Способ диагностики нематопсиозиса у двустворчатых моллюсков (устриц и мидий), культивируемых в черном море



Способ диагностики нематопсиозиса у двустворчатых моллюсков (устриц и мидий), культивируемых в черном море
Способ диагностики нематопсиозиса у двустворчатых моллюсков (устриц и мидий), культивируемых в черном море

 


Владельцы патента RU 2599175:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт морских биологических исследований имени А.О. Ковалевского РАН" (ФГБУН ИМБИ) (RU)

Способ предусматривает ежемесячный отбор 15-25 экземпляров моллюсков в исследуемой акватории, внешнее и внутреннее обследование и последующий паразитологический анализ. Внешнее обследование включает изучение створок моллюсков. Внутреннему обследованию подвергают жабры и соединительные ткани тела моллюсков, которые затем удаляют из раковин, и под микроскопом выявляют наличие ооцист грегарин и определяют степень зараженности моллюсков. Эпизоотологической фон исследуемой акватории по фактору нематопсиозиса считают слабо инвазированным, если заражено от 0,1 до 10% моллюсков в пробе; средним - при 11-30%; сильным - 31-55%, и гиперзараженность констатируется, когда 56-100% обследованных моллюсков поражены нематопсисом. Способ позволяет диагностировать нематопсиозис у мидий и устриц на самых ранних стадиях его возникновения и минимизировать убытки, который он может нанести. 3 ил., 3 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологиям и предназначено для установления заболевания коммерческих моллюсков: устрицы съедобной Ostrea edulis и мидии средиземноморской Mytilus galloprovincialis, выращиваемых на фермах в Черном море.

Заболевание двустворчатых моллюсков возникает в результате заражения грегариной Nematopsis legeri de Beachamp, 1910 (сем. Porosporidae) и называется нематопсиозисом. Грегарины N. legeri являются паразитическими простейшими и характеризуются наличием гетероксенности, в их жизненном цикле участвуют два хозяина. Моллюски играют роль промежуточного хозяина в жизненном цикле нематопсисов, в их соединительных тканях проходит спорогония. Окончательным хозяином N. legeri в Черном море является каменный краб Eriphia verrucosa Forskal, 1775 [1, 2, 3], в пищеварительном тракте которого происходит вегетативное и половое размножение паразита. Двустворчатые моллюски заражаются гимноспорами грегарин в процессе фильтрации ими воды. Гимноспоры раздражают жаберный эпителий моллюсков и стимулируют скопление в нем фагоцитов, которые захватывают гимноспоры и транспортируют их в жаберные лакуны, где паразит развивается, формирует оболочку и образует ооцисту, уже способную заразить краба.

Отрицательное влияние N. legeri на моллюсков проявляется в том, что скапливающиеся в кровеносных сосудах жабр ооцисты, по размерам превышающие элементы крови моллюсков, вызывают закупорку кровеносных сосудов, при которой нарушается кровоток, разрывается жаберный эпителий. Размеры ооцист варьируют в зависимости от видовой принадлежности хозяина: у Ostrea edulis они составляют 12,7×8 мкм, у Mytilus galloprovincialis - 15,4×7,7 мкм. В одном моллюске может содержаться несколько миллионов ооцист, что ведет к их ослаблению, в таких случаях наблюдается несмыкание створок раковины, в результате чего в мантийную полость набивается ил, и они теряют свою коммерческую ценность. Острая форма заболевания приводит к гипоксии, нарушению углеводного обмена, истощению запасов гликогена и, в конечном итоге, к гибели моллюска [3, 4]. Иными словами, поражение культивируемых устриц и мидий грегариной Nematopsis legeri может вызвать большие экономические потери в марихозяйствах по выращиванию этих моллюсков.

Авторами проанализирована существующая научная литература о систематическом положении, встречаемости и особенностях биологии грегарины N. legeri. Выяснилось, что к настоящему времени не известна методика, которая помогла бы фермерам, не имеющим специального биологического образования, пошагово произвести ряд действий, позволяющих безошибочно идентифицировать инвазию моллюсков нематопсисом, что особенно важно для профилактики нематопсиозиса в марихозяйствах.

Известен ряд способов диагностики заболеваний устриц и мидий, вызываемых чужеродными организмами (паразитами и комменсалами). К их числу относится способ диагностики и профилактики проктэкозиса черноморских мидий в условиях марикультуры [5]. У вскрытых мидий проводят внешний осмотр мягких тканей и выявляют морфологические и цветовые аномалии мантии и гепатопанкреаса. Затем образцы тканей изучают компрессорным методом под микроскопом и по конкретным признакам выявляют спороцист - возбудителей заболевания.

Известен также способ диагностики полидорозиса у выращиваемых в Черном море двустворчатых моллюсков [6]. В соответствии с данной методикой, вначале производится внешний осмотр раковин живых мидий и устриц с целью выявления двойных отверстий (вход-выход), проделанных сверлящей полихетой из рода Polydora. Затем моллюсков вскрывают и исследуют внутренний слой раковины для того, чтобы обнаружить выделяющиеся цветом проделанные полихетами извилистые U-образные ходы или пузырчатые вздутия. В случае обнаружения указанных аномалий ходы и вздутия на раковине взламывают скальпелем, обнаруженных полихет извлекают и определяют их таксономическую принадлежность.

Существует способ диагностики пионозиса у выращиваемых в Черном море устриц и мидий [7]. Согласно этой методике, моллюска вначале осматривают для выявления характерных отверстий в периостракуме и количественной оценки площади поражения раковины перфорирующей губкой (%), затем раскрывают раковину, удаляют тело моллюска и осматривают гипостракум, для выявления конической горбистости на поверхности раковины. Затем раковину осматривают на просвет с целью выявления отверстий в периостракуме и гипостракуме или систем галерей в остракуме. Образцы ткани губки исследуют под микроскопом с помощью компрессорного метода, кремневые спикулы измеряют и зарисовывают, что позволяет определить видовую идентичность их хозяина.

К недостаткам перечисленных способов, не позволяющим использовать их для диагностики нематопсиозиса, относятся невозможность их применения из-за различий в систематическом положении, морфо-анатомических признаков и биологических особенностей. В аналогах фигурируют виды: плоский червь Proctoeces maculatus, (тип Plathelminthes, класс Trematoda), два вида сверлящих полихет из рода Polydora (тип Annelida, класс Polychaeta) и перфорирующая губка Pione vastifica (тип Porifera, класс Demospongiae).

В основу Способа диагностики нематопсиозиса у выращиваемых в Черном море устриц и мидий поставлена задача контроля состояния моллюсков в марихозяйствах, а также естественного эпизоотического фона в конкретной акватории путем выявления признаков заболевания.

Поставленная задача достигается тем, что заболевание (нематопсиозис) диагностируют путем внешнего и внутреннего обследования моллюсков для выявления клинических признаков и последующего паразитологического анализа. Для выявления заболевания, в течение всего срока культивирования, ежемесячно исследуют пробу по 15-25 экз. живых моллюсков, включающую годовиков, 2- и 3-годовалых моллюсков.

Моллюска рассматривают под бинокуляром с целью выявления возможного несмыкания створок. Затем его вскрывают скальпелем и осматривают под бинокуляром ткани. Из раскрытой раковины удаляют тело моллюска, образцы тканей с помощью компрессорного метода исследуют под микроскопом (увеличение ×180) для выявления наличия ооцист грегарин.

По результатам анализа моллюсков считают слабо инвазированными, если среднее количество ооцист на 1 мм2 мазка жабр в исследуемой пробе составляет 0,1-1; средне инвазированными - при наличии от 1 до 10 ооцист на 1 мм2 мазка. Сильно инвазированными считаются моллюски, у которых количество ооцист достигает - 11-50 ооцист·мм-2 жабр. Гиперзараженными считают моллюсков, у которых количество ооцист превышает 51 ооцист·мм-2 жабр.

Изобретение поясняется чертежами.

Фиг. 1 - ооцисты грегарин Nematopsis legeri из жаберных лепестков О. edulis (А) и M. galloprovincialis (Б, В); Фиг. 2 - аномальный вид жабер моллюска (разрывы, бледный цвет), пораженного грегариной Nematopsis legeri (А), внешний вид жабр здорового моллюска (Б); Фиг. 3 - несмыкание створок раковины устрицы О. edulis, пораженной нематопсиозисом.

Способ осуществляется следующим образом.

Клинические признаки. На начальном этапе развития заболевания происходит внутриклеточное развитие паразита в фагоцитах моллюсков, в результате чего они гипертрофируются и увеличиваются в размерах в 3-4 раза. В соединительных тканях моллюсков скапливаются ооцисты грегарины N. legeri (Фиг. 1). Жабры моллюсков становятся бледными (Фиг. 2). При усилении инвазии наблюдается закупорка кровеносных сосудов, происходит разрыв жаберного эпителия и нарушение жаберных нитей (Фиг. 3). При гиперинвазии, помимо всех перечисленных выше признаков, наблюдается несмыкание створок устриц и мидий (Фиг. 4).

Клинические признаки нематопсиозиса:

а) наличие в жабрах моллюсков ооцист грегарин N. legeri;

б) изменение цвета жабр и соединительных тканей, появление на жабрах темных пятен;

в) разрыв жаберного эпителия и разрушение жаберных нитей;

г) несмыкание створок раковин моллюсков.

Паразитологический (эпизоотологический) анализ. При изучении эпизоотологической ситуации акватории конкретного марихозяйства по выращиванию двустворчатых моллюсков или акватории, предполагаемой для этих целей, берут пробу в размере 15-25 экз. моллюсков 2-3-годовалого возраста из разных частей морской фермы или 4-5 участков, удаленных друг от друга на 150-200 м. Для выявления корректной эпизоотологической картины акватории хозяйства анализ проб проводится непосредственно после их отбора.

Каждую устрицу или мидию тщательно очищают от обрастателей и промывают в морской воде. После этого моллюска рассматривают под бинокуляром с целью выявления возможного несмыкания створок. После внешнего осмотра раковину моллюска вскрывают скальпелем, перерезая основной мускул-замыкатель, осматривают под бинокуляром ткани, выявляя изменение цвета и появление темных пятен на жабрах и соединительных тканях.

Затем из раскрытой раковины удаляют тело моллюска, образцы тканей с помощью компрессорного метода исследуют под микроскопом (увеличение ×180) для выявления наличия ооцист грегарин. Обнаруженные ооцисты грегарин измеряют и зарисовывают, на основании чего устанавливают их видовую принадлежность. Количество ооцист грегарин подсчитывают в 100 полях зрения микроскопа, вычисляют среднее значение ооцист на 1 мм поверхности жабр.

Оценка эпизоотического фона

Для оценки паразитологической ситуации на акватории марихозяйств авторами предлагается шкала степеней заражения устриц и мидий нематопсисом, которая свидетельствует о потенциальной угрозе для культивируемых моллюсков по фактору нематопсиозиса. Заражение считается слабым, если заражено от 0,1 до 10% моллюсков в пробе, средним - при 11-30%, сильным - 31-55%; гиперзараженность констатируется, когда 56-100% обследованных моллюсков поражены нематопсисом.

Примеры

Пример 1

Пробу устрицы обыкновенной Ostrea edulis 2-4-летнего возраста в количестве 56 экз. (опытная устричная ферма б. Казачья, г. Севастополь) исследовали для выявления признаков нематопсиозиса. Каждого из моллюсков помещали в чашку Петри и проводили внешний осмотр в отраженном свете на стереоскопическом микроскопе МБС-10. Затем устриц вскрывали, образцы тканей с помощью компрессорного метода исследовали под микроскопом, обнаруженные ооцисты грегарин измеряли, зарисовывали, анализ характеристик ооцист подтвердил их идентичность N. legeri. Экстенсивность инвазии составила 26,8%, среднее количество ооцист, обнаруженных на 1 мм2 мазка жабр, составляло 16,7. С учетом частоты встречаемости инвазированных нематопсисом устриц в этой пробе ситуацию в марихозяйстве в б. Казачья по фактору нематопсиозиса можно охарактеризовать как соответствующую средней степени зараженности. Это свидетельствовало об относительно благополучном положении эпизоотического фона в бухте Казачья по фактору нематопсиозиса.

Пример 2

На предмет нематопсиозиса исследовали пробу мидий 2-3-летнего возраста из 71 экз., собранную в акватории Карадагского природного заповедника (Кузмичевы камни). Исследования проводили в специализированной лаборатории Карадагской биостанции НАН Украины. Анализ характеристик ооцист, обнаруженных в жабрах мидий, подтвердил их идентичность N. legeri. Среднее количество ооцист в 1 мм2 жабр составляло 3,73. В этой пробе 33,8% мидий были заражены нематопсисом, что позволило охарактеризовать эпизоотический фон по фактору нематопсиозиса в данной акватории как имеющий сильную степень заражения.

Пример 3

Пробу мидий 2-3-летнего возраста из 46 экз. выбирали в Сердоликовой бухте Карадагского природного заповедника, исследования проводили в специализированной лаборатории Карадагской биостанции НАН Украины. Обнаруженные ооцисты грегарин идентифицировали как N. legeri. Среднее количество ооцист в 1 мм2 жабр составляло 6,18. В этой пробе 63% мидий были заражены нематопсисом. С учетом высокой частоты встречаемости инвазированных нематопсисом мидий эпизоотологическую ситуацию в этом районе по нематопсиозису следует считать крайне неблагоприятной, соответствующей степени гиперзараженности.

Предлагаемый способ позволяет диагностировать нематопсиозис у мидий и устриц на самых ранних стадиях его возникновения и минимизировать убытки, которые может нанести нематопсиозис марихозяйству.

Литература

1. Белофастова И.П. Грегарины рода Nematopsis (Eugregarinida, Porosporidae) - паразиты черноморских моллюсков / И.П. Белофастова // Паразитология. - 1996. - Т. 30, вып. 2. - С. 159-173.

2. Белофастова И.П. Nematopsis legeri De Beachamp, 1910 (Eugregarinida, Porosporidae) - паразиты моллюсков Черного моря / И.П. Белофастова // Экология моря. - 1997. - Вып. 46. - С. 3-6.

3. Гаевская А.В. Паразиты, болезни и вредители мидий (Mytilus, Mytilidae). VI. Полихеты (Polychaeta). - Севастополь: ЭКОСИ-Гидрофизика, 2008. - 137 с.

4. Ковальчук Н.А. Распространение в Черном море грегарины Nematopsis legeri, возбудителя нематопсиоза мидий и устриц / Н.А. Ковальчук, Е.В. Холодковская, В.В. Губанов // V Всесоюзная конференция по промысловым беспозвоночным: тезисы докладов (Минск, 9-13 октября 1990 г.). - Минск, 1990. - С. 180-181. (7).

5. Способ диагностики и профилактики проктэкозиса черноморских мидий в условиях марикультуры. Пат. №82302, Украина, МПК А01К 61/00.

6. Спосiб дiагностики полiдорозису у вирощуваних у Чорному мopi двостулкових молюскiв (устриць i мiдiй). Пат. №60630, Украина, МПК А01К 61/00.

7. Спосiб дiагностики пioнозicу у мiдiй i устриць, що культивують у Чорному мopi. Пат №82820, Украина, МПК А01К 61/00.

Способ диагностики нематопсиозиса у двустворчатых моллюсков (устриц и мидий), культивируемых в Черном море, включающий ежемесячный отбор 15-25 экз. моллюсков в исследуемой акватории, внешнее и внутреннее обследование моллюсков для изучения клинических признаков заболевания и последующий паразитологический анализ, отличающийся тем, что внешнее обследование включает изучение створок моллюсков; внутреннему обследованию подвергают жабры и соединительные ткани тела моллюсков, которые затем удаляют из раковин, и под микроскопом выявляют наличие ооцист грегарин и определяют степень зараженности моллюсков, а эпизоотологический фон исследуемой акватории по фактору нематопсиозиса считают слабо инвазированным, если заражено от 0,1 до 10% моллюсков в пробе; средним - при 11-30%; сильным - 31-55%, и гиперзараженность констатируется, когда 56-100% обследованных моллюсков поражены нематопсисом.



 

Похожие патенты:

Способ включает подключение бассейна для вылова рыбы к отверстию, расположенному в отсеке нахождения рыбы бассейна для рыбы, отведение воды и находящейся в ней рыбы в бассейн для улова, возврат отведенной воды в отсек нахождения рыбы.
Способ включает отбор половозрелых производителей, инъецирование их суспензией гипофиза рыб, отбор половых продуктов, осеменение икры, обесклеивание ее раствором молока при перемешивании пузырьками воздуха.
Изобретение относится к экологии и может быть использовано для неинвазивной прижизненной оценки физиологического состояния рыб по изменению цвета кожных покровов.

Устройство включает понтоны для установки устройства на водоеме, внешний садок из водонепроницаемого материала, верхняя часть которого имеет форму куба, нижняя - форму опрокинутой усеченной пирамиды с металлическим наконечником и отверстием на вершине, насос и аэратор.

Устройство включает две основные части (2), между которыми расположена по меньшей мере одна шина (14). Каждая основная часть (2) содержит обращенные друг к другу на одном уровне соединенные первые захватывающие элементы (7) и вторые захватывающие элементы (15), выполненные с возможностью скольжения по вертикали в каждой основной части (2) для установки над указанными первыми захватывающими элементами (7) с их перекрыванием.

Способ включает отлов производителей разных рас и стадий половой зрелости. Маточное стадо резервируют в морской воде соленостью 3,07÷8,00‰ до наступления полового созревания производителей.

Способ предусматривает добавление в водную среду обитания молоди рыб гуминового соединения, содержащего в определенных количествах гуминовые кислоты и фульвокислоты.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано при создании агробиокомплексов, предназначенных для выращивания растений, животных, рыб и птиц.

Установка включает опорный каркас, напорную емкость, инкубационные сосуды для икры, емкость для отвода личинок с сетчатым вкладышем и систему труб водоподачи и водоотведения.

Изобретение относится к рыбоводству и может быть использовано при выращивании молоди осетровых на предприятиях по разведению и воспроизводству. Способ предусматривает обработку оплодотворенной икры препаратом "Споротермин" в количестве 4 г на 100 мл воды на 1 кг оплодотворенной икры с экспозицией не менее 15 минут.
Наверх