание инфекционных агентов, а также на чувствительность и/или устойчивость к различным инфекциям [7, 8].

Ген TLR9 картирован в 3 хромосоме (3р21.3). Один из выявляемых функциональных полиморфизмов гена заключается в нуклеотидной замене тимина на цитозин в позиции 1237, что приводит к изменению экспрессии TLR9 в клетках и к нарушению распознавания инфекционных агентов и, следовательно, к повышению частоты инфекционных осложнений [10].

Существует несколько способов прогнозирования развития инфекций у лиц, получающих химиотерапию. Так, существует метод, при котором авторы предлагали определять абсолютное количество лимфоцитов и CD34-лимфоцитов в периферической крови и вычисление процентного соотношения CD34-клеток к количеству лимфоцитов для определения вероятности развития или отсутствия инфекционного осложнения химиотерапии у 40 детей с гемобластозами, получающими данный вид лечения [11]. Исследователи предлагают экстраполировать полученные данные на всех больных, получающих химиотерапию независимо от возраста и нозологической принадлежности гемобластоза, что вызывает сомнения, так как схемы и дозы применяемых лекарственных препаратов могут весьма сильно различаться и оказывать влияние на содержание исследуемых клеточных элементов и, следовательно, не могут точно отражать функциональные возможности иммунной системы в отношении формирования резистентности к инфекциям.

Известен также способ прогнозирования инфекционных осложнений после химиотерапии у больных острыми лейкозами, где авторами исследовалась активность ферментов лимфоцитов периферической крови (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы) больных острым лейкозом до проведения химиотерапии. О возможности возникновения инфекционных осложнений судили по сочетанию величин активности этих дегидрогеназ, как показателей метаболического и функционального состояния клеток, участвующего в прогнозе инфекционных осложнений [12]. Однако не во всех лабораториях возможно использование биолюминометра и, кроме того, на метаболическое состояние клеток, могут оказывать влияние и сопутствующие заболевания. Учитывая, что данный метод был апробирован у больных острыми лейкозами, представляется невозможным использовать предлагаемый способ у больных ЗЛПЗ.

Существует также способ прогноза развития инфекции и тяжелых инфекционных осложнений у больных гемобластозами, получающих программную полихимиотерапию, который включает исследование комплекса клинико-иммунологических показателей, среди которых оценивались: абсолютное количество лимфоцитов, относительное содержание CD3+T-лимфоцитов, CD16+-клеток в крови; концентрация IgM в сыворотке крови; фагоцитарная активность гранулоцитов и моноцитов; митоген-индуцированная пролиферация мононуклеарных клеток. Для прогноза развития тяжелых инфекционных осложнений использовали комплекс иммунологических показателей, включавший: абсолютное количество лимфоцитов в крови; фагоцитарную активность гранулоцитов и моноцитов; относительное содержание HLA-DR+-моноцитов; спонтанную пролиферацию мононуклеарных клеток [13]. Среди недостатков данного метода следует отметить, что он апробирован лишь у 10 больных гемобластозами после окончания курса полихимиотерапии до развития цитостатической нейтропении. Кроме того, большой перечень маркеров, предлагаемых авторами для оценки, ведет к весьма продолжительному времени обследования, включает трудоемкие и дорогостоящие способы исследования и включает показатели иммунной системы, обладающие весьма широкими референсными интервалами в зависимости от возраста, наличия сопутствующих заболеваний, нозологической формы гемобластоза, проводимого предшествующего лечения.

Анализ литературы показал, что предлагаемый способ прогнозирования развития инфекций у больных ЗЛПЗ на основании анализа SNP TLRs не имеет прототипа, соответственно обладает критерием «новизна» и по совокупности отличительных действий от аналогов присутствует критерий «существенные отличия».

Таким образом, выявление генетических мутаций в образ-распознающих рецепторах иммунной системы у больных ЗЛПЗ может оказаться дополнительным прогностическим критерием риска развития инфекционно-воспалительных осложнений на фоне ПХТ и сопутствующей антимикробной терапии.

Цель изобретения - разработка способа прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающими программную химиотерапию и комбинированную антибактериальную терапию.

Поставленная цель достигается с помощью анализа полиморфизма гена TLR9 Т-1237С до назначения ПХТ или в ранние сроки лечения у пациентов со ЗЛПЗ, получающих программную химиотерапию и комбинированную антибактериальную терапию с или без клинических проявлений инфекционно-воспалительных процессов до периода развития цитостатического агранулоцитоза.

Способ применяли следующим образом. Верификацию диагноза ЗЛПЗ осуществляли на основании клинической картины заболевания, общеклинического, биохимического анализа крови, морфологического исследования пунктатов и трепанобиоптатов костного мозга, гистологического и иммуногистохимического исследования лимфатических узлов, а также иммунофенотипического профиля опухолевых клеток. В первые пять суток стационарного наблюдения, после подтверждения диагноза и до появления миелотоксических осложнений у больных проводили забор венозной крови в объеме 1000 мкл в полистироловую пробирку типа «Эпппендорф» с замком объемом 1,5 мл, содержащую 200 мкл 4% раствора цитрата натрия.

Дальнейшее исследование осуществляли согласно методике в три этапа с использованием комплекта реагентов «SNP-экспресс» для выявления полиморфного локуса гена TLR9 методом полимеразной цепной реакции с аллель-специфичными праймерами (производства НПФ «Литех», г. Москва), на амплификаторе «Терцик» (ООО «ДНК технология», г. Москва) и электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле.

На первом этапе (выделение ДНК из биопроб) в чистую пробирку типа «Эппендорф» с замком вносили 1000 мкл цельной крови. В случае ее расслоения в процессе хранения кровь перемешивали до однородного состояния. Пробирку закрывали и центрифугировали со скоростью 3000 об/мин при комнатной температуре +22°С на микроцентрифуге-вортексе «Эппендорф» (Германия) в течение 5 мин. После центрифугирования крови и разделения ее на плазму и форменные элементы аккуратно пипеткой-дозатором переменного объема удаляли плазму, оставляя ее тонкий слой, не захватывая лейкоциты. Пробирку закрывали и выдерживали при -20°С в морозильной камере в течение 1 часа до полного замораживания форменных элементов. Затем пробирку доставали и размораживали ее содержимое при комнатной температуре +22°С. Следующим шагом было внесение в пробирку 500 мкл реактива «ДНК-экспресс-кровь», что равно 500 мкл суммарного объема оставшихся в пробирке форменных элементов и плазмы. Пробирку закрывали, защелкивали замочек, после чего содержимое в течение 10 с тщательно перемешивали на вортексе Elmi Sky Line (Литва). В предварительно прогретый до температуры +98°С твердотельный термостат устанавливали анализируемую пробирку и выдерживали в течение 15 мин. На следующем этапе пробирку замком в сторону оси помещали в высокоскоростную микроцентрифугу и центрифугировали со скоростью 1200 об/мин при комнатной температуре +22°С в течение 10 мин. Полученный супернатант использовали в качестве исследуемого образца ДНК непосредственно после его приготовления или замораживали после перенесения образца в отдельную пробирку типа «Эппендорф» в морозильной камере при -20°С на срок не более 6 месяцев. Замороженные образцы перед использованием полностью размораживали при комнатной температуре +22°С.

На втором этапе (проведение полимеразной цепной реакции) использовали комплект реагентов для амплификации «SNP-экспресс». Вначале приготавливали и маркировали пробирки для проведения амплификации вместимостью 0,5 мл из расчета 2 штуки на одну пробу («норма» - N и «патология» - Р) плюс 1 пробирка для отрицательного контроля. За 20 минут до приготовления рабочей амплификационной смеси комплект реагентов для ПЦР извлекали из морозильной камеры и полностью размораживали при комнатной температуре +22°С. Пробирки с реакционной смесью и раствором разбавителя тщательно перемешивали (путем вортексирования и переворачивания пробирки, соответственно). Из компонентов комплекта готовили рабочие смеси реагентов для амплификации из расчета на 1 пробу: одна пробирка с реакционной смесью «Норма»: 17,5 мкл разбавителя; 2,5 мкл реакционной смеси «Норма»; 0,2 мкл Taq-полимеразы. Вторая пробирка с реакционной смесью «Патология»: 17,5 мкл разбавителя; 2,5 мкл реакционной смеси «Патология»; 0,2 мкл Taq-полимеразы. После приготовления рабочих смесей для амплификации их тщательно перемешивали пипетированием. В соответствующие пробирки, подготовленные для амплификации, добавляли по 20 мкл соответствующей рабочей амплификационной смеси. Во все пробирки вносили по 1 капле минерального масла и по 5 мкл образца под слой масла из обработанной анализируемой пробы в пробирку с рабочей амплификационной смесью «Норма» и в пробирку с рабочей амплификационной смесью «Патология». В качестве отрицательного контрольного образца добавляли разбавитель в объеме 5 мкл в оба типа реакционной смеси. Пробирки закрывали и центрифугировали в течение 3 с при 3000 об/мин при комнатной температуре +22°С на микроцентрфуге-вортексе. Затем перемещали пробирки в прогретый до +94°С (температура, установившаяся в режиме «Пауза») программируемый твердотельный термостат (амплификатор) и проводили амплификацию по следующей программе (Таблица 1):

На третьем этапе - детекции, для разделения продуктов амплификации методом горизонтального электрофореза, в аппарат для электрофореза «Biometra Standart Power Pack Р25» (Германия) заливали ТАЕ буфер, приготовленный на дистиллированной воде с разбавлением 50хТАЕ в 50 раз (рН=8,3). К 3 г агарозы добавляли 2 мл 50хТАЕ буфера и 100 мл дистиллированной воды. Данную смесь расплавляли в СВЧ-печи и добавляли к 100 г расплавленной агарозы 10 мкл 1% раствора бромистого этидия, перемешивали. Расплавленную агарозу охлаждали до температуры 60°С и заливали в планшет. Для получения в агарозном геле карманов для нанесения образцов устанавливали на планшет гребенку, используя зажим типа «бульдог». После застывания агарозы осторожно вынимали гребенку из геля и переносили планшет с гелем в камеру для проведения электрофореза. В карманы геля наносили по 15 мкл амплификата в последовательности соответствующей нумерации проб. Подключали электрофоретическую камеру к источнику питания и задавали напряжение, соответствующее напряженности электрического поля 15 В/см геля. Проводили электрофоретическое разделение продуктов амплификации в направлении от катода (-) к аноду (+). Контроль за электрофоретическим разделением осуществляли визуально по движению полосы красителя в течение 15 мин. Затем вынимали гель из формы и переносили на стекло УФ-трансиллюминатора Vilber Lourmat (Франция). Включали трансиллюминатор и анализировали результаты анализа: фрагменты анализируемой ДНК проявлялись в виде светящихся оранжево-красных полос (таблица 2).

Пример интерпретации результатов анализа представлен на рисунке,

где К - отрицательный контрольный образец,

1 - нормальная гомозигота,

2 - гетерозигота,

3 - патологическая (мутантная) гомозигота.

4 - контаминация или затекание из соседнего кармана геля в тесте на патологическую (мутантную) аллель,

5 - реакция не прошла (ошибка при проведении анализа или некорректная работа амплификатора).

Распределение генотипов по исследуемому полиморфному локусу проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий χ2 Пирсона с поправкой Йэйтса на непрерывность. Дополнительно оценивали показатель отношения шансов - odds ratio (OR) с вычислением границ 95%-го доверительного интервала (95%CI). Значение OR=1 свидетельствовало об отсутствии ассоциации риска развития инфекций с наблюдаемым генотипом. При значении OR<1 говорили об отрицательной ассоциации (фактор пониженного риска развития инфекционных осложнений), a OR>1 рассматривали как положительную ассоциацию инфекций с признаком (фактор повышенного риска). Для расчета результатов использовали пакеты программ MS Office Excel 2003 STATISTICA V.12, а также «Калькулятор для расчета статистики в исследованиях «случай-контроль» (http:gen-exp.ru/calculator_or.php). Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

Разработанный способ прогноза развития инфекционных осложнений у больных ЗЛПЗ, получающих ПХТ и комбинированную антибактериальную терапию, был оценен у 41 пациента (20 мужчин - 48,8% и 21 женщина - 51,2%, медиана (Me) возраста 59 лет). Среди них, 28 человек с ММ, 9 - с ДВККЛ и 4 - с МКЛ. В зависимости от развития клинических проявлений инфекционно-воспалительных процессов больные были разделены на 2 группы, сопоставимые по возрастным и тендерным характеристикам. В первую группу вошли 27 (65,9%) больных с отсутствием инфекций, во вторую - 14 (34,1%) обследованных с клиническими проявлениями инфекционных заболеваний. Спектр инфекционных осложнений представлен обострениями бактериальных инфекций (хронический бронхит, фарингит, энтероколит), рецидивами герпесвирусной инфекции (орофасциальный герпес), развитием грибковых инфекций (стоматит, эзофагит) и эпизодов фебрильной лихорадки.

Проведенные статистические расчеты позволили выявить взаимосвязь полиморфизма гена TLR9 (Т-1237С) у больных ЗЛПЗ и развитием инфекционных осложнений, несмотря на проводимую сопроводительную антимикробную терапию. А именно, при оценке мутационного статуса гена TLR9 (Т-1237С) установлено, что наличие мутантного аллеля С и содержащих его генотипов ТС+СС встречается достоверно реже среди лиц, не имевших инфекционных осложнений на фоне ПХТ (5,6% vs. 25,0%, χ2=6,51, р=0,01, OR=0,18, 95%CI: 0,04-0,75 и 11,1% vs. 42,9%, χ2=5,42, р=0,02, OR=0.17, 95%CI: 0,03-0,83, соответственно) (таблица 3).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязи полиморфизма гена TLR9 (Т-1237С) с манифестацией инфекционных осложнений на фоне программной и антибактериальной терапии у больных ЗЛПЗ. Выделен фактор, повышающий риск возникновения данных осложнений - мутантный аллель С гена TLR9 (Т-1237С) в гомозиготном состоянии. Определение данного маркера позволяет прогнозировать и профилактировать развитие инфекционных осложнений на фоне ПХТ и антибактериальной терапии у больных ЗЛПЗ до наступления цитостатического агранулоцитоза, оптимизировать индивидуальную противомикробную тактику ведения данных больных.

Пример 1. Больной С., 1956 года рождения. Диагноз ММ был установлен в мае 2007 г., подтвержден присутствием в миелограмме 35% плазмоцитов, гиперпротеинемией (общий белок 138 г/л) и наличием М-градиента в протеинограмме. Проведено 8 курсов терапии с использованием ингибиторов протеосом (бортезомиб) и 2 курса химиотерапии, включающий иммуномодулирующий препарат (леналидомид). При молекулярно-генетическом тестировании у больного на 2-е сутки госпитализации был взят 1 мл венозной крови и проведено исследование полиморфного участка гена TLR9 (Т-1237С). Выявлена нормальная гомозигота ТТ гена TLR9 (Т-1237С). На 21-е сутки лечения отмечался агранулоцитоз 0,6×109/л, клинические проявления каких-либо инфекционных процессов отсутствовали.

Пример 2. Больная А., 1948 года рождения. Диагноз ММ установлен в ноябре 2011 г. подтвержден данным биопсии экстрамедуллярного очага в области грудины, протеинурией 1,4 г/л, повышением сывороточного уровня IgG до 42,1 г/л. Проведено 2 курса терапии с бортезомиб-содержащими препаратами, 1 курс лучевой терапии на экстрамедуллярный очаг поражения и 5 курсов ПХТ с применением иммуномодулирующих средств (леналидомид). Молекулярно-генетическое тестирование проводили на 4-е сутки XT. Обнаружили мутантную гомозиготу СС гена TLR9 (Т-1237С). На 14-е сутки ПХТ отмечался агранулоцитоз 0,4×109/л. Несмотря на проводимую антибактериальную (цефтазидим) и противогрибковую терапию (флуконазол), на 4-й день после окончания курса ПХТ появились жалобы на кашель, одышку, повышение температуры тела до фебрильных цифр. В гемограмме число лейкоцитов составляло 0,28×109/л. Объективно: состояние тяжелое; в легких дыхание жесткое, единичные сухие хрипы; ЧДД=22-24/мин. При рентгенографии органов грудной клетки - признаки бронхита. Проведена коррекция антимикробной терапии с добавлением амикацина, ванкомицина, метронидазола и противогрибковой терапии (ирунин) соответственно чувствительности микрофлоры. В результате на 25-е сутки самочувствие больной нормализовалось.

Источники информации

1. Гершанович М.Л. Основные принципы лечения неходжкинских лимфом. Практическая онкология. 2004. Т. 5. №3. С. 185-193.

2. Программное лечение заболеваний системы крови: Сборник алгоритмов диагностики и протоколов лечения заболеваний системы крови / Под ред. В.Г. Савченко. - М.: Практика, 2012. - 1056 с.

3. Основы клинической гематологии: учебное пособие / С.А. Волкова, Н.Н. Боровков. - Н. Новгород: Издательство Нижегородской гос. медицинской академии, 2013. - 400 с.

4. Toll-like receptors in the pathogenesis of human В cell malignancies / Isaza-Corerea J.M., Liang Z., van der Berg A., Diepstra A., Visser L. // Journal of Hematology and Oncology. 2014. Vol. 7. №1. URL: http://www.jhoonline.org/content/7/1/57 (дата обращения 14.08.2014).

5. Trejo-de la О A., Hernandez-Sancen P., Maldonado-Bernal C. Relevance of single-nucleotide polymorphisms in human TLR genes to infectious and inflammatory diseases and cancer // Genes and Immunity. 2014. Vol. 15. №6. P. 199-209.

6. The role of Toll-like receptors in chronic В cell malignancies / Muzio M., Bertilaccio M.T.S., Simonetti G., Frenquelli M., Caligaris-Cappio F. // Leukemia and Lymphoma. 2009. Vol. 50. №10. P. 1573-1580.

7. Генетический полиморфизм иммуногенной сигнальной системы / Цыган В.Н., Иванов A.M., Камилова Т.А., Кожухова Е.А., Мурашкин Н.Н., Цыган Н.В. // Журнал инфектологии. 2011. Т. 3. №2. С. 21-27.

8. Kutikhin A.G., Yuzhalin А.Е. Inherited variation in pattern recognition receptors and cancer; dangerous liaisons? // Cancer Management and research. 2012. №4. P. 31-38.

9. Evaluation of the toll-like receptor 6 Ser249Pro polymorphism in patients with asthma, atopic dermatitis and chronic obstructive pulmonary disease // Hoffjan S., Stemmler S., Parwez Q., Petrasch-Parwez E., Arinir U., Rohde G., Reinitz-Rademacher K., Schultze-Werninghaus G., Bufe A., Epplen J.T. // BMC medical Genetics. 2005. Vol. 34. №6. URL: http://www.biomedcentral.com/1471-2350/6/34 (дата обращения 18.08.2014).

10. Polymorphisms in Toll-like receptor genes and susceptibility to pulmonary aspergillosis / Carvalho A., Pasqualotto A.C., Pitzurra L., Romani L., Denning D.W, Rodrigues F. // The Journal of Infectious Diseases. 2008. Vol. 197. №4. P. 618-621.

11. Способ прогнозирования развития инфекционных осложнений химиотерапии»: пат. 2294540 Рос. Федерация. №2005118188/14; заявл. 14.06.05; опубл. 27.02.07. Бюл. №6.

12. Способ прогнозирования инфекционных осложнений после химиотерапии у больных острыми лейкозами: пат. 2315305 Рос. Федерация. №2005134594/15; заявл. 08.11.2005; опубл. 20.01.08. Бюл. №2.

13. Способ прогноза развития инфекции и тяжелых инфекционных осложнений у больных гемобластозами на программной полихимиотерапии: пат. 2199115 Рос. Федерация. №2000118298/14; заявл. 10.07.00; опубл. 20.02.03.

Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений у больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями, получающих программную химиотерапию, включающий выделение ДНК из клеток периферической венозной крови, характеризующийся тем, что проводится анализ распределения генотипов полиморфизма Т-1237С гена TLR9 до наступления цитопенических осложнений программной химиотерапии и манифестации инфекций и в случае выявления мутантной гомозиготы СС Т-1237С гена TLR9 прогнозируют повышение риска развития инфекций.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и может быть использовано для лабораторной оценки эффективности лечения фондапаринуксом у кардиохирургических больных с гепарин-индуцированной тромбоцитопенией.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и молекулярной биологии, и предназначено для диагностики плоскоклеточного рака легкого (ПКРЛ). Осуществляют получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй - из прилегающей гистологически нормальной ткани, выделение и очистку препаратов РНК, синтез кДНК на матрице РНК, амплификацию фрагмента гена CALL и сравнение количества амплифицированного фрагмента ДНК CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа обнаружения наличия микробной биомассы земного типа. Сущность способа заключается в том, что получают тестируемый образец, о котором известно, что он содержит или может содержать микроорганизмы, помещают тестируемый образец в контейнер, отделяют от тестируемого образца компоненты тестируемого образца с микроорганизмами, проводят масс-спектрометрическое исследование компонентов тестируемого образца с микроорганизмами.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной системы и развития плода на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки риска развития патологии беременности. Сущность способа состоит в том, что в качестве биомаркеров оценки риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения трансаминирования глутаминовой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине и касается способа получения продукта, содержащего иммуноглобулины G, A, M, при котором в качестве исходного сырья используют осадки фракции Кона, которые гомогенизируют с получением суспензии, которую обрабатывают хлороформом, перемешивают, выдерживают, центрифугируют, формируют осадок с последующим удалением балластных фракций дополнительным центрифугированием, выделяют целевой продукт с последующим розливом, замораживанием и высушиванием.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи. Сущность способа состоит в том, что из венозной крови осуществляют выделение генетического материала.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего иммунологического прогнозирования возникновения «малых повреждений миокарда» (МПМ) в послеоперационный период после проведения чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ) и стентирования коронарных артерий у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Изобретение относится к медицине, к актуальной проблеме современного здравоохранения, разделу педиатрии и может быть использовано для оценки тяжести поражения гепато-билиарной системы у младенцев и детей раннего возраста и степени выраженности фиброза печени.
Изобретение относится к медицине, а именно к гнойной хирургии, и может быть использовано для профилактики гипертрофических рубцов при лечении флегмон мягких тканей. Для этого проводят ежедневное гистологическое исследование мазка-отпечатка и лабораторное исследование типа ацетилирования. При ацетилярной активности более 30% и выявлении II фазы раневого процесса, комплекс консервативной терапии включает местное нанесение мази Эгаллохит в течение 5 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 5 дней. При ацетилярной активности от 30 до 20% и при выявлении II фазы раневого процесса комплекс консервативной терапии включает местное нанесение мази Эгаллохит в течение 7 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 7 дней, а затем электрофорез Карипазима 350 ПЕ в течение 7 дней. При ацетилярной активности менее 20% и при выявлении II фазы раневого процесса комплекс консервативной терапии включает введение Лонгидазы по 1,0 мл внутримышечно 1 раз в 3 дня в количестве 10 инъекций, местное нанесение мази Эгаллохит в течение 10 дней, а при выявлении III фазы раневого процесса - ультрафонофорез геля Контрактубекс в течение 10 дней, затем электрофорез Карипазима 350 ПЕ в течение 10 дней, лазеротерапия по 10 минут в течение 5 дней. Способ обеспечивает снижение частоты образования гипертрофических рубцов за счёт предупреждения избыточного рубцевания, ликвидации воспаления и стимуляции регенерации с учётом индивидуальных особенностей больного в отношении избыточного рубцевания. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ дифференциальной диагностики стадий гонартроза, включающий исследование крови и определение в ее плазме концентрации мочевой кислоты (МК), в мкМ/л, отличающийся тем, что в мононуклеарной фракции крови также определяют активность миелопероксидазы (МПО), в у.е./мин·мг, и активность ксантиноксидоредуктазы (КОР), в МЕ/г, после чего рассчитывают суммарный коэффициент диагностики К по формуле: при выполнении условия 3.1≤К<3.4 диагностируют I стадию; при выполнении условия 3.4≤К<3.9 диагностируют II стадию; при выполнении условия 3.9≤К<5.2 диагностируют III стадию; при выполнении условия К≥5.2 диагностируют IV стадию гонартроза по шкале Kellgren-Lawrence. Осуществление изобретения обеспечивает повышение надежности дифференциальной диагностики стадии гонартроза. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска госпитальной летальности больных острым коронарным синдромом без подъема сегмента ST. Сущность способа состоит в том, что метод для определения риска госпитальной летальности больных острым коронарным синдромом без подъема сегмента «ST» на электрокардиограмме проводят путем пошагового анализа ряда биологических параметров, включающих следующие переменные: возраст пациента 62 года и выше, уровень креатинина крови более 168,0 мкмоль/л, уровень глюкозы крови более 6,4 ммоль/л, уровень тропонина I в крови более 1нг/мл, класс III-IV острой сердечной недостаточности по классификации Killip, систолическое артериальное давление ниже 100 мм рт. ст., передняя локализация инфаркта миокарда. При сумме баллов от 0-3 пациента относят к категории низкого риска, при сумме баллов от 4 до 7 пациента относят к категории высокого риска госпитальной летальности. Использование заявленного изобретения позволяет повысить прогностическую ценность заявленного способа, он отличается удобством и простотой использования, учетом наиболее значимых прогностических факторов, способствует выбору оптимальной тактики лечения для каждого пациента с учетом индивидуальных особенностей. 4 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и предназначено для дифференциации природы происхождения рецидивных кист при цистном эхинококкозе. Осуществляют выделение ДНК из клеток герминативного слоя оболочки первичной и рецидивной эхинококковых кист. Методом полимеразной цепной реакции получают фрагменты маркерного участка гена cox1 Е. granulosus. Проводят анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов. При обнаружении сходства длин рестрикционных фрагментов первичной и рецидивной эхинококковых кист устанавливают, что рецидивная киста имеет имплантационную природу происхождения. При нахождении различий устанавливают резидуальную или реинвазивную причину возникновения рецидивной кисты. Изобретение обеспечивает получение новых критериев дифференциации природы происхождения послеоперационных рецидивов цистного эхинококкоза. 2 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья, определяют возраст, уровень систолического и диастолического артериального давления, наличие отягощенного семейного анамнеза, наличие сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз, микрососудистых изменений в конъюнктиве, степень пигментации угла передней камеры, осуществляют забор периферической венозной крови и выделение ДНК, проводят анализ полиморфизма гена VEGF-A с.-958C>T (rs833061), после чего определяют значения дискриминантных показателей Dp и Dk по формулам. В случае, если Dp больше Dk, прогнозируют риск развития ПОУГ. Изобретение обеспечивает раннюю диагностику ПОУГ и позволяет формировать группы риска по данному заболеванию. 3 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ). У женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, осуществляют забор крови, выделение ДНК и анализ полиморфизмов генов интерлейкинов. В случае выявления генетического варианта -511Т IL-1В, либо сочетания аллелей и генотипов -889ТT IL-1А, -511Т IL-1В и -113Т IL-9, либо сочетания аллелей и генотипов -511Т IL-1В и -113ТТ IL-9, либо сочетания аллелей -511Т IL-1B, -113Т IL-9, -592C IL-10 и -251Т IL-8, либо сочетания аллелей -511Т IL-1B, -703Т IL-5 и -584C IL-4 прогнозируют повышенный риск развития ХКХ. В случае выявления сочетания аллелей -889С IL-1А, -511С IL-1B и -703С IL-5, либо сочетания аллелей -511C IL-1B и -703С IL-5 прогнозируют низкий риск развития ХКХ. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития ХКХ у женщин. 8 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Предложен способ прогнозирования характера поражения желчного пузыря у женщин, больных хроническим калькулезным холециститом, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. В случае выявления сочетания генотипов -889ТТ и -889СТ IL-1A либо генотипа -174СС IL-6 прогнозируют образование крупного диаметра камня, а в случае выявления генотипа -584СС IL-4 прогнозируют увеличение толщины стенки желчного пузыря более 4 мм. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование характера поражения желчного пузыря у женщин, больных хроническим калькулезным холециститом. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки индивидуального генетического риска атеросклероза. Осуществляют взятие крови, выделение ДНК и генотипирование митохондриальной ДНК. Наличие варианта A1811G свидетельствует о высоком генетическом риске. Наличие вариантов Т204С, G8251A, Т10238С, G12501A свидетельствует о низком генетическом риске. Изобретение обеспечивает повышение точности диагностики предрасположенности к атеросклерозу.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и гепатологии во внутренних болезнях, и может быть использовано для оценки состояния печени у больных хроническим вирусным гепатитом С. Сущность способа: в цельной крови больного определяют количество тромбоцитов, в сыворотке крови определяют уровень фактора некроза опухоли альфа и концентрацию альбумина, рассчитывают по следующей формуле индекс фиброза печени: ИФ=3,79-0,0056·ТР+0,0855·ФНО-α-0,0352·АЛЬБУМИН. При значении индекса фиброза в интервале от 0 до 0,5 определяют отсутствие фиброза (стадия F0), значение индекса фиброза в интервале от 0,6 до 2,5 соответствует умеренной стадии фиброза (F1-2), значение индекса фиброза более 2,5 соответствует выраженной стадии фиброза (F3-4). Изобретение обеспечивает снижение травматичности, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности и специфичности. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования чувствительности к химиотерапии у больных с лимфопролиферативными заболеваниями. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови определяют количественные уровни маркеров тимидинкиназы-1 (TK-1) и β2-микроглобулина (β2-МГ), а также после первого курса химиотерапии активность TK-1. Если активность ТК-1 до начала лечения <150,0 ДЕд/л, то в результате 6-8 курсов XT достигается полная или частичная ремиссия, если уровень β2-МГ до начала лечения <2200,0 мкг/л, то в результате 6-8 курсов XT достигается полная или частичная ремиссия. Если активность ТК-1 после 1 курса химиотерапии возрастает более чем в 4 раза относительно исходного значения, то в результате 6-8 курсов XT достигается полная или частичная ремиссия. Использование заявленного способа позволяет для части пациентов избежать получения неэффективного лечения и его побочных токсических осложнений, улучшить прогноз заболевания за счет рационализации терапии уже на первом этапе. 3 ил., 3 табл., 4 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-06-20 2016-06-20T19:07:51
Наверх