Способ диагностики течения "асимптомного" каротидного атеросклероза

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза. Диагностику течения «асимптомного» каротидного атеросклероза проводят путем иммуноферментного определения в плазме крови биомаркеров. При этом в плазме крови иммуноферментным методом определяют уровни тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), адипонектина, асимметричного диметиларгинина (ADMA), а биохимическим методом уровни нитрата, нитрита и оксида азота (NO). Затем каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от его снижения или повышения относительно нормы. А именно при значении уровней t-PA, адипонектина и оксида азота выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при их снижении относительно нормы - 0 баллов. После чего рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение «асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более - неблагоприятное. Способ обеспечивает высокую точность диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза за счет специфичности и чувствительности метода совместного определения биомаркеров - t-PA, PAI-1, адипонектина, ADMA, нитрата, нитрита и NO. 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза.

Важнейшей и клинически значимой локализацией атеросклеротических бляшек является область бифуркации общих сонных (каротидных) артерий. Распространенность каротидного атеросклероза составляет 25,4% у мужчин и 26,4% у женщин (в возрасте от 18 до 99 лет) (Prati Ρ, Vanuzzo D, Casaroli M, Di Chiara A, De Biasi F, Feruglio GA, Touboul PJ. Prevalence and determinants of carotid atherosclerosis in a general population. Stroke. 1992 Dec; 23(12): 1705-11). Каротидный атеросклероз - одна из основных причин ишемического инсульта. Развитие ишемических нарушений мозгового кровообращения (НМК) у больных со стенозирующим поражением артерий, кровоснабжающих головной мозг, может реализовываться по всем известным механизмам. Так, в общей структуре всех верифицированных подтипов ишемического инсульта атеротромботический подтип инсульта (по механизму артерио-артериальной эмболии из нестабильной АСБ) встречается в 34% случаев, а гемодинамический инсульт (в результате снижения перфузионного давления на фоне стеноокклюзирующего процесса) - в 15% случаев НМК (Суслина З.А. Сосудистая патология головного мозга: итоги и перспективы. Анналы клинической и экспериментальной неврологии, 2007, 1; 1: 10-16). В то же время процесс атеросклеротического поражения артерий является доминирующим сосудистым процессом при всех гетерогенных подтипах НМК.

Исходя из факта наличия или отсутствия в анамнезе данных за ишемический инсульт в заинтересованной зоне кровоснабжения стенозы внутренней сонной артерии (ВСА) подразделяют на «симптомные» и «асимптомные».

К «асимптомным» стенозам ВСА относят сужение просвета сонной артерии ≥50% при отсутствии в анамнезе в течение предшествующих 6 месяцев эпизодов ишемии сетчатки (amaurosis ftigax) и/или головного мозга. В общей популяции распространенность «асимптомных» стенозов ВСА составляет: от 0% до 7,5% для стенозов умеренной степени (то есть 50-70%) и 0-3,1% - для выраженных стенозов (≥70%) (den Hartog AG, Achterberg S, Moll FL, Kappelle LJ, Visseren FLJ, van der Graaf Y, et al. Asymptomatic carotid artery stenosis and the risk of ischemic stroke according to subtype in patients with clinically manifest arterial disease. Stroke. 2013; 44: 1002-1007).

Имеющийся на сегодняшний день объем научной информации о факторах инициации, развития и прогрессирования атеросклеротического процесса свидетельствует о чрезвычайной сложности и неоднозначности выявляемых клинических и молекулярно-генетических взаимодействий.

Известен способ диагностики и прогнозирования течения атеросклеротического процесса, заключающийся в получении образца ткани из стенки артерии в результате проведения биопсии или в ходе хирургической операции, лиофилизации образца, регистрации ЭПР-спектра методом высокочастотного электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), измерения времен релаксации парамагнитных комплексов Mn2+ на сертифицированном спектрометре электронного парамагнитного резонанса W-диапазона. При выявлении времени поперечной релаксации ионов Mn2+ меньше 100 не определяют слабую степень кальцификации атеросклеротической бляшки (RU 2468368 C1, 27.11.2012). Однако данный метод не обеспечивает оценку течения «асимптомного» каротидного атеросклероза и используется только для диагностики наличия заболеваний, вызванных атеросклерозом. Кроме того, указанная методика является инвазивной и может быть использована для узкой категории больных, которым показано оперативное вмешательство. Недостатком способа является также и то, что его можно использовать лишь в специализированных центрах.

Известен способ исследования пациентов с «асимптомными» стенозами ВСА (50-79%) путем MP-исследования в режимах TOF, Τ1, Т2, PDw в области бифуркации общей сонной артерии в начале наблюдения и затем каждые 18 месяцев. Период наблюдения составил 54 месяца. Была выделена группа больных, у которых в течение этого периода было выявлено кровоизлияние в бляшку и рассчитана скорость прогрессирования атеросклеротического процесса (как увеличение объема стенки ВСА по МРТ) до и после кровоизлияния. Оказалось, что до развития кровоизлияния она составила - 20,5±13,1 мм3/год (р=0,129), а после - 18,3±6,5 мм3/год (р=0,008); у пациентов, у которых не развилось кровоизлияние в бляшку, этот параметр составил 5,3±7,2 мм3/год (р=0,466) (Sun J, Underhill HR, Hippe DS, Xue Y, Yuan C, Hatsukami TS. Sustained acceleration in carotid atherosclerotic plaque progression with intraplaque hemorrhage. JACC: Cardiovascular imaging. 2012; 5(8): 798-804). Таким образом, наличие кровоизлияния в бляшку по данным MP-исследования можно считать субоптимальным предиктором нарастания степени прогрессирования атеросклеротического процесса в каротидном бассейне. Однако в рутинной практике использование вышеуказанной сравнительно дорогостоящей методики не всегда оправданно, поэтому для уточнения группы пациентов «высокого риска» в последнее десятилетие интенсивно ведется поиск биомаркеров и генетических изменений, определяющих предрасположенность к дестабилизации атеросклеротической бляшки. Особое место в этих исследованиях занимают биохимические предикторы эндотелиальной дисфункции. Эндотелий играет ведущую роль в поддержании адекватного тока крови по сосудистому руслу. Эндотелиальная дисфункция характеризуется формированием тенденции к снижению способности к вазодилатации, провоспалительному состоянию, сопровождающемуся протромботической активностью.

Наиболее близким техническим решением к заявленному является способ диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза путем иммуноферментного анализа в плазме крови содержания адипонектина (Iglseder В, Mackevics V, Stadlmayer A, Tasch G, Ladumer G, Paulweber B. Plasma adiponectin levels and sonographic phenotypes of subclinical carotid artery atherosclerosis: data from the SAPHIR Study. Stroke. 2005 Dec; 36(12): 2577-82). Недостатками способа является его невысокая точность диагностики, поскольку данный биомаркер отражает только один из факторов природы атеросклероза.

Авторами предлагаемого изобретения для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза в качестве биомаркеров были использованы тканевой активатор плазминогена (t-PA), ингибитор активатора плазминогена (PAI-1), адипонектин, асимметричный диметиларгинин (ADMA), нитрат, нитрит и оксид азота (NO). Такой набор биомаркеров обусловлен следующим. В частности, обнаружено, что оксид азота (NO), образующийся в эндотелии при участии фермента эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), многими авторами рассматривается как мощный сосудорасширяющий агент, имеющий огромное значение в возникновении такого феномена, как поток-зависимая вазодилатация. Помимо этого, NO уменьшает агрегацию тромбоцитов, замедляет адгезию моноцитов и лейкоцитов к эндотелию, ингибирует пролиферацию гладкомышечных клеток, а также препятствует окислению холестерина липопротеидов низкой плотности. Определение конечных метаболитов - нитритов и нитратов, рассматривающихся как устойчивые конечные продукты NO, получило широкое распространение в экспериментальных и клинических работах для оценки общего синтеза NO. Повышение уровней метаболитов NO при гиперхолестеринемии связывают с ингибирующим действием NO при окислении ЛПНП. Антитромботическое влияние NO может также быть связано с отрицательным воздействием на экспрессию ингибитора активатора плазминогена - 1 (PAI-1) - протромботического белка. Тканевой активатор плазминогена (t-PA) и PAI-1 напрямую влияют и вмешиваются в процессы формирования и деградации тромба и, следовательно, во многом определяют риск развития артериального тромбоза. Кроме того, в организме человека синтезируется эндогенный ингибитор синтазы оксида азота - асимметричный диметиларгинин (АДМА), уровень которого находится в обратно пропорциональной зависимости от показателей поток-зависимой дилатации. Определенный вклад в развитие заболеваний, связанных с ожирением также вносит и адипонектин, который ингибирует разнообразные механизмы, лежащие в основе атерогенеза: экспрессию молекул адгезии в эндотелиальных клетках, пролиферацию гладкомышечных клеток и образование пенистых клеток. Изменения вышеописанных биомаркеров, являющихся специфичными по отношению к эндотелиальной дисфункции, приводят к изменению показателей, определяемых в образцах крови, которые при совместном их использовании являются пригодными для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза с высокой точностью.

Технический результат заявленного изобретения заключается в высокой точности диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза за счет специфичности и чувствительности метода совместного определения биомаркеров - тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), адипонектина, асимметричного диметиларгинина (ADMA), нитрата, нитрита и оксида азота (NO).

Технический результат достигается тем, что диагностику течения «асимптомного» каротидного атеросклероза проводят путем иммуноферментного определения в крови биомаркеров, отличающийся тем, что в плазме крови иммуноферментным методом определяют уровни тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), адипонектина, асимметричного диметиларгинина (ADMA) и биохимическим методом в сыворотке крови уровни нитрата, нитрита и оксида азота (NO), причем каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от его снижения или повышения относительно нормы, а именно при значении уровней t-PA, адипонектина и NO выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при снижении их относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при снижении их относительно нормы - 0 баллов, затем рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более - неблагоприятное.

Способ осуществляется следующим образом.

Анализы активности биомаркеров t-PA, PAI-1, адипонектина и ADMA были произведены на базе лаборатории гемореологии и гемостаза ФГБНУ НЦН. Исследование проводилось с использованием микропланшетного ридера Victor2, Perkin-Elmer (США). При всех исследованиях использовались калибраторы фирм производителей реагентов. Контроль исполнения анализов иммуноферментным методом проводился в дублях с использованием лиофилизированных контрольных сывороток/плазм с низким и высоким содержанием исследуемых параметров.

Взятие образцов крови производилось натощак, из локтевой вены одноразовой иглой в вакуумную пробирку (содержащую ЭДТА). Далее в течение 30 минут от момента взятия образцы крови подвергались центрифугированию в течение 15 минут со скоростью 2500 g. Исследуемая плазма в дальнейшем аликвотировалась и замораживалась при температуре - 80°С. Размораживание образцов производилось непосредственно перед проведением ИФА.

Анализы биомаркеров NO, нитрита и нитрата проводили в образцах сыворотки крови биохимическим методом в микропланшетном формате при длине волны: 540 нм и диапазоне измерения: 0,78-200 мкмоль/л.

Наиболее распространенными жалобами пациентов с «асимптомным» атеросклерозом были: головная боль и/или реже шум в ушах, а также неустойчивость настроения и памяти. Онемение в дистальных отделах рук и ног встречалась у некоторого числа пациентов, однако оно вероятнее всего было связано с диабетической полинейропатией, присутствовавшей у этих больных.

При анализе неврологического статуса указанной когорты пациентов основным синдромом являлся цефалгический, реже проявлялись когнитивные нарушения. Головные боли встречались достаточно часто, в 56% случаев (n=65), имели в подавляющем большинстве «давящий», «тупой» характер, локализовались в лобно-височной и затылочной областях.

Когнитивные нарушения были представлены в основном жалобами на нарушение памяти (преимущественно на текущие события). Для объективизации выявленных изменений был использован опросник МоСА. Средний балл по этой шкале в группе исследования составил 24,9±2,6 баллов, что свидетельствует о наличии у пациентов с «асимптомным» атеросклерозом когнитивной дисфункции легкой-умеренной степени.

Данным больным с «асимптомным» каротидным атеросклерозом проводят иммуноферментное определение в плазме крови биомаркеров, а именно определяют уровни t-PA, PAI-1, адипонектина, ADMA и биохимическим методом определение в сыворотке крови уровней нитрата, нитрита и NO. При этом каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от снижения или повышения его уровня относительно нормы. Причем при значении уровней t-PA, адипонектина и NO выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при их снижении относительно нормы - 0 баллов. После чего рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более - неблагоприятное.

Определение концентрации адипонектина проводилось следующим образом. В процессе анализа методом BioVendor Human Adiponectin ELISA стандарты, образцы и контроли инкубировались в лунках микропланшета, покрытых меченными пероксидазой хрена человеческими анти-адипонектин моноклональными антителами. Далее в лунки с иммобилизированным комплексом антитела-sTfR добавлялись другие моноклональные антитела sTfR человека, меченные ферментом пероксидазой хрена. После второй инкубации и процедуры промывки в лунки добавлялся субстрат тетраметилбензидин и пероксид водорода, с которым связавшиеся конъюгированные антитела вступали в реакцию. Последняя останавливалась добавлением раствора кислоты, и абсорбция получившегося желтого раствора определялась спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Показатели абсорбции пропорциональны концентрации адипонектина в исследуемом образце, числовое значение которой определялось по калибровочной кривой. Указанная методика является вариантом «сэндвичного» ИФА.

Определение концентрации ингибитора активации плазминогена первого типа и тканевого активатора плазминогена производилось по той же методике, что и определение адипонектина, только с использованием набора компании Technoclone.

Определение концентрации асимметричного диметиларгинина базировалось на конкурентной схеме ИФА, применялись реактивы фирмы Immundiagnostik. В образцы крови до начала анализа добавлялся реагент-дериватизатор. Затем подготовленные таким образцы вместе с поликлональной анти-АДМА-сывороткой инкубировали в лунках микропланшета, покрытых производным АДМА. В течение инкубационного периода АДМА в исследуемой плазме конкурирует за связывание с поликлональными антителами с исходно присутствовавшим в лукнах производным АДМА. Следующие этапы данного теста проходят по методике, описанной по определению адипонектина.

Определение окиси азота проводили в образцах сыворотки крови биохимическим методом в микропланшетном формате. Длина волны: 540 нм. Диапазон измерения: 0,78-200 мкмоль/л. Аналитическая чувствительность: 0,78-200 мкмоль/л. Данный метод основан на ферментном превращении нитрата в нитрит под действием фермента нитратредуктазы. Специфическая реакция нитрит - иона, основанная на синтезе азосоединения (реакция Грисса) регистрируется колориметрически. Реакция Грисса - двухстадийная реакция диазотитрования, в которой кислый NO2 (нитрозирующий агент, реагирует с сульфаниловой кислотой с образованием иона диазония. Этот ион присоединяется к N-(1-нафтил) этилендиамину с формированием цветного азопроизводного, которое поглощает свет на длине волны 540-570 нм. Для определения использовался набор Total NO/Nitrite/Nitrate Assay фирмы R&D Systems (США), который имеет 2 аналитические опции. Измерение эндогенного нитрита - первая опция. Превращение нитрата в нитрит с использованием нитрат-редуктазы и измерение общего нитрита - вторая. Для получения концентрации нитрата производят вычисление концентрации эндогенного нитрита из значения общего нитрита.

В исследование было включено 117 пациентов с «асимптомными» стенозами одной из внутренних сонных артерий (не менее 50%) и 105 добровольцев без признаков атеросклероза в системе сонных артерий (верифицированным при дуплексном сканировании магистральных артерий головы и шеи, проведенном не позднее, чем за 6 месяцев до включения пациента в исследование). Критерием «асимптомности» стеноза, в соответствие с текущими рекомендациями, являлось отсутствие ишемического инсульта в бассейне пораженной внутренней сонной артерии в течение 6 месяцев от времени выявления стеноза. Однако в настоящем исследовании было принято решение о сужении критериев включения пациентов в группу исследования - были отобраны лишь пациенты, у которых в анамнезе отсутствовали указания на перенесенное нарушение мозгового кровообращения (как ипси-, так и контралатерально по отношению к стенозированной артерии) любой этиологии (как ишемического, так и геморрагического генеза). Средний возраст обследованных составил 65,7±9,3 лет; несколько преобладали мужчины (59%) (см. таблица 1). Всем пациентам в исследуемой группе проводился опрос по шкале когнитивной оценки МоСА (The Montreal Cognitive Assessment test), включавшей вопросы на выявление зрительно-пространственных нарушений, снижения слухо-речевой памяти, концентрации и внимания.

Обследование пациентов включало как инструментальные методики, так и комплексную оценку общесоматического и неврологического статуса, рутинные клинико-лабораторные тесты и определение биомаркеров методом иммуно-ферментного анализа, а именно в плазме крови определяли уровни t-РА, PAI-1, адипонектина, ADMA, нитрата, нитрита и NO.

Учитывая многофакторную природу атеросклероза был проведен анализ биомаркерной «отягощенности» пациентов с «асимптомными» стенозами брахиоцефальных артерий (БЦА). С этой целью были определены референтные значения исследуемых параметров и уровень того или иного биомаркера оценивался по отношению к группе контроля (см. таблица 2).

Референтные уровни для всех маркеров были выбраны исходя из их средних значений в группе контроля, что являлось нормой для группы исследования больных с «асимптомным» каротидным атеросклерозом. Причем при значении уровней t-PA, адипонектина и оксида азота выше нормы этим биомаркерам присваивали 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивали 1 балл, а при снижении их относительно нормы - 0 баллов.

Оказалось, что медиана среднего значения балла по приведенной шкале у пациентов с «асимптомным» каротидным атеросклерозом составила 4 балла и более, а у пациентов в группе контроля она была ниже 4 баллов.

То есть тенденция к более «благоприятному» биомаркерному профилю была у 75% пациентов контрольной группы. В то же время у пациентов с «асимптомным» каротидным атеросклерозом при вовлечении 4-х и более биомаркеров была тенденция к «неблагоприятному» биомаркерному профилю в 85,8% случаев (см. таблица 3).

Таким образом, заявленный способ обеспечивает высокую достоверность диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза.

Примеры осуществления способа

Пример 1

Пациент Е., 60 лет, обратился в научно-консультативное отделение Научного центра неврологии с жалобами на головные боли и некоторое снижение памяти на текущие события. Из анамнеза известно, что длительное время страдает артериальной гипертонией с умеренным повышением цифр артериального давления (максимально - до 160/100 мм рт.ст.). Систематически гипотензивную терапию не принимал; в 2011 году диагностировано нарушение толерантности к глюкозе.

При осмотре - конституция гиперстеническая (ИМТ - 29 кг/м2). Артериальное давление - 140/90 мм рт.ст. В неврологическом статусе отмечается мелкоразмашистый нистагм при взгляде влево. Лицо симметрично в покое и при выполнении мимических проб. Глотание и фонация не нарушены. Мягкое небо симметрично. Рефлексы с мягкого неба и задней стенки глотки живые. Язык по средней линии. Парезов нет. Сухожильные рефлексы симметрично снижены. Патологических рефлексов нет. Отмечается снижение болевой чувствительности в дистальных отделах рук и ног. При выполнении координаторных проб отмечается некоторая неуверенность. В пробе Ромберга пошатывается.

При проведении комплексного нейропсихологического тестирования у пациента выявлены умеренные когнитивные нарушения, преимущественно вовлекающие кратковременную память. При обследовании по Монреальской шкале оценки когнитивных функций (МоСА) пациент набрал 22 балла (норма - 28 и выше).

При проведении биохимического анализа крови выявлено следующее: уровень гликемии натощак - 6,3 ммоль/л, гликированный гемоглобин - 6,2%. Уровень глюкозы плазмы через 2 часа после нагрузки в ходе ОГТТ - 9,2 ммоль/л. Обращает на себя внимание нарушение показателей липидного обмена в виде повышения уровня триглицеридов до 2,24 ммоль/л, снижение уровня холестерина ЛПВП до 0,78 ммоль/л и повышения уровня холестерина до 6,7 ммоль/л.

При оценке показателей гемостаза обнаружено повышение агрегации тромбоцитов под влиянием адреналина до 54 (в норме 37-43%) и АДФ до 60 (в норме 40-46%), повышение уровня фибриногена - до 4,3 г/л, а также снижение индекса фибринолитической активности до 5%.

При оценке биомаркеров эндотелиальной дисфункции отмечено повышение относительно нормы концентраций нитрата и нитрита (157 и 155 мкмоль/л соответственно), с выраженным снижением плазменного уровня NO - до 2-х мкмоль/л. Выраженное повышение PAI-1 (до 8,4 Ед/мл) сопровождалось снижением активности тканевого активатора плазминогена до 1,2 нг/мл. Уровень ADMA был резко повышен - 0,78 мкмоль/л, а адипонектина - снижен (6,5 мкг/мл). По биомаркерной шкале (см. раздел 3.5) пациент набрал максимальные 7 баллов, поскольку все показатели находилась за пределами референтных значений (значений нормы). Был поставлен диагноз неблагоприятного течения «асимптомного» каротидного атеросклероза.

Учитывая такие выраженные изменения маркерных молекул атеросклеротического процесса, пациенту было выполнено ДС МАГ, где был обнаружен 60% стеноз правой ВСА и 55% стеноз левой ВСА. При МРТ выявлялись признаки дисциркуляторной энцефалопатия, однако данных за перенесенное острое НМК получено не было.

Таким образом, у данного пациента выявляются изменения, затрагивающие практически все звенья атерогенеза - воспаление, фибринолитическую активность, усиление гемостатической активации, липидный обмен. Несмотря на то что пациент является по сути «асимптомным», такой большой набор различных молекулярных маркеров является фактором высокого риска по возможной дестабилизации атеросклеротической бляшки и дальнейшему развитию острого НМК по типу атеротромбоза, артерио-артериальной эмболии или по гемодинамическому подтипу. Все вышесказанное было учтено при выборе «агрессивной» терапевтической тактики для данного пациента.

На фоне назначения адекватной антиагрегантной, гипотензивной и гиполипидемической терапии, а также препаратов, влияющих на углеводный обмен, отмечено улучшение клинической картины у данного пациента - несколько регрессировали когнитивные нарушения, почти исчез цефалгический синдром, стабилизировались цифры артериального давления. Спустя 12 месяцев после первичного осмотра были повторно проанализированы показатели биомаркеров: выявлена положительная динамика в виде уменьшения балла по биомаркерной шкале до 5 (за счет снижения уровня АДМА и повышения концентрации t-PA). Клинического «озвучивания» каротидного атеросклероза за указанный период наблюдения отмечено не было. Прогрессирование степени стеноза было в пределах допустимых значений - на 5% в левой ВСА.

Пример 2

Пациент К., 57 лет, обратился в клинику с жалобами на эпизодически возникающую головную боль, снижение памяти (преимущественно на текущие события). Из анамнеза известно, что цефалгический синдром беспокоит в течение порядка 3-х лет, связан с психоэмоциональным напряжением. Нарушение памяти беспокоит уже год, однако сильно в повседневную жизнь пациента «не вмешивается». Ранее не обследовался.

При обследовании в научно-консультативном отделении выявлено некоторое пошатывание в пробе Ромберга, значение балла по шкале МоСА - 28, что соответствует нижней границе нормы. Артериальное давление при осмотре составило 130/80 мм рт.ст., частота сердечных сокращений - 78 в минуту. Признаков другой соматической патологии при осмотре выявлено не было.

В общем клиническом и биохимическом анализах крови выявляется некоторое повышение уровня общего холестерина и снижение холестерина липопротеидов высокой плотности (6,3 ммоль/л и 0,8 ммоль/л соответственно). При оценке показателей гемостаза обнаружено повышение агрегации тромбоцитов под влиянием адреналина до 50 (в норме 37-43%) и АДФ до 53 (в норме 40-46%).

Пациент был обследован с применением указанной биомаркерной модели. Отмечены нормальные уровни t-PA (2,76 нг/мл), PAI-1 (2,4 Ед/мл), повышение адипонектина до 18 мкг/мл (что также соответствует норме). Показатели оксида азота и нитрат также были в пределах референтных значений (25,9 мкмоль/л и 43 мкмоль/л соответственно), за исключением уровня нитрита, который был выше нормы (23 мкмоль/л). Отклонения наблюдались и в уровне АДМА, который составил 0,53 мкмоль/л. В совокупности оценка по шкале составила 2 балла, что соответствует «благоприятному» профилю «асимптомного» каротидного атеросклероза.

Учитывая возраст пациента и жалобы, было решено провести ультразвуковое исследование брахиоцефальных артерий, где было выявлено лишь небольшое (до 1,1 мм) утолщение комплекса интима-медиа правой внутренней сонной артерии.

На фоне назначения некоторой седативной терапии и рекомендаций по изменению образа жизни состояние пациента заметно улучшилось, регрессировал цефалгический синдром, нарушения памяти значительно уменьшились.

Таким образом, совместное использование биомаркеров - t-PA, PAI-1, адипонектина, ADMA, нитрата, нитрита и NO для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза позволяет с высокой точностью и достоверностью диагностировать его благоприятное (минимальные признаки выраженности, утолщение комплекса интима-медиа сонных артерий, небольшой процент стеноза) и неблагоприятное течение (выраженный [>50%] стеноз сонных артерий, нестабильная атеросклеротическая бляшка).

Способ диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза, включающий иммуноферментное определение в плазме крови биомаркеров, отличающийся тем, что в плазме крови иммуноферментным методом определяют уровни тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), адипонектина, асимметричного диметиларгинина (ADMA) и биохимическим методом в сыворотке крови уровни нитрата, нитрита и оксида азота (NO), причем каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от его снижения или повышения относительно нормы, а именно при значении уровней t-PA, адипонектина и оксида азота выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при их снижении относительно нормы - 0 баллов, затем рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение «асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более - неблагоприятное.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к получению диагностических препаратов. При осуществлении предлагаемого способа получения сыворотки для диагностики алеутской болезни норок (АБН) получают высокоочищенный вирусный антиген путем гомогенизации органов инфицированных АБН норок с последующим трехкратным замораживанием/размораживанием гомогената, дезинтеграции клеточного гомогената трехкратной ультразвуковой обработкой, осаждением неразрушенных клеток двукратным низкоскоростным центрифугированием, последующим осаждением иммунных комплексов, уплотнением осадка низкоскоростным центрифугированием, экстрагированием иммунных комплексов (ИК) минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратной экстракции на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, осаждением ИК высокоскоростным центрифугированием из объединенных экстрактов при 30000 об/мин в течение 2,5 часов, извлечением ИК из осадка минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратного экстрагирования на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, диссоциацией иммунных комплексов в кислой среде в течение 1 часа на холоду, отделением вируса АБН-Ф от антител высокоскоростным ультрацентрифугированием, растворением осадка в минимальном количестве карбонатного буфера, отделением ферритина от вирусных частиц на колонке с сефарозой 6B в системе карбонатного буфера.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для обнаружения инфекции мочевыводящих путей у пациента. Для этого способ включает получение образца от пациента и обнаружение в указанном образце экспрессии рецептора CD1d на NKT-клетках и BCL6 в тканях мочевого пузыря.
Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для раннего прогнозирования невынашивания беременности. Способ включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала у женщин, проведение обратной транскрипции с получением мДНК, определение экспрессии CASP-3α (отн.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированному тамавидину, и может быть использовано для детекции связанной с биотином субстанции. Получают модифицированный биотин-связывающий белок на основе тамавидина с последовательностью SEQ ID NO: 2, который содержит до 7 мутаций и при этом остаток аспарагина в 115 положении заменен на цистеин.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансфузиологии, и может быть использовано для контроля эффективности облучения донорской крови. Способ включает постановку реакции бласттрансформации клеток крови с митогеном фитогемагглютинином и учет результатов реакции путем определения индекса стимуляции лимфоцитов.

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой пептид, который имеет аминокислотную последовательность, состоящую из смежных аминокислот, полученных из белка WT1, и индуцирует WT1-специфические хелперные Т-клетки связыванием с молекулой МНС класса II.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано в диагностике сенсибилизации организма к формальдегиду. Для этого определяют относительное содержание аутоантител к мембранным антигенам паренхимы легких LuM и к β2-гликопротеину.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для диагностики тяжелой преэклампсии у беременных. Способ включает иммунологическое исследование периферической венозной в 22-37 недель беременности.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и отоларингологии, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом В во втором триместре беременности при анемическом синдроме.

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для выделения и определения холестерина множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) в сыворотке крови человека. Способ заключается в том, что сыворотку крови обрабатывают 20%-ным буферным раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка:ПВП (1,0:0,84), с последующей инкубацией в течение 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием при 9000 об/мин в течение 10 мин при 23°С, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП-35000 и определяют холестерин в преципитате. При уровне содержания холестерина в ммЛНП более 6,6 мг/дл констатируют повышенный уровень ммЛНП у обследуемого индивидуума. Изобретение может быть использовано для установления наличия субклинического атеросклероза у обследуемого индивидуума, оценки тяжести патологического процесса и разработки прогностических критериев сосудистых осложнений. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики ранних стадий наружного генитального эндометриоза путем исследования биологической жидкости. В предлагаемом способе в утренней порции мочи женщин определяют содержание 6-сульфатоксимелатонина и при его концентрации, равной 41 нг/мл и ниже, диагностируют наружный генитальный эндометриоз I-II стадии. Осуществление изобретения позволяет упростить способ диагностики при сохранении высокой точности. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и позволяет прогнозировать угрожающий поздний выкидыш у беременных женщин. Для этого в сроке 5-12 недель гестации определяют относительное количество CD178+ моноцитов гестации в периферической венозной крови. При его значении равном 37,7% или менее в моноцитарном гейте прогнозируют угрожающий поздний выкидыш у женщин с угрозой прерывания беременности ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе. Использование данного способа позволяет выбрать правильную тактику ведения беременности, провести комплекс лечебно-профилактических мероприятий и снизить риск развития осложнений и неблагоприятных исходов беременности в группе женщин с высоким риском невынашивания беременности. 3 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики вероятности развития локального воспаления в миоматозном узле. Для этого определяют средний уровень иммунореактивности СИР образцов сыворотки крови к антигену Spr-06. При значении СИР к антигену SPR-06 в диапазоне от +11% до +20% или от -21% до -30% прогнозируют течение миомы матки с развитием локального воспаления в миоматозном узле. При значении СИР к антигену SPR-06 выше +20% или ниже -30% диагностируют нарушение питания в миоматозном узле, что является показанием к хирургическому лечению. Использование данного способа позволяет прогнозировать на основании данных анализа крови течение миомы матки с развитием клинической симптоматики. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития кровотечений у женщин с миомой матки. Способ включает определение уровня аутоантител к TrM-03 в сыворотке крови. При его значении в сравнительном аспекте со средней популяционной нормой в диапазонах от +11% до +20% или от -21% до -30% прогнозируют небольшую вероятность развития маточных кровотечений. Это является показанием к проведению консервативного лечения с дальнейшим контролем показателей указанных аутоантител. При его значении выше +20% и ниже -30% прогнозируют развитие кровотечений, что является показанием к проведению хирургического лечения. Способ позволяет с высокой точностью прогнозировать течение миомы матки и подбирать наиболее подходящий метод лечения для каждой пациентки. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, аллергологии, кардиологии, функциональной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования развития диастолической дисфункции левого и правого желудочков и своевременной коррекции терапии у больных бронхиальной астмой. Сущность способа: оценивают уровень остеопонтина в плазме крови методом твердофазного иммуноферментного анализа, и при значении остеопонтина 36 нг/мл и более прогнозируют развитие диастолической дисфункции обоих желудочков. Предлагаемый способ обеспечивает своевременную коррекцию терапии у больных бронхиальной астмой, дает возможность своевременной коррекции терапии заболевания. 1 табл., 3 пр.
Представленная группа изобретений касается способа получения концентрата культуры клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для приготовления бруцеллезных антигенов, способа получения концентрата клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для получения сыворотки бруцеллезной диагностической, способа получения единого бруцеллезного антигена РА, РСК и РДСК, способа получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП), способа получения бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способа получения сыворотки бруцеллезной диагностической, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РБП и тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в КР с молоком. Охарактеризованный способ получения концентрата культуры клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для приготовления бруцеллезных антигенов, используемых в диагностических тест-системах, включает получение посевного материала бактериальных клеток и их культивирование в глубинных условиях на жидкой питательной среде с регулированием уровня концентрации растворенного в культуральной среде кислорода на протяжении всего процесса культивирования, нактивацию выросших бактериальных клеток нагреванием с последующим их концентрированием. При этом процесс культивирования бактериальных клеток осуществляют при температуре 36-38°C, в процессе культивирования на этапе накопления бактериальных клеток от концентрации 1,5-2,5 млрд м.к./см3 до концентрации 10 млрд м.к./см3 выдерживают концентрацию растворенного кислорода в культуральной среде в интервале 20-25 мг/л, а свыше 10 млрд м.к./см3 и до достижения бактериальными клетками стационарной фазы роста обеспечивают концентрацию растворенного кислорода в культуральной среде в интервале значений 40-45 мг/л, а концентрирование выросших бактериальных клеток осуществляют посредством осаждения флокулянтом, в качестве которого используют натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), который добавляют в культуральную среду в количестве 0,1-0,15 г по сухому веществу на 1 литр культуральной среды, после чего сливают надосадок с получением концентрата инактивированных бактериальных клеток для последующего приготовления бруцеллезного антигена в РА, РСК, РДСК, антигена РБП; антигена КР с молоком. Изобретения могут быть использованы для диагностики бруцеллеза животных. 9 н. и 29 з.п. ф-лы, 5 пр.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и медицине, в частности может быть использовано для детектирования присутствия и/или количества наркотических или психотропных веществ в биологических жидкостях человека. Предлагаемый способ позволяет детектировать в крови и моче малые количества опиатов, никотина, кокаина, марихуаны, фентанила, метадона, бензодизепинов, барбитуратов и амфетаминов при проведении диагностики ранних стадий употребления. Сущность способа заключается в том, что на дне лунок микропланшета иммобилизуют в виде по крайней мере двух микрообластей растворы конъюгатов бензоилэкгонина, тетрагидроканнабинола, амфетамина, морфина, фентанила, метамфетамина, метилендиокситамфетамина, метадона, бензодиазепина, барбитурата и котинина с белком, при проведении анализа в часть лунок микропланшета вносят мультианалитные калибровочные пробы, содержащие смесь указанных конъюгатов наркотиков с белком в буферном растворе, причем для исследования образцов мочи и сыворотки крови используют одни и те же мультианалитные калибровочные пробы, а в остальные лунки вносят исследуемые образцы мочи и/или крови, во все лунки добавляют раствор в реакционном буфере смеси биотинилированных мышиных моноклональных антител к искомым наркотикам для получения меченных биотином иммунных комплексов на дискретных микрообластях, детектируют излучение фосфоресценции на каждой дискретной области во всех лунках одновременно, строят калибровочные кривые, с которыми сравнивают измеренные значения фосфоресценции. 9 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 7 пр.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и ветеринарии и предназначено для определения жизнеспособности новорожденных телят. Способ включает взятие у телят венозной крови через 24-36 часов после рождения в утренние часы до кормления, определение в сыворотке крови концентрации кортизола и дегидроэпиандростерон-сульфата и расчет индекса жизнеспособности как соотношение концентрации кортизола (нМ/л) к концентрации дегидроэпиандростерон-сульфата (нМ/л). При значениях индекса жизнеспособности более 2,0 у телят устанавливают пониженную жизнеспособность. Заявленное изобретение позволяет быстро и точно определить жизнеспособность телят. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа количественного определения нескольких антиген-специфических иммуноглобулинов в анализируемом образце, включающего стадию анализа связывания серии образцов, содержащих иммуноглобулин известной антигенной реактивности, с несколькими антигенными компонентами или их фрагментами, иммобилизованными на твердой подложке. Группа изобретений также касается способа калибровки устройства, подходящего для анализа связывания нескольких антиген-специфических иммуноглобулинов с несколькими антигенами или их фрагментами, иммобилизованными на твердой подложке; и набора для осуществления указанных способов. Группа изобретений обеспечивает высокий уровень количественной оценки и калибровки. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 1 пр., 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза. Диагностику течения «асимптомного» каротидного атеросклероза проводят путем иммуноферментного определения в плазме крови биомаркеров. При этом в плазме крови иммуноферментным методом определяют уровни тканевого активатора плазминогена, ингибитора активатора плазминогена, адипонектина, асимметричного диметиларгинина, а биохимическим методом уровни нитрата, нитрита и оксида азота. Затем каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от его снижения или повышения относительно нормы. А именно при значении уровней t-PA, адипонектина и оксида азота выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при их снижении относительно нормы - 0 баллов. После чего рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение «асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более - неблагоприятное. Способ обеспечивает высокую точность диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза за счет специфичности и чувствительности метода совместного определения биомаркеров - t-PA, PAI-1, адипонектина, ADMA, нитрата, нитрита и NO. 3 табл., 2 пр.

Наверх