Борьба с эктопаразитами
Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для предохранения животных от эктопаразитов. Способ включает обработку млекопитающего, не являющегося человеком, зараженного эктопаразитами или подверженного риску заражения эктопаразитами, композицией, содержащей 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил)пиразол-5-карбоксамид или его соль, где млекопитающее, не являющееся человеком, выбрано из домашнего скота, домашних млекопитающих и подопытных млекопитающих. Заявленное изобретение высокоэффективно для предохранения животных от эктопаразитов. 19 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.
При разведении животных, таких как домашние животные и домашний скот, эктопаразиты вызывают большие потери, включающие экономические потери, в частности потому, что многие эктопаразиты могут действовать как переносчики болезней.
Борьба с эктопаразитами животных является постоянной проблемой. Например, многочисленные линии клещей выработали устойчивость к широкому кругу пестицидов, таких как мышьяк, гексахлоргексан, камфехлор, ДДТ, пиретрины, карбаматы и фосфорорганические соединения, вопреки тому факту, что указанные соединения обладают различными методами воздействия и несколькими разными главными местами направления атаки в эктопаразите. Поэтому общепринято, что крайне желательно разработать и промышленно произвести дополнительные активные агенты с новыми способами воздействия для борьбы с эктопаразитами.
Хорошо известно, что соединения, содержащие хиназолиновое, пиразольное или пиримидинове ядро, находят использование в качестве фунгицидов, инсектицидов и митоцидов в химической обработке сельскохозяйственных культур (например, патент США 5411963). Однако несколько сообщений указывают, что феназахин и тебуфенпирад имеют ограниченный спектр активности в отношении насекомых-вредителей, а также относительно низкую токсичность в отношении полезных видов клещей при обычном использовании (Pest Manag. Sci. 2005 61(2): 103-10).
В данном описании описаны способы предохранения от эктопаразитов и/или подавления эктопаразитов животных. Способы включают применение к животному эффективного количества композиции, которая содержит одно или несколько из: 4-трет-бутилфенетилхиназолин-4-илового эфира (феназахин), 4-хлор-5-этил-2-метил-N-[(4-трет-бутилфенетил)метил]пиразол-3-карбоксамида (тебуфенпирад), 5-хлор-N-[2-[4-(2-этоксиэтил)-2,3-диметилфенокси]этил]-6-этил-4-пиримидинамина (пиримидифен) и 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил]пиразол-5-карбоксамида (толфенпирад). Предполагается, что феназахин, тебуфенпирад, пиримидифен и толфенпирад воздействуют на метаболизм путем ингибирования митохондриальной цепи переноса электрона путем связывания с комплексом I на коферменте Q0 и представляют новый способ воздействия для борьбы с эктопаразитами при охране здоровья животных.
Неожиданные противоклещевые и противоблошиные свойства некоторых ингибиторов митохондриального переноса электронов имеют существенное значение, поскольку имеется относительно немного сельскохозяйственных пестицидов, которые могут быть эффективно использованы против эктопаразитов животных.
В данном описании описаны композиции и способы борьбы с эктопаразитами животных. Способы влекут за собой использование композиций, которые содержат 4-трет-бутилфенетилхиназолин-4-иловый эфир (формула I), 4-хлор-5-этил-2-метил-N-[(4-трет-бутилфенетил)метил]пиразол-3-карбоксамид (формула II), 5-хлор-N-[2-[4-(2-этоксиэтил)-2,3-диметилфенокси]этил]-6-этил-4-пиримидинамин (формула III) и 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил]пиразол-5-карб-оксамид, представленный формулой IV, для борьбы с иксодовыми клещами, клещами, блохами, мухами и вшами, которые заражают животных.
Формула I
Формула II
Формула III
Формула IV
Соединения формулы I, формулы II, формулы III и формулы IV пригодны для борьбы с членистоногими, которые поражают сельскохозяйственную домашнюю живность, такую как, например, коровы, овцы, козы, лошади, свиньи, ослы, верблюды, буйволы, кролики, куры, индейки, утки, гуси и другие домашние животные, такие как, например, собаки, кошки, содержащиеся в клетках птицы, аквариумные рыбки, и так называемые экспериментальные животные, такие как, например, хомяки, морские свинки, крысы и мыши. Борьбой с такими членистоногими можно уменьшить число случаев смерти и снижения продуктивности (по мясу, молоку, шерсти, коже, яйцам и т.п.), так что является возможным более экономичное и простое животноводство.
В данном описании описан способ обработки субъектов, не являющихся человеком, где способ включает введение субъекту композиции, содержащей соединение формулы I или его соль.
В данном описании описан способ обработки субъектов, не являющихся человеком, где способ включает введение субъекту композиции, содержащей соединение формулы II или его соль.
В данном описании описан способ обработки субъектов, не являющихся человеком, где способ включает введение субъекту композиции, содержащей соединение формулы III или его соль.
В данном описании описан способ обработки субъектов, не являющихся человеком, где способ включает введение субъекту композиции, содержащей соединение формулы IV или его соль.
В различных вариантах осуществления описанных в данном описании способов: субъектом, не являющимся человеком, является млекопитающее; субъектом, не являющимся человеком, является птица; введение включает местное введение; введение включает парентеральное (например, пероральное) введение; и субъект, не являющийся человеком, заражен эктопаразитом или рискует быть зараженным эктопаразитом. В различных вариантах осуществления: эктопаразитом является членистоногое; эктопаразит выбирают из семейств Ixodiae, Argasidae, Psoroptidae, Sarcoptodae, Muscidae, Trichodectidae или Pulicidae; эктопаразит выбирают из Boophilus spp., Rhipicephalus spp., Dermacentor spp., Hyalomma spp., Amblyomma spp., Otobius spp., Ornithodoros spp., Damalinia spp., Stomoxys spp., Bovicola spp. или Ctenocephalides spp.
В различных вариантах осуществления описанных в данном описании способов: композиция является твердой; композиция является жидкостью или гелем; введение включает нанесение жидкой композиции, содержащей данное соединение, субъекту, не являющемуся человеком; введение включает нанесение твердой композиции, содержащей данное соединение, субъекту, не являющемуся человеком; введение включает опрыскивание, окунание или нанесение мазков субъекту, не являющемуся человеком; соединение присутствует в жидкой композиции в концентрации от 0,01 до 50% масс.; соединение присутствует в жидкой композиции в концентрации от 0,02 до 10% масс.; млекопитающее выбирают из коров, овец, коз, свиней, собак, кошек и лошадей; местное введение включает прикрепление к субъекту, не являющемуся человеком, твердого изделия, включающего композицию (например, бирки, ошейника, подвески к ошейнику, подвески к уху, подвески к хвосту, повязки на конечность или поводка); твердое изделие включает полимерный материал.
В данном описании описана фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его соль, в единичной дозированной форме.
В данном описании описана фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы II или его соль, в единичной дозированной форме.
В данном описании описана фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы III или его соль, в единичной дозированной форме.
В данном описании описана фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы IV или его соль, в единичной дозированной форме.
В данном описании описана композиция, содержащая соединение формулы I или его соль, где композиция пригодна для местного введения субъекту, не являющемуся человеком.
В данном описании описана композиция, содержащая соединение формулы II или его соль, где композиция пригодна для местного введения субъекту, не являющемуся человеком.
В данном описании описана композиция, содержащая соединение формулы III или его соль, где композиция пригодна для местного введения субъекту, не являющемуся человеком.
В данном описании описана композиция, содержащая соединение формулы IV или его соль, где композиция пригодна для местного введения субъекту, не являющемуся человеком.
В различных вариантах осуществления композиция представляет собой порошок.
Детали одного или нескольких вариантов осуществления представлены в прилагаемом описании ниже. Другие характерные признаки, цели и преимущества изобретения будут ясны из описания и формулы изобретения.
Несколько соединений, обладающих активностью в качестве ингибиторов митохондриального комплекса I, были выпущены на рынок в 1990-х годах для целей защиты зерновых культур и других растений от хищничества вредителей растений, таких как клещики паутинные (например, клещик паутинный двупятнистый) или галловые клещи (например, клещик Шлехтендаля). Указанные соединения включают феназахин (4-трет-бутилфенетилхиназолин-4-иловый эфир, формула I),
тебуфенпирад (4-хлор-5-этил-2-метил-N-[(4-трет-бутилфенетил)метил]пиразол-3-карбоксамид, формула II),
пиримидифен (5-хлор-N-[2-[4-(2-этоксиэтил)-2,3-диметилфенокси]этил]-6-этил-4-пиримидинамин, формула III),
толфенпирад (4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил]пиразол-5-карбоксамид, формула IV),
фенпироксимат (трет-бутил-4-[[(1,3-диметил-5-феноксипиразол-4-ил)метилиденамино]оксиметил]бензоат и
пиридабен (4-хлор-2-трет-бутил-5-[(4-трет-бутилфенил)метилсульфанил]пиридазин-3-он).
Формула V (фенпироксимат)
Формула VI (пиридабен)
Несмотря на воздействие на консервативный центр (кофермент Q0 комплекса I) и вмешательство в существенно важный процесс (митохондриальный перенос электронов), указанные пестициды, тем не менее, демонстрируют удивительную и непредсказуемую видовую селективность. Данные соединения, хотя использовались главным образом в качестве акарицидов против клещей-паразитов растений, обычно оказывают минимальное воздействие на хищных клещей и полезных насекомых в полевых условиях (Pest Manag. Sci. 2005 61(2): 103-10).
Конкретным примером сильной зависящей от вида разницы в силе ингибиторов комплекса I виден для феназахина в работе Hackler et al. Фенезахин является высокоактивным против тли хлопковой (LC50 2,6 ч/млн) и против личинок москита (LC50 0,725 ч/млн), но имеет низкую силу против совки капустной (LC50 188 ч/млн) и больше 400 ч/млн активности против и южной блошки длинноусой, и совки табачной (Hackler et al. 1988 Development of broad-spectrum insecticide activity from a miticide. In: Synthesis and Chemistry of Agrochemicals V (Bakeret al., eds), American Chemical Society, Washington DC, pp. 147-156). Приведенные различия видовой чувствительности могут быть обусловлены внутренними различиями активности (т.е. изменениями активных центров), различиями метаболизма и/или различиями проникновения. Например, феназахин активно метаболизируется совкой, что может объяснить низкую эффективность против этого вида. Кроме того, феназахин более экстенсивно разлагается микросомами печени крысы, чем микросомами печени форели, что может частично объяснить более высокую токсичность соединения для рыб, чем для млекопитающих. В настоящее время такие видозависимые различия во взаимодействиях соединений с активными центрами, или в метаболизме, или различия проникновения невозможно предсказать априори.
Авторы неожиданно обнаружили, что феназахин (4-трет-бутилфенетилхиназолин-4-иловый эфир) и некоторые другие ингибиторы митохондриального комплекса I активны в отношении блох и клещей, двум дальнородственных групп членистоногих, обе из которых являются экономически важными эктопаразитами при разведении домашних животных.
Соединения, 4-трет-бутилфенетилхиназолин-4-иловый эфир, 4-хлор-5-этил-2-метил-N-[(4-трет-бутилфенетил)метил]пиразол-3-карбоксамид, 5-хлор-N-[2-[4-(2-этоксиэтил)-2,3-диметилфенокси]этил]-6-этил-4-пиримидинамин и 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил]пиразол-5-карбоксамид рассматриваются в качестве соединений, которые должны быть активны против паразитов животных (эктопаразитов), таких как панцирные клещи, аргассовые клещи, чесоточные клещи, краснотелки, вши, волосяные вши, птичьи вши и блохи. Данные паразиты включают эктопаразитов отряда Acari семейства Ixodiae, например, клещей кольчатых, таких как Boophilus spp., например, Boophilus microplus, Boophilus decoloratus и Boophilus annulatus; Rhipicephalus spp., таких как Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus pulchellus и Rhipicephalus evertsi; Hyalomma spp., таких как Hyalomma truncatum, Hyalomma rufipes, Hyalomma detritum, Hyalomma marginatum, Hyalomma dromedarii и Hyalomma anatolicum excavatum; видов Dermacentor, таких как Dermacentor variabilis и Dermacentor andersoni; Amblyomma spp., таких как Amblyomma variegatum, Amblyomma herbraeum, Ablyomma pomposum, Amblyomma americanum, Amblyomma cayennenese, Amblyomma maculatum, Amblyomma gemma и Amblyomma lepidum; семейства Argasidae, например, Otobius spp., таких как Otobius megnini и Ornithodoros spp., таких как Ornithodoros savignui, Ornithodoros lahorensis и Ornithodoros tholozani; семейства Psoroptidae, например, Psoroptos ovis и Psoroptes equi; и семейства Sarcoptidae, например, Sarcoptes bovis или Sarcoptes scabici; эктопаразитов отряда Diptera, которые включают жалящих и сосущих мух; эктопаразитов отряда Phthiraptera, которые включают сосущих вшей и пухоедов; и эктопаразитов отряда Siphonaptera, включающих, но не ограниченных ими, блоху кошачью (Ctenocephalides felis) и блоху собачью (Ctenocephalides canis).
Активные соединения могут быть введены энтерально в форме, например, таблеток, капсул, питья, вливаний, гранул, паст, болюсов, способом с пищей, свечами. Соединения могут быть введены парентерально, например, инъекциями (внутримышечно, подкожно, внутривенно, внутрибрюшинно и т.п.). Соединения могут быть также введены в виде имплантатов, назальным введением, чрескожным введением в форме, например, погружения или окунания, разбрызгивания, орошения, нанесения пятен, мытья, опыления и с помощью содержащих активное соединение формовых изделий, таких как ошейники, подвески к ошейнику, подвески к хвосту, повязки на конечности, поводки, маркирующие устройства и т.п.
Содержание активного соединения в готовых формах, изготовленных из имеющихся в продаже композиций, может варьироваться в широких пределах. Концентрация активного соединения в готовых формах может составлять от 0,0000001 до 95% масс. активного соединения, предпочтительно между 0,0001 и 10% масс.
При применении для рогатого скота, домашней птицы, домашних животных комбинации активных соединений могут использоваться в виде форм (например, порошков, эмульсий, текучих субстанций), содержащих активные соединения в количестве от 1 до 80% масс., или непосредственно или после 100-10000-кратного разведения, или они могут быть использованы в виде химической протравы.
Соединения формул I, II, III и IV применяют к эктопаразитам отряда Acari в форме свободного основания или в форме сельскохозяйственно приемлемой кислотно-аддитивной соли, например, в виде гидрохлорида или ацетата, путем местной обработки животных, например, опылением, окунанием или обработкой разбрызгиванием разбавленной водной формой. Соединения формул I, II, III и IV предпочтительно используют в форме свободного основания. Степень разведения может варьироваться, хотя предпочтительно используют концентрацию активного соединения в интервале от 0,01 до 50% масс., в особенности от 0,02 до 10% масс. Обработку предпочтительно повторяют через интервалы от 7 до 21 днями.
Активный агент может быть удобно введен в композицию в виде тонкодисперсного порошка, тонкодисперсного концентрата, смачиваемого порошка, эмульгируемого концентрата или в виде раствора с обычными твердыми или жидкими адъювантами.
Особо предпочтительными композициями по изобретению являются жидкие концентраты, в особенности концентраты. содержащие предпочтительно от 3,0 до 50% масс. активного агента, которые должны быть разбавлены водой перед применением. Такие жидкие концентраты предпочтительно включают эмульгирующий агент, такой как простой полигликолевый эфир, полученный из спирта с высокой молекулярной массой, меркаптана или алкилфенола с алкиленоксидом, а также разбавитель, такой как жидкий ароматический углеводород или минеральное масло.
Подходящими твердыми носителями являются, например, соли аммония и молотые природные материалы, такие как каолин, глины, тальк, мел, кварц, аттапульгит, монтморрилонит или диатомитовая земля, и молотые синтетические материалы, такие как высокодисперсный диоксид кремния, оксид алюминия и силикаты; подходящими твердыми носителями для гранул являются, например, молотые и фракционированные природные породы, такие как кальцит, мрамор, пемза, сепиолит и доломит; или иначе синтетические гранулы из неорганических и органических тонко измельченных материалов и гранулы из органических материалов, таких как опилки, скорлупа кокосовых орехов, кукурузные початки, стебли табака. Подходящими эмульгаторами и/или пенообразователями являются, например, неионные и анионные эмульгаторы, такие как полиоксиэтиленовые эфиры жирных кислот, полиоксиэтиленовые простые эфиры жирных спиртов, например, алкилариловые эфиры полигликоля, алкилсульфонаты, алкилсульфаты, арилсульфонаты, или еще гидролизаты протеина; подходящими диспергаторами являются, например, отработанные лигнин-сульфитные растворы и метилцеллюлоза.
Карбоксиметилцеллюлоза и природные и синтетические полимеры в форме порошков, гранул или латексов, такие как аравийская камедь, поливиниловый спирт и поливинилацетат, или иначе натуральные фосфолипиды, такие как цефалины и лецитины, и синтетические фосфолипиды могут быть использованы в рецептурах. Другими добавками могут быть минеральные и растительные масла. Возможно использование красителей, таких как неорганические пигменты, например, оксид железа, оксид титана и берлинская лазурь, и органические красители, такие как ализариновые красители, азокрасители и металлофталоцианиновые красители, и следовые нутриенты, такие как соли железа, марганца, бора, меди, кобальта, молибдена, цинка.
Рецептуры обычно включают от 0,1 до 95% масс. активного соединения, предпочтительно от 0,5 до 90%.
Действие соединений формул I, II, III и IV против эктопаразитов животных можно видеть из примеров, которые следуют ниже. Примеры должны рассматриваться только как иллюстративные и не ограничивающие совсем каким-либо образом остальную часть изобретения. Все публикации, цитированные в данном описании, введены тем самым ссылкой во всей их полноте.
Пример 1: Активность против личинок A. americanum в испытании на выживание при погружении
Используя описанную ранее методику, которая может эффективно предсказать действенность соединения против взрослых клещей в природных условиях (White W.H. et al., An in vitro larval immersion microassay for identifying and characterizing candidate acaricides. J. Med. Entomol. 2004 Nov.; 41(6): 1034-42), испытуемые соединения из исходного диметилсульфоксидного (ДМСО) раствора или из одного 2% ДМСО распределяли в круглодонный 96-луночный планшет и смешивали с водным буферным раствором, содержащим 1% этанола и 0,2% Triton X100. Конечная концентрация ДМСО не превышала 2%. Однозвездных клещей личиночной стадии (Amblyomma americanum) распределяли по лункам, содержащим испытуемые соединения, и окунали на 30 минут. Затем клещей распределяли по тканным биопсийным мешочкам, которым давали сохнуть в течение 1 часа. После сушки мешочки инкубировали при 25°С и влажности 95% в течение 24 часов, и подсчитывали количество живых и мертвых личинок. Результаты данного опыта представлены в таблице 1.
|
Таблица 1
Число живых/общее число личинок клеща на 24 ч после обработки |
|||
| Обработка: Концентрация | |||
| 2% | |||
| ДМСО | 43/2 | ||
| Формула I | 0,05% | 0,01% | 0,001% |
| 0/48 | 0/51 | 23/80 | |
| Формула II | 0,05% | 0,01% | 0,001% |
| 0/69 | 0/77 | 38/85 | |
| Формула III | 0,05% | 0,01% | 0,001% |
| 0/55 | 0/62 | 24/57 | |
| Формула IV | 0,05% | 0,01% | 0,001% |
| 0/76 | 0/79 | 58/114 |
Оценка активности испытуемых соединений против яиц блох является широко используемым испытанием для определения товарной эффективности против этих насекомых-паразитов (McTier T.L. et al., Evaluation of the effects of selamectin against adult and immature stages of fleas (Ctenocephalides felis) on dogs and cats. Vet. Parasitol. 2000 Aug. 23; 91(3-4): 201-12; Dryden M. et al. Efficacy of topical applied formulation of metaflumizone on cats against the adult cat flea, flea eggs production and hatch and adult flea emergence. Vet. Parasitol. 2007 Dec. 15; 150(3): 263-7). Соединения растворяли в ацетоне, 100 мкл каждого раствора помещали в 5 мл стеклянные чашки и давали им высохнуть на воздухе. Сорок яиц блохи кошачьей (Ctenocephalides felis) возрастом менее 48 часов, а также блошиные отходы (главным образом фекальный материал взрослых блох и перхоть хозяина) помещали в чашки. Чашки покрывали бумажным полотенцем, чтобы сделать возможным воздухообмен, и инкубировали при 25°С и влажности 90% в течение 5 суток и подсчитывали число личинок. Результаты данного исследования показаны в таблице 2.
|
Таблица 2
Число вылупившихся личинок блох (процент от общего числа яиц) из 40 яиц после 5 суток |
|||
| Обработка: Количество на чашку | |||
| Ацетон | 8 (20%) | ||
| Формула I | 1 мг | 100 мкг | 10 мкг |
| 1 (2,5%) | 1 (2,5%) | 4 (10%) | |
| Формула II | 1 мг | 100 мкг | 10 мкг |
| 1 (2,5%) | 1 (2,5%) | 7 (17,5%) | |
| Формула III | 1 мг | 100 мкг | 10 мкг |
| 1 (2,5%) | 0 (0%) | 1 (2,5%) | |
| Формула IV | 1 мг | 100 мкг | 10 мкг |
| 0 (0%) | 0 (0%) | 6 (15%) |
1. Способ обработки млекопитающего, не являющегося человеком, зараженного эктопаразитами или подверженного риску заражения эктопаразитами, где способ включает введение млекопитающему, не являющемуся человеком, композиции, содержащей 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил)пиразол-5-карбоксамид или его соль, где млекопитающее, не являющееся человеком, выбрано из домашнего скота, домашних млекопитающих и подопытных млекопитающих.
2. Способ по п.1, в котором млекопитающее, не являющееся человеком, заражено эктопаразитом.
3. Способ по п.1, где млекопитающее, не являющееся человеком, рискует быть зараженным эктопаразитом.
4. Способ по п.1, где эктопаразитом является членистоногое.
5. Способ по п.1, где эктопаразит выбран из семейств Ixodiae, Argasidae, Psoroptidae, Sarcoptodae, Muscidae, Trichodectidae или Pulicidae.
6. Способ по п.1, где эктопаразит выбран из Boophilus spp., Rhipicephalus spp., Dermacentor spp., Hyalomma spp., Amblyomma spp., Otobius spp., Ornithodoros spp., Damalinia spp., Stomoxys spp., Bovicola spp. или Ctenocephalides spp.
7. Способ по п.1, где композиция представляет собой твердое вещество.
8. Способ по п.1, где композиция представляет собой жидкость или гель.
9. Способ по п.8, в котором введение включает нанесение жидкой композиции млекопитающему, не являющемуся человеком.
10. Способ по п.7, в котором введение включает контактирование млекопитающего, не являющегося человеком, с твердой композицией.
11. Способ по п.1, в котором введение включает опрыскивание, окунание или нанесение мазков млекопитающему, не являющемуся человеком.
12. Способ по п.8, в котором 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил)пиразол-5-карбоксамид или его соль присутствует в жидкой композиции в концентрации от 0,01 до 50 мас.%.
13. Способ по п.8, в котором 4-хлор-3-этил-1-метил-N-[4-(п-толилокси)бензил)пиразол-5-карбоксамид или его соль присутствует в жидкой композиции в концентрации от 0,02 до 10 мас.%.
14. Способ по п.1, в котором млекопитающее, не являющееся человеком, выбирают из коров, овец, коз, свиней, собак, кошек и лошадей.
15. Способ по п.1, где местное применение включает прикрепление к млекопитающему, не являющемуся человеком, твердого изделия, включающего композицию.
16. Способ по п.15, в котором твердое изделие выбирают из ошейника, подвески к ошейнику, подвески к уху, подвески к хвосту, повязки на конечность или поводка.
17. Способ по п.16, в котором твердое изделие включает полимерный материал.
18. Способ по п.1, в котором млекопитающее, не являющееся человеком, выбрано из домашнего скота и домашних млекопитающих.
19. Способ по любому из пп.1, 14 и 18, в котором эктопаразитом является блоха.
20. Способ по любому из пп.1, 14 и 18, в котором эктопаразитом является клещ.
