Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на скелет эритроцитов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2601404:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов. Способ ззаключается в определении в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-3 и определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision». При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-3 до 14,50±0,44% и увеличении в периферической крови количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,70±1,1% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.

 

1. Цель изобретения - разработать способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на белок полосы-3 скелета эритроцита при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа, позволяющего оценить влияние цитомегаловирусной инфекции на содержание белка полосы-3 скелета эритроцита при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации приводящее к снижению числа нормальных эритроцитов и увеличению дегенеративных форм в периферической крови, что может вызвать угрозу формирования анемии.

3. Этот белок называется полосой-3, поскольку занимает при гель-электрофорезе в присутствии додецилсульфата третье порядковое место относительно других белков. Полоса-3 является трансмембранным белком и имеет глобулярную конформацию, а его полипептидная цепь длиной 930 аминокислотных остатков пересекает бислой мембраны эритроцита, по крайней мере, в 10 раз [1, 2, 3, 6]. Каждый эритроцит содержит около 106 молекул белка полосы-3, которые образуют димеры и тетрамеры [1, 9]. Основная функция эритроцитов заключается в переносе O2 к тканям и забирает от них CO2. Белок полосы-3 принимает участие в этом обмене. Находясь в легких, эритроциты избавляются от CO2 путем замены ионов HCO3- на Cl-. В мембране как раз эту функцию выполняет белок полосы-3 [2, 4]. Он осуществляет пассивный транспорт полярных молекул через неполярный бислой мембраны. Поэтому полоса-3 обеспечивает трансмембранный гидрофильный проход, по которому ионы Cl- и HCO-3 переносятся без контакта с гидрофильным окружением липидного бислоя [5, 8].

4. Новая техническая задача

Разрабатывается способ, позволяющий путем гель-электрофореза установить количественное содержание в мембране эритроцита белка полосы-3, по которому судят о состоянии целостности скелета эритроцита и выполнения транспортной функции в процессе газообмена.

5. В доступной литературе имеются сведения [7, 8] об участии белка полосы-3 в переносе Na+, K+, HCO3-, Cl- в организме здорового человека, а также при испытаниях in vitro. В отличие от вышеприведенных данных наши исследования отмечают:

1. Белки полосы-3 помимо транспортной функции участвуют и в связи с белком анкирином, укрепляя скелет эритроцита.

2. Под влиянием цитомегаловирусной инфекции количество белка полосы-3 снижается, что оказывает влияние на устойчивость скелета эритроцита.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследовано 25 беременных в возрасте 18-27 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ХЦМВИ) в стадии обострения на 25-26 неделях гестации и 10 беременных, не болевших на всем протяжении беременности. Диагноз обострение ХЦМВИ устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.2. Исследование белкового состава мембран эритроцитов проводили с помощью вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (7,5-10%) полиакриламидном геле в присутствие 0,1% раствора додецилсульфата натрия. Полипептидные зоны окрашивали в 0,1% растворе R-250, 50% растворе спирта и 7% растворе уксусной кислоты. Идентификацию электрофореграмм проводили при длине волны 590-600 нм с помощью установки «BioDocAnalize» (Германия).

6.3. Морфология эритроцитов, окрашенных по Романовскому-Гимза, изучалась на цитофотометрической установке «Mekos» (Москва).

6.4. Морфофункциональное состояние эритроцитов периферической крови изучалось с помощью цитофотометрической установки «Pixera» (США) по программе «BioVision» (США).

7. Все расчеты производились с использованием программного обеспечения «Statistica 6.0». Проверку нормальности распределения проводили по критерию Колмогорова-Смирнова. Проверку гипотезы по статистической значимости различий двух выборок проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Показатели считали значимыми при p<0,05.

8. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие результаты. При обострении ХЦМВИ на третьем триместре гестации до титра антител IgG к ЦМВ до 1:1600 отмечалось снижение в мембранах эритроцитов методом гель-электрофореза содержание белка полосы-3 до 14,50±0,44% (контроль - 18,34±0,19%; p<0,05). При этом отмечались значительные изменения в структуре эритроцитов периферической крови. У беременных, перенесших обострение ЦМВИ до титра антител 1:1600 во время родов в периферической крови отмечалось увеличение количества дегенеративных форм до 12,70±1,1% (контроль - 4,60±0,08%). Исследования мазков крови выполнялись на аппарате «Mekos» и установке «Pixera» по программе «BioVision». При таких изменениях морфологической структуры эритроцитов, вызванной обострением ЦМВИ, создается угроза формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации.

Литература

1. Anong W., Franco T., Chu Н., Weis Т. Adducin forms a bridge between the erythrocytes membrane and its cytoskeleton and regulates membrane cohesion // Blood. 2009. Vol. 114. P. 1904-1912.

2. Enderward V., Cartron J., Ripoche P., Gros G. RhAG protein of the rgesus complex is ω2 channel in the human red cell membrane // FASEB Jour. 2008. Vol. 22. P. 64-73.

3. Franke R.P., Scharnweber Т., Fuhrmann R. Mrowietz C. Effect of radiographic contrast media (lodixanol, lopromide) on the spectrin / actin-network of the membranous sytoskeleton of erythrocytes // Clin Hemorheol. Microcire. 2013. Vol. 54. P. 273-285.

4. Hoffman J.E., Dodson A., Proverbio F. On the functional use of the membrane compartmentalized pool of ATPby the Na+ and Ca++ pumps in human red blood cell ghosts // J. Gen. Physion. 2009. Vol. 134. P. 351-361.

5. Sowah D., Casey J. An intramoleular transport metabolon: fusion of carbonic anhydrase II to the COOH terminus of the Cl-/HCO3- exchanger, AE1 // Amer. J. Physiol. Cell. Physiol. 2011. Vol. 301. P. 336-346.

6. Stefanovic M., Makham N., Parry E., Garrett I. An 11-amine acid beta-hairpin loop in the cytoplasmic domain of band 3 is responsible for ankyrin binding in mouse erythrocytes // Proc. Nat. Acad. USA. 2007. Vol. 104. P. 13972-13977.

7. Telen M., Kaufman R. The mature erythrocyte // Clinical Hematology. 2004. P. 217-247.

8. Tiffert Т., Lew V.L. Elevated intracellular Ca++ reveals a functional membrane nucleotide pool in intact human red blood cells // J. Gen. Physiol. 2011. Vol. 138. P. 381-391.

9. Wang D., Sarabia V.E., Reithmeier R.A., Kuhlbrandt W. Thee-dimensional map of the dimeric membrane domain of human ery anion exchanger, Band 3 // EMBO Jour. 1994. Vol. 13, №14. P. 3230-3235.

Способ оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов, заключающийся в определении в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-3 и определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision», и при титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-3 до 14,50±0,44% и увеличении в периферической крови количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,70±1,1% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики предрасположенности к посттравматическому остеоартрозу коленного сустава. У пациентов существляют генотипирование полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования ответа онкологического пациента с неходжкинской лимфомой на противораковую терапию, включающую бортезомиб и ритуксимаб, отличающийся тем, что способ включает определение уровня или количества первого прогностического фактора и определение присутствия или количества второго прогностического фактора, причем низкий уровень СD68 или присутствие полиморфизма PSMB1 (P11A) коррелирует по меньшей мере с одним положительным исходом.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения степени гетероплазмии мутаций митохондриального генома. Проводят полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени, вычисляют значение ΔCt, определяют коэффициент эффективности амплификации и рассчитывают степень гетероплазмии мутаций митохондриального генома по формуле.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки микробного спектра эндометрия для этиологической диагностики хронического эндометрита (ХЭ), заключающейся в том, что производят забор фрагмента слизистой оболочки полости матки, далее методом ПЦР в реальном времени количественно оценивают значение контроля взятия материала, при снижении данного показателя ниже 104 ГЭ/образец результат считают недостоверным, общей бактериальной массы, положительный результат при значении более 103 ГЭ/образец, определяют количество геном-эквивалентов микроорганизмов и сравнивают его с пороговым значением (ПЗ), применяя диагностическую панель, включающую Lactobacillus spp., абсолютно- или условно-патогенные микроорганизмы, такие как Eubacterium spp., Enterobacteriaceae, Escherichia coli, Streptococcus spp., Streptococcus agalactiae, Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus spp., Peptostreptococcus spp., Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp., Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex 1 и 2 типов, Cytomegalovirus; при выявлении абсолютно- или условно-патогенных микроорганизмов в количестве, превышающем пороговое значение, делают заключение о потенциальном значении данного микроорганизма в этиологической диагностике хронического эндометрита.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной биологии и онкологии, и предназначено для прогнозирования развития острой почечной недостаточности (ОПН) после кратковременной ишемии почки.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ) с неэффективным местным гипотензивным лечением.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и представляет собой способ прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ) у мужчин русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, включающий забор крови, отличающийся тем, что после выделения ДНК из периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной эстракции проводят анализ полиморфизмов генов интерлейкинов IL-1А -889Т>С, IL-1В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и прогнозируют повышенный риск развития ХКХ в случае выявления генетических вариантов -511Т IL-1В, -511ТТ IL-1В, либо комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -511Т IL-1В и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1В и -584Т IL-4, либо комбинации аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B, прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у мужчин в случае выявления генетического варианта -511СС IL-1В.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска неблагоприятного исхода послеоперационного течения перитонита, осложненного абдоминальным сепсисом, заключающийся в определении и оценке активности фактора Виллебранда, отличающийся тем, что дополнительно определяют и оценивают активность факторов свертывания крови VIII и V, уровень фактора Виллебранда, время Хагеман - зависимого лизиса, активность естественных антикоагулянтов - протеина С и антитромбина на 1-е, 3-и и 7-е сутки после хирургического вмешательства и при увеличении значений 5-ти и более из перечисленных факторов системы гемостаза, по сравнению с предыдущими результатами, прогнозируют высокий риск неблагоприятного исхода послеоперационного течения перитонита, осложненного абдоминальным сепсисом, 4-х факторов - умеренный риск, от 1-го до 3-х - низкий риск.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, из периферической венозной крови выделяют ДНК, после чего проводят анализ полиморфизмов генов TNFα, Ltα, TNFR1 и TNFR2.

Группа изобретений относится к области медицины и иммунологии. В частности, группа изобретений относится к способам иммунологической диагностики, включающим применение как нативной молекулы, так и пептидных последовательностей фрагментов плазминогена, которые могут быть использованы в качестве универсальной системы детекции продуктов протеолиза с образованием на COOH-концах пептидной цепи лизина при проведении анализа для выявления у человека заболеваний, ассоциированных с повышенной активностью протеолитических ферментов.
Наверх