Способ дифференциации культур candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору



Способ дифференциации культур candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору

 


Владельцы патента RU 2595370:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для дифференциации грибов Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору. Способ предусматривает забор исследуемого материала. Осуществляют посев исследуемого материала на селективные питательные среды с последующим выделением и идентификациией чистых культур C. albicans. У выделенных чистых культур C. albicans определяют антииммуноглобулиновую активность в отношении секреторного иммуноглобулина А (АИгсА). При этом к нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 0,3 мкг/мл. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору с целью установления их этиологической значимости и дальнейшего проведения своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Всех представителей дрожжеподобных грибов рода Candida относят к условно-патогенным [Онищенко Г.Г. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08. Постановление Российской Федерации, 2008. С. 20-34.] Они входят в состав нормальной микрофлоры рта, влагалища и толстой кишки большинства здоровых людей, но могут также вызывать развитие заболеваний [Мамедова Л.Р., Караев З.О. Этиологическая характеристика нозокомиальных инфекций мочевыводящих путей. Проблемы медицинской микологии. 2010. Т. 12, №3. С. 13-14; Кузьмина Д.А., Новикова В.П., Шабашова Н.В. и др. Candida spp. и микробиоценоз полости рта у детей с декомпен-сированной формой кариеса. Проблемы медицинской микологии. 2011. Т. 13, №1. С. 23-27].

Заболевание обусловлено не просто наличием грибов рода Candida, а их размножением в большом количестве, и/или попаданием более патогенных штаммов гриба.

В связи с такой двойственной природой грибов рода Candida у клиницистов нередко возникают сложности в оценке результатов обследования [Карпунина Т.И., Олина А.А., Машуров М.Г. и др. Фосфолипаза оппортунистических грибов: их возможная роль в патогенезе и диагностике микозов. Проблемы медицинской микологии. 2006. Т. 8, №4. С. 41-46; Кубась В.Г., Данилова О.П., Чайка Н.А. Кандидозная инфекция. СПб., 1996. С. 46].

Рост инфекций, вызываемых грибами рода Candida, диктует необходимость поиска новых способов дифференциации нормальной микрофлоры от этиологических агентов, способных вызывать развитие патологических процессов [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М: «Медицина», 1999. С. 185].

В последние 20 лет значительно увеличилась концентрация грибов рода Candida в составе микрофлоры влагалища [Сергеева В.В., Сарматова Н.И. Частота обнаружения Candida albicans в биоценозе урогенитального тракта женщин. Immunopathology, Allergology, Infectology. 2010. №1. с. 168].

В видовой структуре грибов рода Candida, колонизирующих вагинальный биотоп, устойчиво доминируют представители культур С. albicans, доля которых составляет 84,3-88,9% от всех изолируемых культур [Дробкова В.А. Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста. Автореф. дисс. … канд. мед. наук. Пермь, 2010. С. 20].

Известен способ количественного исследования дрожжеподобных грибов, выделенных из вагинального биотопа, с подсчетом числа колониеобразующих единиц. Клинически значимый уровень культур С. albicans составляет 104 КОЕ/мл [Анкирская А.С., Муравьева В.В., Акопян Т.Э. и др. Клиническая лабораторная диагностика. 1997. №7. С. 41-45].

Однако количество культур С. albicans в 30,±5,5% случаев из смывов, полученных от молодых здоровых женщин, превышает значение 104 КОЕ/мл на фоне отсутствия клиники воспалительной реакции [Орлова B.C., Набережнев Ю.И., Будник И.В. Микробиоценоз влагалища современных практически здоровых женщин молодого репродуктивного возраста. Научные ведомости. 2008. 6 (46). С. 34].

Напротив, у 36% женщин с диагностированным кандидозным вульвовагинитом, абсолютное количество культур С. albicans в вагинальном отделяемом составляет менее 104 КОЕ/мл [Ворошилина Е.С. Совершенствование методических подходов к оценке микробиоценоза влагалища у женщин репродуктивного возраста. Автореферат дисс. … д-ра мед. наук. Челябинск, 2012. С. 22].

Известен способ дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору путем определения у выделенных штаммов следующих свойств: размер клеток, фосфолипазная активность, отношение к температуре [Трухина Е.В. Клинико-лабораторное и экспериментальное обоснование новых подходов к диагностике и лечению кандидозной инфекции влагалища. Автореф. дисс. … канд. мед. наук. Пермь, 2005. С. 2].

Известен способ дифференциации культур Candida albicans различной локализации (ротовая полость, кожные покровы и слизистые влагалища), являющихся возбудителями кандидоза, от штаммов, выделенных от здоровых лиц, по уровню адгезии штаммов [Лисовская С.А. Новый подход к оценке патогенного потенциала клинических штаммов Candida albicans. Автореф. дисс… канд. биол. наук. Казань, 2008. С. 4]. Однако способ не обладает достаточно высокой чувствительностью. Например, высокий уровень адгезии регистрируется у штаммов - представителей нормальной микрофлоры, что может затруднить дифференциацию культур С. albicans.

Известен способ дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору по сравнительной оценке уровня фосфолипазной активности изолированных культур [Трухина Е.В. Клинико-лабораторное и экспериментальное обоснование новых подходов к диагностике и лечению кандидозной инфекции влагалища. Автореф. дисс. … канд. мед. наук. Пермь, 2005. С. 2].

Обнаружены антилизоцимная и антикомплементарная активности у культур Candida albicans, выделенных из вагинального биотопа женщин больных кандидозом и вульвовагинальным кандидозом [Свиридов М.А., Долгушин И.И., Карташова О.Л. Оценка персистентных характеристик Candida albicans. Медицинская наука и образование Урала. 2008. №4. С. 104-106]; а также антилактоферриновая активность у культур С. albicans, выделенных из вагинального биотопа женщин при хронических гнойно-воспалительных заболеваниях придатков матки [Бухарин О.В., Карташова О.Л., Киргизова С.Б. и др. Антилактоферриновая активность микроорганизмов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. №5. С. 10].

При изучении антилактоферриновой активности (АЛфА) у культур С. albicans, выделенных из вагинального биотопа здоровых женщин (штаммы нормальной микрофлоры) и женщин больных хроническими воспалительными заболеваниями придатков матки в стадии ремиссии (патогенные штаммы), было установлено, что этот признак чаще с высокими значениями встречался у штаммов, изолированных от больных женщин [Бухарин О.В., Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Валышева И.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. №5. С. 10].

Однако дифференциация грибов вагинального биотопа женщин по частоте встречаемости и уровню АЛфА не всегда объективна, поскольку лакто-феррин продуцируется нейтрофилами и моноцитами и его количество многократно увеличивается при заболевании [Rein М.F., Shih L., Miller R. et al. Use of a lactoferrin assay in the differential diagnosis of female genital tract infections and implications for the pathophysiology of bacterial vaginosis. Sex. Transm. Dis. 1996. V. 23, No 6. P. 517-521], что может существенно влиять на экспрессию генов (повышая или снижая экспрессию генов), ответственных за фенотипические проявления данного свойства у штаммов С. albicans, колонизирующих вагинальный биотоп.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору путем изучения их биологических свойств (морфологическая трансформация, продукция ферментов - фосфолипаз и протеаз, способность к пленкообразованию) [Дробкова В.А. Биологические особенности грибов рода Candida, изолируемых из вагинального биотопа женщин репродуктивного возраста. Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук. Пермь, 2010. С. 9-20].

Однако указанный способ имеет ряд существенных недостатков:

1. Трудоемок для применения в условиях клинической лаборатории и больше подходит для научно-исследовательских целей из-за необходимости определения у выделенных микроорганизмов сразу нескольких биологических свойств, таких как - морфологическая трансформация, продукция ферментов - фосфолипаз и протеаз, способность к пленкообразованию.

2. Требует использования реактивов и специальных питательных сред для определения указанных биологических свойств и, как следствие, дополнительных манипуляций для их подготовки и большего количества времени.

Заявляемое изобретение направлено на достижение технического результата, заключающего в создании точного, простого и экономически выгодного способа дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору.

Для достижения указанного технического результата в заявляемом способе дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору проводят забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур С. albicans. Затем у выделенных штаммов С. albicans определяют антииммуноглобулиновую активность в отношении секреторного иммуноглобулина А (АИгсА) и к нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака равном или меньше 0,3 мкг/мл.

Новым в заявляемом способе является то, что у выделенной культуры Candida albicans определяют антииммуноглобулиновую активность в отношении секреторного иммуноглобулина А (АИгсА) и к нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 0,3 мкг/мл.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат, состоит в том, что заявляемый способ путем определения у культур Candida albicans антииммуноглобулиновой активности в отношении секреторного иммуноглобулина А, позволяет дифференцировать культуры С albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору, способную вызывать развитие инфекционно-воспалительных заболеваний, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Секреторный иммуноглобулин A (slgA) является основным протективным иммуноглобулином местной иммунной защиты, противостоящим микробной колонизации слизистых оболочек различных биотопов человека, он продуцируется только иммунными клетками слизистой оболочки (В-лимфоцитами), его содержание стабильно.

Для многих представителей микрофлоры, колонизирующих слизистые оболочки открытых полостей организма человека характерна способность секретировать протеолитические ферменты, расщепляющие секреторный иммуноглобулин А [Кострюкова Н.Н., Бехало В.А. Молекулярно-биологические основы патогенности гонококков и особенности иммунного ответа. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. №1. С. 105; Rao М.В., Tanskale A.M., Ghatge M.S. et al. Molecular and biotech-nological aspects of microbial proteases. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. V. 62(3). P. 598].

Известно, что культура С. albicans способна деградировать slgA, супрессируя локальный иммунитет, а антииммуноглобулиновая активность в отношении секреторного IgA определяет способность С. albicans поддерживать воспалительный процесс и участвовать в его хронизации [Капустина О.А., Чайникова И.Н., Карташова О.Л. Видовая характеристика и факторы персистенции грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов при ин-фекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012. №4. С. 37-41].

Известен способ определения антииммуноглобулиновой активности микроорганизмов [патент РФ №2236465, C12Q 1/02, G01N 33/569, 2004].

Способ осуществляется путем выращивания исследуемой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде, приготовления из выросшей агаровой культуры микробной взвеси и смешивания ее с очищенным иммуноглобулином. Параллельно готовят контроль из забуференного физиологического раствора и очищенного иммуноглобулина. Опытную и контрольную пробы инкубируют 18-24 ч, отделяют супернатант от бактериальных клеток центрифугированием, определяют концентрацию остаточного иммуноглобулина в опытной и контрольной пробах иммуноферментным анализом. Антииммуноглобулиновую активность рассчитывают по формуле где АИгА - антииммуноглобулиновая активность, %; Ск - концентрация остаточного иммуноглобулина в контроле, мкг/мл; Со - концентрация остаточного иммуноглобулина в опыте, мкг/мл. Антииммуноглобулиновая активность выражается в процентах (%) инактивации иммуноглобулина в опыте по сравнению с контролем.

Авторами экспериментально установлены различия в распространенности и выраженности антииммуноглобулиновой активности в отношении slgA у культур С. albicans, выделенных из влагалища у здоровых женщин и больных инфекционно-воспалительными заболеваниями.

Исследование было проведено на 64 штаммах С. albicans, выделенных от женщин, страдающих сальпингоофоритом (острое и хроническое течение); а также 34 штаммах, выделенных от клинически здоровых женщин при профилактическом осмотре.

Исследуемый материал (отделяемое из влагалища) засевали на чашки с питательной средой Сабуро (Дагестанский НИИПС, г. Махачкала) с рН 6,0-6,5 методом секторных посевов, выдерживали в условиях термостата при температуре 37°С в течение 48 часов. Выросшие колонии микроскопировали и изучали морфологию - обнаружение псевдомицелия определяло принадлежность гриба к роду Candida. Чистую культуру идентифицировали, определяя тип филаментации и наличие хламидоспор при посеве на Хламидоспорагар (Дагестанский НИИПС, г. Махачкала). Посевы инкубировали при 22°С в темном месте в течение 3-4 дней. Выявление хламидоспор позволяло идентифицировать культуру как Candida albicans.

У всех выделенных штаммов Candida albicans определяли антииммуноглобулиновую активность в отношении slgA следующим способом.

1. Исследуемую культуру Candida albicans выращивали на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-36 часов.

2. Из выросшей агаровой культуры готовили взвесь в физиологическом растворе в концентрации 1 млрд/мл.

3. На стерильном забуференном физиологическом растворе 0,15 М, рН 7,2, готовили раствор очищенного человеческого секреторного иммуноглобулина А (набор реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ»), полученный раствор разводили в 1000 раз этим же стерильным буфером. В лунки стерильного полистиролового планшета вносили по 50 мкл микробной взвеси и раствора иммуноглобулина А.

4. Параллельно с опытной готовили контрольную пробу, содержащую вместо микробной взвеси 50 мкл забуференного физиологического раствора.

5. Пробы инкубировали не менее 18 ч при 37°С.

6. После инкубации пробы переносили в пластиковые пробирки и центрифугировали 8000 об/мин 20 мин при +5°С.

7. Отбирали необходимое количество супернатанта в пробирки, содержащие такое количество буфера, чтобы пробы были разведены в соотношении 1:50. В указанном соотношении пробы вносили в планшет набора реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ» на 30 минут, затем промывали лунки планшета промывочным раствором, вносили по 100 мкл конъюгата, инкубировали 30 минут и вновь промывали. Вносили в лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина, инкубировали в течение 25 минут и вносили по 100 мкл стоп-реагента.

8. Проводили определение остаточной концентрации секреторных IgA в опытной и контрольной пробах, измеряя их оптическую плотность на фотометре Multiskan (Labsystems, Финляндия при длине волны 492 нм), перерасчет концентрации иммуноглобулинов осуществляли путем построения калибровочных графиков. Найденные по графику значения концентрации секреторных IgA умножали на коэффициент разведения, т.е. на 50, и получали концентрацию секреторного IgA (мкг/мл) в опытной и контрольной пробах.

9. Рассчитывали антииммуноглобулиновую активность в отношении slgA по формуле

АИгсА=Ск0,

где АИгсА - антииммуноглобулиновая активность в отношении slgA, мкг/мл;

Ск - концентрация slgA в контроле, мкг/мл;

Со - концентрация slgA в опыте, мкг/мл.

Антииммуноглобулиновую активность выражали в мкг/мл (мкг инактивированного секреторного иммуноглобулина А в мл культуральной среды).

Результаты исследований представлены в таблице.

Как видно из таблицы, у культур С. albicans, выделенных из влагалища здоровых женщин, антииммуноглобулиновая активность в отношении секреторного IgA присутствует в 33% случаев с уровнем выраженности от 0,01 до 0,3 мкг/мл, а культуры С. albicans, выделенные из влагалища женщин с острым течением заболевания, характеризовались наличием признака в 100% случаев с уровнем выраженности от 0,31 мкг/мл до 0,53 мкг/мл.

Штаммы С. albicans, выделенные из влагалища женщин с обострением хронического течения заболевания, обладали антииммуноглобулиновой активностью в отношении секреторного IgA в 100% случаев с уровнем выраженности признака от 0,54 мкг/мл до 1,18 мкг/мл.

Таким образом, проведенные исследования показали, что все представители культур С. albicans, выделенные от больных женщин, в 100% случаев обладали антииммуноглобулиновой активностью в отношении slgA, при этом уровень выраженности данного признака был более 0,3 мкг/мл.

Тогда как у штаммов С. albicans, выделенных из влагалища здоровых женщин, антииммуноглобулиновая активность в отношении slgA определялась в 33% случаев с уровнем выраженности признака от 0,01 до 0,3 мкг/мл.

Авторами установлены пороговые значения способности культур С. albicans к инактивации slgA, позволяющие дифференцировать культуры Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору: к нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 0,3 мкг/мл.

Предложенный способ дифференциации культур С albicans вагинального биотопа женщин был испытан в ГБУЗ «Оренбургская районная больница».

Эффективность дифференциации, проведенной в соответствии с заявляемым способом, составила 95%.

Способ осуществляется следующим способом:

1. Исследуемый материал (отделяемое из влагалища) засевают на чашки со средой Сабуро (Дагестанский НИИПС, г. Махачкала).

2. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 48 часов.

3. Выросшие колонии микроскопируют и изучают морфологию - обнаружение псевдомицелия определяет принадлежность гриба к роду Candida.

4. Чистую культуру идентифицируют до вида, определяя тип филаментации и наличие хламидоспор при посеве на Хламидоспорагар (Дагестанский НИИПС, г. Махачкала) после инкубирования посевов при 22°С в темном месте в течение 3-4 дней. Выявление хламидоспор позволяет идентифицировать культуру как С. albicans.

5. Исследуемую культуру Candida albicans выращивают на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-36 часов.

6. Из выросшей агаровой культуры готовят взвесь в физиологическом растворе в концентрации 1 млрд/мл.

7. На стерильном забуференном физиологическом растворе 0,15 М, рН 7,2, готовят раствор очищенного человеческого секреторного IgA (набор реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ»), полученный раствор разводят в 1000 раз этим же стерильным буфером. В лунки стерильного полистиролового планшета вносят по 50 мкл микробной взвеси и раствора секреторного иммуноглобулина А.

8. Параллельно с опытной готовят контрольную пробу, содержащую вместо микробной взвеси, 50 мкл забуференного физиологического раствора.

9. Пробы инкубируют не менее 18 ч при 37°С.

10. После инкубации пробы переносят в пластиковые пробирки и центрифугируют 8000 об/мин 20 мин при +5°С.

11. Отбирают необходимое количество супернатанта в пробирки, содержащие такое количество буфера, чтобы пробы были разведены в соотношении 1:50. В указанном соотношении пробы вносят в планшет набора реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ» на 30 минут, затем промывают лунки планшета промывочным раствором, вносят по 100 мкл конъюгата, инкубируют 30 минут и вновь промывают. Вносят в лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина, инкубируют в течение 25 минут и вносят по 100 мкл стоп-реагента.

12. Проводят определение остаточной концентрации slgA в опытной и контрольной пробах, измеряя их оптическую плотность на фотометре Multiskan (Labsystems, Финляндия при длине волны 492 нм), перерасчет концентрации slgA осуществляют путем построения калибровочных графиков. Найденные по графику значения концентрации slgA умножают на коэффициент разведения, т.е. на 50, и получают концентрацию slgA (мкг/мл) в опытной и контрольной пробах.

13. Рассчитывают антииммуноглобулиновую активность в отношении slgA по формуле

АИгсА=Ск-Со,

где АИгсА - антииммуноглобулиновая активность в отношении секреторного IgA, мкг/мл;

Ск - концентрация slgA в контроле, мкг/мл;

Со - концентрация sgA в опыте, мкг/мл.

Антииммуноглобулиновая активность выражается в мкг/мл (мкг инак-тивированного секреторного иммуноглобулина А в мл культуральной среды).

14. К нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 0,3 мкг/мл.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. Во время профилактического осмотра у пациентки Б. отделяемое из влагалища было засеяно на чашки со средой Сабуро. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 48 часов. Выросшие колонии микроскопировали и изучали морфологию - обнаружение псевдомицелия определило принадлежность гриба к роду Candida.

Чистую культуру идентифицировали до вида, определяя тип филаментации и наличие хламидоспор при посеве на Хламидоспорагар после инкубирования посевов при 22°С в темном месте в течение 3-4 дней. Выявление хламидоспор позволило идентифицировать культуру как С. albicans.

На следующем этапе у С. albicans определяли антииммуноглобулиновую активность в отношении секреторного IgA. Исследуемую культуру Candida albicans выращивали на плотной питательной среде при 37°С в течение 24-36 часов. Из выросшей агаровой культуры готовили взвесь в физиологическом растворе в концентрации 1 млрд/мл. На стерильном забуференном физиологическом растворе 0,15 М, рН 7,2, готовили раствор очищенного человеческого секреторного IgA (набор реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ»), полученный раствор разводили в 1000 раз этим же стерильным буфером. В лунки стерильного полистиролового планшета вносили по 50 мкл микробной взвеси и раствора секреторного IgA.

Параллельно с опытной готовили контрольную пробу, содержащую вместо микробной взвеси, 50 мкл забуференного физиологического раствора. Пробы инкубировали не менее 18 ч при 37°С.

После инкубации пробы переносили в пластиковые пробирки и центрифугировали 8000 об/мин 20 мин при +5°С. Отбирали необходимое количество супернатанта в пробирки, содержащие такое количество буфера, чтобы пробы были разведены в соотношении 1:50. В указанном соотношении пробы вносили в планшет набора реагентов «IgA секреторный-ИФА-БЕСТ» на 30 минут, затем промывали лунки планшета промывочным раствором, вносили по 100 мкл конъюгата, инкубировали 30 минут и вновь промывали.

Вносили в лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина, инкубировали в течение 25 минут и вносили по 100 мкл стоп-реагента.

Проводили определение остаточной концентрации секреторных IgA в опытной и контрольной пробах, измеряя их оптическую плотность на фотометре Multiskan (Labsystems, Финляндия при длине волны 492 нм), перерасчет концентрации секреторных иммуноглобулинов А осуществляли путем построения калибровочных графиков. Найденные по графику значения концентрации секреторных IgA умножали на коэффициент разведения, т.е. на 50, и получали концентрацию секреторного IgA в мкг/мл в опытной и контрольной пробах: 14,84 мкг/мл и 15 мкг/мл соответственно.

АИгсА рассчитывали по формуле

АИгсА=15 мкг/мл - 14,84 мкг/мл=0,16 мкг/мл

АИгсА у выделенного штамма С. albicans составляла 0,16 мкг/мл. Согласно предлагаемому способу был сделан вывод о том, что данный штамм С. albicans относится к нормальной микрофлоре влагалища.

Пример 2. У обследуемой женщины А., часто болеющей воспалительными заболеваниями придатков матки, было взято на исследование отделяемое влагалища.

Бактериологическое исследование проведено аналогично примеру 1. На основании полученных результатов о наличии у выделенного штамма С. albicans антииммуноглобулиновой активности в отношении slgA с уровнем выраженности 1,05 мкг/мл был сделан вывод о том, что выделенный штамм может быть патогенным и в дальнейшем вызывать развитие местного инфекционно-воспалительного процесса.

В отношении женщины А. были проведены профилактические мероприятия с применением антимикотических средств, что в комплексе с патогенетическими средствами привело к положительному эффекту и предотвратило рецидив заболевания.

Пример 3. Перед проведением внутриматочного вмешательства (внутриматочная контрацепция) у пациентки У. было взято на бактериологическое исследование отделяемое влагалища. Бактериологическое исследование проведено аналогично примеру 1.

Была выделена культура С. albicans с уровнем выраженности АИгсА 0,53 мкг/мл. Согласно заявляемому способу был сделан вывод о том, что выделенный штамм является патогенным и способен вызвать воспалительные осложнения.

Проведена целенаправленная коррекция микрофлоры влагалища биопрепаратами, что позволило предотвратить воспалительные осложнения после проведенного внутриматочного вмешательства.

Таким образом, использование заявляемого способа позволяет дифференцировать культуры Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Способ дифференциации культур Candida albicans вагинального биотопа женщин на нормальную и патогенную микрофлору, включающий забор исследуемого материала, посев его на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур С. albicans, определение биологических свойств у выделенных микроорганизмов, отличающийся тем, что у выделенных штаммов С. albicans определяют антииммуноглобулиновую активность в отношении секреторного иммуноглобулина А (АИгсА) и к нормальной вагинальной микрофлоре относят штаммы С. albicans, не обладающие АИгсА и обладающие АИгсА при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 0,3 мкг/мл.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицине и касается способа количественного определения нескольких антиген-специфических иммуноглобулинов в анализируемом образце, включающего стадию анализа связывания серии образцов, содержащих иммуноглобулин известной антигенной реактивности, с несколькими антигенными компонентами или их фрагментами, иммобилизованными на твердой подложке.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и ветеринарии и предназначено для определения жизнеспособности новорожденных телят. Способ включает взятие у телят венозной крови через 24-36 часов после рождения в утренние часы до кормления, определение в сыворотке крови концентрации кортизола и дегидроэпиандростерон-сульфата и расчет индекса жизнеспособности как соотношение концентрации кортизола (нМ/л) к концентрации дегидроэпиандростерон-сульфата (нМ/л).

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и медицине, в частности может быть использовано для детектирования присутствия и/или количества наркотических или психотропных веществ в биологических жидкостях человека.
Представленная группа изобретений касается способа получения концентрата культуры клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для приготовления бруцеллезных антигенов, способа получения концентрата клеток бруцелл из штамма Brucella abortus 19 для получения сыворотки бруцеллезной диагностической, способа получения единого бруцеллезного антигена РА, РСК и РДСК, способа получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП), способа получения бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способа получения сыворотки бруцеллезной диагностической, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и РДСК, тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РБП и тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в КР с молоком.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, аллергологии, кардиологии, функциональной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования развития диастолической дисфункции левого и правого желудочков и своевременной коррекции терапии у больных бронхиальной астмой.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития кровотечений у женщин с миомой матки. Способ включает определение уровня аутоантител к TrM-03 в сыворотке крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики вероятности развития локального воспаления в миоматозном узле.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и позволяет прогнозировать угрожающий поздний выкидыш у беременных женщин. Для этого в сроке 5-12 недель гестации определяют относительное количество CD178+ моноцитов гестации в периферической венозной крови.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики ранних стадий наружного генитального эндометриоза путем исследования биологической жидкости.

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для выделения и определения холестерина множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) в сыворотке крови человека.

Изобретение относится к способу продуцирования каротиноидов, в том числе астаксантина. Способ предусматривает культивирование бактерии, принадлежащей к роду Paracoccus, которая одновременно продуцирует астаксантин и кантаксантин, в среде, содержащей биотин в концентрации 0,001-50 мг/л.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выделения липополисахарида Chlamydia trachomatis.
Предложены штамм молочнокислых бактерий Lactococcus lactis subsp. lactis diacetylactis CNCM № I-4404, штамм молочнокислых бактерий Lactococcus lactis subsp.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен способ получения ex vivo культуры альвеолярных макрофагов из операционного материала больных туберкулезом легких для оценки вирулентности М.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для повышения продуктивности лядвенца рогатого. Способ предусматривает выращивание лядвенца рогатого на питательной среде Красильникова-Кореняко, в которую добавляют минеральный азот в дозе 0,072 г/л.

Изобретение относится к микробиологической и пищевой промышленности и касается молочнокислых бактерий Streptococcus thermophilus. Они используются в качестве закваски при получении кисломолочных продуктов обычно в сочетании с культурами болгарской палочки.
Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Staphylococcus xylosus №5/55 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры Федерального бюджетного учреждения науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г.Н.
Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования коринебактерий содержит панкреатический гидролизат кильки, натрия хлорид, D-глюкозу, водный голубой, натрий углекислый, агар микробиологический, геотермальную воду и стерильную дефибринированную кровь человека или животных при заданном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к штаммам Bradyrhizobium japonicum для улучшения роста растения, композиции на основе данных штаммов и семени, покрытому указанной композицией. Для улучшения роста растений предложены штамм Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50608, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50609, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50610, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50611, Bradyrhizobium japonicum NRRL В-50612.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к области биологической борьбы с нежелательной (сорной) растительностью при помощи фитопатогенных грибов.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен способ получения ex vivo культуры альвеолярных макрофагов из операционного материала больных туберкулезом легких для оценки вирулентности М.
Наверх