Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной



Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной
Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной

 


Владельцы патента RU 2599014:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной. Сущность способа заключается в том, что извлекают стерины из корневищ с корнями крапивы 70% этиловым спиртом и рассчитывают количественное содержание стеринов по оптической плотности в концентрированной серной кислоте при максимуме поглощения 328 нм в пересчете на эргостерин, и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

Aо - оптическая плотность раствора стандартного образца;

M - точная навеска сырья, г;

mo - точная навеска эргостерина, г;

W - влажность сырья, %.

В случае отсутствия рабочего стандартного образца эргостерина используют значение удельного показателя поглощения его раствора - 800; расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

m - точная навеска анализируемого образца, г;

W - влажность сырья, %.

800 - удельный показатель поглощения эргостерина.

Использование способа позволяет с высокой точностью определять стерины в корневищах крапивы двудомной. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной (Urtica dioica L.), и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа стеринов в сырье данного растения.

Действующая система контроля качества требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их свойствах, позволяющих селективно определять конкретные группы БАС.

В России лекарственным сырьем крапивы двудомной являются листья как источник витамина К1. Кроме того, известно, что за рубежом применяются корневища с корнями, в качестве источника препаратов для урологической практики, обладающих противоопухолевой активностью (Простафортон, Базотон) (1, 2). Несмотря на положительный европейский опыт в применении корневищ с корнями крапивы двудомной, в нашей стране до сих пор не выпускаются препараты на основе корневищ с корнями крапивы двудомной. Это связано с тем обстоятельством, что в настоящее время отсутствует фармакопейная статья на указанный вид сырья, а также препараты на его основе.

Химический состав корневищ с корнями крапивы двудомной достаточно богат и содержат стерины, полисахариды, лектины и другие соединения (2). В то же время до сих пор остается неясным, какая именно группа БАС обладает антинеопластической активностью. При этом большинство авторов склоняются к мысли, что этим свойством обладают стерины (1, 2, 3). Необходимым условием для проверки правильности этого предположения является выделение индивидуальных БАС из корневищ с корнями крапивы двудомной и исследование их свойств.

В качестве прототипа нами выбран спектроскопический метод количественного определения стеринов и сапонинов, основанный на галохромной реакции в серной кислоте (4, 5). Однако данный метод не позволяет селективно определить спектральные характеристики стеринов, отличается многостадийной пробоподготовкой, в ходе которой анализируемая проба перед растворением в серной кислоте досуха высушивается. Это существенно увеличивает время анализа, может приводить к деструкции анализируемых БАС и к искажению результатов анализа (ошибка единичного определения составляет ±5,60%).

Ранее нами с помощью колоночной хроматографии был выделен один из доминирующих компонентов корневищ с корнями крапивы двудомной. С помощью 1Н-ЯМР, ТСХ, и масс-спектрометрии было установлено, что выделенное вещество является эргостерином (6).

Таким образом, целью изобретения является разработка 1 метода количественного определения суммы стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной.

Техническим результатом является улучшение способа количественного анализа стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной.

Технический результат достигается тем, что извлечения стеринов из лекарственного растительного сырья осуществляется с помощью спирта этилового 70%, с последующим определением стеринов по оптической плотности в концентрированной серной кислоте, на фоне концентрированной серной кислоты при аналитической длине волны 328 нм, при этом расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ao - оптическая плотность раствора стандартного образца;

m - точная навеска сырья, г;

mo - точная навеска эргостерина, г;

W - влажность сырья, %.

В случае отсутствия рабочего стандартного образца эргостерина используют значение удельного показателя поглощения его раствора - 800; расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

m - точная навеска анализируемого образца, г;

W - влажность сырья, %.

800 - удельный показатель поглощения эргостерина.

В качестве раствора стандартного образца целесообразно использовать раствор эргостерина или значение его удельного показателя поглощения в концентрированной серной кислоте, так как результаты спектрофотометрического исследования растворов эргостерина и извлечений из корневищ с корнями крапивы двудомной, представленные на рис. 1 и 2, показывают наличие одинаковых максимумов поглощения при аналитической длине волны 328 нм (рис. 1, 2). В результате происходит уменьшение риска термического разложения химических соединений, продолжительности, уменьшения числа технологических стадий, сокращается время анализа и повышается точность метода количественного определения стеринов в лекарственном растительном сырье.

Способ реализуется следующим образом.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 200 мл, добавляют 100 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин, затем закрывают той же пробкой, охлаждают до комнатной температуры, после чего колбу снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. 1 мл полученного извлечения помещают в градуированную пробирку на 10 мл, добавляют осторожно по каплям 4 мл серной кислоты концентрированной и нагревают на водяной бане при температуре 70°С в течение 1 часа. Затем содержимое пробирки количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и объем доводят концентрированной серной кислотой до метки (испытуемый раствор А). Измерение оптической плотности проводят сразу после приготовления раствора при аналитической длине волны 328 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца эргостерина.

Приготовление раствора эргостерина. Около 0,01 г (точная навеска) стандартного образца эргостерина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 10 мл в концентрированной серной кислоты, нагревают в водяной бане при температуре 70°С в течение 1 часа, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора до метки концентрированной серной кислотой и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят до метки концентрированной серной кислотой, перемешивают и измеряют оптическую плотность сразу после приготовления раствора при аналитической длине волны 328 нм. При этом в качестве раствора сравнения используют концентрированную серную кислоту.

Расчет количественного содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ao - оптическая плотность раствора стандартного образца;

m - точная навеска сырья, г;

mo - точная навеска эргостерина, г;

W - влажность сырья, %.

В случае отсутствия рабочего стандартного образца эргостерина используют значение удельного показателя поглощения его раствора - 800; расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

m - точная навеска анализируемого образца, г;

W - влажность сырья, %.

800 - удельный показатель поглощения эргостерина.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1

Аналитическую пробу корневищ с корнями крапивы двудомной, заготовленного в Ботаническом саду в 2014 г., измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г сырья (точная навеска) воздушно-сухого сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 200 мл, добавляют 100 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин. Затем закрывают той же пробкой, охлаждают до комнатной температуры. После чего колбу снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. 1 мл полученного извлечения помещают в градуированную пробирку на 10 мл, добавляют осторожно по каплям 4 мл серной кислоты концентрированной и нагревают на водяной бане при температуре 70°С в течение 1 часа. Затем содержимое пробирки количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и объем доводят концентрированной серной кислотой до метки (испытуемый раствор А). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 328 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора эргостерина. Определяем значение оптической плотности испытуемого раствора А=0,924629, раствора эргостерина А0=0,701958, массу сырья m=1,0050 и стандартного образца эргостерина m0=0,0056.

Содержание суммы стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

Содержание стеринов X=3,26%.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±1,54%.

Пример 2

Аналитическую пробу корневищ с корнями крапивы двудомной, заготовленных в с. Большая Черниговка в 2014 г., измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г сырья (точная навеска) воздушно-сухого сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 200 мл, добавляют 100 мл 70% этилового спирта. Далее процесс проводят в соответствии с примером 1.

Для расчета содержания стеринов использовали удельный показатель поглощения эргостерина, который равен 800, определили значение оптической плотности испытуемого раствора А=0,942034, массу сырья m=1,0070.

Содержание суммы стеринов Х=3,25%.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±1,54%.

Таким образом, заявленный способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной разработан впервые для анализа данной группы БАС и обладает следующими преимуществами:

1) позволяет селективно анализировать выбранную группу БАС в корневищах с корнями крапивы двудомной;

2) существенно сокращает время анализа сырья: с 4 часов (прототип) до 3 часов;

3) сокращается количество технологических стадий: с 11 (прототип) до 7;

4) уменьшается ошибка единичного определения: с±5,60% (прототип) до ±1,54%.

Источники информации

1. Кукес В.Г. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / Под ред. В.Г. Кукеса. - М.: Медицина, - 1999. - 192 с.

2. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов / Изд. 2-е, перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», - 2007. - 1239 с.

3. American herbal pharmacopoeia® botanical pharmacognosy - microscopic characterization of botanical medicines - CRC Press is an imprint of Taylor & Francis Group, an Informa business, - 2011.

4. Генкина Г.Л, Мжельская Л.Г. Спектрофотометрия гликозидов олеаноловой кислоты и хедерагенина в концентрированной серной кислоте // Химия природных соединений, - 1977. - №2. - с. 220-227.

5. Пономарев В.Д., Оганесян Э.Т. Спектры поглощения пентациклических тритерпеноидов в серной кислоте // Химия природных соединений, -1971. - №2. с. 147-150.

6. Балагозян Э.А., Рыжов В.М. Исследование стериновых соединений густого экстракта корневищ с корнями крапивы двудомной // Сборник материалов IV Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт-Петербург, 2014 г. - СПб.: Изд-во СПХФА, - 2014. C. 406-408.

Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной с помощью спектрофотометрии, отличающийся тем, что экстракцию из корневищ с корнями крапивы двудомной осуществляют 70% спиртом этиловым, пробоподготовку проводят без стадии выпаривания и расчет количественного содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;
Аo - оптическая плотность раствора стандартного образца;
m - точная навеска сырья, г;
mo - точная навеска эргостерина, г;
W - влажность сырья, %,
в случае отсутствия рабочего стандартного образца эргостерина используют значение удельного показателя поглощения его раствора - 800; расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - точная навеска анализируемого образца, г;
W - влажность сырья, %.
800 - удельный показатель поглощения эргостерина.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области диагностики и может быть использовано для тестирования и корректировки работы алкометра. Портативный картридж со стандартным спиртовым газом для алкометра содержит стандартный спиртовой газ с предварительно заданной концентрацией и выполнен с возможностью отображения значения указанной концентрации на внешней поверхности картриджа (1) или его сохранения на запоминающем носителе, предусмотренном на картридже (1).

Группа изобретений относится к медицине, а именно диагностике содержащихся в выдыхаемом воздухе паров алкоголя, и может быть использована в клинической практике, промышленности, здравоохранении или для личного пользования.
Изобретение относится к технике контроля состояния водителей транспортных средств. Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе диагностики физического состояния водителя заключается в том, что в забираемой у водителя воздушной пробе определяют концентрацию алкоголя, принимают у водителя речевое сообщение и определяют координаты местонахождения транспортного средства.
Изобретение относится к контролю состояния водителей транспортных средств. Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе газового анализа выдыхаемого воздуха заключается в том, что забирают у водителя выдыхаемую воздушную пробу, определяют при помощи измерительных датчиков концентрации газовых компонентов в этой пробе, определяют координаты местонахождения транспортного средства, передают посредством беспроводной связи измеренные значения концентраций и координаты местонахождения транспортного средства в блок анализа и принятия решений, где сравнивают полученные значения концентраций с предельно допустимыми значениями.

Изобретение относится к медицине. .

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении эффективности диетотерапии при нарушениях липидного обмена. .

Изобретение относится к акушерству . .

Изобретения относятся к области испытательной и измерительной техники. Способ включает регистрацию оптического излучения в спектре чувствительности фотодиода, сопровождающего инициирование заряда взрывчатого вещества (ВВ), находящегося в объекте испытания (ОИ).

Изобретение относится к области ядерной энергетики и касается системы измерения концентрации борной кислоты в первом контуре теплоносителя ядерного реактора. Система включает в себя два источника лазерного излучения, измерительную и эталонную кювету, фотоприемный блок, блок обработки сигналов, блок управления, блок измерения параметров лазерного излучения, два модулятора лазерного излучения, три оптических переключателя, три управляемых оптических ослабителя, управляемый спектральный фильтр, четыре волоконно-оптические линии, пять отражательных и пять полупрозрачных зеркал.

Изобретение относится к оптике и может быть использовано при определении фазового состава нанопорошков из оксида иттрия. В способе определения моноклинной метастабильной фазы оксида иттрия по сдвигу полос оптического поглощения ионов Nd3+ или других редкоземельных элементов в нанокристаллитах для определения степени поглощения излучения в диапазоне длин волн 200-1100 нм изготовлены образцы из нанопорошка оксида иттрия в моноклинной и кубической фазах круглой формы диаметром 15 мм и толщиной 200÷600 мкм путем прессования под давлением 50-150 МПа без добавок.

Изобретение относится к нанотехнологии и может быть использовано при изготовлении спазеров, плазмонных нанолазеров, при флуоресцентном анализе нуклеиновых кислот, высокочувствительном обнаружении ДНК, фотометрическом определении метиламина.

Изобретение относится к системам для контроля пара и определения распределения размеров капель. Способ определения качества влажного пара, находящегося внутри паровой турбины, включает излучение оптическим датчиком (52, 54) множества длин волн через влажный пар, измерение с помощью оптического датчика (52, 54) интенсивности влажного пара, соответствующей каждой из множества длин волн, пропускаемых через влажный пар, определение вектора отношения интенсивностей путем деления интенсивности влажного пара на соответствующую интенсивность сухого пара для каждой из множества длин волн, последовательное применение масштабных коэффициентов к вектору отношения интенсивностей для получения масштабированного вектора отношения интенсивностей, расчет подходящего значения для каждого из масштабных коэффициентов для получения множества разностей, определение минимальной разности из указанного множества разностей, определение распределения размеров капель путем вычисления количественной плотности капель, соответствующей минимальной разности, и определение качества пара на основе распределения размера капель.

Способ возбуждения и регистрации оптических фононов включает в себя нанесение на острие иглы кантилевера АСМ слой активного материала. В нём производят возбуждение активирующим импульсом фемтосекундного лазера оптических фононов.

Изобретение относится к области дистанционного мониторинга природной среды и касается способа определения объема выбросов в атмосферу от природных пожаров. Способ включает синхронную съемку поверхности установленными на космическом носителе цифровой видеокамерой и гиперспектрометром, выделение методами пространственного дифференцирования функции яркости видеоизображения контура пожара, калибровку яркости пикселей внутри контура, расчет по измерениям гиперспектрометра концентрации вредных выбросов от пожара по эталонному затуханию дважды прошедшего атмосферу светового луча в полосе поглощения кислорода 761…767 нм и его затуханию в видимом диапазоне.

Изобретение относится к способу измерения концентрации урана в водном растворе, включающему в себя следующие последовательные этапы: a) электрохимическое восстановление до валентности IV урана, присутствующего в водном растворе с валентностью выше IV, причем это восстановление осуществляют при pH<2 путем пропускания электрического тока в раствор; b) измерение оптической плотности раствора, полученного по завершении этапа a), на выбранной длине волны между 640 и 660 нм, а предпочтительно - 652 нм; и c) определение концентрации урана в водном растворе путем выведения концентрации урана валентности (IV), присутствующего в водном растворе, полученном по завершении этапа a), из результата измерения оптической плотности, полученного на этапе b).

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к спектральному абсорбционному анализу с дифференциальной схемой измерения концентрации паров ртути и паров бензола.

Изобретение относится к медицине и описывает способ идентификации водорастворимого лекарственного вещества путем сравнения с эталоном. Способ характеризуется проведением ионометрии, титрометрии и спектрофотометрии, при этом ионометрические исследования проводят с использованием различных концентраций лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации идентифицируемого вещества в каждом последующем растворе кратно по сравнению с предыдущим, титрометрические зависимости измеряют в различных концентрациях идентифицируемого лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации в каждом последующем титруемом растворе ниже, чем в предыдущем, в кратное число раз, титрующий раствор вводят равномерно в течение всего процесса титрования, дополнительное измерение спектрофотометрических зависимостей проводят не менее чем в двух разных концентрациях: насыщенного раствора и разбавленного в 10-20 раз, а измерения спектрофотометрических зависимостей проводят в двух растворителях: бидистиллированной воде и ином растворителе из ряда спиртов.
Наверх