Способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов с помощью клеточных тест-систем

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека. Способ включает три этапа: подготовку исследуемого объекта, подготовку тест-системы и определение безопасности объекта для тест-системы. Токсичность и токсигенность пробиотических микроорганизмов оценивают на основании определения жизнеспособности культуры клеток с использованием камеры Горяева. Изобретение обеспечивает повышение точности и достоверности результатов определения безопасности пробиотических микроорганизмов для человека. 4 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в микробиологии для доклинической оценки токсичности, определения безопасности и пробиотического потенциала микроорганизмов, в пищевой промышленности для оценки гигиенической безопасности и текущего контроля качества пищевых ингредиентов - пробиотиков, а также в научно-исследовательских работах.

Обеспечение безопасности пищевых ингредиентов, в том числе микроорганизмов, используемых в качестве пробиотических, является важной частью санитарно-эпидемиологического благополучия населения, поскольку некачественные компоненты и продукты питания могут приводить к заболеваниям различной этиологии. Для предотвращения этого необходимо тщательно проводить испытания токсичности объектов пищевого назначения, в том числе на этапе доклиники.

Биологическую оценку безопасности пищевых продуктов и ингредиентов проводят с использованием одноклеточных протистов, насекомых, мелких ракообразных, водорослей и семян высших растений.

Известны экспресс-методы определения общей токсичности кормов и сырья для их производства, в том числе продуктов микробиологического синтеза, сухого молока, концентрированных кормовых добавок по ГОСТ 31674-2012 [1]. Биотестирование проводят на инфузориях стилонихиях (Stylonychia mytilus) или колподах (Colpoda steinii). Метод основан на извлечении из исследуемых кормов различных фракций токсических веществ параллельно ацетоном и водой с последующим воздействием этих экстрактов на стилонихий или на колподы. Оценку результату биотеста дают по реакции гибели инфузорий. Безопасным считается корм, определенный как нетоксичный (выживаемость стилонихий более 70%; около 90% колпод остались подвижными) при одновременном параллельном исследовании как ацетонового, так и водного экстракта. Выживаемость стилонихий N, %, вычисляют по формуле (1) следующим образом:

где N2 - среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества стилонихий в конце опыта через 1 ч экспозиции, шт.;

N1 - среднеарифметическое (из пяти испытаний) значение количества стилонихий в начале опыта, шт.

Известен способ комплексной оценки токсичности кормовых и пищевых продуктов, заключающийся в использовании инфузорий Paramecium caudatum, культивируемых на зернах длиннозерного риса. Оценку токсичности проводят по проценту выживших инфузорий в водном растворе ацетонового экстракта исследуемого продукта, рассчитанному по формуле, аналогичной формуле (2). Степень токсичности продукта при тестировании его водного раствора определяют по времени, за которое происходит гибель инфузорий [4].

Недостатком данных методов является то, что тест-организмы относятся к царству Простейших (Protozoa) и имеют значительно более простую клеточную организацию, чем высшие позвоночные, организмы которых состоят различных типов тканей и клеток.

В качестве модельной системы организма человека при определении безопасности бактериальных штаммов обычно используются высшие животные (молодые особи крыс, мышей, кроликов, кошек и др.), в том числе сельскохозяйственные (например, цыплята) обоего пола.

Известны методы определения общей токсичности кормов, комбикормов и кормовых добавок биотестированием параллельно на кроликах (кожная проба) и на мышах (острый опыт) по ГОСТ 31674-2012 [1]. Результат определяют по совокупности реакций в обоих методах: корм нетоксичный (нетоксичен в обоих тестах), корм токсичный (токсичен хотя бы в одном тесте).

Первый метод основан на дермонекротическом воздействии на кожу кролика токсичных веществ, в основном микогенного происхождения, извлекаемых из кормов ацетоном. Токсичность исследуемых кормов определяют по наличию воспалительного процесса на участке кожи с нанесенным экстрактом: корм нетоксичный, если воспаление отсутствует.

Второй метод основан на введении водного или ацетонового экстракта корма однократно в желудок белым мышам. Учет реакции ведут на основании анализа состояния внутренних органов (ЖКТ, печени, селезенки, почек) при вскрытии мышей. Корм нетоксичный, если все мыши живы, а при вскрытии убитых мышей патологоанатомических изменений не обнаружено.

Известны способы определения предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов пробиотиков, а именно оценка токсигенности и токсичности [3].

Токсигенность микробов изучают для определения максимальной дозы, вызывающей гибель подопытных животных в течение 7-14 суток наблюдения.

Культуру испытуемого штамма сеют на жидкую питательную среду, выдерживают в термостате при оптимальной для роста температуре в течение 10 суток для накопления в ней токсина, если он продуцируется штаммом. Затем фильтруют ее через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат вводят неразведенным или разведенным в несколько раз, в зависимости от целей и задач исследования. Каждую дозу фильтрата испытывают одновременно на 10 мышах массой тела 10-14 г (на двух разных линиях мышей) при внутрибрюшинном введении или морских свинках массой тела 250-350 г. При отсутствии гибели животных, признаков нарушения здоровья и потери массы тела к концу срока наблюдения при введении максимально переносимой дозы следует сделать заключение, что штамм не обладает токсигенностью.

Токсичность испытуемых штаммов проверяют на мышах массой тела (15±1) г при внутрибрюшинном введении убитой прогреванием при температуре 100°С в течение 30 мин взвеси испытуемого штамма (в максимальной концентрации микробных клеток). Прогретую культуру, нативную или в разведении, вводят 10 мышам в объеме 0,5 мл. Определяют LD50 или максимально переносимую дозу. Наблюдение за животными ведут в течение 7-14 суток. При отсутствии гибели животных, признаков нарушения здоровья и потери массы тела к концу срока наблюдения при введении максимально переносимой дозы следует сделать заключение, что штамм нетоксичен.

Известен способ определения безвредности пробиотических микроорганизмов [2]. Колонии 24-часовой культуры бифидобактерий или лактобацилл, выращенных на агаризованной МРС-среде, снимают с агара петлей, суспендируют в 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида до концентрации 108 кл./мл и выдерживают 30 мин при температуре (37±1)°С. По 0,5 мл полученной взвеси вводят с помощью специальной насадки на шприц в желудок 5 белым мышам массой (15±1) г. Наблюдения за мышами осуществляют в течение 5 суток. В случае гибели хотя бы одной мыши опыт повторяют на удвоенном количестве животных. Если в повторном опыте ни одна из мышей не погибнет, штамм считают безвредным, в противном случае штамм бракуется.

Недостатками методов с использованием высших млекопитающих являются высокая стоимость, громоздкость, длительность анализа и этические проблемы. Поэтому необходим простой, доступный и достоверный метод оценки воздействия различных пищевых ингредиентов на живой организм и его системы.

Вышеперечисленных недостатков лишен предлагаемый метод биологической оценки с использованием в качестве тест-систем культур клеток животных и человека. Клетки in vitro реагируют на воздействие химических и биологических факторов адекватно исходному организму.

Задачей изобретения является разработка эффективного способа определения безопасности микроорганизмов, используемых в качестве пищевых ингредиентов, для человека.

Техническим результатом заявляемого способа является расширение технологических возможностей способа, заключающихся в определении не только токсичности, но и, в целом, безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, а также повышение точности и достоверности результатов и их количественное определение.

Преимущества предлагаемого способа с применением культур клеток перед методами с использованием высших животных в следующем:

- возможность одновременной постановки большого количества опытов;

- возможность оценить динамику поведения клеточной системы в зависимости от времени, т.е. оценить эффект при хроническом воздействии;

- возможность в течение 24 ч сделать предварительное заключение о безвредности объекта исследования;

- использование нескольких типов тканей и клеток человека дает основание для экстраполяции результатов на организм человека в целом;

- способ культивирования в монослое и прижизненное наблюдение клеток человека с помощью микроскопа позволяют определить их жизнеспособность и, соответственно, степень воздействия тестируемого объекта с большей точностью.

Способ определения безопасности микроорганизмов, в том числе пробиотических, используемых в качестве пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека, включает следующие этапы:

1) подготовку исследуемого объекта: для исследования токсичности микробные клетки выращивают на соответствующей плотной питательной среде в течение 24 ч при 37°С, смытые с агара микробные клетки разводят стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида до необходимого количества (используя стандарты мутности ОСО 42-28-59-85 или стандарт McFarland) и инактивируют прогреванием при 100°С в течение 1 ч; для изучения токсигенности микробные клетки выращивают в течение 10 суток в соответствующей жидкой питательной среде при температуре 37°С, после чего культуральную жидкость центрифугируют при 4000 об/мин в течение 30 мин;

2) подготовку тест-системы: выращивают монослой клеток в культуральном флаконе площадью 25 см2 на соответствующей питательной среде ЕМЕМ, DMEM или 199, включающей 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС, 0,05% антибиотика гентамицина или пенициллина-стрептомицина; удаляют со сформировавшегося монослоя питательную среду; промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером, или раствором Версена, или физраствором; вносят 10 мл питательной среды ЕМЕМ, DMEM или 199, включающей 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС;

3) определение безопасности объекта для тест-системы: для исследования токсичности сформировавшийся монослой клеток обрабатывают инактивированными бактериями в количестве 107, 108, 109 ОЕ/0,5 мл; для изучения токсигенности супернатант бактериальных клеток вводят во флаконы со сформировавшимся монослоем по 0,25, 0,5 мл и 1,0 мл; в обоих случаях выдерживают 1 ч в СО2-инкубаторе при 37°С и концентрации газа 5,0%, затем удаляют питательную среду и промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером, или раствором Версена, или физраствором, вносят 10 мл свежей питательной среды ЕМЕМ, DMEM или 199 с содержанием 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС, флаконы на 24 ч помещают в СО2-инкубатор при температуре 37°С и концентрации газа 5,0%, удаляют питательную среду, производят снятие клеток растворами Версена 0,02% и трипсина 0,25% в соотношении 3:1, окрашивают клетки раствором красителя трипанового синего, производят подсчет живых и мертвых клеток и определение жизнеспособности с помощью камеры Горяева.

В качестве контроля используют флакон с клетками, выросшими на питательной среде без добавления микроорганизмов или надосадочной жидкости. Испытания повторяют минимум трехкратно. Полученные данные сравнивают с контролем, а результат - жизнеспособность (Ж) - выражают в процентах по формуле (2) как отношение количества живых клеток, выросших на среде с добавлением исследуемого ингредиента, к общему числу клеток:

где Кж - среднеарифметическое значение количества живых клеток в конце опыта, шт.;

Ко - среднеарифметическое общее значение количества клеток в начале опыта, шт.;

100 - коэффициент пересчета в проценты.

Если во всех опытах жизнеспособность более 50%, штамм считают нетоксичным и нетоксигенным, безопасным при использовании в пищевой промышленности. Если хотя бы в одном случае происходит гибель 50% и более клеточной популяции, опыт повторяют. При подтверждении результата определяют ТС50 - цитопатическую активность, характеризующую количество микроорганизмов в питательной среде, которое приводит к уничтожению клеточной популяции на 50%, при этом штамм является небезопасным и не рекомендуется к использованию в пищевой промышленности в качестве пробиотического препарата.

Определение проводят на монослойных постоянных (перевиваемых) клеточных линиях различного происхождения, морфологии, типа ткани, например HEK 293 - почка эмбриона человека, FLECH (ФЛЭЧ) - фибробласты легкого эмбриона человека, Нер-2 - эпидермоидная карцинома гортани человека, СаСо-2 - аденокарцинома ободочной кишки человека, Girardi Heart - клетки предсердия человека, NCTC - подкожная соединительная ткань мыши.

Для ведения культур клеток используют стандартные синтетические жидкие среды: Игла MEM (minimal essential medium), альфа MEM, DMEM (Dulbecco′s modified Eagle′s medium), 199, F12, основой которых являются солевые растворы Эрла и Хенкса. В качестве источника факторов роста используют сыворотку крови КРС или эмбриональную бычью в количестве 10-15%. Питательную среду готовят согласно паспортам клеточных линий Российской коллекции клеточных культур позвоночных (РКККП). Для предупреждения контаминации используют антибиотики пенициллин-стрептомицин или гентамицин. Во избежание инактивации при хранении раствор антибиотика готовят непосредственно перед заменой среды: в стерильных условиях навеску антибиотика растворяют в физ. растворе и вносят в среду для культивирования клеток из расчета 100-200 ЕД каждого на 1 мл среды или 0,05%. По мере истощения эссенциальных веществ и изменения рН системы каждые 2-3 дня производят замену среды в культуральных флаконах.

Подготовку монослоя (снятие и рассев) осуществляют следующим образом. Со сформировавшегося монослоя лабораторным аспиратором удаляют питательную среду; промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером, или раствором Версена, или физраствором; дезагрегируют клетки в суспензию: во флаконы вносят 1 мл раствора Версена 0,02% и трипсина 0,25% в соотношении 3:1, для лучшего открепления клеток от субстрата флаконы помещают на горизонтальный термостатируемый шейкер при 37°С со скоростью вращения 40-50 об/мин на 10 мин; степень дезагрегации клеточного монослоя контролируют визуально, при недостаточном переходе в суспензию используют стерильные скребки лифтеры или скрейперы; по достижении открепления 90-100% клеток клетки хорошо ресуспендируют пипетированием и рассевают: в новый флакон вносят суспензию клеток плотностью около 6000-7000 кл./см2 и 10 мл питательной среды ЕМЕМ, DMEM или 199, включающей 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС и 0,05% антибиотика гентамицина или пенициллина-стрептомицина; флаконы помещают в СО2-инкубатор при температуре 37°С и концентрации газа 5,0%.

В процессе пересева после трипсинизации оценивают состояние клеточной культуры методом исключения красителя и подсчета общего количества клеток, а также выявления в их числе мертвых и живых клеток: аликвоту суспензии клеток (~40 мкл) смешивают с равным количеством 0,4% раствора красителя трипанового синего, отбирают пипеткой 3 мкл суспензии, вносят под покровное стекло камеры Горяева и производят подсчет клеток.

Предложенный способ иллюстрируется следующим примером.

Определение таких показателей безопасности пробиотических микроорганизмов, как отсутствие токсичности и токсигенности, для штамма Lactobacillus plantarum L-211(В-11235)

Клеточные тест-системы аденокарциномы ободочной кишки человека СаСо-2, соединительной ткани мыши NCTC, легкого эмбриона человека FLECH выращивают на питательных средах согласно таблице 1 с добавлением 0,05% антибиотика гентамицина в течение 10-14 суток в зависимости от линии; со сформировавшегося монослоя удаляют питательную среду лабораторным аспиратором; промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером; вносят 10 мл соответствующей питательной среды, включающей 10% сыворотки согласно таблице 1.

Для исследования токсичности штамма Lactobacillus plantarum микробные клетки выращивают на среде MRS, состав которой указан в таблице 2, с добавлением 1,2% агара в течение 24 ч при 37°С. Смытые с агара микробные клетки разводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до необходимого количества (по оптическому стандарту ОСО 42-28-59-85, выпускаемому ГИСК им. Тарасевича) и инактивируют прогреванием при 100°С в течение 1 ч. Сформировавшийся монослой клеток обрабатывают инактивированными бактериями в количестве 107, 108, 109 ОЕ/0,5 мл, выдерживают 1 ч в СО2-инкубаторе при 37°С и концентрации газа 5,0%, после чего удаляют питательную среду, промывают монослой дважды фосфатно-солевым буфером и среду заменяют на свежую. Спустя сутки производят удаление питательной среды, дезагрегацию клеток растворами Версена 0,02% и трипсина 0,25% в соотношении 3:1 на качалке в течение 10 мин, снятие монослоя клеток, окрашивание, подсчет клеток и оценку жизнеспособности помощью камеры Горяева. Полученные данные сравнивают с результатами контроля при введении 0,5 мл физраствора.

В таблице 3 показано, что инактивированные температурой бактерии Lactobacillus plantarum штамма В-11235 не оказывают критического влияния на пролиферацию и жизнеспособность нераковых клеточных линий FLECH и NCTC. В отношении раковой линии СаСо-2 проявляется дозозависимое ингибирование жизнеспособности, т.е. с увеличением концентрации бактерий увеличивается процент мертвых клеток аденокарциномы, увеличение смертности варьируется от 17% до 26%.

Для изучения токсигенности штамма Lactobacillus plantarum микробные клетки выращивают в течение 10 суток на жидкой среде MRS, состав которой указан в таблице 2, при температуре 37°С. По истечении срока культуральную жидкость центрифугируют при 4000 об/мин в течение 30 мин. Бактериальный супернатант вводят во флаконы с клеточными линиями по 0,25, 0,5 мл и 1,0 мл, выдерживают 1 ч в СО2-инкубаторе при 37°С и концентрации газа 5,0%, после чего среду удаляют, монослой клеток промывают и вносят свежую среду. Спустя 24 ч производят удаление питательной среды, дезагрегацию клеток растворами Версена 0,02% и трипсина 0,25% в соотношении 3:1 на качалке в течение 10 мин, снятие монослоя клеток, окрашивание, подсчет клеток и оценку жизнеспособности помощью камеры Горяева. Полученные данные сравнивают с результатами контроля при введении соответствующих объемов физраствора.

В таблице 4 показано, что инактивированные центрифугированием клетки бактерий Lactobacillus plantarum В-11235 не оказывают критического влияния на пролиферацию и жизнеспособность нераковых клеточных линий FLECH и NCTC. В отношении раковой линии СаСо-2 проявляется дозозависимое ингибирование жизнеспособности, т.е. с увеличением концентрации бактерий увеличивается процент мертвых клеток аденокарциномы, увеличение смертности варьируется от 10% до 21%.

В процессе исследований не определена ТС50. Штамм Lactobacillus plantarum L-211(B-11235) не обладает токсичностью и токсигенностью для клеточных линий аденокарциномы ободочной кишки человека СаСо-2, соединительной ткани мыши NCTC, фибробластов легкого эмбриона человека FLECH, является безопасным и может использоваться в пищевой промышленности в качестве пробиотического препарата.

Источники информации

1. ГОСТ 31674-2012 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности. - М.: Стандартинформ, 2013. - 33 с.

2. МУ 2.3.2.2789-10 Методические указания по санитарно-эпидемиологической оценке безопасности и функционального потенциала пробиотических микроорганизмов, используемых для производства пищевых продуктов. - М.: Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. - 93 с.

3. МУК 4.2.2602-10 Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Система предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов. Отбор, проверка и хранение производственных штаммов, используемых при производстве пробиотиков. - М.: Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. - 61 с.

4. Пат. РФ №2266015, МПК A23K, G01N. Способ комплексной оценки токсичности кормовых и пищевых продуктов / Гроздов А.О. (РФ). - Заявл. 16.08.01; опубл. 20.08.03.

Способ определения безопасности микроорганизмов, в том числе пробиотических, используемых в качестве пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека, включающий 3 этапа:
подготовку исследуемого объекта: для исследования токсичности микробные клетки выращивают на соответствующей плотной питательной среде в течение 24 ч при 37°С, смытые с агара микробные клетки разводят стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида до необходимого количества (используя стандарты мутности ОСО 42-28-59-85 или стандарт McFarland) и инактивируют прогреванием при 100°С в течение 1 ч; для изучения токсигенности микробные клетки выращивают в течение 10 суток в соответствующей жидкой питательной среде при температуре 37°С, после чего культуральную жидкость центрифугируют при 4000 об/мин в течение 30 мин;
подготовку тест-системы: выращивают монослой клеток в культуральном флаконе площадью 25 см2 на соответствующей питательной среде ЕМЕМ, DMEM или 199, включающей 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС, 0,05% антибиотика гентамицина или пенициллина-стрептомицина; удаляют со сформировавшегося монослоя питательную среду; промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером, или раствором Версена, или физраствором; вносят 10 мл питательной среды ЕМЕМ, DMEM или 199, включающей 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС;
определение безопасности объекта для тест-системы: для исследования токсичности сформировавшийся монослой клеток обрабатывают инактивированными бактериями в количестве 107, 108, 109 ОЕ/0,5 мл; для изучения токсигенности супернатант бактериальных клеток вводят во флаконы со сформировавшимся монослоем по 0,25, 0,5 мл и 1,0 мл; в обоих случаях выдерживают 1 ч в СО2-инкубаторе при 37°С и концентрации газа 5,0%, затем удаляют питательную среду и промывают монослой клеток дважды фосфатно-солевым буфером, или раствором Версена, или физраствором, вносят 10 мл свежей питательной среды ЕМЕМ, DMEM или 199 с содержанием 10% сыворотки эмбриональной бычьей или КРС, флаконы на 24 ч помещают в СО2-инкубатор при температуре 37°С и концентрации газа 5,0%, удаляют питательную среду, производят снятие клеток растворами Версена 0,02% и трипсина 0,25% в соотношении 3:1; окрашивают клетки раствором красителя трипанового синего; производят подсчет живых и мертвых клеток и определение жизнеспособности с помощью камеры Горяева, причем жизнеспособность (Ж) выражают в процентах по формуле (2) как отношение количества живых клеток, выросших на среде с добавлением исследуемого ингредиента, к общему числу клеток:

где Кж - среднеарифметическое значение количества живых клеток в конце опыта, шт.;
Ко - среднеарифметическое общее значение количества клеток в начале опыта, шт.;
100 - коэффициент пересчета в проценты, причем
если во всех опытах жизнеспособность более 50%, штамм считают нетоксичным и нетоксигенным, безопасным при использовании в пищевой промышленности; если хотя бы в одном случае происходит гибель 50% и более клеточной популяции, опыт повторяют; при подтверждении результата определяют ТС50 - цитопатическую активность, характеризующую количество микроорганизмов в питательной среде, которое приводит к уничтожению клеточной популяции на 50%, при этом штамм является небезопасным и не рекомендуется к использованию в пищевой промышленности в качестве пробиотического препарата.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Дифференциально-диагностическая питательная среда содержит аланин, натрия хлорид и дистиллированную воду в заданных соотношениях компонентов.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для in vitro прогнозирования прогрессирования ВИЧ-1 (вирус иммунодефицита человека типа 1) заболевания у пациента, инфицированного вирусом ВИЧ-1.
Группа изобретений относится к области ветеринарной биотехнологии, микробиологии и может быть использована для выявления антигена возбудителя йерсиниоза лососевых - Yersinia ruckeri в биологическом материале как для диагностики болезней рыб в ветеринарии, так и для научных исследований методом иммуноферментного анализа.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к лигандам для аффинной хроматографии на основе различных доменов белка A (SpA) Staphylococcus. Лиганд содержит либо несколько доменов C, либо несколько доменов B, либо несколько доменов Z белка SpA.

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в гастроэнтерологии. Предложен способ определения чувствительности Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам.

Настоящее изобретение относится к области бактериофаговой терапии для лечения и регулирования бактериальных инфекций. Представленная группа изобретений касается выделенного бактериофага, обладающего активностью против Pseudomonas aeruginosa, белков, кодируемых геномом такого бактериофага, фармацевтической композиции, содержащей такие белки, применяющейся для изготовления лекарственного средства для лечения инфекции, обусловленной Pseudomonas aeruginosa, способа диагностики бактериальной инфекции, вызванной Pseudomonas aeruginosa, и способа уменьшения или ингибирования колонизации или роста Pseudomonas aeruginosa на твердой поверхности.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ связывания Mycobacteria и/или фрагментов Mycobacteria, присутствующих в водной жидкости, с твердой поверхностью.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к определению наличия антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови животных. Для этого антиген смешивают с тестируемой сывороткой крови в различных разведениях в лунках микропланшета с V-образным дном с последующей визуализацией результатов реакции агглютинации с использованием источника ультрафиолетового излучения, преимущественно трансиллюминатора.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики туберкулезной инфекции. Осуществляют взятие периферической венозной крови, определение в гепаринизированной крови уровня стимулированного ИФН-γ иммуноферментным методом.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к области гигиенической безопасности объектов пищевого назначения. Предложен способ определения безопасности пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм гибридных клеток животных Mus musculus 1G7 - продуцент моноклональных антител к ботулиническому токсину типа В.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен штамм гибридных клеток животных Mus.

Изобретение относится к биотехнологии и касается штамма клеток CHO-IL7/13. Охарактеризованный штамм получен трансфекцией клеток CHOdhfr плазмидой pIPvES-DHFR/IL7, содержащей ген интерлейкина-7 человека.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой α1,6-глюкан-содержащее соединение Helicobacter pylori. Настоящее изобретение также раскрывает конъюгат для индукции иммунного ответа против H.pylori, содержащий указанное соединение, конъюгированное с белком-носителем.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к композициям для интенсивной продукции целевого белка в эукариотических клетках, включающим ДНК-вектор со вставкой гена целевого белка и агонист клеточных рецепторов.

Изобретение относится к области медицины, биотехнологии и генетической инженерии. Предложена тригибридная клетка для экспрессии белков, полученная путем гибридизации первой клетки, представляющей собой стволовую клетку или клетку, происходящую из некоммитированной клетки-предшественника, второй клетки, происходящей из общей лимфоидной клетки-предшественника, и третьей клетки, происходящей из общей лимфоидной клетки-предшественника, где указанная первая клетка не является клеткой миеломы, а также способ её получения и способ получения белков с её использованием.

Изобретение относится к молекулярной биологии и клеточным технологиям. Предложен способ получения клетки с заданным фенотипом, где указанный способ включает стадии гибридизации первой стволовой клетки или клетки, происходящей из некоммитированной клетки-предшественника, второй клетки, происходящей из общей лимфоидной клетки-предшественника, и третьей клетки, происходящей из общей лимфоидной клетки-предшественника, с получением гибридной клетки, которая проявляет фенотипическую пластичность, и воздействия на указанную гибридную клетку условий, выбранных из группы, состоящей из тимической стромальной клетки, цитокина, фактора роста, иммуноглобулина, лиганда рецептора или их комбинации так, чтобы указанная гибридная клетка стала указанной клеткой с фенотипом В-клетки, Т-клетки, миелоидной клетки или дедифференцированного фенотипа относительно указанной гибридной клетки.

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Предложена трансгенная зародышевая клетка не являющегося человеком позвоночного.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к области гигиенической безопасности объектов пищевого назначения. Предложен способ определения безопасности пищевых ингредиентов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов, в котором в качестве тест-систем используются культуры клеток млекопитающих и человека. Способ включает три этапа: подготовку исследуемого объекта, подготовку тест-системы и определение безопасности объекта для тест-системы. Токсичность и токсигенность пробиотических микроорганизмов оценивают на основании определения жизнеспособности культуры клеток с использованием камеры Горяева. Изобретение обеспечивает повышение точности и достоверности результатов определения безопасности пробиотических микроорганизмов для человека. 4 табл., 1 пр.

Наверх