Способ количественного определения групп стигминов

Авторы патента:

Сливкин Алексей Иванович (RU)

Дьякова Нина Алексеевна (RU)

Калашников Валентин Петрович (RU)

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

G01N33/15 - медицинских препаратов

Владельцы патента RU 2597796:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") (RU)

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения группы стигминов в субстанциях. Сущность способа заключается в том, что в исследуемую пробу прибавляют 20-30 мл очищенной воды для аминостигмина, ривастигмина, пиридостигмина бромида или спирта этилового 95% для неостигмина метилсульфата и физостигмина салицилата. Далее смесь выдерживают при комнатной температуре и прибавляют тот же растворитель до метки с дальнейшим прибавлением к аликвотной части приготовленного раствора спиртового раствора КОН, нагреваают в течение 10 минут, охлаждают и обрабатывают щелочным раствором диазореактива 2,5 мл 0,1 М раствора NH₄OH и фотоэлектроколориметрируют окрашенные растворы, раствор сравнения - раствор диазотированного n-анизидина и калия гидроксида. Использование способа позволяет с высокой точностью определять количественное содержание стигминов в субстанциях. 7 табл., 1 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтическому анализу, и может быть использовано для количественного определения лекарственных средств группы стигминов, а именно аминостигмина, ривастигмина, пиридостигмина бромида, неостигмина метилсульфата и физостигмина салицилата в субстанциях.

Известен способ количественного определения аминостигмина, ривастигмина, пиридостигмина бромида, неостигмина метилсульфата, который заключается в кипячении исследуемых препаратов в водном растворе щелочи и отгонке с водяным паром диметиламина, который поглащают раствором борной кислоты и титруют 0,1М раствором соляной кислоты в присутствии смешанного индикатора [1, 2, 3, 4, 5].

Известены способы количественного определения неостигмина метилсульфата, такие как трилонометрический, с применением тетрароданоцинката аммония, йодометрический с кислотой и в нейтральной средах [1, 4], ионнообменной хроматографии [4], флуориметрический [5].

Известен способ количественного определения физостигмина салицилата, который заключается в титровании его, растворенного в смеси спирта и хлороформа 0,1М раствором NaOH при наличии фенолфталеина до розового окрашивания [3, 4].

Недостатками известных способов являются малая чувствительность и неспецифичность.

Технический результат изобретения заключается в увеличении точности, специфичности и чувствительности количественного определения лекарственных средств группы стигминов, а также в снижении токсичности способа за счет использования лишь нетоксичных реактивов.

Технический результат достигается тем, что точно отмеренные пипеткой объемы ампульных растворов аминостигмина (около 1,0 мл 0,2% раствора), ривастигмина (около 1,0 мл 0,25% раствора), пиридостигмина бромида (около 1,0 мл 0,5% раствора), физостигмина (около 1,0 мл 0,1% раствора) и точную навеску неостигмина метилсульфата (около 0,1 г) помещают в мерные колбы емкостью 100 мл, прибавляют 20-30 мл очищенной воды для аминостигмина, ривастигмина, пиридостигмина бромида или спирта этилового 95% для неостигмина метилсульфата и физостигмина салицилата, выдерживают при перемешивании и комнатной температуре. Затем доводят указанными растворителями до метки объемы колб. Для проведения количественного определения с помощью пипетки отбирают объемы выше приготовленных растворов группы стигминов - 6,0; 6,5; 7,0; 7,5 и 8,0 мл и прибавляют 7,5 мл спиртового раствора КОН, слабо нагревают в течение 10-15 минут при перемешивании. Происходит выделение СО₂, метиламина, диметиламина и образование производных пиридина, производных фенолов и эзеролина (оксипроизводного эзерина). После охлаждения к реакционной смеси каплями прибавляют 3,0 мл химического реактива - диазотированного n-анизидина, приготовленного по примеру 1, и 2,5 мл 0,1 М раствора NH₄OH. Через 2-3 мин появляется ярко-красное окрашивание, устойчивое в течение 2 часов, обусловленное продуктами реакции, приведенными в таблице 1. К объемам растворов прибавляют по 0,5 мл 0,1 М раствора КОН для сохранения устойчивости окраски растворов. Измеряют оптическую плотность окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при толщине окрашенного слоя 10,0 мм и длине волны 490 нм. Раствор сравнения - раствор диазотированного n-анизидина и калия гидроксида. Подчинения интенсивности поглощения окрашенных растворов закону Бугера-Ламберта-Бера находится в пределах концентраций для субстанций аминостигмина 0,12-0,16 мг/мл; ривастигмина 0,15-0,20 мг/мл; пиридостигмина бромида 0,3-0,4 мг/мл; неостигмина метилсульфата 0,06-0,08 мг/мл и физостигмина салицилата 0,06-0,08 мг/мл. Коэффициенты а и b исследуемых субстанций вычислены методом наименьших квадратов после статистической обработки калибровочных графиков и приведены в таблицах 2-6.

Пример 1. Приготовление химического реактива, т.е. диазотированного n-анизидина: 2,5 г n-анизидина растворяют в 5,5 мл 10% раствора NaOH и 30-40 мл очищенной воды. Прибавляют 1,5 мл 1% раствора натрия нитрита и разбавляют водой до 50 мл объема. Наблюдают образование оранжево-красное окрашивание раствора. Сохраняют в склянке из темного стекла в холодильнике. Срок годности 10 дней.

В таблице 7 приведены сравнительные данные, подтверждающие преимущества предлагаемого способа количественного определения лекарственных средств перед прототипом.

Разработанный способ количественного определения группы стигминов является простым в выполнении, дает воспроизводимые результаты. Относительная ошибка определения не превышает ±0,32%.

Литература

1. Погодина Л.И. Анализ многокомпонентных лекарственных форм. Учебн. пособие для фак. усоверш. провизоров / Л.И. Погодина. - Мн.: Выш. Шк. - 1985 - 240 с.

2. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии / под ред. проф. П.Л. Сенова. - М.: Медицина. - 1978. - 360 с.

3. Туркевич М.М. Фармацевтическая химия / М.М. Туркевич. - Киев: Высшая школа, 1973. - 495 с.

4. Максютина Н.П. Методы анализа лекарств / Н.П. Максютина и др. - К.: Здоровья. - 1984. - 224 с.

5. Методы идентификации фармацевтических препаратов / Максютина Н.П. и др. - К.: Здоровья. - 1978. - 240 с.

6. Бушкова М.Н. Анализ лекарств в условиях аптеки / М.Н. Бушкова и др. - К.: Здоровья. - 1975. - с. 408.

7. Кулешова М.И. Пособие по качественному анализу лекарств / М.И. Кулешова, Л.Н. Гусева, O.K. Савицкая. - М.: Медицина. - 1980. - 208 с.

I-V - исследуемые лекарственные препараты;

VI - 2-диметиламинометилпиридин-3-ол;

VII 3-2-диметиламиноэтилфенол; VIII - 3-оксипиридин/или пиридин-3-ол; (IX) - 3-диметиламинофенол; XII-XVI - продукты реакций

Способ количественного определения группы стигминов в субстанциях, заключающийся в прибавлении 20-30 мл очищенной воды для аминостигмина, ривастигмина, пиридостигмина бромида или спирта этилового 95% для неостигмина метилсульфата и физостигмина салицилата, выдерживании при комнатной температуре и прибавлении того же растворителя до метки с дальнейшим прибавлением к аликвотной части приготовленного спиртового раствора КОН, нагревании в течение 10 минут, охлаждении и обработке щелочным раствором диазореактива 2,5 мл 0,1 М раствора NH₄OH и фотоэлектроколориметрировании окрашенных растворов, раствор сравнения - раствор диазотированного n-анизидина и калия гидроксида.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ определения обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой, отличающийся тем, что проводят определение уреазной активности следующим образом: в одну из лунок микропланшета вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером, в две другие вносят водные растворы мочевины с фосфатным буфером, содержащие уреазу с известной концентрацией 5 и 10 Ед/л соответственно, а в остальные лунки вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером и образцами ротовой жидкости, затем во все лунки вносят фенол/нитропруссидный реагент и гипохлорит, после чего измеряют оптическую плотность на микропланшетном ридере при длине волны 546 нм и рассчитывают концентрацию уреазы в образцах ротовой жидкости в Ед/л, при значении уреазной активности выше 15,85±2,11 Ед/л регистрируют обсемененность полости рта уреазопозитивной микробиотой.

Способ определения аномалии упаковки хроматина сперматозоидов человека при мужской инфертильности с использованием биомедицинской тест-системы // 2595838

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики и лечения мужского бесплодия у инфертильных пациентов, а также в программах экстракорпорального оплодотворения за счет отбраковки образцов спермы, содержащих клетки с нарушенной упаковкой хроматина.

Способ экспрессной оценки биосовместимости металлов и их сплавов по пилипенко п.н. // 2595812

Изобретение относится к медицинской технике, точнее к технике лабораторных исследований, в частности к способам проведения анализа биосовместимости металлических материалов, изделий и имплантатов.

Спектрофотометрический способ определения белка в биологических жидкостях // 2593361

Изобретение относится к биохимии и описывает спектрофотометрический способ определения общего белка в биологических жидкостях. Способ включает смешивание образца биологической жидкости с раствором реагента, содержащим следующие компоненты: бромпирогаллоловый красный, молибдат натрия оксалат натрия, янтарную кислоту и воду.

Способ и устройство для анализа взаимодействий биологических молекул на биологическом микрочипе на основе флуоресценции аминокислотных остатков триптофана // 2588816

Группа изобретений относится к молекулярной биологии, биофизике, биохимии и биотехнологии и касается способа анализа взаимодействий между молекулами, флуоресцирующими в ультрафиолетовой (УФ) области спектра, включая белки, пептиды, гликопротеины, протеогликаны и другие соединения, последовательность которых содержит один или более аминокислотных остатков триптофана (Trp), и биологическими молекулами, иммобилизованными в ячейках биологического микрочипа (биочипа), при котором анализ взаимодействий производится на основе измерения интенсивности УФ-флуоресценции аминокислотных остатков триптофана.

Способ определения карнозина в биологических материалах // 2585115

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для количественного определения карнозина в тканях и физиологических жидкостях.

Способ диагностики аномалий дифференцировки сперматозоидов при мужском бесплодии в системе. // 2584592

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики аномалий дифференцировки сперматозоидов при мужском бесплодии. Сущность способа состоит в том, что проводят количественное определение в ядрах сперматозоидов тиоловых групп.

Способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии и диагностикум определения мужского бесплодия // 2582914

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно к области вспомогательных репродуктивных технологий, в частности для увеличения частоты наступления беременности, и может быть использовано при лечении бесплодия в программах экстракорпорального оплодотворения и гомологичной инсеминации.

Способ детекции проникновения углеродных нанотрубок в биологическую ткань // 2582286

Изобретение относится к области нанотехнологий и молекулярной биологии. Предложен способ детекции проникновения углеродных нанотрубок (УНТ) в биологическую ткань, геном клеток которой содержит промотор гена теплового шока, сшитый с кодирующей областью дрожжевого транскрипционного фактора Gal4, и генетическую репортерную конструкцию UAS-GFP.

Способ прогнозирования энтеральной недостаточности при остром перитоните в эксперименте // 2580664

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для прогнозирования течения энтеральной недостаточности при остром перитоните в эксперименте.

Способ измерения количества и размеров жировых капель в лекарственных препаратах для парентерального применения // 2593779

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа измерения размера и количества жировых капель в препаратах для парентерального введения. Сущность способа заключается в том, что подготавливают пробу посредством введения эмульсии лекарственного препарата в профильтрованный через мембранный фильтр раствор натрия хлорида, перемешивания полученной суспензии и последующего забора части полученной суспензии и введения ее в профильтрованный через мембранный фильтр раствор натрия хлорида и перемешивания полученной суспензии.

Способ определения невидимых механических включений в окрашенных лекарственных средствах // 2593019

Изобретение относится к способам определения размеров частиц, в частности к способам определения невидимых механических включений в окрашенных лекарственных препаратах для парентерального применения.

Способ количественного определения метилкарбаматных производных бензимидазола // 2589845

Изобретение относится к фармацевтическому анализу. Способ осуществляют путем растворения анализируемой пробы, обработки раствора химическим реактивом с последующим фотоэлектроколориметрированием - измерением оптической плотности окрашенных растворов, причем растворение проводят в воде очищенной, выдерживают на нагретой водяной бане до полного растворения при перемешивании, охлаждают и в дальнейшем аликвотную часть приготовленного раствора объемом от 1,0 до 5,0 мл последовательно обрабатывают при перемешивании каплями 3,5 мл 0,1 Н спиртового раствора KОН, выдерживают и перемешивают 5 минут, далее обрабатывают каплями 2,5 мл 0,5% раствора вератрового альдегида в серной кислоте и 1,5 мл 0,1 Н раствора серной кислоты, выдерживают еще 3 минуты и после этого фотоэлектроколориметрируют окрашенные растворы.

Способ количественного определения сферофизина бензоата в субстанциях // 2589844

Изобретение относится к фармацевтическому анализу. Способ характеризуется растворением анализируемой пробы, обработкой раствора химическим реактивом с последующим фотоэлектроколориметрированием окрашенных растворов, при этом растворение проводят в воде очищенной, выдерживают на нагретой водяной бане до полного растворения, охлаждают и разбавляют тем же растворителем до 100 мл; аликвотную часть приготовленного раствора объемом от 1,0 до 5 мл последовательно обрабатывают 2,0-2,3 мл щелочного 1% раствора нитропруссида натрия и 0,1 мл 3% раствора водорода перекиси, выдерживают в течение 1 мин, после чего прибавляют 0,1 М раствор калия гидроксида до рН 10 и фотоэлектроколориметрируют окрашенные растворы.

Идентификация, оценка и лечение раковых заболеваний с генетической или приобретенной устойчивостью к ингибиторам alk // 2589834

Группа изобретений относится к способам для определения того, будет ли субъект, страдающий раковым заболеванием, положительный по мутациям ALK, отвечать на лечение ингибитором ALK, и/или вероятно ли, что у пациента, страдающего таким раковым заболеванием, заболевание будет прогрессировать медленнее, а также к набору.

Способ определения функциональной активности гликопротеина-р // 2587780

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и клинической фармакологии, и предназначено для оценки функциональной активности гликопротеина-Р (Pgp) в эксперименте и клинике для осуществления эффективной и безопасной фармакотерапии субстратами данного белка-транспортера.

Модулирование хемосенсорных рецепторов и связанных с ними лигандов // 2586282

Группа изобретений раскрывает съедобные композиции, содержащие модификаторы хемосенсорных рецепторов и их лигандов. Конкретнее группа изобретений включает проглатываемые композиции, содержащие соединение структурной формулы (IIc) Композиции заявленной группы изобретений обеспечивают возможность получения и улучшения сладкого вкуса.

Способ определения карнозина в биологических материалах // 2585115

Микрофлюидный чип для создания клеточных моделей органов млекопитающих // 2584598

Изобретение относится к области биохимии. Предложен микрофлюидный чип для создания клеточных моделей органов млекопитающих.

Способ флуориметрического определения флуниксина // 2582960

Изобретение относится к аналитической химии, конкретно к определению флуниксина в лекарственных препаратах. При осуществлении способа в ацетатно-аммиачный буферный раствор с рН 7.0-7.8 добавляют Твин-80 до концентрации 1·10-2 М, соль тербия Tb3+ до концентрации 1·10-3 М, лекарственный препарат триоктилфосфиноксид до концентрации 1·10-4 М, облучают раствор электромагнитным излучением с длиной волны λвозб=347 нм и по наличию флуоресценции на длине волны λфл=545 нм судят о наличии флуниксина.

Способ количественного определения лекарственных средств // 2599102

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения лекарственных средств дистигмина дибромида, демекастигмина дибромида и флупиртина. Сущность способа заключается в том, растворяют анализируемые пробы в спирте, выдерживают при перемешивании до полного растворения, обрабатывают спиртовым раствором КОН при небольшом нагревании. Далее внесят метанольный раствора никеля (II) сульфата и раствора аммиака, извлекают окрашенный осадок комплексной соли хлороформом, сушат органический слой безводным сульфатом натрия и фотоэлектроколориметририруют. Использование способа позволяет с высокой точность определять дистигмин дибромид, демекастигмин дибромид и флупиртин. 5 табл., 1 пр., 5 ил.