Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой лекарственное средство с гепатопротекторной активностью, представляющее собой 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндион и его соли общей формулы:

где X выбран из группы: H, Na, K, либо из группы производных гидроксиалкиламмония общей формулы

где R1, R2 выбраны из группы: H, СH₃, СН₂СН₃, СН₂СН₂ОH; R3 выбран из группы: H, СН₂OН; n=1, 2. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лекарственного средства с гепетопротекторной активностью в сочетании с меньшей токсичностью. 7 з.п. ф-лы, 4 пр., 17 табл.

 

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для лечения заболеваний печени различной этиологии, в том числе, в комбинации с другими препаратами.

Известно гепатопротекторное средство, представляющее собой комплекс пептидов, получаемых путем экстрагирования из печени крупного рогатого скота, US 4254103 А, опубл. 03.03.1981.

Также известен гепатопротектор с антиоксидантной активностью, содержащий натуральные вещества, а именно оболочку сердцевины грецкого ореха или ее экстракт JP 2008074807 (А), опубл. 03.04.2008.

Недостатками указанных выше экстрактов животного и растительного происхождения являются:

- невозможность контролировать состав и качество экстрактов;

- частые аллергические реакции;

- невысокая эффективность.

Известно использование в качестве фармацевтического средства для лечения различных заболеваний печени вещества, представляющего производное метионина и аденозинтрифосфата (S-Adenosyl methionine -адеметионин), http://en.wikipedia.org/wiki/S-Adenosyl_methionine, 02.03.2015 (копия ссылки прилагается).

Данное средство принято в качестве прототипа заявленного лекарственного средства с гепатопротекторной активностью.

Препарат показан при хроническом гепатите, внутрипеченочном холестазе, циррозе печени, печеночной энцефалопатии, абстинентном синдроме и др. Адеметионин присутствует во всех живых клетках и играет ключевую роль в важнейших биохимических реакциях (трансметилирование, транссульфирование, синтез полиаминов), однако природный адеметионин нестабилен. Стабильный синтетический адеметионин получен в 1974 г. в Италии, однако его терапевтическую эффективность нельзя признать достаточной.

Задачей настоящего изобретения является повышение эффективности лекарственного средства с гепатопротекторной активностью.

Согласно изобретению поставленная задача решается путем создания лекарственного средства с гепатопротекторной активностью, представляющего собой 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндион и его соли общей формулы:

где X выбран из группы: Н, Na, K, либо из группы производных гидроксиалкиламмония общей формулы

где R1, R2 выбраны из группы: H, СH₃, СН₂СH₃, СН₂СН₂ОН;

R3 выбран из группы: H, СН₂ОН;

n=1, 2;

лекарственное средство может быть приготовлено в виде таблеток или капсул для энтерального приема; или в виде жидкой или лиофильно высушенной субстанции для парентерального приема; или в виде ректальных свеч; или в виде облаток или таблеток, или конфет для рассасывания; может дополнительно содержать гепатопротектор гептрал; или гепатопротектор эссенциале; или гепатопротектор урсодезоксихолевую кислоту.

Изобретение распространяется на все пространственные изомеры заявляемых веществ и все их таутомерные формы.

Заявителю не известны какие-либо источники информации, в которых бы содержались сведения об идентичных технических решениях, что позволяет сделать вывод о соответствии заявленного изобретения критерию "Новизна".

Благодаря реализации заявленного технического решения достигается технический результат, состоящий в значительном повышении эффективности лекарственного средства.

Заявителем не выявлены какие-либо источники информации, содержащие сведения о влиянии отличительных признаков изобретения на достигаемый вследствие их реализации технический результат. Это, по мнению заявителя, свидетельствует о соответствии данного технического решения условию патентоспособности «Изобретательский уровень».

Для решения поставленной задачи предпочтительны производные, указанные в таблице 1.

Производное 1 заявляемого вещества синтезируют в 4 этапа в соответствии со схемой 1, а производные 2-9, являющиеся солями производного 1, получают действием на производное 1 соответствующих оснований по схеме 2.

Схема 1. Синтез 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндиона (производное 1)

Схема 2. Синтез производных 2-9

В таблице 2 приведена расшифровка реагентов (оснований), использованных для синтеза производных 2-9.

Пример 1. Получение 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндиона (производное 1).

На первом этапе 1 моль (172 г) п-броманилина растворяют при нагревании до 50°C в 2,5 л воды с добавкой 1,1 моль НСl (105 мл 30% соляной кислоты). К раствору приливают при перемешивании раствор 1,1 моль (81 г) цианата калия в 400 мл воды. Полученную смесь нагревают 15 мин на водяной бане, затем охлаждают, отделяют белый кристаллический осадок и промывают его водой, затем водным спиртом, после чего осадок сушат на воздухе до постоянного веса при 50°C. Получают 175 г N-(4-бромфенил)мочевины в виде бесцветного кристаллического продукта. Выход 81% от теоретического.

На втором этапе в 600 мл безводного метанола растворяют 2 моль (46 г) металлического натрия. К полученному раствору прибавляют 1 моль (160 г) диэтилмалонового эфира и перемешивают 5 минут. Затем прибавляют 1 моль (215 г) N-(4-бромфенил)мочевины и кипятят смесь 6 ч с обратным холодильником при перемешивании. Затем охлаждают смесь до 25°C и прибавляют 2 л воды. Раствор фильтруют от осадка, после чего фильтрат подкисляют НСl до pH 1, выпавший осадок фильтруют и промывают водой. Полученный сырой продукт обрабатывают при перемешивании 2 л воды с добавкой 100 мл 25%-ного аммиака, нерастворенный осадок отбрасывают, а раствор подкисляют НСl до pH 1, выпавший осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Получают 250 г 1 -(4-бромфенил)барбитуровой кислоты в виде бесцветного кристаллического продукта с температурой плавления 261-263°C. Выход 89% от теоретического.

На третьем этапе растворяют 1 моль (283 г) 1-(4-бромфенил)барбитуровой кислоты в 3 л воды, содержащей 1 моль (40 г) NaOH. К полученному прозрачному раствору приливают раствор 75 г (1,1 моль) нитрита натрия в 400 мл воды и затем перемешивают. Охлаждают раствор до 10°C, затем при перемешивании, по каплям прибавляют 1,2 моль (72 г) уксусной кислоты и выдерживают при 25°C 1 час. Затем к полученной смеси прибавляют 200 мл 30%-ной соляной кислоты и перемешивают 10 минут. Сформировавшийся осадок фильтруют, промывают 1%-ным раствором НСl, затем водой и сушат. Получают 284 г 1-(4-бромфенил)виолуровой кислоты в виде светло-желтого кристаллического продукта с температурой плавления 220°C (с разл.). Выход 91% от теоретического.

На четвертом этапе к 9,36 г (0,03 моль) 1-(4-бромфенил)виолуровой кислоты добавляют 50 мл серной кислоты 90% и перемешивают при комнатной температуре до растворения. Полученный раствор по каплям, при интенсивном перемешивании приливают к 300 мл ледяной воды, содержащей 200 г крошеного льда, контролируя, чтобы температура смеси не превышала 3°C. Сформировавшийся осадок отделяют на фильтре Шота, промывают холодной водой до нейтральной реакции смывов и сушат на воздухе при комнатной температуре, получая 7,10 г целевого продукта 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндиона (1) в виде практически бесцветного мелкокристаллического порошка.

Выход и температура плавления полученного вещества (1) приведены в таблице 3, данные спектра ПМР - в таблице 4, данные элементного анализа - в таблице 5.

Пример 2. Синтез производных (2-4).

К 16,50 г (0,05 моль) 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндиона (1) приливают 300 мл воды, содержащей эквимольное количество соответствующего основания (NaOH, КОН или трис-оксиметиламинометана, см. таблицу 2). Смесь нагревают до температуры не выше 60°C и перемешивают 10 мин, после чего фильтруют раствор, разливают во флаконы для лиофильной сушки и замораживают при (-20)°C. После лиофилизации получают целевой продукт (2-4) в виде окрашенной пористой массы.

Пример 3. Синтез производных (5-9).

К 16,50 г (0,05 моль) 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндиона (1) приливают 60 мл воды и добавляют эквимольное количество соответствующего основания (1-аминопропан-3-ола, диметиламиноэтан-2-ола, диэтиламиноэтан-2-ола, N,N-диэтаноламина или N-триэтаноламина) (15-20) (см. таблицу 2). Смесь нагревают до температуры не выше 60°C и перемешивают 10 мин, при неполном растворении добавляют еще 10 мл воды и перемешивают 5 мин до полного растворения. Раствор фильтруют и затем растворитель удаляют в вакууме на роторном испарителе при температуре не выше 30°C. Остаток промывают 30 мл спирта, отфильтровывают осадок и сушат на воздухе при комнатной температуре, получая производные (5-9) в виде окрашенного кристаллического порошка.

Выход и температура плавления производных 1-9 приведены в таблице 3, данные спектров ПМР - в таблице 4, данные элементного анализа - в таблице 5.

Пример 4. Изучение гепатопротекторной активности производных 1-9 проводили на крысах линии Wistar обоего пола массой 195-245 граммов. Животные находились в стандартных условиях содержания при естественном световом режиме, свободном доступе к воде и пище. Острый токсический гепатит у крыс вызывали внутрижелудочным введением 50% раствора четыреххлористого углерода (ССl₄) в оливковом масле в дозе 1 мл/кг в течение 6 дней. Через 10 дней у всех экспериментальных животных по морфологической картине печени подтверждалось наличие токсического гепатита. Общая продолжительность эксперимента составляла 20 дней.

Испытуемые препараты вводили перорально в виде суспензии в оливковом масле 1 раз в сутки после формирования модельной патологии или внутривенно в дозе 25 мг/кг. Динамику веса крыс определяли на весах фирмы «Sartorius».

Результаты приведены в таблицах 6, 7.

Исследование эффективности производных №1 и №2 было дополнительно осуществлено с участием больных (мужчины и женщины в возрасте от 25 до 60 лет) с диагнозами: токсическое поражение печени, алкогольный гепатит, алкогольная болезнь печени (жировой гепатоз), алкогольный цирроз печени.

Критерии включения: повышение уровней аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТП) минимум в 2 раза от верхней границы нормы.

Производное №1

Пациенты опытной группы (в количестве 30 человек) принимали производное №1 в форме капсул, содержащих 250 мг препарата в общей дозе 1000 мг/сут.

Пациенты контрольной группы (в количестве 9 человек) принимали плацебо (капсулы, наполненные мелом).

Динамика снижения АлАТ приведена в таблице 8.

Динамика снижения АсАТ приведена в таблице 9.

Динамика снижения ГГТП приведена в таблице 10.

Производное №2

Пациентам опытной группы (в количестве 30 человек) вводили производное №2 в форме лиофилизата для в/в инъекций, содержащих 50 мг препарата, в общей дозе 300 мг/сут.

Пациентам контрольной группы (в количестве 10 человек) в качестве плацебо вводили 0,9% раствор NaCl.

Динамика снижения АлАТ приведена в таблице 11.

Динамика снижения AcAT Приведена в таблице 12.

Динамика снижения ГГТП приведена в таблице 13.

Эффективность производного №4 по дополнительным показателям исследована на лабораторных крысах.

Для моделирования токсического гепатита использовали сочетанное введение крысам дихлорэтана и ацетаминофена в дозах 300 и 250 мг/кг соответственно. Через 10 дней у всех экспериментальных животных по морфологической картине печени подтверждалось наличие токсического гепатита. В группе нелеченного контроля, к 10-му дню исследования погибло 4 животных из 10. В группах, где животным энтерально или парентерально вводили производное №4, ни одно животное не погибло.

С этого времени на протяжении 10 дней экспериментальным животным с лечебной целью вводили 1 раз в сутки производное №4 (50 мг/кг, в/ж в крахмальной слизи) или производное №4 (10 мг/кг, в/в, в хвостовую вену).

Также было исследовано совместное действие заявляемых соединений и известных препаратов для лечения заболеваний печени.

Для моделирования токсического гепатита использовали сочетанное введение крысам дихлорэтана и ацетаминофена в дозах 500 и 500 мг/кг соответственно. Через 10 дней у всех экспериментальных животных по морфологической картине печени подтверждалось наличие токсического гепатита.

Результаты исследования приведены в таблице 17.

1. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью, характеризующееся тем, что представляет собой 3-(4-бромфенил)-6,6-дигидрокси-5-гидроксииминогексагидро-2,4-пиримидиндион и его соли, общей формулы:

где X выбран из группы: H, Na, K, либо производное гидроксиалкиламмония общей формулы

где R1, R2 выбраны из группы: H, CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂OH;
R3 выбран из группы: H, CH₂OH;
n=1, 2.

2. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что приготовлено в виде таблеток или капсул для энтерального приема.

3. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что приготовлено в виде жидкой или лиофильно высушенной субстанции для парентерального приема.

4. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что приготовлено в виде ректальных свеч.

5. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что приготовлено в виде облаток или таблеток, или конфет для рассасывания.

6. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что дополнительно содержит гепатопротектор гептрал.

7. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что дополнительно содержит гепатопротектор эссенциале.

8. Лекарственное средство с гепатопротекторной активностью по п. 1, отличающееся тем, что дополнительно содержит гепатопротектор урсодезоксихолевую кислоту.