Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на скелет эритроцитов

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов. Способ ззаключается в определении в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-3 и определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision». При титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-3 до 14,50±0,44% и увеличении в периферической крови количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,70±1,1% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.

 

1. Цель изобретения - разработать способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на белок полосы-3 скелета эритроцита при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа, позволяющего оценить влияние цитомегаловирусной инфекции на содержание белка полосы-3 скелета эритроцита при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации приводящее к снижению числа нормальных эритроцитов и увеличению дегенеративных форм в периферической крови, что может вызвать угрозу формирования анемии.

3. Этот белок называется полосой-3, поскольку занимает при гель-электрофорезе в присутствии додецилсульфата третье порядковое место относительно других белков. Полоса-3 является трансмембранным белком и имеет глобулярную конформацию, а его полипептидная цепь длиной 930 аминокислотных остатков пересекает бислой мембраны эритроцита, по крайней мере, в 10 раз [1, 2, 3, 6]. Каждый эритроцит содержит около 106 молекул белка полосы-3, которые образуют димеры и тетрамеры [1, 9]. Основная функция эритроцитов заключается в переносе O2 к тканям и забирает от них CO2. Белок полосы-3 принимает участие в этом обмене. Находясь в легких, эритроциты избавляются от CO2 путем замены ионов HCO3- на Cl-. В мембране как раз эту функцию выполняет белок полосы-3 [2, 4]. Он осуществляет пассивный транспорт полярных молекул через неполярный бислой мембраны. Поэтому полоса-3 обеспечивает трансмембранный гидрофильный проход, по которому ионы Cl- и HCO-3 переносятся без контакта с гидрофильным окружением липидного бислоя [5, 8].

4. Новая техническая задача

Разрабатывается способ, позволяющий путем гель-электрофореза установить количественное содержание в мембране эритроцита белка полосы-3, по которому судят о состоянии целостности скелета эритроцита и выполнения транспортной функции в процессе газообмена.

5. В доступной литературе имеются сведения [7, 8] об участии белка полосы-3 в переносе Na+, K+, HCO3-, Cl- в организме здорового человека, а также при испытаниях in vitro. В отличие от вышеприведенных данных наши исследования отмечают:

1. Белки полосы-3 помимо транспортной функции участвуют и в связи с белком анкирином, укрепляя скелет эритроцита.

2. Под влиянием цитомегаловирусной инфекции количество белка полосы-3 снижается, что оказывает влияние на устойчивость скелета эритроцита.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследовано 25 беременных в возрасте 18-27 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ХЦМВИ) в стадии обострения на 25-26 неделях гестации и 10 беременных, не болевших на всем протяжении беременности. Диагноз обострение ХЦМВИ устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.2. Исследование белкового состава мембран эритроцитов проводили с помощью вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (7,5-10%) полиакриламидном геле в присутствие 0,1% раствора додецилсульфата натрия. Полипептидные зоны окрашивали в 0,1% растворе R-250, 50% растворе спирта и 7% растворе уксусной кислоты. Идентификацию электрофореграмм проводили при длине волны 590-600 нм с помощью установки «BioDocAnalize» (Германия).

6.3. Морфология эритроцитов, окрашенных по Романовскому-Гимза, изучалась на цитофотометрической установке «Mekos» (Москва).

6.4. Морфофункциональное состояние эритроцитов периферической крови изучалось с помощью цитофотометрической установки «Pixera» (США) по программе «BioVision» (США).

7. Все расчеты производились с использованием программного обеспечения «Statistica 6.0». Проверку нормальности распределения проводили по критерию Колмогорова-Смирнова. Проверку гипотезы по статистической значимости различий двух выборок проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Показатели считали значимыми при p<0,05.

8. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие результаты. При обострении ХЦМВИ на третьем триместре гестации до титра антител IgG к ЦМВ до 1:1600 отмечалось снижение в мембранах эритроцитов методом гель-электрофореза содержание белка полосы-3 до 14,50±0,44% (контроль - 18,34±0,19%; p<0,05). При этом отмечались значительные изменения в структуре эритроцитов периферической крови. У беременных, перенесших обострение ЦМВИ до титра антител 1:1600 во время родов в периферической крови отмечалось увеличение количества дегенеративных форм до 12,70±1,1% (контроль - 4,60±0,08%). Исследования мазков крови выполнялись на аппарате «Mekos» и установке «Pixera» по программе «BioVision». При таких изменениях морфологической структуры эритроцитов, вызванной обострением ЦМВИ, создается угроза формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации.

Литература

1. Anong W., Franco T., Chu Н., Weis Т. Adducin forms a bridge between the erythrocytes membrane and its cytoskeleton and regulates membrane cohesion // Blood. 2009. Vol. 114. P. 1904-1912.

2. Enderward V., Cartron J., Ripoche P., Gros G. RhAG protein of the rgesus complex is ω2 channel in the human red cell membrane // FASEB Jour. 2008. Vol. 22. P. 64-73.

3. Franke R.P., Scharnweber Т., Fuhrmann R. Mrowietz C. Effect of radiographic contrast media (lodixanol, lopromide) on the spectrin / actin-network of the membranous sytoskeleton of erythrocytes // Clin Hemorheol. Microcire. 2013. Vol. 54. P. 273-285.

4. Hoffman J.E., Dodson A., Proverbio F. On the functional use of the membrane compartmentalized pool of ATPby the Na+ and Ca++ pumps in human red blood cell ghosts // J. Gen. Physion. 2009. Vol. 134. P. 351-361.

5. Sowah D., Casey J. An intramoleular transport metabolon: fusion of carbonic anhydrase II to the COOH terminus of the Cl-/HCO3- exchanger, AE1 // Amer. J. Physiol. Cell. Physiol. 2011. Vol. 301. P. 336-346.

6. Stefanovic M., Makham N., Parry E., Garrett I. An 11-amine acid beta-hairpin loop in the cytoplasmic domain of band 3 is responsible for ankyrin binding in mouse erythrocytes // Proc. Nat. Acad. USA. 2007. Vol. 104. P. 13972-13977.

7. Telen M., Kaufman R. The mature erythrocyte // Clinical Hematology. 2004. P. 217-247.

8. Tiffert Т., Lew V.L. Elevated intracellular Ca++ reveals a functional membrane nucleotide pool in intact human red blood cells // J. Gen. Physiol. 2011. Vol. 138. P. 381-391.

9. Wang D., Sarabia V.E., Reithmeier R.A., Kuhlbrandt W. Thee-dimensional map of the dimeric membrane domain of human ery anion exchanger, Band 3 // EMBO Jour. 1994. Vol. 13, №14. P. 3230-3235.

Способ оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов, заключающийся в определении в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-3 и определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision», и при титре антител к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-3 до 14,50±0,44% и увеличении в периферической крови количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,70±1,1% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики предрасположенности к посттравматическому остеоартрозу коленного сустава. У пациентов существляют генотипирование полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования ответа онкологического пациента с неходжкинской лимфомой на противораковую терапию, включающую бортезомиб и ритуксимаб, отличающийся тем, что способ включает определение уровня или количества первого прогностического фактора и определение присутствия или количества второго прогностического фактора, причем низкий уровень СD68 или присутствие полиморфизма PSMB1 (P11A) коррелирует по меньшей мере с одним положительным исходом.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения степени гетероплазмии мутаций митохондриального генома. Проводят полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени, вычисляют значение ΔCt, определяют коэффициент эффективности амплификации и рассчитывают степень гетероплазмии мутаций митохондриального генома по формуле.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки микробного спектра эндометрия для этиологической диагностики хронического эндометрита (ХЭ), заключающейся в том, что производят забор фрагмента слизистой оболочки полости матки, далее методом ПЦР в реальном времени количественно оценивают значение контроля взятия материала, при снижении данного показателя ниже 104 ГЭ/образец результат считают недостоверным, общей бактериальной массы, положительный результат при значении более 103 ГЭ/образец, определяют количество геном-эквивалентов микроорганизмов и сравнивают его с пороговым значением (ПЗ), применяя диагностическую панель, включающую Lactobacillus spp., абсолютно- или условно-патогенные микроорганизмы, такие как Eubacterium spp., Enterobacteriaceae, Escherichia coli, Streptococcus spp., Streptococcus agalactiae, Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus, Enterococcus spp., Peptostreptococcus spp., Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp., Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex 1 и 2 типов, Cytomegalovirus; при выявлении абсолютно- или условно-патогенных микроорганизмов в количестве, превышающем пороговое значение, делают заключение о потенциальном значении данного микроорганизма в этиологической диагностике хронического эндометрита.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной биологии и онкологии, и предназначено для прогнозирования развития острой почечной недостаточности (ОПН) после кратковременной ишемии почки.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ) с неэффективным местным гипотензивным лечением.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и представляет собой способ прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ) у мужчин русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, включающий забор крови, отличающийся тем, что после выделения ДНК из периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной эстракции проводят анализ полиморфизмов генов интерлейкинов IL-1А -889Т>С, IL-1В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и прогнозируют повышенный риск развития ХКХ в случае выявления генетических вариантов -511Т IL-1В, -511ТТ IL-1В, либо комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -511Т IL-1В и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1В и -584Т IL-4, либо комбинации аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B, прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у мужчин в случае выявления генетического варианта -511СС IL-1В.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска неблагоприятного исхода послеоперационного течения перитонита, осложненного абдоминальным сепсисом, заключающийся в определении и оценке активности фактора Виллебранда, отличающийся тем, что дополнительно определяют и оценивают активность факторов свертывания крови VIII и V, уровень фактора Виллебранда, время Хагеман - зависимого лизиса, активность естественных антикоагулянтов - протеина С и антитромбина на 1-е, 3-и и 7-е сутки после хирургического вмешательства и при увеличении значений 5-ти и более из перечисленных факторов системы гемостаза, по сравнению с предыдущими результатами, прогнозируют высокий риск неблагоприятного исхода послеоперационного течения перитонита, осложненного абдоминальным сепсисом, 4-х факторов - умеренный риск, от 1-го до 3-х - низкий риск.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, из периферической венозной крови выделяют ДНК, после чего проводят анализ полиморфизмов генов TNFα, Ltα, TNFR1 и TNFR2.

Группа изобретений относится к области медицины и иммунологии. В частности, группа изобретений относится к способам иммунологической диагностики, включающим применение как нативной молекулы, так и пептидных последовательностей фрагментов плазминогена, которые могут быть использованы в качестве универсальной системы детекции продуктов протеолиза с образованием на COOH-концах пептидной цепи лизина при проведении анализа для выявления у человека заболеваний, ассоциированных с повышенной активностью протеолитических ферментов.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и касается способа выбора длительности терапии Церулоплазмином у пациентов с бронхиальной астмой. Сущность способа заключается в том, что у пациентов с бронхиальной астмой определяют в крови супкроксиддисмутазу (СОД) и малоновый альдегид (МА) и их соотношения МДА/СОД после лечения Церулоплазмином в дозе 100 мг внутривенно 1 раз в сутки в течение 7 дней. При достижении соотношения МДА/СОД 5,03 курс антиоксидантной терапии Церулоплазмином прекращают, в противном случае продолжают антиоксидантную терапию в течение 3-4 дней. Использование способа позволяет повысить эффективность терапии бронхиальной астмы. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к микрофлюидной системе и может быть использовано для количественного определения отклика живых клеток на определенные молекулы. Микрофлюидная система для управления картой концентраций молекул, пригодных для возбуждения клеток-мишеней, включает: микрофлюидное устройство (1); камеру (8) или дополнительный микрофлюидный канал, содержащий основание (6), предназначенное для приема клетки-мишени; микропористую мембрану (5), покрывающую сеть отверстий (47, 470); одно или несколько средств снабжения для снабжения одного или каждого из микрофлюидных каналов текучей средой, причем по меньшей мере одна из этих текучих сред содержит стимулирующие молекулы клетки-мишени. При этом микрофлюидное устройство содержит nc≥1 микрофлюидных каналов, снабженных по меньшей мере одним входным отверстием (21, 22) для текучей среды и по меньшей мере одним выходным отверстием для текучей среды; а также n0≥2 отверстий (47, 470) в микрофлюидном канале (4, 40) или распределенных по нескольким микрофлюидным каналам. При этом количества nc микрофлюидных каналов и n0 отверстий связаны соотношением , где 1<i<nc, a n0/ci - количество отверстий на канал Ci. Изобретение позволяет повысить точность анализов и сократить время проведения анализа. 14 з.п. ф-лы, 12 ил.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к скринингу веществ, оказывающих регулирующее вес действие, и может быть использовано в медицине. Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включает приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина. Фармацевтические композиции включают нуклеиновую кислоту, которая подавляет экспрессию гена синовиолина, или ингибитор активности убиквитинирования белка синовиолина. Изобретение позволяет воздействовать на снижение веса за счет ингибирования экспрессии гена или активности белка синовиолина. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу ранней диагностики ангиопатии при метаболическом синдроме. Способ ранней диагностики ангиопатии при метаболическом синдроме включает определение индекса массы тела (ИМТ), содержания в периферической венозной крови триглицеридов и N-концевого фрагмента мозгового натрийуретического пептида (Nt-pro-BNP) и при увеличении содержания Nt-pro-BNP более 500 фмоль/мл, триглицеридов более 3,0 ммоль/л и ИМТ более 35 кг/м2 диагностируют метаболический синдром, включающий ангиопатию. Вышеописанный способ позволяет формировать группы риска по сахарному диабету II типа, атеросклерозу, гипертензии, стенокардии и сердечно-сосудистой недостаточности для проведения профилактики, а также определять эффективность лечебных мероприятий. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гемокоагулологии, и касается способа выявления в крови продуктов паракоагуляции. Способ выявления в крови продуктов паракоагуляции, включающий забор крови, стабилизацию ее 3,8%-ным цитратом натрия, отделение плазмы от форменных элементов крови и определение в ней массы образующегося сгустка, при этом плазму разделяют по 1 мл на контрольную и опытные пробы, в контрольную пробу вводят 0,1 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия, в опытные - по 0,1 мл 0,03-0,09%-ного раствора гипохлорита натрия, проводят инкубацию проб в течение 30 мин при комнатной температуре, определяют в каждой пробе концентрацию фибриногена по методу Рутберг с последующим расчетом разности концентраций опытной пробы с максимальным значением и контрольной пробы, положительное значение которой 0,25 г/л и выше указывает на наличие в плазме продуктов паракоагуляции. Предложенный способ позволяет без предварительного тестирования коммерческих препаратов выявить в плазме больного с коагулопатией продукты паракоагуляции, тем самым повышая качество и доступность диагностики ДВС-синдрома, а также снизить материальные и трудовые затраты за счет применения минимального набора лабораторного оборудования и реактивов. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у недоношенных новорожденных при церебральной ишемии средней степени тяжести, обусловленной врожденной цитомегаловирусной инфекцией. Сущность способа: определяют рН в аспирате из начального отдела полости носа (А), рН в аспирате из глубоко расположенного отдела носоглоточного пространства (В) и активность лактатдегидрогеназы в аспирате из начального отдела полости носа (Ед/л)(С). Затем с помощью дискриминантного уравнения, включающего определяемые показатели, прогнозируют летальный исход у недоношенных новорожденных при церебральной ишемии средней степени тяжести: D=-58,953×А+87,849×В-0,004×С, где D - дискриминантная функция с граничным значением равным +194,71. При D равном или больше граничного значения дискриминантной функции прогнозируют отсутствие летального исхода при церебральной ишемии средней степени тяжести, а при D меньше граничного значения прогнозируют летальный исход при церебральной ишемии средней степени тяжести, обусловленной врожденной цитомегаловирусной инфекцией у недоношенных новорожденных. Вероятность правильного прогноза составляет 80,3%. Изобретение обеспечивает раннее проведение лечебных мероприятий, направленных на предотвращение летального исхода у данной категории больных. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки риска прогрессирования хронической болезни почек (ХБП) у детей. У ребенка с подозрением на ХБП забирают кровь из периферической вены и с помощью метода аллель-специфичной полимеразной цепной реакции проводят идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов генов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) Alu Ins/Del I>D, ангиотензина (AGT) Thr174Met и Met235Thr, рецепторов 1 типа ангиотензина 2 (R1AGT) С1166С и эндотелина-1 (ЕТ-1) Lys198Asn. При выявлении Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT оценивают риск прогрессирования ХБП как легкий. При выявлении Met174Met AGT и Alu Ins/Del АСЕ оценивают средний риск. При выявлении сочетания однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ оценивают высокий риск прогрессирования ХБП. Изобретение позволяет с высокой достоверностью оценивать риск прогрессирования ХБП у детей на основании раннего выявления генетических предикторов - однонуклеотидных полиморфизмов генов. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, иммунологии, и касается способа прогнозирования невынашивания беременности в первой половине гестации у женщин с урогенитальной инфекцией. Сущность способа: методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) определяют концентрацию 25-гидроксивитамина D в сыворотке крови беременной, и при ее значении менее 20 нг/мл прогнозируют невынашивание беременности. Способ позволяет повысить точность прогнозирования путем проведения малоинвазивной процедуры. 3 пр.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано при отборе проб биоматериала для получения достоверных данных по содержанию макро- и микроэлементов шерсти крупного рогатого скота. Способ отбора и подготовки проб шерсти включает настриг требуемого образца по массе не менее 2 г с верхней части холки животного с участка кожи размером 5×5 см. Полученную пробу шерсти замачивают в электрохимически дезинфицирующей активированной католитной воде с температурой от +40 до +60°С в течение 2-3 часов. Далее промывают проточной водой с большим напором до исчезновения видимых загрязнений. Очищают в ультразвуковых ваннах с рабочей частотой колебания 35 кГц, используя последовательно моющие среды: 40%-ный этиловый спирт, бидистиллированную воду по 60 мин в каждой среде. По окончании пробу высушивают в сушильном шкафу при +40°С. Обеспечивается удобство взятия образца шерсти с менее загрязненного участка кожи. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии. Определяют среднекубическую величину новообразования магнитно-резонансной томографией. Определяют иммуноферментным анализом концентрацию биомаркеров в моче и сыворотке крови - фактора роста эндотелия сосудов (VEGF, в нг/мл), матриксной металлопротеиназы 9 (ММР9, в нг/мл) и моноцитарного хемотоксического протеина 1 (МСР1, в нг/мл). Затем полученные значения вводят в выражения С1-С6. Оценивают состояние почки пациента по наибольшему из полученных значений С1-С6. Способ позволяет оперативно, высокотехнологично, неинвазивным путем выделить из группы урологических больных пациентов с раком почки за счет оценки наиболее значимых показателей. 5 пр.
Наверх