Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс cd4+/cd8+ т-лимфоцитов селезенки


 


Владельцы патента RU 2594119:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов. Сущность способа состоит в том, что после спленэктомии определяют массу селезенки, морфометрически в гистологических срезах селезенки подсчитывают количество CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, вычисляют индекс соотношения масс CD4+/CD8+Т-лимфоцитам (ИСМ) по формулам. При значениях ИСМ селезенки >1,0 прогнозируют благоприятное течение апластической анемии, а при ≤1,0 - неблагоприятное течение заболевания. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Способ позволяет прогнозировать течение апластической анемии (АА) после спленэктомии путем проведения морфометрической оценки количества CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов в гистологических срезах селезенки после иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания клеток, вычисления их массы и индекса соотношения масс (ИСМ) CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки.

АА - тяжелое гематологическое заболевание, характеризующееся синдромом костномозговой недостаточности. В основе этой патологии лежит апоптоз клеточных линий кроветворной ткани, сопровождающийся замещением клеточного костного мозга жировым и, как следствие, панцитопенией в периферической крови. Спленэктомия входит в программу комбинированной иммуносупрессивной терапии у пациентов с данной патологией. До сих пор роль CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов селезенки в патогенезе АА изучена недостаточно. Практически отсутствуют сведения о влиянии массы CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов селезенки и ИСМ CD4+/CD8+Т-клеток на течение АА после спленэктомии. Исследования популяционного состава лимфоцитов при этом заболевании многими авторами проводились преимущественно в крови и костном мозге (E.E.Solomou, S.Rezvani, S.Mielke [et al.] / Deficient CD4 CD25 FOXP3 T regulatory cells in acquired aplastic anemia // Blood. - 2007. - Vol. 110, No 5. - P. 1603-1606; A.M.Rizitano, H.Kook, W.Zeng [et al.] / Oligoclonal and polyclonal CD4 and CD8 lymphocytes in aplastic anemia and paroxysmal nocturnal hemoglobinuria measured by V-beta spectratyping and flow cytomenry // Blood. - 2002. - Vol. 100, No. 1. - P. 178-183).

Целью изобретения является разработка способа прогнозирования течения АА после спленэктомии по ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки.

Прототип отсутствует.

Аналогами являются известные способы: 1. «Функциональная характеристика CD4+Т-клеток при апластической анемии» S.Kordasti, J.Marsh, S.AL-Khan [et al.] / Functional characterization of CD4+T cells in aplastic anemia // Blood. - 2012. - Vol. 119, No 9. - P. 2033-2043; 2. «Возрастание CD4+ и CD8+Т-клеток эффекторов памяти у больных апластической анемией». X.Hu, Y.Gu, Y.Wang [et al.] / Increased CD4+ and CD8+effector memory T cells in patients with aplastic anemia // Haematologica. - 2009. - Vol.94. - P. 428-429. В приведенных аналогах определяли содержание CD4+ и CD8+Т-клеток в крови и костном мозге больных АА при оценке характера течения заболевания, спленэктомия не проводилась.

Отличия заявляемого способа от аналогов включают:

1. Подсчет количества CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов проводят морфометрически после ИГХ окрашивания в гистологических срезах селезенки у больных АА после спленэктомии, а не в крови и костном мозге методом проточной цитометрии.

2. Течение АА после спленэктомии прогнозируют по ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Способа прогнозирования течения АА после спленэктомии по ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки не существует.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.

Способ осуществляется следующим образом

После проведения спленэктомии у больных АА определяют массу удаленной селезенки, проводку образцов послеоперационного материала выполняют на гистологических срезах, приготовленных из парафиновых блоков селезенок, толщиной 3-5 мкм общепринятым способом. Для идентификации CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов селезенки используют ИГХ метод окрашивания по стандартной методике в соответствии с протоколом систем визуализаций «Dako». Морфометрическую оценку количества CD4+ и CD8+Т-клеток выполняют на световом микроскопе фирмы «Leica» со встроенной фото- и видеокамерой, с помощью программного обеспечения анализа изображений ImageScope Color, версии М с окуляром х10, при объективе ×100. Исследования проводят в 20 полях зрения для каждого образца, начиная от капсулы вглубь лимфоидного органа. Исходя из полученных результатов, вычисляют массу CD4+ и CD8+лимфоцитов и рассчитывают ИСМ CD4+/CD8+клеток по формулам:

M1=m×D1%/100%

M2=m×D2%/100%

ИСМ=M1/M2,

где:

M1 - масса CD4+Т-лимфоцитов, г,

М2 - масса CD8+Т-лимфоцитов, г,

D1 - количество CD4+Т-лимфоцитов, %,

D2 - количество CD8+Т-лимфоцитов, %,

m - масса селезенки, г,

ИСМ - индекс соотношения масс CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки.

Исследования проведены на гистологических срезах селезенок от 32 больных АА после спленэктомии в возрасте от 18 до 65 лет (12 - нетяжелой формой заболевания и 20 - тяжелой). При оценке ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки благоприятное течение заболевания установлено у 13 пациентов (9 - с нетяжелой формой и 4 - тяжелой). У 19 больных АА определен неблагоприятный прогноз (3 - при нетяжелой форме и 16 - тяжелой). Группу сравнения составили образцы селезенок, взятых от 20 лиц, не имевших в анамнезе заболеваний системы крови.

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа прогнозировать течение АА после спленэктомии по ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки.

Пример 1.

Больной В., 28 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 19.01.2001 г. Диагноз: АА, нетяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 71 г/л, гранулоциты 0,63×109/л, тромбоциты 45×109/л. Через месяц (20.02.2001 г.) выполнена хирургическая операция, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки (т) составила 140 г. В гистологических срезах селезенки проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов по стандартной методике. Морфометрически определено количество (D1) CD4+8,7% и (D2) CD8+3,5% Т-лимфоцитов. По ранее приведенным формулам вычислены их массы: (M1) CD4+ и (М2) CD8+. Установленные величины масс получены в ходе следующих расчетов: M1 (CD4+)=140 г × 8,7% / 100% (12,20 г) и М2 (CD8+)=140 г × 3,5% / 100% (4,90 г). ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки составил 2,5 (>1,0).

Заключение: по результатам ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки установлено, что у больного АА благоприятный прогноз течения заболевания.

Состояние клинико-гематологического улучшения наступило через месяц после операции (23.03.2001 г.): гемоглобин 70 г/л, гранулоциты 1,38×109/л, тромбоциты 150×109/л. Зависимость от гемотрансфузий уменьшилась. Состояние ремиссии было достигнуто через 8 месяцев (27.06.2002 г.): гемоглобин 102 г/л, гранулоциты 2,01×109/л, тромбоциты 250×109/л. Зависимости от гемотрансфузий нет.

Пример 2.

Больной Р., 38 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 23.01.1998 г. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 92 г/л, гранулоциты 0,36×109/л, тромбоциты 10×109/л. Через две недели (03.02.1998 г.) выполнена хирургическая операция, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки (m) составила 105 г. В гистологических срезах селезенки проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов по стандартной методике. Морфометрически определено количество (D1) CD4+ 7,0% и (D2) CD8+ 6,0% Т-лимфоцитов селезенки. По ранее приведенным формулам вычислены их массы: (M1) CD4+ и (М2) CD8+. Установленные величины масс получены в ходе следующих расчетов: M1 (CD4+)=105 г × 7,0% / 100% (7,35 г) и М2 (CD8+)=105 г × 6,0% / 100% (6,30 г). ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки составил 1,2 (>1,0).

Заключение: по результатам ИСМ CD4+/CD8+лимфоцитов селезенки установлено, что у больного АА благоприятный прогноз течения заболевания.

Состояние клинико-гематологического улучшения наступило через 4 месяца после операции (30.06.1998 г.): гемоглобин 111 г/л, гранулоциты 3,08×109/л, тромбоциты 60×109/л. Зависимость от гемотрансфузий снижена. Состояние ремиссии было достигнуто через 12 месяцев (01.03.1999 г.): гемоглобин 124 г/л, гранулоциты 6,0×109/л, тромбоциты 130×109/л. Зависимости от гемотрансфузий нет.

Пример 3.

Больной К., 26 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 12.09.1995 г. Диагноз: апластическая анемия, нетяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 82 г/л, гранулоциты 0,68×109/л, тромбоциты 15,0×109/л. Через неделю (19.09.1995 г.) выполнена хирургическая операция, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки (m) составила 70 г. В гистологических срезах селезенки проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов по стандартной методике. Морфометрически определено количество (D1) CD4+ 3,2% и (D2) CD8+ 7,9% Т-лимфоцитов селезенки. По ранее приведенным формулам вычислены их массы: (M1) CD4+ и (М2) CD8+. Установленные величины масс получены в ходе следующих расчетов: M1 (CD4+)=70 г × 3,2% / 100% (2,24 г. ) и М2 (CD8+)=70 г × 7,9% / 100% (5,53 г. ). ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки составил 0,4 (<1,0).

Заключение: по результатам ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки установлено, что у больного АА неблагоприятный прогноз течения заболевания.

В ходе динамического наблюдения за пациентом выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Состояние клинико-гематологического улучшения не наступило. Спустя 6 месяцев после операции (13.03.1996) больной умер.

Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки прогнозировать течение АА после спленэктомии. При величинах ИСМ CD4+/CD8+Т-лимфоцитов селезенки >1,0 прогнозируют благоприятное течение АА, а при значениях <1,0 - неблагоприятное течение заболевания.

Предлагаемый способ информативен, может быть использован в гематологических отделениях, морфологических и гистологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения АА после спленэктомии.

Способ прогнозирования течения апластической анемии, включающий определение лимфоцитов периферической крови, отличающийся тем, что после спленэктомии определяют массу селезенки, морфометрически в гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания подсчитывают количество CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов, вычисляют индекс соотношения масс (ИСМ) по формулам:
M1=m×D1%/100%
M2=m×D2%/100%
ИСМ=M1/M2,
где:
M1 - масса CD4+ Т-лимфоцитов, г,
М2 - масса CD8+ Т-лимфоцитов, г,
D1 - количество CD4+ Т-лимфоцитов, %,
D2 - количество CD8+ Т-лимфоцитов, %,
m - масса селезенки, г,
ИСМ - индекс соотношения масс CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов селезенки,
и при значениях ИСМ >1,0 прогнозируют благоприятное течение апластической анемии, а при ИСМ≤1,0 прогнозируют неблагоприятное течение заболевания.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для индивидуального прогнозирования антенатальной гибели плода у беременных и выбора рациональной акушерской тактики в зависимости от результатов прогноза.
Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для взятия крови у шиншилл. Шиншиллу фиксируют на животе с запрокинутой назад головой.

Изобретение относится к области измерений для диагностических целей. Блок датчиков для проведения диагностических измерений, размещенных на поверхности тела, включает основание, содержащее выемку, в которой закреплен пьезоэлемент датчика давления.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается способа прогнозирования развития сердечно-сосудистых осложнений после острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST без тревожно-депрессивных расстройств.

Изобретение относится к медицине, а именно, к онкологии, и может быть использованго для комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл.
Изобретение относится к области судебной и криминалистической медицины и может быть использовано для выявления следов, имеющих органическое происхождение, а именно следов пальцев и ладоней.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики заболеваний онкологического и не онкологического генеза. Сущность способа состоит в том, что исследуют электрофоретическую подвижность эритроцитов и при снижении электрофоретической подвижности эритроцитов менее чем на 49% от физиологической нормы диагностируют заболевание не онкологического генеза.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность липоевой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, экологии, токсикологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики у детей дисметаболической нефропатии, ассоциированной с токсическим действием кадмия, хрома, свинца и фенола техногенного происхождения и дисметаболической нефропатии нетоксической природы. Определяют в крови ребенка содержание кадмия, свинца, хрома и фенола. При содержании в крови кадмия - в 1,4-2,0 раза, свинца - в 1,2-1,5 раза, хрома - в 1,2-1,7 раза, фенола - в 1,3-4,0 раза выше референтного/фонового, осуществляют генетическое исследование полиморфизма генов CYPOX, RCYT 450, SULTA1. При наличии полиморфизма по гомозиготному и гетерозиготному варианту генов CYPOX, RCYT 450, SULTA1 проводят ультразвуковое исследование у ребенка состояния кровотока в подкапсульной зоне почек в режиме цветового допплеровского картирования. При установлении обеднения кровотока в подкапсульной зоне почек определяют лабораторные показатели: уровень общей антиоксидантной активности сыворотки крови (ОАС), уровень Cu/Zn зависимой супероксиддисмутазы (Cu/Zn-СОД), уровень глутатионпероксидазы (ГлПО) и гидроперекисей липидов, показатель абсолютного фагоцитоза и фагоцитарного числа. При превышении уровня ОАС на 25-30%, уровня Cu/Zn-СОД на 30-50%, ГлПО на 30-50%, гидроперекисей липидов на 30-50% и абсолютного фагоцитоза и фагоцитарного числа в 1,2 и 2,3 раза соответственно. При наличии у ребенка указанного условия, по меньшей мере, в виде 65% от указанных лабораторных показателей, диагностируют у ребенка наличие дисметаболической нефропатии, ассоциированной с токсическим действием кадмия, свинца, хрома и фенола техногенного происхождения. При отсутствии такого превышения диагностируют у ребенка наличие дисметаболической нефропатии нетоксической природы. Способ позволяет точно провести дифференциальную диагностику, своевременно провести необходимые лечебные и профилактические мероприятия за счет учета наиболее значимых показателей. 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, кардиологии. У обследуемых учитывают наличие или отсутствие артериальной гипертонии, сахарного диабета, отягощенной наследственности по ишемической болезни сердца, конституционно-морфологический тип по Рису-Айзенку и Теннеру. Определяют отношение окружности талии к окружности бедер, гиперхолестеринемию, генетические маркеры групп крови системы АВ0 и резус. Дополнительно определяют маркеры: возраст, наличие табакокурения, метаболического синдрома, дыхательной недостаточности, повышение уровня холестерина липопротеидов низкой плотности, снижение уровня холестерина липопротеидов высокой плотности, повышение коэффициента атерогенности, наличие гипертриглицеридемии, гипергомоцистеинемии, гиперфибриногенемии, повышение уровня С-реактивного белка, генетические маркеры групп крови системы MN. Для каждого фактора вычисляют прогностический коэффициент (ПК). Прогнозирование вероятности развития атеросклероза осуществляют по значению суммы ПК. При значении суммы ПК «+6» баллов и выше прогнозируют высокий риск развития атеросклероза с поражением коронарных, экстракраниальных и периферических артерий у шахтеров с антракосиликозом. При сумме ПК «-6» и менее баллов прогнозируют низкий риск развития атеросклероза у шахтеров с антракосиликозом. Способ позволяет точно провести прогнозирование атеросклероза с поражением коронарных, экстракраниальных и периферических артерий у шахтеров с антракосиликозом и своевременно назначать и проводить лечебно-профилактические мероприятия за счет учета наиболее значимых факторов риска. 1 табл., 2 пр.
Наверх