Сложные эфиры гиалуроновой кислоты, их получение и применение в дерматологии

Авторы патента:

РОВАТИ Лучио Клаудио (IT)

C08B37/00 - Получение полисахаридов, не отнесенных к группам C08B 1/00-C08B 35/00; получение их производных (целлюлоза D21)

Владельцы патента RU 2598552:

РОТТАФАРМ С.П.А. (IT)

Предложены сложные эфиры гиалуроновой кислоты с производными гидроксикоричной кислоты. Причем производные гидроксикоричной кислоты выбирают из феруловой кислоты и кофеиновой кислоты. Способ получения сложных эфиров гиалуроновой кислоты предусматривает растворение натриевой соли гиалуроновой кислоты в формамиде. Причем указанную соль вводят в реакцию в присутствии эквивалентного количества третичного основания с производным гидроксикоричной кислоты, предварительно активированной карбонилдиимидазолом при комнатной температуре. Полученную вязкую массу разбавляют водным раствором NaCl, продукт реакции извлекают посредством осаждения ацетоном с последующей очисткой метанолом, фильтрацией и сушкой в вакууме. Изобретение позволяет получить сложные эфиры гиалуроновой кислоты с производными гидроксикоричной кислоты, применимые для защиты кожи, в качестве соединений, усиливающих упругость, обладающих увлажняющим, смягчающим действием. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 9 пр.

Настоящее изобретение относится к новым сложноэфирным производным гликозаминогликанов (GAG), таким как гиалуроновая кислота (НА), с производными гидроксикоричной кислоты, такими как феруловая кислота и кофеиновая кислота.

НА представляет собой GAG, состоящий из повторяющейся последовательности дисахаридного звена, образованного глюкуроновой кислотой и N-ацетилглюкозамином.

НА выполняет несколько биологических функций, которые охватывают область от регуляции воды, присутствующей в тканях, до подвижности клеток, а также выполняет в дерме функцию в качестве поддерживающего остова за счет связывания с другими веществами с образованием макромолекулярных комплексов, которые обеспечивают плотность кожи.

Производные гидроксикоричной кислоты, такие как феруловая кислота и кофеиновая кислота, широко распространены в семенах и листьях растений в свободной форме или ковалентно связанными с лигнином или другими биополимерами. Благодаря фенольному ядру и расширенному сопряжению боковой цепи они образуют феноксильные радикалы, которые стабилизируются за счет резонанса, который генерирует их сильную антиокислительную и защитную функцию при различных воспалительных патологиях и в защитном свойстве клеток, подвергающихся ультрафиолетовому облучению.

Гиалуроновая кислота представляет собой увлажняющее вещество, которое действует на уровне кожи за счет удерживания трансэпидермальной влаги. Однако в высоколипидный роговой слой с трудом проникают высокогидрофильные молекулы, которые, более того, представляют собой вещество, являющееся объектом быстрого распада. Одно из преимуществ соединений представленного изобретения состоит в том, что присутствие заместителей гидроксикоричной кислоты в модифицированном полимере обеспечивает защиту от ферментативного разрушения, производимого гиалуронидазой, которая присутствует в тканях; этерификация НА производными гидроксикоричной кислоты предоставляет возможность получения соединений с усиленными липофильными свойствами относительно природного полимера и которые, вследствие этого, могут более легко биоабсорбироваться через эпидермис. В результате своих химических, физических и биологических свойств НА была особо изучена и была объектом структурных модификаций, и имеется несколько публикаций и патентов, касающихся новых производных.

Несколько работ было выполнено по способам ретикуляции НА с целью получения упруговязких продуктов, подлежащих использованию в первую очередь для внутрисуставного введения в терапии артрозов, таких, которые описаны, например, в ЕР 0341745, или подлежащих использованию также в качестве постоперационной антиадгезионной смазки, которая описана, например, в US 4582865.

Относительно небольшим остается число патентов или публикаций, касающихся сложных эфиров, полученных на гидроксигруппах НА с органическими кислотами.

Среди них авторы изобретения ссылаются на US 5679567, которая описывает получение ацетилированной НА с различными уровнями замещения. WO 2005/092929 и Inv. New Drugs (2004), 22(3), 207-217, описывают сложноэфирные производные НА с масляной кислотой, которые снабжены антипролиферативной активностью и которые вследствие этого являются потенциально пригодными для противоопухолевого применения, тогда как WO 2008/081255 описывает другие сложноэфирные производные НА с масляной кислотой, но с высокой степенью ретикуляции, и которые в первую очередь должны применяться в качестве агентов, усиливающих вязкость-упругость, для внутрисуставного введения. Другие сложноэфирные производные НА описаны Picotti et al. в WO 2009/080220, в котором НА этерифицируют липоевой кислотой для предоставления производных для применения в качестве лечебно-косметических средств для кожи или в качестве медицинского устройства для внутрисуставного лечения.

До настоящего времени у авторов изобретения не было сведений относительно применения сложных эфиров полисахаридов, а более конкретно сложных эфиров НА с производными гидроксикоричной кислоты, такими как феруловая кислота и кофеиновая кислота, для защиты кожи в качестве соединений, обладающих усиливающим упругость, увлажняющим, смягчающим действием, или относительно их применения в качестве медицинских устройств с действием против покраснения или успокаивающим действием при эритематозных состояниях, вызванных облучением, или в качестве восполняющих вязкость агентов.

Настоящее изобретение описывает новые сложноэфирные производные гиалуроновой кислоты с производными гидроксикоричной кислоты, такими как феруловая и кофеиновая кислота, отличающиеся от ранее известных производных полисахаридов, которые были этерифицированы различными кислотами, такими как уксусная, масляная и липоевая кислоты.

Молекулярная масса гиалуроновой кислоты предпочтительно может составлять от 200 тыс. до 400 тыс. Да.

Степень замещения этерифицированной гиалуроновой кислоты согласно изобретению может быть отрегулирована и зависит от применяемых условий протекания реакции, таких как, в качестве примера, стехиометрическое соотношение между гиалуроновой кислотой и производным гидроксикоричной кислоты, предварительно активированным карбонил-ди-имидазолом, количество используемого основания для катализа и время реакции, и находится, в рамках исследованных экспериментальных условий, между 2% и 20%.

Вследствие этого химические, физические и реологические свойства производных, полученных согласно изобретению, могут изменяться за счет изменения степени этерификации гиалуроновой кислоты компонентом - гидроксикоричной кислотой.

Предпочтительно в предложенных сложных эфирах гиалуроновой кислоты карбоксильная группа образует соль с натрием.

Предложенные в настоящем изобретении сложные эфиры гиалуроновой кислоты предназначены для местной обработки кожных повреждений, таких как раны, язвы, дерматиты, псориаз, гипертермия, вызванная излучением.

Кроме того, предложенные в настоящем изобретении сложные эфиры гиалуроновой кислоты предназначены для местной обработки в качестве увлажняющих средств, средства повышения упругости, замедляющего старение средства или средства против прыщей, а также для внутрисуставного лечения в качестве восполняющего вязкость средства.

Настоящее изобретение также относится к способу получения таких производных, которые отличаются и являются новыми относительно предшествующего уровня техники. Фактически, согласно предложенному способу натриевую соль гиалуроновой кислоты растворяют в формамиде, причем указанную соль вводят в реакцию в присутствии эквивалентного количества третичного основания с производным гидроксикоричной кислоты (феруловой или кофеиновой кислотой), предварительно активированной карбонилдиимидазолом (CDI) при комнатной температуре, полученную вязкую массу разбавляют водным раствором NaCl, продукт реакции извлекают посредством осаждения ацетоном с последующей очисткой метанолом, фильтрацией и сушкой в вакууме. Предложенный способ обеспечивает возможность удаления примесей, образующихся в процессе синтеза, без необходимости использования затратных по времени и дорогостоящих процессов, таких как диализ или тангенциальная фильтрация, с последующим извлечением конечного целевого продукта посредством лиофилизации или сушки распылением.

При этом в зависимости от требуемой степени этерификации, которая составляет от 2% до 20%, кислота, активируемая CDI, предпочтительно присутствует в соотношении относительно НА, составляющем от 0,25 до 1 эквивалента.

Кроме того, в зависимости от требуемой степени этерификации, которая составляет от 2% до 20%, реакцию НА с кислотой, активированной CDI, предпочтительно проводят в течение периода времени от 1 до 24 часов.

Еще одним объектом настоящего изобретения является композиция для местного применения, содержащая предложенные выше сложные эфиры гиалуроновой кислоты и дерматологически приемлемые инертные эксципиенты.

Предпочтительно композиция для местного применения содержит процентную долю сложного эфира гиалуроновой кислоты от 0,1% до 5% масс. в расчете на композицию.

Предпочтительно композицию для местного применения получают в виде крема, геля, мази, водного или водно-спиртового лосьона, эмульсии масло/вода или вода/масло.

ПРИМЕРЫ

Эксперименты с ЯМР регистрировали, используя прибор Bruker Avance 400. Соединения растворяли в D₂O с pH 12 с использованием капли KOD с концентрацией равной приблизительно 5 мг/мл.

В ароматической зоне, находящейся между 6 и 8 м.д. (ppm), можно наблюдать ароматические сигналы в результате этерификации, тогда как очень сильный сигнал синглета метила гиалуроновой кислоты виден приблизительно при 1,8 м.д. Объединение данных сигналов предоставляет степень этерификации образцов.

Пример 1: Получение феруловой кислоты гиалуроновой кислоты со средней степенью замещения (соединение 1)

3 г гиалуроната Na (м.м. 404; 7,9 мэкв в мономерных звеньях, молекулярная масса равна 300 кДа) растворяют при 90°С в 60 мл формамида. После охлаждения при комнатной температуре 1,05 мл триэтиламина (7,5 мэкв) и 0,5 г ферулоилимидазолида (м.м. 244; 1,99 мэкв) суспендировали в 10 мл формамида и получали, как описано в Molecules 2007, 12, р. 2540-2544, compound 12, и добавляли к полученному таким образом раствору.

После реакции в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли 15 мл 5% NaCl. Изначально сильновязкий раствор, который таким образом становился более текучим, наливали по каплям в литр безводного ацетона. Полученный таким образом осадок фильтровали, снова подвергали встряхиванию с 400 мл безводного ацетона, повторно фильтровали и снова встряхивали с 200 мл безводного метанола.

После фильтрования и сушки в вакууме при 40°С извлекали 3,1 г безводного образца.

Полученное таким образом соединение анализировали посредством ИК-, ЯМР-спектроскопии и элементного анализа.

Степень замещения (этерификацию), равную 8%, получали за счет расчета соотношения объединенных сигналов (ЯМР) между сигналом метиловой группы НА и дуплетным сигналом феруловой кислоты (ср. ЯМР, фиг. 1).

Пример 2: Получение сложного ферулового эфира гиалуроновой кислоты с низкой степенью замещения

Следовали такой же методике, как в примере 1, уменьшая, однако, время реакции перед добавлением NaCl только до 2 часов. Получали 2,8 г безводного соединения со степенью этерификации, равной 4% (ср. ЯМР, фиг. 2).

Пример 3: Получение сложного ферулового эфира гиалуроновой кислоты с высокой степенью замещения

Следовали методике примера 1, увеличивая, однако, время реакции перед добавлением NaCl до 24 часов и количество имидазолида до 1,9 г (7,9 мэкв). Получали 3,3 г безводного соединения со степенью этерификации, равной 17% (ср. ЯМР, фиг. 3).

Пример 4: Получение кофеиновой кислоты гиалуроновой кислоты

В раствор кофеиновой кислоты (0,51 г, 2,83 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл) добавляли 1,1′-карбонилдиимидазол (CDI, 0,92 г, 5,67 ммоль). Полученную в результате смесь содержали при кипячении с обратным холодильником в течение 1 часа, и реакционную смесь непосредственно использовали на следующей стадии.

Гиалуронат натрия (3,0 г, 7,92 ммоль в мономерных звеньях) растворяли в формамиде (60 мл) при 70°С в течение 1 часа в бутыли с двумя горловинами, помещенной в ванну с песком. Полученный таким образом вязкий и бесцветный раствор охлаждали при комнатной температуре и к нему добавляли TEA (1,1 мл, 7,92 ммоль) и раствор имидазолида в ТГФ (приблизительно 2,8 ммоль). Смесь встряхивали до тех пор, пока не получали однородный оранжево-рыжеватый раствор. Вязкость и стабильность раствора повышалась до такой точки, чтобы приводить за несколько минут к образованию студенистого оранжево-рыжеватого (эластичного и упругого) агломерата. После содержания в покое при комнатной температуре в течение ночи агломерат добавляли к раствору NaCl 5% масс./об. (15 мл).

Полученный гель обрабатывали 200 мл ацетона, фильтровали, ресуспендировали при двухкратном встряхивании с 100 мл метанола, фильтровали и сушили в вакууме. Получали 2,5 г безводного продукта с цветом желтой охры.

Образцу, равному приблизительно 6 мг, полимера предоставляли возможность набухания в 0,7 мл D₂O для получения совершенно прозрачного и бесцветного геля. Гель переносили в трубку для ЯМР, при этом анализ (фиг. 4) показывал дуплетные сигналы между 6 и 7,2 м.д., которые могут являться признаком ароматического водорода этерифицированной кофеиновой кислоты, и сильный синглетный сигнал метильной группы при 1,8 м.д. Добавление одной капли NaOD при 40% в D₂O обеспечивало возможность количественной оценки степени дериватизации гиалуроната натрия, которая, как было обнаружено, составляла 7%.

Пример 5: Оценка устойчивости к ферментному распаду

Присутствие микроорганизмов на эпидермисе вызывает релевантную биологическую активность на коже, активность показана в виде различных ферментных функций, среди которых есть функция, выполняемая ферментом гиалуронидазой. Гиалуроновая кислота (НА) распадается естественным образом благодаря присутствию указанного фермента, который катализирует ее распад посредством гидролиза гликозидных 1,4-бета-связей между мономерными звеньями полисахаридной цепи. НА с поперечной межмолекулярной связью является высокоустойчивой к ферментному действию гиалуронидазы, при этом подобная устойчивость повышается с повышением степени поперечного сшивания. Этерификация НА молекулами, имеющими подходящую химическую структуру, такими как производные гидроксикоричной кислоты согласно изобретению, обеспечивает возможность получения соединений с реологическими признаками, которые могут быть сравнимы с НА с поперечной межмолекулярной связью, сохраняя, однако, хорошую степень растворимости в воде.

Использовали коммерческую натриевую соль НА (молекулярная масса 300 кДа), такую как использована в описанном ранее синтезе, и два образца НА, этерифицированной феруловой кислотой с низкой и высокой степенью этерификации, которые описаны соответственно в примерах 2 и 3 выше.

Эксперимент проводили согласно общепризнанным методикам.

Коротко, полисахаридный раствор (1 мг/мл), содержавшийся при 37°С и содержащий в своем составе фермент в количестве, равном 0,1 мг/мл (гиалуронидаза бычьих семенников, тип I-S Sigma, 1000 Ед/мг), инкубировали при 37°С с постоянным временными интервалами, в диапазоне 0-2 часа, причем образцы в количестве, равном 0,5 мл, брали и оставляли при 100°С в течение 5 минут, фильтровали для извлечения фермента, а после этого анализировали посредством эксклюзионного хроматографического анализа: проведение процесса хроматографии обеспечивает возможность определения распределения молекулярной массы.

После 30 минут инкубирования с ферментом коммерческая неэтерифицированная НА подвергалась сильному распаду, изменяясь от средней молекулярной массы, равной приблизительно 300 кДа, до значения, приблизительно в 10 раз меньшего. Образец, относящийся к примеру 2, со степенью этерификации, равной приблизительно 4%, подвергался распаду, составляющему приблизительно 60%, тогда как образец, относящийся к примеру 3, с высокой степенью этерификации, подвергался только ограниченному процессу распада, изменяясь до средней молекулярной массы, составляющей приблизительно 250 кДа.

Пример 6: Реологическое исследование образца НА, этерифицированного феруловой кислотой

Реологические свойства соединения согласно изобретению (соединение примера 1) сравнивали со свойствами натриевой соли НА (молекулярная масса 300 кДа), используемой в качестве исходного первоначального материала для получения сложных эфиров согласно изобретению.

Реологические измерения проводили с использованием реометра Rotovisco 1-Haake, системы пластина-пластина, программного обеспечения Rheowin 323. Вязкость измеряли посредством градиента скорости диска, «скорости сдвига», от 0,01 с^-1 до 500 с^-1, при этом образцы растворяли в количестве, равном 2% в 5% физиологическом растворе NaCl.

Образец, относящийся к примеру 1, показывал реологические свойства псевдопластичного типа, при которых вязкость уменьшается с увеличением скорости сдвига (ср. фиг. 5а и 5b). Расчетные параметры диаграммы текучести, полученной за счет применения зависимости Оствальда-де-Вела, составляли соответственно: К (Па·с), т.е. коэффициент густоты потока, равен 9,97+/-0,53 (n=3) и n=0,47 (индекс реологического поведения, т.е. наклон кривой вязкости на логарифмической шкале как функция градиента скорости).

Фактически данный результат приводит к заключению, что этерификация НА феруловой кислотой предоставляет цепи, которые при низких сдвигах имеют незначительные нелинейные затрудненные конформации, которыми нельзя пренебрегать, которые могут взаимодействовать друг с другом. Посредством увеличения прикладываемого сдвига цепи имеют тенденцию выравнивания с потоком, возвращаясь за счет этого к системе с естественными свойствами.

В отличие от этого немодифицированная естественная НА имеет профиль, типичный для растворов с очень низким значением К (К=0,40 Па·с).

Пример 7: Действие против РФК соединения ферулата НА (Пример 1) на активированных нейтрофилах человека

Изучали, могут ли соединения согласно изобретению сохранять противоокислительную активность захвата радикалов субстратов гидроксикоричных кислот, используемых для этерификации НА.

Авторы изобретения исследовали способность соединения 1 к подавлению, in vitro, активности реактивных молекул кислорода (РФК), вырабатываемых нейтрофильными лейкоцитами, активированными Форболмиристацетатом (ФМА) в присутствии Люминола, вещества, которое в присутствии оксидантов, таких как H₂O₂, проявляет хемилюминесценцию.

Соответственно, количества клеточной суспензии лейкоцитов (10⁶ клеток/мл) инкубировали с соединением 1, растворенным в подходящем буфере в присутствии Люминола (5 мкМ). Клетки инкубировали при 37°С в течение 10 минут с соединением 1 или с нативной натриевой солью НА в концентрации, равной 0,02 и 0,2 мМ. После этого клетки активировали 0,1 мкМ ФМА и отслеживали хемилюминесценцию в течение 20 минут с временными интервалами, равными 4 минутам, с помощью ридера флуоресценции HTS7000 (Perkin Elmer).

Соединение 1 показало максимум ингибирования, составляющий 7 8%, при более высокой испытываемой концентрации, тогда как НА была практически неактивна, показывая, что введение феруловой кислоты в полисахарид понижало противорадикальную активность первоначального субстрата.

Пример 8: Получение водно-масляного смягчающего крема с фильтром солнечного излучения

В качестве неограничивающего примера изобретения получали готовую форму крема, заключающую в себе сложноэфирное производное согласно изобретению, усиленное за счет добавления вещества, обладающего солнцезащитным фактором (УФВ), такого как гамма-оризанол, для добавления действия хромофорного фрагмента модифицированному полисахариду.

Готовая форма имеет в своем составе соединение 1, описанное в примере 1, с концентрацией, равной 2%, смешанное с общепринятыми эксципиентами, используемыми в дерматологии, такими как эмульсифицирующие агенты, консерванты, успокаивающие агенты, растворители и продукт, имеющий защитную активность против солнечной радиации, а именно гамма-оризанол.

Кратко, процесс получения состоял в следующем:

a) жировая фаза: дикаприлил карбонат, кококаприлат, полиглицерил-2-диполигидроксистеарат и феноксиэтанол растворяли при встряхивании посредством нагревания до приблизительно 80°С в аппарате для растворения; после растворения добавляли гамма-оризанол;

b) водная фаза: воду, натрия дегидроацетат и соединение 1 загружали в турбоэмульгатор; после нагревания до приблизительно 60°С до растворения добавляли дополнительные компоненты всегда при легком встряхивании, а именно эмульгирующую смесь натрия лаурилглюкозы карбоксилата/лаурилглюкозида и смесь консервантов метилпропандиола/фенилпропанола;

с) эмульсия: жировую фазу наливали при встряхивании в водную фазу и включали турбину на 10 минут; реакционную массу, в конце концов, медленно охлаждали, всегда при встряхивании, до температуры, равной 20/25°С.

Получали крем, имеющий следующую композицию (% масс.):

Воду следует добавлять до 100.

Пример 9: Функциональное исследование лечебно-косметической активности для кожи

Функциональную активность в качестве лечебно-косметического средства для кожи, например степень увлажнения и упругости кожи, исследовали с применением опытной готовой формы, показанной в предшествующих примерах, с группой специально подготовленных добровольцев. Во время исследования активность готовой формы примера 8 сравнивали с такой же готовой формой без активных ингредиентов (контроль) на двух группах добровольцев, подвергшихся обработке два раза в день в течение периода, равного 4 неделям (периоды времени Т0 и T4w).

А) упругость кожи: оценку упругости кожи проводили с помощью «кожного измерителя», измерительного инструмента, который посредством зонда, приложенного к коже, создает внутри самого зонда отрицательное давление (всасывание) на протяжении 1 секунды, с последующим сбрасыванием. Упругость рассчитывают с помощью соотношения между остаточной деформацией и максимальным растяжением кожи. Подобное соотношение, известное в литературе в качестве параметра R2, показывает способность кожи возвращаться к своему первоначальному состоянию покоя вслед за стрессовым явлением. Чем больше данное значение приближается к 1, тем выше упругость кожи.

Обработка группы, связанная с готовой формой примера 8, дала процентное изменение параметра R2 во время T4w, по отношению к первоначальному времени Т0, равное 27,5% (критерий Стьюдента р<0,05), тогда как было обнаружено, что такое же процентное изменение для контрольной группы было незначительным. Подобный результат показал, что соединение 1 согласно изобретению наделено усиливающей релевантную упругость активностью, результатом которой является увеличение параметра R2, что не было обнаружено в контрольной группе, приготовленной с теми же самыми эксципиентами.

В) Гидратация кожи: уровень гидратации кожи лица измеряли с помощью «корнеометра», инструмента, который измеряет гидратацию кожи на основании физического принципа емкостного сопротивления. Инструмент состоит из квадратного датчика площадью 49 мм². Посредством вдавливания поверхности датчика на плоскую область кожи лица инструмент предоставляет число, пропорциональное содержанию воды в роговом слое. Вследствие этого число предоставляет измерение гидратации кожи на поверхности кожи, выраженное в виде корнеометрических единиц (от 0 до 150 у.е.), которые являются условными единицами инструмента.

В конце испытания группа, обработанная готовой формой примера 8, зарегистрировала увеличение процентного изменения значений гидратации кожи, составляющее до 4,8% относительно отсутствия изменения контрольной группы, использованной для сравнения. Однако было обнаружено, что подобное увеличение находится близко к пределу достоверности, результат, который, возможно, является следствием относительно низкого числа членов использованной группы (n=10).

1. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты с производными гидроксикоричной кислоты, где производными гидроксикоричной кислоты являются феруловая кислота и кофеиновая кислота.

2. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, в которых молекулярная масса гиалуроновой кислоты составляет от 200 тыс. до 400 тыс. Да.

3. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, в которых степень замещения кофеиновой и феруловой кислотами в полисахариде составляет от 2% до 20%.

4. Способ получения сложных эфиров гиалуроновой кислоты (НА) по п. 1, в котором натриевую соль гиалуроновой кислоты растворяют в формамиде, причем указанную соль вводят в реакцию в присутствии эквивалентного количества третичного основания с производным гидроксикоричной кислоты, предварительно активированной карбонилдиимидазолом (CDI) при комнатной температуре, полученную вязкую массу разбавляют водным раствором NaCl, продукт реакции извлекают посредством осаждения ацетоном с последующей очисткой метанолом, фильтрацией и сушкой в вакууме.

5. Способ по п. 4, в котором производным гидроксикоричной кислоты является феруловая кислота.

6. Способ по п. 4, в котором производным гидроксикоричной кислоты является кофеиновая кислота.

7. Способ по п. 4, в котором кислота, активируемая CDI, присутствует в соотношении относительно НА, составляющем от 0,25 до 1 эквивалента в зависимости от требуемой степени этерификации, которая составляет от 2% до 20%.

8. Способ по п. 4, в котором обеспечивают возможность реакции НА с кислотой, активированной CDI, в течение периода времени от 1 до 24 часов в зависимости от требуемой степени этерификации, которая составляет от 2% до 20%.

9. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, предназначенные для местной обработки кожных повреждений, таких как раны, язвы, дерматиты, псориаз, гипертермия, вызванная излучением.

10. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, предназначенные для местной обработки в качестве увлажняющих средств, средства повышения упругости, замедляющего старение средства или средства против прыщей.

11. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, предназначенные для внутрисуставного лечения в качестве восполняющего вязкость средства.

12. Композиция для местного применения, содержащая сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, и дерматологически приемлемые инертные эксципиенты.

13. Композиция для местного применения по п. 12, содержащая процентную долю сложного эфира гиалуроновой кислоты от 0,1 до 5 мас.% в расчете на композицию.

14. Композиция для местного применения по п. 12 в виде крема, геля, мази, водного или водно-спиртового лосьона, эмульсии масло/вода или вода/масло.

15. Сложные эфиры гиалуроновой кислоты по п. 1, в которых карбоксильная группа образует соль с натрием.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способы получения сиалированной сахарной цепи.

Композиции, содержащие глюкан // 2596496

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики, а именно к иммуностимулирующей композиции в форме геля, имеющей температуру плавления перехода геля в золь выше 37°C и включающей от 0,1 до 6% растворимого бета-глюкана, который получен из дрожжей и содержит основную цепь из β-(1,3)-связанных остатков глюкозы и боковые цепи, включающие два или более β-(1,3)-связанных остатков глюкозы, при этом боковые цепи присоединены к основной цепи β-(1,6)-связью, и по существу не содержит повторяющихся β-(1,6)-связанных остатков глюкозы; и гелеобразующий агент, который представляет собой карбоксиметилеллюлозу или геллановую камедь, а также к способу ее получения и применения для облегчения заживления раны или язвы, для лечения мукозита слизистой оболочки полости рта, для лечения рака и для обеспечения пролиферации клеток кожи in vitro.

Способ получения окисленного декстрана // 2592617

Изобретение относится к способу получения окисленного декстрана. Способ предусматривает окисление водного раствора декстрана с молекулярной массой 20-75 кДа раствором перманганата калия в среде уксусной кислоты при нагревании, отстаивание и фильтрование раствора от примесей, выделение окисленного декстрана этанолом и сушку.

Способ получения поперечно-сшитого геля // 2590558

Изобретение относится к способу получения поперечно-сшитого геля полисахарида и применению его для длительного заполнения объемных дефектов кожи. В способе получают водный гель, содержащий полисахарид в поперечно-несшитой форме вместе с бифункциональным или многофункциональным эпоксидным сшивающим агентом, при температуре ниже 35°С.

Способ получения пектина и целлюлозы из свекловичного жома // 2580884

Изобретение относится к химической, пищевой и фармацевтической промышленности. Способ получения пектина и целлюлозы из свекловичного жома включает гидролиз измельченного жома свеклы в присутствии соляной кислоты при нагревании, отжим твердой фазы, многоступенчатую экстракцию твердой фазы, осаждение пектина из жидких фаз с последующей его очисткой, обезвоживанием и сушкой пектина и целлюлозы.

Полисахарид и его производные с активностью к фиколину-3, способ получения и применения // 2575752

Предложен полисахарид или его производное. Полисахарид обладает сродством к фиколину-3 и характеризуется наличием олигосахаридного повторяющегося блока общей формулы (I).

Анионные полисахариды, функционализированные по меньшей мере двумя гидрофобными группами, связанными с по меньшей мере трехвалентной промежуточной группировкой // 2575460

Изобретение относится к новым производным анионных полисахаридов, частично функционализированных по меньшей мере двумя вицинальными гидрофобными группами, причем указанные гидрофобные группы, являющиеся одинаковыми или разными, связаны с по меньшей мере трехвалентным радикалом или промежуточной группировкой.

Способы получения микробного полимера, содержащего фукозу, полимер и его применения // 2573574

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способы получения полимера, включающего фукозу, полимер, содержащий фукозу, и его применения.

Способ получения гликозидов акрилатных производных с использованием полисахаридов и гликозидаз или гликозилтрансфераз // 2570556

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения этиленово-ненасыщенного гликозида формулы (I).

Полисахаридный продукт с улучшенными характеристиками и прозрачностью в водных композициях на основе пав и способ его получения (варианты) // 2568133

Изобретение относится к получению полимеров для средств личной гигиены или бытовой химии. Предложенный модифицированный полигалактоманнан включает катионный полигалактоманнан с водорастворимой и водонерастворимой фракциями.

Способы и системы для получения сахаров из богатых углеводами субстратов // 2600126

Способ предусматривает обеспечение богатого углеводами субстрата и водного раствора с катализатором гидролиза. Поддерживают давление вакуумирования над субстратом для введения катализатора гидролиза в богатый углеводами субстрат с получением при этом реакционной смеси. Воздействуют на указанную реакционную смесь более высоким давлением газовой фазы на стадии проведения реакции гидролиза, выдерживают реакционную смесь с получением мономеров и/или полимеров сахаров в открытом пространстве внутри волокон субстрата. Воздействуют на реакционную смесь посредством давления газовой фазы, которое ниже давления реакции гидролиза, для выведения указанных мономеров и/или полимеров сахаров из указанного открытого пространства внутри волокон субстрата в указанный водный раствор и выдерживают. Стадии гидролиза и извлечения повторяют в течение по меньшей мере двух циклов изменения давления для выведения максимального количества мономеров и/или полимеров сахаров из открытого пространства внутри волокон субстрата. Затем выделяют мономеры и/или полимеры сахаров из водного раствора. Причем способ не включает обработку водяным паром или разрушение аммиаком волокон богатого углеводами субстрата. Изобретение позволяет упростить способ извлечения сахаров из богатых углеводами субстратов. 2 н. и 23 з.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл., 7 пр.

Способ получения водорастворимых олигосахаридов // 2600133

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ получения водорастворимых олигосахаридов из опилок древесины лиственных пород деревьев включает экстрагирование олигосахаридов при температуре 170°С, отделение фильтрованием от опилок и центрифугирование. Экстрагирование растительного сырья проводят очищенной горячей водой в течение 120 минут, с последующим разделением на хроматографе, до получения конечного продукта. Экстрагирование проводят из опилок березы или осины, при соотношении воды к опилкам 1:30, проводят повторное экстрагирование при соотношении воды к опилкам 1:10, а разделение, до выхода конечного продукта, осуществляют с использованием гель-проникающего хроматографа. Способ обеспечивает увеличение выхода водорастворимых олигосахаридов.

Агент для связывания жиров, полученный из биомассы, образующейся в процессе пивоварения // 2608233

Изобретение относится к богатой полисахаридами композиции, содержащей бета-глюкан, хитин и хитозан, извлеченные из клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae из биомассы, представляющей собой побочный продукт процесса пивоварения. Способ получения композиции включает следующие стадии: подготовку реактора с помощью раствора NaOH с концентрацией от 0,25 до 3 М при перемешивании и температуре от 50 до 95°С, добавление к указанному раствору биомассы, полученной в процессе пивоварения, поддержание указанных условий в течение по меньшей мере 1 часа. Далее проводят охлаждение указанного раствора до комнатной температуры, нейтрализацию раствора путем по меньшей мере однократного добавления кислого раствора или воды до достижения рН 7. Причем в случае проведения более чем однократного добавления между добавлениями осуществляют стадию отделения твердого продукта от указанного раствора. Затем осуществляют передачу твердого продукта на по меньшей мере однократную промывку водой и отделение полученного твердого продукта, сушку твердого продукта до постоянной массы и тонкое измельчение. Полученную композицию можно приготовить в виде съедобного, фармацевтического или ветеринарного продукта. Изобретение позволяет получить композицию, которая обладает способностью селективного связывания жиров, и поэтому ее можно применять для предотвращения и/или лечения заболеваний, таких как избыточный вес, ожирение, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия, гипертония и сердечно-сосудистые расстройства. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 ил., 18 табл., 9 пр.

Способ получения полисахарида арабиногалактана // 2620013

Изобретение относится к пищевой и медицинской промышленности. Согласно предложенному способу экстракцию арабиногалактана проводят в течение 30-40 мин в ультразвуковой установке с частотой 27-42 кГц при температуре 20-30°C с гидромодулем 1.3-7 к сухой массе сырья, затем экстракт фильтруют, диспергируют методом ультразвукового распыления и концентрируют в приемнике до концентрации сухого вещества в пределах 20-40%. Концентрат осаждают добавлением органического смешивающегося с водой растворителя в соотношении 1:4. Осажденный арабиногалактан промывают в этом же растворителе, сушат и измельчают. Предпочтительно экстракцию арабиногалактана проводят без предварительной экстракции дигидрокверцетина. Для получения арабиногалактана с заданной молекулярной массой, экстракт арабиногалактана конденсируют в последовательно соединенных сосудах. После осаждения арабиногалактана и его промывки экстрагент фильтруют, подвергают перегонке и вновь включают в процесс производства арабиногалактана. Изобретение позволяет получить арабиногалактан высокой степени чистоты с заданной молекулярной массой с дополнительным включением дигидрокверцетина, снизить энергозатраты и продолжительность способа извлечения. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 3 пр.

Высокоэффективный способ получения бактериального полисахарида, получение конъюгата на его основе и иммуногенная композиция // 2627156

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения капсульного полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы X, его конъюгат с белком-носителем и иммуногенная композиция на основе конъюгата для приготовления вакцин против менингита. Способ осуществляют с использованием ферментационной среды, включающей казаминкислоту, оптимальной стратегии добавления питательного раствора и улучшенного процесса выделения и очистки полисахарида, исключающего любые хроматографические методы. Соотношение полисахарида к белку в конъюгате находится в пределах от 0,2 до 0,6. Изобретения позволяют получать очищенный полисахарид Neisseria meningitidis серогруппы X с выходом от 300 до 550 мг/л, средней молекулярной массой от 400 до 550 кДа, выходом на стадии очистки от 60% до 65% и содержанием менее 0,5% белков, менее 0,5% нуклеиновых кислот и менее 5 EU/мкг эндотоксинов. Полисахарид X доводят до размера от 150 до 200 кДа и конъюгируют с белком-носителем. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл.

Способ получения аргинин производного сульфата арабиногалактана // 2631470

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Способ получения аргинин производного сульфатированного арабиногалактана включает взаимодействие кислой формы сульфата арабиногалактана в растворе бутанола с аргинином, растворенным в 70%-ном этаноле, при рН 8 реакционного раствора. Изобретение позволяет синтезировать новое производное арабиногалактана, упростить процесс получения его производных. 1 пр.

Способ получения производных полисахаридов // 2633583

Изобретение относится к способу получения производного полисахарида, включающий: (а) приведение по меньшей мере одного полисахарида, характеризующегося показателем кристалличности (CI), составляющим по меньшей мере 20%, измеряемым методом XRD, в контакт с по меньшей мере одним соединением при температуре не более 70°С; и (b) последующее приведение продукта, получаемого на стадии (а), в контакт с по меньшей мере одним ароматическим изоцианатом, причем ароматический изоцианат представляет собой полиизоцианат, выбранный из группы, содержащей: метилендифенилдиизоцианат, представленный в форме его 2,4'-, 2,2'- и 4,4'-изомеров, а также их смесей, смеси метилендифенилдиизоцианатов и их олигомеров, или их производные, имеющие уретановые, изоциануратные, аллофонатные, биуретные, уретониминные, уретдионные и/или иминооксадиазиндионные группы, а также их смеси с получением производного полисахарида, показатель кристалличности которого составляет по меньшей мере 50% от соответствующей величины по меньшей мере одного полисахарида. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

С6-с18-ацилированное производное гиалуроновой кислоты, способ его получения, наномицеллярная композиция на его основе, способ ее получения и способ получения стабилизированной наномицеллярной композиции и ее применение // 2640287

Настоящее изобретение относится к способу получения гидрофобизированной гиалуроновой кислоты (формула I). Причем R представляет собой H+ или Na+ и R1 представляет собой H или -С(=O)CxHy или -C(=O)CH=CH-het, где x представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, и y представляет собой целое число в диапазоне от 11 до 35, и CxHy представляет собой неразветвленную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную C5-C17 цепь, и het представляет собой гетероциклическую или гетероароматическую группу с произвольным содержанием атомов N, S или О, по меньшей мере с одной повторяющейся единицей, содержащей одну или несколько R1 -С(=O)CxHy или -C(=O)CH=CH-het групп, и где n находится в диапазоне от 12 до 4000. Также предложены способ получения этого прозводного гиалуроновой кислоты, наномицеллярная композиция на ее основе, способ получения наномицеллярной композиции, ее применение при фармацевтических и косметических применениях, а также способ получения ее стабилизированной формы. Изобретение позволяет получить гидрофобный носитель на основе гиалуроновой кислоты для биологически активных веществ и обеспечивает перенос связанных веществ из гидрофобных доменов наномицеллы в клетку. 6 н. и 29 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 38 пр.

Способ производства формованного продукта из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты // 2640865

Изобретение относится к производству формованного продукта из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты. Способ предусматривает получение субстрата гиалуроновой кислоты, растворенной в первой жидкой среде, которая представляет собой водный раствор, без какого-либо сшивания, осаждение субстрата гиалуроновой кислоты, подвергая его воздействию второй жидкой среды, содержащей один или более первых водорастворимых органических растворителей в количестве, обеспечивающем условия осаждения гиалуроновой кислоты без какого-либо сшивания. Причем на этих стадиях придают субстрату гиалуроновой кислоты желаемую форму в виде частиц, волокон, ленты, нити, сетки, пленки, диска или гранул. После чего подвергают осажденный субстрат несшитой гиалуроновой кислоты в желаемой форме единственной стадии сшивания в третьей жидкой среде в условиях, подходящих для получения осажденного формованного продукта из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты. Третья жидкая среда имеет рН 11,5 или выше и содержит один или более полифункциональных сшивающих агентов и количество одного или более вторых органических растворителей, обеспечивающих условия осаждения гиалуроновой кислоты. Также предложены формованные продукты из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты, водная композиция, содержащая один из этих продуктов, и применение формованного продукта или водной композиции в косметической хирургической операции. Изобретение позволяет получить формованный продукт из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты с высокой устойчивостью к деформации. 5 н. и 26 з.п. ф-лы, 6 ил., 11 табл., 13 пр.

Способ получения композиции на основе гиалуроновой кислоты // 2640911

Изобретение относится к области косметологии и дерматологии и представляет собой способ получения композиции для использования в качестве дерматологического наполнителя в косметических и медицинских применениях в форме геля, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимеры выбирают из полисахарида, а способ включает по меньшей мере стадии (i), (ii) и (iv) и необязательно стадию (iii), где стадия (i) заключается в сшивание смеси, включающей в себя первый полимер и воду, стадия (ii) в завершение сшивания после сшивания на стадии (i), стадия (iii) необязательное смешивание продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером, стадия (iv) заключается в диализе продукта, полученного на стадии (ii) или на стадии (iii), где стадия диализа (iv) включает стадии (iv.1)-(iv.3)(iv.1) экструдирование продукта, полученного на стадии (ii) или (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, в котором размер отверстий второго сита меньше, чем размер отверстий первого сита; или экструдирование продукта, полученного на стадии (ii) или (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, и последующее экструдирование экструдированного через второе сито продукта через третье сито, в котором размер отверстий второго сита меньше, чем размер отверстий первого сита, а размер отверстий третьего сита меньше, чем размер отверстий второго сита, где стадия (iv.2) представляет собой заполнение мембраны диализа продуктом, полученным на стадии (iv.1), стадия (iv.3) - обработку заполненной мембраны, полученной на стадии (iv.2), раствором для диализа. Изобретение обеспечивает получение исключительно гомогенных композиций. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 14 пр.