Полимерный адъювант - антиген-носитель для вакцин

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к адъюванту - антигену-носителю для вакцин, содержащему антиген-носитель - полиазолидинаммоний, модифицированный гидрат-ионами галогенов, модифицированный под действием жесткого ультрафиолетового излучения с длиной волны 240-260 нм в кислой среде с pH не выше 3, в количестве 0,001-0,15 мас.%; микрочастицы карбоната кальция с размером 1-5 мкм в количестве 3-5 мас.% и воду. Изобретение обеспечивает создание адъюванта - антиген-носителя для вакцин, обладающего биологической совместимостью и гемосовместимостью, оптимальными физико-механическими свойствами, а также способностью быстро биорезорбироваться in vivo без образования токсичных продуктов и негативных реакций в процессе использования. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к адъювантам, предназначенным для повышения эффективности вакцин и увеличения интервалов между вакцинациями.

Известен адъювант Фрейнда. Полный адъювант Фрейнда содержит BCG или липополисахариды, полученные из микобактерий туберкулеза, сложные жирные кислоты (дериваты ланолина), масла и эмульгаторы (Арлацел А или Твпн-80) (Kathy D. Antibodies. Methods: [book 1] [Text] / Kathy D. - M.: Mir, 1991. - 287 с. ). Адъювант Фрейнда, лишенный фракции микобактерий туберкулеза, называют неполным. Адъювант имеет вид эмульсий вода-в-масле (Е/Н), т.е. эмульсий, в которых непрерывная фаза представляет собой масло или смесь масел, а дисперсная фаза представляет собой водную фазу, которая может включать солюбилизирующие вспомогательные вещества, такие как, например, глицерин или диметилсульфоксид. Действующее начало обычно локализуется в водной фазе, которая часто является солевым забуференным раствором. Эта фаза находится в форме капель, отделенных между собой масляной пленкой. Этот состав позволяет получить более сильные и продолжительные во времени биологические ответы.

Недостатками является то, что он обладает токсичностью и аллергизирующим действием, использование адъюванта Фрейнда способствует индукции гиперчувствительности замедленного типа и развитию аутоиммунных процессов, вызывает и характеризуется комплексом воспалительных изменений с преобладанием пролиферативного компонента, локализующегося главным образом в суставах и периартикулярной ткани. Также эмульсии этого типа Е/Н обычно являются высоковязкими эмульсиями, и следовательно, создают трудности при введении их путем инъекции.

Известен адъювант гидрат окиси алюминия - Al(OH)3. Гидрат окиси алюминия представляет собой минеральный гель, содержащий 6-22 мг Al(OH)3 в 1 мл, с хорошими сорбционными свойствами и представляет собой наиболее часто используемый адъювант (Статья Rajesh K. Gupta и соавт. "Adjuvants, balance between toxicity and adjuvanticity", Vaccine, vol. 11, Issue 3, 1993, pages 993-306").

Недостатком является низкая эффективность, токсичность и риск образования гранулем в зонах введения. Кроме того, известно, что гидрат окиси алюминия эффективно индуцирует только гуморальный, но не клеточный иммунитет и относительно кратковременно образует антитела, титры которых понижаются через 3-4 недели после введения антигена.

Наиболее близкий к предлагаемому изобретению адъювант - антиген-носитель сополимеров 2-метил-5-винилпиридин и N-винилпирролидона (Патент РФ, №2446824). Это водорастворимый полимер с средневязкостной молекулярной массой М=30000÷55000 дальтон, нетоксичный, обладающий иммуностимулирующим действием. Его совместное введение с белком увеличивает выход антителообразующих клеток в 5-15 раз, предположительно активируя В-лимфоциты и Т-хелперы. Добавление к белковому антигену сополимера приводит к увеличению образования специфических антителообразующих клеток.

Недостатком вакцин с применением данного адъюванта - антиген-носителя является то, что они вводятся только перорально, имеют низкую гемосовместимость, возможно применение лишь в вакцинах против гриппа.

Технической задачей и результатом является создание адъюванта - антиген-носителя для вакцин, обладающего биологической совместимостью и гемосовместимостью, оптимальными физико-механическими свойствами, а также способностью быстро биорезорбироваться in vivo без образования токсичных продуктов и негативных реакций в процессе использования.

Технический результат достигается тем, что в качестве адъюванта - антиген-носителя - выбран полиазолидинаммоний, модифицированный гидрат-ионами галогенов, нанесенный на поверхность микрочастиц карбоната кальция с размером частицы от 1 до 5 мкм, модификация которого происходит под действием жесткого ультрафиолетового излучения с длиной волны 240-260 нм в кислой среде с pH не выше 3, разведенный в дистиллированной воде в следующем соотношении компонентов, мас. %:

Полиазолидинаммоний модифицированный
гидрат-ионами галогенов 0,001-0,15
Микрочастицы карбоната кальция с размером 1-5 мкм 3-5
Вода остальное

Адъювант - антиген-носитель вносится в состав вакцины в концентрациях 2 мкг - 25 мг/мл и обеспечивает значительное улучшение гемосовместимости, иммунного ответа, может использоваться в вакцинах против рожи свиней, антирабических и других, также дает возможность перорального, внутримышечного и подкожного введения.

Пример 1. Определение острой токсичности адъюванта - антиген-носителя.

Для определения острой токсичности применяют максимальные дозы исследуемого препарата. Определение токсичности адъюванта - антиген-носителя проводились путем перорального введения исследуемого образца лабораторным мышам в следующем (максимальном) соотношении компонентов, мас. %:

Полиазолидинаммоний модифицированный
гидрат-ионами галогенов 0,15
Микрочастицы карбоната кальция с размером 1-5 мкм 5
Вода остальное

Ежедневно фиксировалось общее состояние мышей. Наблюдение за животными проводили в течение 14 суток, в первый день мыши находились под непрерывным наблюдением. Результаты определения острой токсичности адъюванта - антиген-носителя приведены в таблице 1.

Основные параметры острой токсичности вычислены методом Литчфилда и Уилкоксона.

Исходя из полученных данных адъювант - антиген-носитель - имеет следующие параметры:

LD50 = не выявлено.

LD0 = 25 мг/кг м.т. (максимальное содержание д.в. адъюванта - антиген-носителя)

Пример 2. Исследование гематологических показателей крови при пероральном, внутримышечном и подкожном способах введения адъюванта антиген-носителя.

Эксперимент проводился на крысах 6 месячного возраста, подобранных по принципу аналогов и содержащихся в клетках по 5 голов, получающих одинаковый рацион. Животным вводили адъювант - антиген-носитель - в максимально допустимой дозе - 25 мг/кг м.т., как в примере исследования острой токсичности. Кровь получали путем декапитации в пробирку со стабилизатором ЭДТА на следующий день после введения адъюванта - антиген-носителя. Определение гематологических показателей проводилось на автоматическом ветеринарном гематологическом анализаторе ВС - 2800 VET фирмы МИНДРЕИ. Общее состояние животных определяли путем осмотра. В таблице 2 представлены результаты эксперимента.

Полученный цифровой материал исследований подвергнут биометрической обработке по методике Е.К. Меркурьевой (1970).

Полученные показатели периферической крови свидетельствуют о том, что независимо от способа введения адъюванта - антиген-носителя, гематологические показатели соответствовали физиологической норме для данного вида животного. Данные согласуются с показателями крови крыс, полученные учеными И.Н. Кравченко, Хохловой О.Н., (2008), которые определяли гематологические показатели свободных от патогенной флоры крыс CD (spraguedawley) и мышей CD 1 в норме. Кроме того, на месте введения не развивается воспалительный или аллергический процесс.

В литературных источниках указано, что адъювант - антиген-носитель не мутагенен по результатам тестов AMES, не тератогенен (не вызывает пороков и уродств), NOEL=25 мг/кг.

Таким образом, полученные результаты по определению острой токсичности адъюванта - антиген-носителя - и гематологические показатели свидетельствуют о безопасности применения для организма животных, что позволяет его использовать в качестве адъюванта - антиген-носителя для вакцин с различными антигенными субстанциями.

Адъювант - антиген-носитель для вакцин, содержащий антиген-носитель - полиазолидинаммоний, модифицированный гидрат-ионами галогенов, модифицированный под действием жесткого ультрафиолетового излучения с длиной волны 240-260 нм в кислой среде с pH не выше 3, микрочастицы карбоната кальция с размером 1-5 мкм, а также воду в следующем соотношении компонентов, мас.%:

Полиазолидинаммоний, модифицированный гидрат-ионами галогенов 0,001-0,15
Микрочастицы карбоната кальция с размером 1-5 мкм 3-5
Вода остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для экстренной вакцинации животных против ящура. Способ по изобретению предусматривает обеспечение вакциной, при этом указанная вакцина содержит антиген ящура, составленный в виде эмульсии вода-в-масле, замораживание вакцины, где указанную вакцину замораживают, не используя способ моментального замораживания, и хранение указанной замороженной вакцины до тех пор, пока возникнет необходимость в экстренной вакцинации.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и пульмонологии, и касается активации факторов противовирусной защиты при хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).

Изобретение относится к области биотехнологии, генной и белковой инженерии. Предложены рекомбинантный полипептид, имеющий специфические иммуногенные свойства изоформ Oct-1, содержащий N-концевой участок Oct-1A человека, линкер и 6 остатков гистидина; а также способ получения поликлональных антител против изоформ Oct-1 с использованием такого полипептида.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК, созданной при помощи новых праймеров CTTCCATATGGAACGAAGGCGTTTGTG и TGTGGATCCAGCTAGTTAGGCATGAAA. Указанная рекомбинантная плазмидная ДНК используется для получения рекомбинантного белка PRAME-F, состоящего из пептида MGSSHHHHHHSSGLVPRGSH слитого с последовательностью природного белка PRAME, путём её экспрессии в бактериальных клетках.

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа производства препарата «Мобилан (M-VM3)». Изобретение оптимизирует стадии производства, повышая его рентабельность, делая оптимальным соотношение время производства/количество полученного препарата/количество средств, затраченных на производство.

Группа изобретений основана на открытие того, что путь передачи сигнала Notch связан со злокачественной опухолью. Более конкретно, группа изобретений относится к композициям, включающим ANTP/DN-MAML, а также способам лечения злокачественной опухоли с помощью данных композиций.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарии и медицине. Описана вакцина, содержащая в качестве антигена хитин и его производные в концентрации 0,01-5% в мл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана кодирующая нуклеотидная последовательность, прежде всего матричная РНК (мРНК), которая содержит или кодирует гистоновую структуру типа «стебель-петля» и поли(A)-последовательность или сигнал полиаденилирования.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены применение четырех РНК, кодирующих четыре различных антигена для получения набора вакцин для лечения рака предстательной железы, и набор, включающий вакцины, каждая из которых содержит по меньшей мере одну РНК.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается лечения ожирения и сопутствующих метаболических расстройств. Для этого вводят активированную - потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору человека в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора, полученного в процессе последовательного многократного разведения матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору человека в водном или водно-спиртовом растворителе и промежуточного внешнего механического воздействия - вертикального встряхивания.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой молекулу диантитела. Данная молекула диантитела способна связываться с двумя различными эпитопами на двух различных клетках, где первый эпитоп экспрессируется на типе клеток, отличающемся от типа клеток, на котором экспрессируется второй эпитоп, так что диантитело может сближать эти две клетки, где указанное диантитело содержит первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, ковалентно связанные друг с другом. Причем указанная первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу первый домен, содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи первого иммуноглобулина (VL1), специфичную к первому эпитопу, второй домен, содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина (VH2), специфичную ко второму эпитопу, и содержащий цистеин домен, причем указанные первый домен и второй домен ковалентно связаны посредством пептидного линкера из 0-9 аминокислотных остатков так, чтобы указанные первый домен и второй домен не ассоциировали с образованием участка связывания эпитопа. Указанная вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу третий домен, содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи второго иммуноглобулина (VL2), четвертый домен, содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи первого иммуноглобулина (VH1), содержащий цистеин домен, причем указанные третий домен и четвертый домен ковалентно связаны посредством пептидного линкера из 0-9 аминокислотных остатков так, чтобы указанные третий домен и четвертый домен не ассоциировали с образованием участка связывания эпитопа. При этом первый домен и четвертый домен ассоциируют с образованием первого участка связывания (VL1)(VH1), который связывает первый эпитоп, а второй домен и третий домен ассоциируют с образованием второго участка связывания (VL2)(VH2), который связывает второй эпитоп. Цистеины содержащих цистеин доменах указанных первой и второй полипептидных цепей связаны вместе дисульфидной связью; и где указанная первая или вторая полипептидная цепь дополнительно содержит или разделитель в виде Е-спирали (SEQ ID NO: 299), или разделитель в виде K-спирали (SEQ ID NO: 300), которые способствуют образованию гетеродимера и располжены с С-конца по отношению к указанному второму домену или указанному четвертому домену. Изобретение позволяет получать молекулы диантител, эффективные для лечения различных заболеваний и нарушений, включающих иммунологические нарушения и злокачественные опухоли. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 49 ил., 17 табл., 19 пр.
Наверх