Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе



Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе
Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе
Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе
Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2593340:

Малышко Вадим Владимирович (RU)
Басов Александр Александрович (RU)
Быков Михаил Ильич (RU)
Попов Константин Андреевич (RU)
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛ, в усл. ед. площади), далее вычисляют интегральный показатель литогенности желчи (ИПЛi) по формуле:

где Ki и Kk - коэффициент разведения - кратность разведения пробы желчи обследуемого и пробы желчи, принятой за норму, с ИПЛ не более 1,1 единиц литогенности - соответственно при определении АОА, и чем выше значение ИПЛi, тем более высокая степень литогенности желчи с риском развития холелитиаза. Способ позволяет оптимизировать выбор метода декомпрессии желчевыводящих путей, направленных на предупреждение ранней инкрустации эндопротезов, что позволяет повысить эффективность лечебных мероприятий. 6 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и позволяет оценивать выраженность метаболических нарушений в желчи, на основании которых можно прогнозировать риск литогенеза в желчевыводящих путях и, в том числе, осуществлять выбор эндобилиарных стентов с соответствующими физико-химическими характеристиками, что ведет к снижению частоты инкрустации и обструкции билиарных эндопротезов и увеличивает сроки функционирования стентов у пациентов с механической желтухой различной этиологии с риском развития холелитиаза.

Проблема механической желтухи остается одной из самых актуальных в современной хирургической гастроэнтерологии [Григорьева И.Н., Никитин Ю.П. Распространенность желчнокаменной болезни в разных регионах // Клин. медицина. - 2007. - Т. 85, №9. - С. 27-29]. Число больных, поступающих в хирургические стационары с заболеваниями органов билиопанкреатодуоденальной зоны, осложненные обструкцией желчевыводящих путей и механической желтухой, на протяжении многих лет не снижается [Стойко Ю.М., Левчук А.Л., Бардаков В.Г., Ветшев П.С. Возможности современных методов диагностики и обоснование лечебной тактики при механической желтухе // Вестник хирургической гастроэнтерологии. - 2008. - №2. - С. 24-32]. Механический фактор закупорки желчных протоков чаще всего имеет место при осложненной желчнокаменной болезни, опухолях билиопанкреатодуоденальной зоны и различных формах панкреатита. Значительно реже этиологическими факторами выступают ятрогенные повреждения магистральных структур протоковой системы, развивающиеся в результате операционной травмы, врожденные аномалии развития желчных протоков, паразитарные болезни печени и желчных протоков, а также «низкие» язвы ДПК [Пауткин Ю.Ф., Климов А.Е. Механическая непроходимость желчных путей (механическая желтуха). - М.: Профиль. 2 С., 2010. - 224 с.].

Продолжают изучать основные причины возникновения механической желтухи: распространенность желчнокаменной болезни на основе прогностических исследований заболеваний гепатобилиарной системы [Хохлачева Н.А., Горбунов А.Ю., Вахрушев Я.М. Изучение распространенности желчнокаменной болезни на основе прогностических исследований заболеваний гепатобилиарной системы // Терапевт, арх. - 2012. - №2. - С. 45-49; Paumgartner G. Medical treatment of cholestatic liver diseases: From pathobiology to pharmacological targets // Gastroenterol. - 2006. - №12 (28). - P. 4445-4451], анализа онкологической заболеваемости и летальности органов билиопанкреатодуоденальной зоны в структуре онкопатологии [Казанцева М.В., Тесленко Л.Г., Цокур И.В., Бондарева И.С. Злокачественные новообразования в Краснодарском крае (2009-2013 годы). Состояние онкологической помощи населению. - Краснодар: Изд-во «Флер», 2014. - 280 с.].

При этом отмечается устойчивая тенденция к росту процента больных пожилого и старческого возраста, поступающих в хирургические стационары с клиникой механической желтухи, возникающей на фоне протоковой обструкции, число которых составляет по разным данным 49-68% от всех пациентов с данной патологией [Быстров С.А., Жуков Б.Н., Бизярин В.О. Миниинвазивные операции в лечении желчнокаменной болезни у пациентов с повышенным операционным риском // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. - 2010. - №7. - С. 55-59]. Общее состояние этих больных усугубляется имеющейся общесоматической патологией, что в значительной степени влияет на результаты лечения, увеличивая количество неблагоприятных исходов в несколько раз [Pring С.М., Kelding-Millar L.S. Expectant treatment or cholecustectomy after endoscopic retrograde cholangiopancreatography for choledocholithiasis in patients over 80 years old // Surg. Endoscop. - 2005. - Vol. 19 (3). - P. 337-360].

Современные принципы лечения пациентов с механической желтухой предполагает применение одного из варианта малоинвазивной декомпрессии желчных протоков, в том числе включая применение эндобилиарных стентов [Гусев А.В., Балагуров Б.А., Боровков И.Н., Коньков О.И., Мартинш Ч.Т., Покровский Е.Ж., Раскин А.В., Станкевич A.M. Дренирование и эндопротезирование желчных протоков при механической желтухе // Вестник новых медицинских технологий. - 2008. - Т. 15, №4. - С. 97-98.]. При длительном функционировании стента происходит его постепенная обтурация, что приводит к рецидиву механической желтухи, развитию холангита и вынуждает вновь госпитализировать больных для замены билиарного эндопротеза [Дюжева Т.Г., Савицкая Е.Е., Котовский А.Е., Батин М.А. Биодеградируемые материалы и методы тканевой инженерии в хирургии желчных протоков // Анналы хир. гепатол. - 2012. - №1. - С. 94-99, Котовский А.Е., Глебов К.Г. Эндоскопическое транспапиллярное стентирование желчных протоков // Анналы хир. гепатол. - 2008. - №1. - С. 66-71]. Подобная ситуация характерна для внутренних билиарных стентов независимо от способа их установки. В научной литературе широко обсуждается вопрос по увеличению эффективности желчеоттока через различающиеся по материалам изготовления, физико-химическим характеристикам, диаметрам и конфигурациям стенты [Куликовский В.Ф., Солошенко А.В., Ярош А.Л., Колпаков А.Я., Карпачев А.А., Балакирева О.В., Битенская Е.П., Власюк Ю.Ю. Билиарный стент с алмазоподобным углеродным покрытием // Эндоскопическая хирургия. - 2013. - №3. - С. 16-20]. Реакция организма на имплантат определяется его реактивностью и поверхностными свойствами последнего: структурой, морфологией и химическим составом [Хенч Д., Джонс Д. Биоматериалы, искусственные органы и инжиниринг тканей (под ред. А.А. Лушниковой). Серия «Мир биологии и медицины». - М.: Техносфера, 2007. - 304 с.], в связи с чем представляет интерес разработка биохимического алгоритма для выбора медицинских изделий с измененными физико-химическими параметрами в зависимости от функционального состояния организма на местном уровне, например при изменениях метаболических показателей желчи у больных с механической желтухой. Следует указать, что средний срок функционирования билиарного стента уменьшается при повторном протезировании [Шевченко, Ю.Л., Ветшев, П.С., Стойко, Ю.М. и др. Приоритетные направления в лечении больных с механической желтухой // Анналы хирургической гепатологии. - 2011. - №3. - С. 9-15], что обусловливает необходимость разработки способов лабораторного анализа для определения наиболее оптимальных по перечисленным выше характеристикам эндобилиарных стентов у пациентов с впервые выявленной механической желтухой.

Выпадение в осадок веществ желчи связано с дестабилизацией физико-химического состояния желчи. При этом в наиболее массовой разновидности желчных камней содержание холестерина превышает 50%. На долю таких желчных камней приходится до 90% от их общего количества [Михин И.В., Голуб В.А. Желчнокаменная болезнь. Острый холецистит. Учебное пособие. - Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2011. - 86 с.], в связи с чем изучение именно показателей липидного обмена является ведущим при оценке риска возникновения холелитиаза.

Известно, что усиление окисления компонентов желчи является интегративным и одним из наиболее ранних местных факторов формирования желчных камней. При самоокислении желчи накапливаются продукты перекисной модификации липидов, что сопровождается агрегацией и агломерацией везикул желчи с последующей кристаллизацией или осаждением макромолекулярных компонентов желчи [Швецова М.М., Барботько А.А. и соавт. Перекисное окисление липидов желчи больных калькулезным и бескаменным холециститом // Терапевтический архив. - 1998 - №5. - С. 33-35; Седов А.П., Парфенов И.П. и соавт. Оценка изменений слизистой оболочки желчных протоков и состава желчи при остром холангите // Анналы хирургической гепатологии. - 2009. - №2. - С. 22-28]. Поэтому химический состав камня определяется, прежде всего, взаимодействием компонентов желчи с продуктами перекисного окисления липидов. В связи с этим физико-химические характеристики желчи целесообразно учитывать при диагностике ранних стадий холелитиаза. Особенно актуально определение прооксидантно-антиоксидантного баланса желчи, позволяющего оценивать как риск развития самоокисления желчи при снижении ее антиокислительной активности, так и вероятность перекисной модификации липидных компонентов, например при усиленной генерации свободных радикалов в условиях развивающегося свободнорадикального патологического процесса (воспаление, опухоль, диспепсия и другие [Cruz A., Padillo F.J., Tunez I. Melatonin protects against renal oxidative stress after obstructive jaundice in rats // Eur. J. Pharmacol. - 2001. - №425 (2). - P. 135-139; Терехина H.A., Заривчатский М.Ф., Владимиров A.A., Хлебников В.В. Показатели антиоксидантной защиты при остром и хроническом холецистите // Клин. лаб. диагностика. - 2008. - №4. - С. 33-41]).

Известен способ определения степени литогенности пузырной желчи [Andrews Е., Schoenheimer R., Hrdina Е. Etiology of gallstones, chemical factors and the role of the gallbladder // Arch. Surg. - 1932. - Vol. 25. - P. 796-805], основанный на расчете холатохолестеринового коэффициента по формуле:

ХХК=ЖК/ХС,

где ХХК - холатохолестериновый коэффициент;

ЖК - суммарная концентрация желчных кислот, ммоль/л;

ХС - концентрация холестерина желчи, ммоль/л.

Считается, что концентрации холестерина и желчных кислот являются определяющими для коллоидной устойчивости желчи. При дисбалансе их соотношения, а именно, снижении концентрации ЖК, повышении ХС, т.е. при снижении ХХК, желчь становится пересыщенной, литогенной, ХС постепенно выпадает в осадок. По данным разных авторов желчь становится литогенной при снижении ХХК до 10 и ниже [Маркидонова А.А., Белобородова Э.И., Бурковская В.А. Состояние желчевыводящей системы и литогенность желчи у больных воспалительными заболеваниями кишечника // Бюллетень сибирской медицины. - 2013. - Т. 12. - №6. - С. 112-119].

Указанный способ имеет следующие недостатки:

а) не учитывают, кроме желчных кислот и холестерина, содержание других липидов (лецитина, фосфатидилэтаноламина, лизолецитина, фосфатидилсерина, составляющих до 22% липидов желчи [Berry W., Reichen J. Bile acid metabolism: its relation to clinical disease // Seminars Liver Dis. - 1983. - Vol. 3. - P. 330-340; Romański K. The role and mechanism of action of bile acids in the digestive system - bile acids in the gut // Adv. Clin. Exp. Med. - 2008. - Vol. 17. - P. 83-89]), обладающих способностью стабилизировать холестерин в составе желчи [Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: в 2 т. Т. 2. Пер. с англ.: - М.: Мир, 1993. - С. 288-289], что важно при оценке литогенности желчи на начальных этапах желчнокаменной болезни, в том числе при установке эндобилиарных протезов;

б) одной из составляющих этого индекса литогенности является показатель желчных кислот, определение которых достаточно трудоемкое [Рубенс Ю.И., Юрика Э.В., Селезнев Ю.В. Индексы литогенности желчи: методы определения, клиническая доступность, информативность // Клин. медицина. - 1992. - Т. 70, №7-8. - С. 39-41], что снижает пропускную способность данного способа в клинической практике;

в) при расчете этого индекса литогенности не принимают во внимание участие инициирующих факторов камнеобразования, например, при воспалительных процессах в желчевыводящих протоках, приводящих к развитию самоокисления желчи и снижению ее антиоксидантного потенциала на фоне интенсификации процессов свободнорадикального окисления [Виноградова И.С., Мандров С.И., Жданова Л.А., Акайзина А.Э., Акайзин Э.С., Миленина И.В., Томилова И.К. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность у детей с начальной стадией желчнокаменной болезни // Медицина и образование Сибири. - 2013. - №6.], что играет существенную роль в патогенезе начальных этапов желчнокаменной болезни и может вести к получению ложноотрицательных результатов при диагностике.

Способ неэффективен из-за указанных недостатков, поэтому остается актуальной задачей разработка новых способов определения литогенности желчи, сочетающих все вышеизложенные факторы и обладающих высокой воспроизводимостью полученных.

За ближайший аналог принят способ определения литогенности желчи [Thomas P.J., Hofmann A.F. Letter: a simple calculation of the lithogenic index og bile: expressing biliary lipid composition on rectangular coordinates // Gastroenterology. - 1973. - Vol. 65, №4. - P. 698-700], основанный на расчете индекса литогенности Томаса-Хофмана (Tomas-Hofmann). Этот индекс учитывает все главные билиарные липиды: фосфолипиды, желчные кислоты, холестерин и учитывает молярную долю последнего в рассматриваемой системе липидов желчи. Таким образом, он отражает отношение фактического насыщения желчи холестерином к максимально возможному, то есть рассчитывается по значению максимальной молярной доли холестерина на границе его максимальной растворимости, который может быть растворен в исследуемом образце. Для нахождения значения максимального молярного процента холестерина на границе его максимальной растворимости используют формулы [Рубенс Ю.И., Юрика Э.В., Селезнев Ю.В. Индексы литогенности желчи: методы определения, клиническая доступность, информативность // Клин. медицина. - 1992. - Т. 70, №7-8. - С.39-41]:

y1=4,87+39,45х-86,9х2+53,7х3 (для x≤0,320)

y2=117,4+755,0х+1,756х2-1,377х3 (для x>0,320), где

y - теоретический максимальный молярный процент холестерина, который может быть растворен в данном образце;

x - соотношение, в знаменателе которого находится показатель лецитина данного образца (в ммоль/л), в числителе - сумма показателей лецитина и суммы желчных кислот данного образца (в ммоль/л).

Индекс литогенности Томаса-Хофмана определяют как соотношение молярного процента холестерина исследуемого образца и теоретически найденного максимального молярного процента холестерина (y1 или y2) для этого образца. Если значение индекса литогенности Томаса-Хофмана более 1, то желчь литогенна, если менее 1 - не литогенна.

Указанный способ имеет следующие недостатки:

а) представленный индекс литогенности сложен в расчетах и не отличается, по мнению ряда специалистов, особой информативностью [Рубенс Ю.И., Юрика Э.В., Селезнев Ю.В. Индексы литогенности желчи: методы определения, клиническая доступность, информативность // Клин, медицина. - 1992. - Т. 70, №7-8. - С.39-41], что может сопровождаться получением ложноотрицательных результатов у больных на начальных стадиях заболевания;

б) при расчете этого индекса литогенности не учитывает нарушение прооксидантно-антиоксидантного баланса желчи, так как известно, что перекисное окисление желчи способствует накоплению продуктов перекисной модификации в пузырной желчи, например при остром или хроническом воспалении, и является интегративным и наиболее ранним местным фактором формирования желчных камней [Мараховский Ю.X. Желчнокаменная болезнь: современное состояние проблемы // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2003. - №1. - С.81-91; Седов А.П., Парфенов И.П., Ярош А.Л., Сергеев О.С., Солошенко А.В., Карпачев А.А., Судаков М.В., Балакирева О.В. Оценка изменений слизистой оболочки желчных протоков и состава желчи при остром холангите // Анналы хирургической гепатологии. - 2009. - Т. 14, №2. - С. 22-27], что необходимо учитывать при диагностике желчнокаменной болезни на ранних стадиях заболевания;

в) индекс литогенности не учитывает избыточный супрамицеллярный холестерин, который может содержаться в желчи в физиологических условиях в составе холестерин/лецитиновых-везикул [Рубенс Ю.И., Юрика Э.В., Селезнев Ю.В. Индексы литогенности желчи: методы определения, клиническая доступность, информативность // Клин, медицина. - 1992. - Т. 70, №7-8. - С. 39-41], что может приводить к получению ложноположительных результатов при использовании этого индекса для оценки литогенности желчи у здоровых лиц.

Способ отличается низкой диагностической эффективностью из-за указанных недостатков, так как недостоверен.

Задача - повышение эффективности диагностических мероприятий, выявляющих дисхолию и позволяющих определять риск литогенеза в желчевыводящих путях, путем комплексной оценки метаболических нарушений на местном уровне по показателям липидного обмена и прооксидантно-антиоксидантного баланса в желчи, что позволит, в том числе, осуществлять оптимальный выбор билиарных эндопротезов и своевременно осуществлять полноценную и при необходимости длительную коррекцию холестаза.

Сущностью изобретения является способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л) и показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса: суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛ, в усл. ед. площади), дополнительно соотносят значения АОА с показателями стандартного аскорбинового эквивалента (AOAvitC), значения МВХЛ - с показателями максимума вспышки стандартного раствора люминола (МВХЛL), значения ПХЛ - с показателями площади стандартного раствора люминола (ПХЛL), далее вычисляют интегральный показатель литогенности желчи (ИПЛi) по формуле:

где Ki и Kk - коэффициент разведения - кратность разведения пробы желчи обследуемого и пробы желчи принятой за норму соответственно при определении АОА, и чем выше значение ИПЛi, тем более высокая степень литогенности желчи с риском развития холелитиаза.

Техническим результатом изобретения является:

1) возможность с помощью комплексной оценки интегрально определять показатель литогенности желчи, что важно для прогнозирования риска камнеобразования в желчевыводящих путях, в том числе на ранних этапах развития желчнокаменной болезни и при билиарном эндопротезировании;

2) составляющими индекса литогенности являются значения суммарной антиокислительной активности и интенсивности хемилюминесценции желчи, так как при формировании холелитиаза, прежде всего при воспалительных заболеваниях, определенную значимость имеют активация свободнорадикального окисления и снижение антиоксидантных факторов в желчи, что важно учитывать при лечении таких больных;

3) способ включает определение соотношения холестерина и общих липидов, что увеличивает его чувствительность при диагностике и позволяет выявлять патологические изменения в желчи, сопровождающиеся нарушением ее литогенности на ранних стадиях заболевания или при дисхолии, наблюдающейся при установке эндобилиарных протезов;

4) используемые для определения интегрального показателя литогенности желчи методики являются доступными, информативными, легко воспроизводимыми и не требуют дорогостоящего оборудования и специальной подготовки персонала.

Способ осуществляют следующим образом.

Определение содержания холестерина желчи проводят с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб, см. приложение 1). Для этого смешивают 2,0 мл рабочего реагента (содержащего холестеролэстеразу 400 U/л, холестеролоксидазу 250 U/л, пероксидазу 500 U/л и хромогены в фосфатном буферном растворе 100 ммоль/л с 20 ммоль/л фенолом) с 20 мкл супернатанта предварительно центрифугированной желчи в течение 30 минут при 3000 об/мин (опытная проба), 20 мкл стандартного раствора холестерина 5,17 ммоль/л (стандарт) и 20 мкл дистиллированной воды (контрольная проба). Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 10 минут при температуре 20-25°C, затем измеряют оптическую плотность опытной пробы и стандарта против контрольного раствора на спектрофотометре в кюветах с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 500 нм. Расчет концентрации холестерина проводят по формуле (см. приложение 2):

ХС=(ЕОП/Ек)·5,17, где

ХС - концентрация холестерина желчи, ммоль/л,

ЕОП - оптическая плотность опытной пробы, в единицах оптической плотности;

Ек - оптическая плотность калибровочной пробы (стандарта), в единицах оптической плотности;

5,17 - концентрация холестерина в калибраторе, в ммоль/л.

Определение общих липидов желчи проводят с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Для этого в трех пробирках смешивают 1,5 мл концентрированной серной кислоты с 20 мкл супернатанта предварительно центрифугированной (30 минут при 3000 об/мин) желчи (опытная проба), 20 мкл стандартного раствора общих липидов 8 г/л (стандарт) и 20 мкл дистиллированной воды (контрольная проба). Полученные растворы перемешивают и нагревают 15 минут на кипящей водяной бане. После охлаждения проточной водой смешивают 100 мкл полученного гидролизата с 1,5 мл 10 ммоль/л раствором ванилина в 11,5 ммоль/л ортофосфорной кислоте. Реакционную смесь инкубируют 50 минут при температуре 15-25°C. Не позднее 60 минут инкубации измеряют оптическую плотность опытной пробы и стандарта против контроля на спектрофотометре, в кювете с длиной оптического пути 10 мм, при длине волны 540 нм. Расчет концентрации общих липидов проводят по формуле (см. приложение 3):

ОЛ=8·(А12), где

ОЛ - концентрация общих липидов, г/л;

A1 - оптическая плотность опытной пробы, в единицах оптической плотности;

А2 - оптическая плотность стандарта, в единицах оптической плотности;

8 - стандартный коэффициент, в г/л.

Для определения антиокислительной активности исследуемую желчь растворяют в специальном элюенте (2,2 мМ раствор ортофосфорной кислоты) в соотношении 1:100. Кратность разведения для каждой пробы желчи в последующем учтена при определении интегрального показателя литогенности. Суммарную антиокислительную активность определяют по методу [Пахомов В.П., Яшин Я.И., Яшин А.Я., Багирова В.Л., Арзамасцев А.П., Кукес В.Г., Ших Е.В. Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных веществ. Патент на изобретение №2238554] в модификации [Басов А.А., Федосов С.Р., Канус И.С., Еремина Т.В., Пшидаток Д.В., Малышко В.В. Современные способы стандартизации антиоксидантных лекарственных средств и биологически активных добавок // Современные проблемы науки и образования. - 2006. - №4, прил. 1. - С. 149] и выражают в мг/л по отношению к антиокислительной активности аскорбиновой кислоты. Окисление анализируемого и стандартного вещества проводят электрохимически путем непосредственной поочередной подачи подготовленных проб в термостатируемую электрохимическую ячейку амперометрического детектора с получением сигналов в виде соответствующих импульсов электрического тока, усиление сигналов, регистрацию в виде дифференциальных выходных кривых и расчет площадей полученных пиков анализируемого (S) и стандартного (Sст) веществ. Полученные результаты выражают в виде положительных значений в нА·с. Антиокислительную активность образцов определяют по суммарному содержанию в них природных флавоноидов: катехинов (вещества группы флавана); кверцетина, рутина, дигидрокверцетина (вещества группы флавона); а также витаминов группы А, Е, С и других соединений, способных связывать свободные радикалы. В качестве стандарта используют раствор аскорбиновой кислоты в концентрациях 0,5-8,0 мг/л.

Люминол-зависимую H2O2-индуцированную хемилюминесценцию желчи измеряют на хемилюминотестере ЛТ-1 производства НПО «Люмин» (Ростов-на-Дону) по авторской методике [Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Система лабораторной диагностики окислительного стресса. Патент на полезную модель №54787. - Заявл. 19.01.2006; опубл. 27.07.2006 - Бюл. №21. - 2 с.]. В кювету вносят 2,7 мл 50 мкМ стандартного раствора люминола в 0,1 М трис-HCl буфере (рН=6,8). Затем добавляют 300 мкл исследуемой желчи в кювету. Термостатируют кювету с реакционной системой 500 секунд в сухом термостате (t=37°C). После этого кювету помещают в люминотестер ЛТ-1 и реакцию радикального окисления люминола запускают впрыскиванием с помощью шприца-дозатора через инжектор 0,5 мл 3% H2O2. Интенсивность вспышки хемилюминесценции регистрируют в условных единицах (усл. ед.) хемилюминесценции в виде двух параметров: максимума вспышки хемилюминесценции и площади хемилюминесценции. Изучение динамики процесса хемилюминесценции [Федосов С.Р., Павлюченко И.И., Басов А.А. Способ повышения информативности прибора «Хемилюминотестер LT-1» // Современные проблемы науки и образования. - 2006. - №4, прил. 1. - С. 27-28] производят с помощью собственного аппаратно-программного комплекса с программным обеспечением [Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Басов А.А. Программа регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-1. Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2006611562. - Заявл. №2006610783; зарег. 10.05.2006.], позволяющим оцифровывать аналоговый сигнал с выхода хемилюминотестера ЛТ-1. Определяют следующие показатели хемилюминесценции: максимум вспышки хемилюминесценции в сравнении с эталоном (рабочий раствор люминола) и площади хемилюминесценции за 25 секунд в сравнении с эталоном (рабочий раствор люминола). В обоих случаях эталоном служит реакционная смесь без исследуемого субстрата. Интенсивность реакций свободнорадикального окисления, определяемая с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции по максимуму и площади хемилюминесценции, позволяет определить способность антиоксидантных компонентов желчи перехватывать свободные радикалы, при этом можно оценить как прямой кратковременного антирадикальный эффект желчи - по максимуму вспышки хемилюминесценции, так и ее пролонгированный антирадикальный эффект - по площади хемилюминесценции.

Обоснование полученных результатов

Определение литогенности желчи остается актуальной задачей в хирургической и терапевтической гастроэнтерологии. В ряде исследований показано, что процесс формирования желчных камней проходит три стадии: насыщение, кристаллизация и рост [Иванченкова Р.А. Хронические заболевания желчевыводящих путей. - М.: Атмосфера, 2006. - 415 с.], среди которых наиболее важной является стадия перенасыщения желчи холестерином, наступающая тогда, когда весь холестерин не может быть солюбилизирован везикулами [Вахрушев Я.М., Хохлачева Н.А. Возможности использования кристаллооптических свойств желчи в ранней диагностике желчнокаменной болезни // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2011. - №4. - С. 26-30], в связи с чем определение соотношения холестерина и общих липидов желчи является одним из важных диагностических критериев при оценки литогенности желчи.

При этом уже на этапах формирования билиарного сладжа в форме взвеси гиперэхогенных частиц и эхонеоднородной желчи со сгустками происходит нарушение сбалансированности в системе свободнорадикального окисления, проявляющееся в повышении антиоксидантной активности, как компенсаторной реакции на развивающийся окислительный стресс. В дальнейшем при формировании замазкообразной желчи накапливаются продукты липопероксидации, и снижается антиоксидантная активность желчи, что ведет к агрегации и агломерации везикул желчи с продуктами липопероксидации и последующей кристаллизации и осаждению макромолекулярных компонентов желчи [Виноградова И.С., Мандров С.И., Жданова Л.А., Акайзина А.Э., Акайзин Э.С., Миленина И.В., Томилова И.К. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность у детей с начальной стадией желчнокаменной болезни // Медицина и образование Сибири. - 2013. - №6], в связи с чем оценка прооксидантно-антиоксидантного баланса желчи также является одним из основных критериев ее литогенности.

Особенность предлагаемого способа заключается в совместном определении, как соотношения холестерина и общих липидов желчи, что позволяет своевременно выявлять стадию перенасыщения желчи холестерином - его способность участвовать в холелитиазе, так и оценке прооксидантно-антиоксидантного баланса желчи, то есть ее способности к самоокислению и устойчивости к внешним воздействиям, связанным с интенсификацией процессов свободнорадикального окисления, что позволяет с помощью полученных результатов изучать литогенность желчи и оценивать риск камнеобразования в желчевыводящих путях, в том числе и при эндобилиарном протезировании. Таким образом, способ позволяет выявлять метаболические нарушения в желчи, связанные с процессами дисхолии, интенсификацией свободнорадикального окисления и снижением антиоксидантной активности, что особенно актуально для диагностики холелитиаза на ранних стадиях и оценки риска камнеобразования при эндобилиарном стентировании.

В исследованиях, проведенных при поддержке государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации (от 28.01.2015 г. ч. 1, раздел 1) «Осуществление прикладных научных исследований, в том числе проведение доклинических исследований лекарственных средств и клинических исследований лекарственных препаратов», установлено, что в группе обследуемых (n=18), не имеющих данных за холедохолитиаз, доброкачественные и злокачественные новообразования органов билиопанкреатодуоденальной зоны, интегральный показатель литогенности желчи составил 1,1±0,2 единиц литогенности (ХСk=3,0±0,2 ммоль/л; ОЛk=8,1±0,8 г/л; АОАk=741,6±78,4 нА·с, AOAvitCk=1198,4 нА·с; МВХЛk=1,9±0,3 условных единиц (усл. ед.), МВХЛLk=1,4 усл. ед.; ПХЛk=171,8±21,7 условных единиц площади (усл. ед. пл.), ПХЛLk=72,7 усл. ед. пл.; Kk=100,0).

При этом у пациентов (n=21) с холедохолитиазом без клинических и лабораторных проявлений холангита интегральный показатель литогенности желчи был повышен в 1,4 раза; у пациентов (n=13) с холедохолитиазом, осложненным острым холангитом, интегральный показатель литогенности желчи был повышен в 12,6 раза; у пациентов (n=10) со злокачественными новообразованиями органов билиопанкреатодуоденальной зоны, осложненными острым холангитом, интегральный показатель литогенности желчи был повышен в 65,1 раза.

Пример №1.

В хирургическое отделение №1 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора С.В. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 12 января 2015 года поступила пациентка К., возраст 88 лет. Диагноз: «ЖКБ. Хронический калькулезный холецистит. Холедохолитиаз. Механическая желтуха». Длительность заболевания желчнокаменной болезнью составляла 25 лет, длительность механической желтухи составила 3 суток. В качестве первого этапа лечения 13.01.15 выполнена эндоскопическая ретроградная холангиография, эндоскопическая папиллосфинктеротомия, частичная механическая литоэкстракция, назобилиарное дренирование по поводу множественных крупных конкрементов общего желчного протока. В общехирургическом лечении больной было отказано по сопутствующей патологии. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения назобилиарного дренирования, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (AOAi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (AOAi=786,2 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1183,5 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=2,1 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=216,8 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,4 усл. ед., ПХЛLi=73,9 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,219 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,274 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 6,4 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,157 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,253 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (XCi) 3,2 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что повышение интегрального показателя литогенности желчи, рассчитанного по описанной выше формуле, у пациентки с холедохолитиазом было незначительное (ИПЛi составил 1,7 единиц литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем 15.01.15 проведено повторное эндоскопическое вмешательство в объеме установки билиарного полимерного стента конфигурации «double pigtail», диаметром 10 Fr, длиной 10 см. В дальнейшем в течение 4-х месяцев у этой пациентки по результатам общеклинических обследований не было зафиксировано данных за обтурацию стента, рецидива механической желтухи и холангита, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное.

Пример №2.

В хирургическое отделение №2 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора СВ. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 14 января 2015 года поступила пациентка А., возраст 78 лет. Диагноз: «ЖКБ. Хронический калькулезный холецистит. Холедохолитиаз. Механическая желтуха. Острый холангит» Длительность заболевания желчнокаменной болезнью составляла 12 лет, длительность механической желтухи составила 2 недели. В качестве первого этапа лечения 15.01.15 выполнена эндоскопическая ретроградная холангиография, эндоскопическая папиллосфинктеротомия, частичная механическая литоэкстракция, назобилиарное дренирование по поводу крупного (более 4,0 см), фиксированного конкремента общего желчного протока. В общехирургическом лечении больной было отказано по сопутствующей патологии и тяжести основного заболевания. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения эндобилиарного стентирования, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (AOAi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (AOAi=249,5 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1207,3 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=2,9 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=257,1 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,3 усл. ед., ПХЛLi=70,8 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,096 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,265 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 2,9 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,110 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,270 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (XCi) 2,1 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что у пациента с холедохолитиазом, осложненным острым холангитом, было значительное повышение интегрального показателя литогенности желчи (рассчитанного по описанной выше формуле, ИПЛi составил 14,8 единицы литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем 20.01.15 проведено повторное эндоскопическое вмешательство в объеме установки билиарного стента со специальными физико-химическими характеристиками покрытия, конфигурации «double pigtail», диаметром 10 Fr, длиной 7 см. В дальнейшем у этой пациентки по результатам общеклинических обследований не было зафиксировано данных за обтурацию стента, рецидива механической желтухи и холангита, больная была подготовлена к общехирургическому лечению, которое было успешно проведено через 3,5 месяца после установки эндопротеза, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное.

Пример №3.

В хирургическое отделение №1 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора С.В. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 22 января 2015 года поступила пациентка З., возраст 76 лет. Диагноз: «Рак головки поджелудочной железы. T3NxMx С\п наружной холангиостомии» В общехирургическом лечении больной было отказано в связи с распространенностью процесса. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения наружной холангиостомии, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (AOAi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (АОАi=304,9 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1182,9 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=1,6 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=238,2 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,3 усл. ед., ПХЛLi=69,5 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,122 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,306 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 3,2 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,060 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,259 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (XCi) 1,2 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что у пациента со злокачественным новообразованием головки поджелудочной железы было умеренное повышение интегрального показателя литогенности желчи (рассчитанного по описанной выше формуле, ИПЛi составил 3,2 единицы литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем в качестве паллиативного окончательного метода лечения было выполнено эндоскопическое протезирование желчевыводящих путей билиарным стентом диаметром 11,5 Fr и длиной 7 см, удаление наружной холангиостомы. В дальнейшем в течение 4 месяцев у пациентки по результатам общеклинических обследований не было зафиксировано данных за обтурацию стента, рецидива механической желтухи и холангита, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное.

Пример №4.

В хирургическое отделение №1 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора С.В. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 23 октября 2014 года поступил пациент М., возраст 56 лет. Диагноз: «Хронический бескаменный холецистит. Холедохолитиаз? Механическая желтуха. Острый холангит». Длительность механической желтухи составила 4 недели. В качестве первого этапа лечения 24.10.14 выполнена эндоскопическая ретроградная холангиография, эндоскопическая папиллосфинктеротомия, браш-биопсия, назобилиарное дренирование по поводу стриктуры терминального отдела холедоха злокачественного генеза. От общехирургического лечения больной категорически отказался. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения назобилиарного дренирования, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (АОАi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (AOAi=168,1 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1192,7 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=3,8 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=390,4 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,4 усл. ед., ПХЛLi=74,9 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,048 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,296 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 1,3 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,072 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,267 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (XCi) 1,4 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что у пациента со злокачественным новообразованием дистального отдела холедоха было выраженное повышение интегрального показателя литогенности желчи (рассчитанного по описанной выше формуле, ИПЛi составил 56,3 единицы литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем в качестве паллиативного окончательного метода лечения было выполнено эндоскопическое протезирование желчевыводящих путей саморасширяющимся нитиноловым эндопротезом диаметром 10 мм и длиной 5 см. В дальнейшем в течение 7 месяцев у пациента по результатам общеклинических обследований не было зафиксировано данных за обтурацию стента, рецидива механической желтухи и холангита, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное.

Пример №5.

В хирургическое отделение №2 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора СВ. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 23 января 2015 года поступил пациент М., возраст 59 лет. Диагноз: «Рак головки поджелудочной железы. T4NxM1. ЖКБ. Хронический калькулезный холецистит. Механическая желтуха. Острый холангит». Длительность механической желтухи составила 3 недели. В качестве первого этапа лечения 24.01.15 выполнена чрескожная-чреспеченочная холангиостомия под ультразвуковыми рентгеноскопическим контролем. В общехирургическом лечении больному было отказано в связи с распространенностью процесса и отдаленным метастазированием. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения наружной холангиостомии, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (AOAi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (AOAi=226,1 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1230,8 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=2,5 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=471,3 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,6 усл. ед., ПХЛLi=81,0 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,081 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,325 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 2,0 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,086 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,262 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (XCi) 1,7 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что у пациента со злокачественным новообразованием поджелудочной железы и сопутствующей ЖКБ было значительное повышение интегрального показателя литогенности желчи (рассчитанного по описанной выше формуле, ИПЛi составил 21,9 единицы литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем в качестве паллиативного окончательного метода лечения было выполнено наружно-внутреннее дренирование желчевыводящих путей под рентгеноскопическим контролем. В дальнейшем в течение 3 месяцев до момента летального исхода от прогрессирования основного заболевания у пациента по результатам общеклинических обследований не было зафиксировано данных за обтурацию дренажа, рецидива механической желтухи и холангита, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное.

Пример №6.

В хирургическое отделение №1 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт - Краевая клиническая больница №1 имени профессора С.В. Очаповского» МЗКК (г. Краснодар) 1 марта 2015 года поступил пациент Б., возраст 67 лет. Диагноз: «ЖКБ. Хронический калькулезный холецистит. Холедохолитиаз? Механическая желтуха. Острый холангит». Длительность механической желтухи составила 11 дней. В качестве первого этапа лечения 2.03.15 выполнена эндоскопическая ретроградная холангиография, эндоскопическая папиллосфинктеротомия, назобилиарное дренирование по поводу стриктуры н\3 холедоха, механической желтухи и острого холангита. После дообследования выставлен диагноз: рак холедоха, T2NxMx. В плане проведения общехирургического лечения (второго этапа) больному было рекомендовано в условиях стационара по месту жительства провести коррекцию явлений печеночно-почечной недостаточности и сопутствующей кардиологической патологии. Проведено обследование с целью оценки выраженности метаболических нарушений желчи и определения риска литогенеза после проведения назобилиарного дренирования, в связи с чем определяли интегральный показатель литогенности желчи.

Для определения интегрального показателя литогенности использовали желчь, забор которой осуществляли при выполнении эндоскопического вмешательства с использованием эндоскопических стерильных катетеров. Затем желчь в объеме 50 мкл добавляли в 5 мл элюента (разведение 1:100, Ki=100,0), после чего проводили измерение суммарной антиокислительной активности исследуемого образца (AOAi, в нА·с) электрохимическим путем на амперометрическом детекторе (AOAi=205,0 нА·с). Далее определяли антиокислительную активность стандартного раствора аскорбиновой кислоты (AOAvitCi) в концентрации 1 мг/л, которая равнялась 1214,6 нА·с.

Кроме того, желчь в объеме 300 мкл вносили в тест-систему с 2,7 мл раствором люминола. Запускали реакцию радикального окисления люминола внесением через инжектор 0,5 мл 3% H2O2 и измеряли на люминотестере с помощью специального программного обеспечения максимум вспышки (МВХЛi=7,3 усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛi=759,8 усл. ед. пл.). Одновременно измеряли максимум вспышки и площадь хемилюминесценции контрольного раствора люминола без исследуемого субстрата, которые оставили: МВХЛLi=1,5 усл. ед., ПХЛLi=70,1 усл. ед. пл.

Для определения общих липидов центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию общих липидов определяли с помощью набора реактивов «Общие липиды» (PLIVA-Lachema Diagnostika s.r.o.). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,135 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,300 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации общих липидов (ОЛi) 3,6 г/л.

Для определения холестерина центрифугировали желчь в течение 30 минут при 3000 об/мин. Концентрацию холестерина определяли с помощью набора реактивов «Холестерин-22-Витал» (Витал Диагностике СПб). Оптическая плотность опытной пробы составила 0,087 единиц оптической плотности, оптическая плотность стандарта составила 0,251 единиц оптической плотности, что соответствовало концентрации холестерина (ХСi) 1,8 ммоль/л.

Интегральный показатель литогенности желчи рассчитывали по формуле:

Проведенными исследованиями показано, что у пациента со злокачественным новообразованием поджелудочной железы и сопутствующей ЖКБ было выраженное повышение интегрального показателя литогенности желчи (рассчитанного по описанной выше формуле, ИПЛi составил 81,4 единицы литогенности) в сравнении с данными контрольной группы, в связи с чем в качестве метода длительной предоперационной декомпрессии было выполнено наружное дренирование желчевыводящих путей под УЗИ и рентгеноскопическим контролем. В дальнейшем в течение одного месяца до момента поступления в стационар для проведения второго этапа радикального лечения у пациента по результатам общеклинических и инструментальных исследований были зафиксированы данные за обтурацию наружного дренажа, периодические рецидивы механической желтухи и холангита, что требовало практически ежедневных санаций дренажа с целью профилактики его обтурации сладжированной желчью, тем самым выбор метода декомпрессии желчевыводящих путей и лечения оценили как адекватный данной клинической ситуации.

Таким образом, с помощью предложенного интегрального показателя литогенности желчи можно оценивать выраженность дисхолии и в дальнейшем использовать полученные данные для прогнозирования риска литогенеза и холелитиаза и целесообразности применения различных корригирующих мероприятий, в том числе использования билиарных эндопротезов с различными физико-химическими характеристиками.

Данное изобретение позволяет:

- исследовать в комплексе показатели дисхолии, свободнорадикального окисления и антиокислительной активности желчи, отражающих выраженность метаболических нарушений в желчи и ее литогенность, а следовательно, риск развития холелитиаза,

- определять целесообразность применения различных корригирующих мероприятий, в том числе рациональность проведения билиарного эндопротезирования у пациентов с холестазом,

- проводить мониторинг эффективности лечебных мероприятий, своевременно предотвращая развитие осложнений на местном уровне при выборе метода декомпрессии при обструкции желчевыводящих путей доброкачественного и злокачественного генеза.

Практическим результатом предложения является возможность исследования выраженности метаболических нарушений при заболеваниях билиопанкреатодуоденальной зоны на местном уровне на основании интегрального показателя литогенности желчи и оптимизации выбора метода декомпрессии желчевыводящих путей, направленных на предупреждение ранней инкрустации эндопротезов, за счет включения дополнительных критериев оценки дисхолии и повышения информативности о состояния литогенеза, что позволяет обеспечить адекватную тактику ведения больного и повысить эффективность лечебных мероприятий.

Способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л) и показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса: суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛ, в усл. ед. площади), дополнительно соотносят значения АОА с показателями стандартного аскорбинового эквивалента (AOAvitC), значения МВХЛ - с показателями максимума вспышки стандартного раствора люминола (МВХЛL), значения ПХЛ - с показателями площади стандартного раствора люминола (ПХЛL), далее вычисляют интегральный показатель литогенности желчи (ИПЛi) по формуле:

где Ki и Kk - коэффициент разведения - кратность разведения пробы желчи обследуемого и пробы желчи, принятой за норму, с ИПЛ не более 1,1 единиц литогенности - соответственно при определении АОА, и чем выше значение ИПЛi, тем более высокая степень литогенности желчи с риском развития холелитиаза.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования чувствительности к химиотерапии у больных с лимфопролиферативными заболеваниями. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови определяют количественные уровни маркеров тимидинкиназы-1 (TK-1) и β2-микроглобулина (β2-МГ), а также после первого курса химиотерапии активность TK-1.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и гепатологии во внутренних болезнях, и может быть использовано для оценки состояния печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки индивидуального генетического риска атеросклероза. Осуществляют взятие крови, выделение ДНК и генотипирование митохондриальной ДНК.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Предложен способ прогнозирования характера поражения желчного пузыря у женщин, больных хроническим калькулезным холециститом, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ). У женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, осуществляют забор крови, выделение ДНК и анализ полиморфизмов генов интерлейкинов.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья, определяют возраст, уровень систолического и диастолического артериального давления, наличие отягощенного семейного анамнеза, наличие сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз, микрососудистых изменений в конъюнктиве, степень пигментации угла передней камеры, осуществляют забор периферической венозной крови и выделение ДНК, проводят анализ полиморфизма гена VEGF-A с.-958C>T (rs833061), после чего определяют значения дискриминантных показателей Dp и Dk по формулам.
Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и предназначено для дифференциации природы происхождения рецидивных кист при цистном эхинококкозе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска госпитальной летальности больных острым коронарным синдромом без подъема сегмента ST.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ дифференциальной диагностики стадий гонартроза, включающий исследование крови и определение в ее плазме концентрации мочевой кислоты (МК), в мкМ/л, отличающийся тем, что в мононуклеарной фракции крови также определяют активность миелопероксидазы (МПО), в у.е./мин·мг, и активность ксантиноксидоредуктазы (КОР), в МЕ/г, после чего рассчитывают суммарный коэффициент диагностики К по формуле: при выполнении условия 3.1≤К<3.4 диагностируют I стадию; при выполнении условия 3.4≤К<3.9 диагностируют II стадию; при выполнении условия 3.9≤К<5.2 диагностируют III стадию; при выполнении условия К≥5.2 диагностируют IV стадию гонартроза по шкале Kellgren-Lawrence.
Изобретение относится к медицине, а именно к гнойной хирургии, и может быть использовано для профилактики гипертрофических рубцов при лечении флегмон мягких тканей.
Изобретение относится к области судебной и криминалистической медицины и может быть использовано для выявления следов, имеющих органическое происхождение, а именно следов пальцев и ладоней.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики заболеваний онкологического и не онкологического генеза. Сущность способа состоит в том, что исследуют электрофоретическую подвижность эритроцитов и при снижении электрофоретической подвижности эритроцитов менее чем на 49% от физиологической нормы диагностируют заболевание не онкологического генеза.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность липоевой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к области медицины, а именно лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки развития угрозы гемической анемии беременных. Для этого определяют количество ненасыщенных жирных кислот в эритроцитах периферической крови с последующей оценкой их функционального состояния.
Изобретение относится к медицине, а именно гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики овариальной и адреналовой гиперандрогении у девочек пубертатного возраста.

Изобретение относится к областям ветеринарии и может быть использовано для оценки степени аккумуляции кадмия в печени крупного рогатого скота. Для этого определяют концентрацию Μn в биосубстрате методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности и безопасности терапии при проведении клинических исследований. Проводят анализ клинических или клинико-лабораторных показателей для каждого пациента из исследуемой группы.
Изобретение относится к области экологической аналитической химии. Способ включает отбор проб массой 2-4 г, их сушку, измельчение и двухкратную экстракцию целевых компонентов дихлорметаном при воздействии на пробу ультразвуковых колебаний, фильтрование объединенного экстракта и упаривание досуха при давлении не выше 0,1 мм рт.ст.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для раннего выявления острого повреждения почек и своевременного назначения соответствующей терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно, к онкологии, и может быть использованго для комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии. Способ включает проведение неоадъювантной химиотерапии, до ее начала проводят забор биопсийного материала опухоли, из которого выделяют тотальную РНК и определяют уровень экспрессии генов монорезистентности RRM1, TYMS, АВСС5, ERCC1, TOP1, ТОР2а, TUBB3 в ткани опухоли. На втором этапе проводят курсы неоадъювантной химиотерапии, на третьем этапе комбинированного лечения выполняют радикальную операцию в объеме пневмонэктемии или лобэктомии, во время которой производят забор образцов опухолевой ткани и визуально неизмененной ткани легкого/бронха, в которых проводят повторное определение уровней экспрессии генов монорезистентности, далее, в послеоперационном периоде на 15 сутки проводят адъювантную химиотерапию карбоплатином в дозе по AUC6 во 2-й день цикла, при уровне экспрессии гена монорезистентности ERCC1 менее 0,5, в комбинации с одним из цитостатиков, выбор которого зависит от уровня экспрессии исследуемых генов монорезистентности. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения НМРЛ IB - III стадии. 1 ил., 4 пр.
Наверх