Способ диагностики poems-синдрома


 


Владельцы патента RU 2605284:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии" Федерального медико-биологического агентства (ФГБУ "РосНИИГТ ФМБА России") (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики POEMS-синдрома у больных множественной миеломой или ангиофолликулярной гиперплазией лимфатических узлов. Способ включает биопсию ткани пораженного органа и окраску срезов лимфатического узла гематоксилином и эозином. Далее проводят подсчет на них CD138+ плазматических клеток. Дополнительно рассчитывают площади кровеносных сосудов относительно всей площади обзора среза, и при превышении этого показателя 30% площади обзора среза диагностируется POEMS-синдром. Использование данного способа позволяет проводить раннюю диагностику POEMS-синдрома у больных множественной миеломой или ангиофолликулярной гиперплазией лимфатических узлов для своевременного назначения химиотерапии. 3 пр.

 

Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики, и в частности к способу диагностики POEMS-синдрома. Указанной аббревиатурой обозначают патологическое состояние, характеризующееся полинейропатией (polyneuropathy), увеличением органов (organomegaly), эндокринными изменениями (endocrinopathy), появлением М-протеина в сыворотке крови (M-protein) и изменениями состояния кожи (skin), возникающие как осложнения множественной миеломы или ангиофолликулярной гиперплазии лимфатических узлов (болезни Кастлемана).

При развитии POEMS-синдрома состояние больного резко ухудшается, он с трудом может ходить, в связи с тем что появляется чувство онемения и боли в стопах, нарушается функция нижних конечностей. Кроме того, возникают отеки кожи и скопление жидкости во внутренних полостях тела, похудание, изменение волосяного покрова и кожных покровов с появлением ангиом и др. Состояние больного отягощается еще и в результате нарушения функции эндокринных желез (сахарный диабет, тиреотоксикоз и др.). Без направленной терапии POEMS-синдрома неизбежен летальный исход [Михайлов A.M., Бессмельцев С.С. и др. Бюллетень СО РАМН, Т. 33, №2, 2013, С. 63-71].

POEMS-синдром, возникающий как осложнение множественной миеломы, является результатом деятельности CD138+ опухолевых плазматических клеток в костном мозге с продукцией легких цепей и эндотелиального фактора роста сосудов с повреждением нервов (демиелинизацией). POEMS-синдром при болезни Кастлемана обусловлен высокой пролиферативной активностью CD138+ плазматических клеток внутри лимфатического узла. Однако количество плазматических клеток может значительно колебаться и по одному их наличию в лимфатическом узле или костном мозге нельзя с уверенностью диагностировать такой вариант развития болезни.

При диагностике POEMS-синдрома как осложнения множественной миеломы (заболевания, не затрагивающего непосредственно лимфатические узлы) учитывают такие критерии, как плазмоклеточная инфильтрация костного мозга, повышенная продукция свободной λ-цепи иммуноглобулинов, а также наличие повышенной активности эндотелиального фактора роста сосудов. Считается, что именно этот фактор способствует неконтролируемому росту и образованию новых сосудов в различных органах, и в частности, в костном мозге [Dispenziery A. et al. Blood, 2003, Vol. 101, N7, P. 2496-2506; Dispenziery A. Blood review, 2007, Vol. 21, N5, P. 285-299; Клодзинский A.A. и др. Клиническая онкогематология, 2008, T. 1, №2, С. 148-155].

При болезни Кастлемана всегда типично не только развитие CD138+ плазматических клеток, но и визуально заметен рост количества патологических сосудов в лимфатических узлах. При диагностике болезни Кастлемана обычно берут биопсию лимфатического узла, производят стандартную окраску срезов лимфатического узла гематоксилином и эозином, определяют количество и распределение В- и Т-лимфоцитов внутри структур лимфатического узла для исключения лимфомы, а также определяют наличие плазматических клеток CD 138+ [Knowles D.M. Neoplastic Hematology. 2 Edition. Philadelphia. Lippincot Williams&Wilkins, 2001, P. 546-549; Райт Д., Леон Э., Эддис Бю. Морфологическая диагностика патологических лимфатических узлов. М., Медицина, 2008, С. 20-27]. При наличии большого количества CD138+ плазматических клеток можно предполагать возможность развития такого осложнения болезни Кастлемана как POEMS-синдром, однако этого исследования явно не достаточно для точного диагностирования POEMS-синдрома, особенно на ранних стадиях его развития, когда не проявились другие симптомы этого синдрома.

Ранняя диагностика POEMS-синдрома необходима для своевременного начала лечения. Именно такой подход приводит к достижению достаточно продолжительной ремиссии; лечение указанного синдрома заключается в терапии, направленной на эрадикацию опухолевых клеток, секретирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста сосудов и в конечном итоге подавляющей образование патологических кровеносных сосудов в костном мозге при множественной миеломе или в лимфатических узлах при болезни Кастлемана. Наиболее успешно лечение в том случае, когда оно начато на ранней стадии развития POEMS-синдрома.

До сих пор не существовало способа точной ранней диагностики POEMS-синдрома у больных множественной миеломой или ангиофолликулярной гиперплазией лимфатических узлов.

Нами предлагается способ диагностики POEMS-синдрома, включающий биопсию ткани пораженного органа (лимфатический узел или трепанобиоптат костного мозга), окраску срезов гематоксилином и эозином и подсчет на них CD138+ плазматических клеток, в котором дополнительно производится подсчет площади кровеносных сосудов относительно всей площади обзора среза, и при превышении этого показателя 30% площади обзора среза диагностируется POEMS-синдром.

Таким образом, в случае множественной миеломы необходима трепанобиопсия костного мозга, в случае болезни Кастлемана - биопсия лимфатического узла.

Терапия, направленная на подавление роста патологических кровеносных сосудов в лимфатических узлах, может включать дополнительную локальную лучевую терапию (рентгеновское или γ-облучение), или прием препаратов, снижающих активность сосудистого эндотелиального фактора роста сосудов и образование патологических сосудов, например ингибитора ангиогенеза леналидомида или бортезомиба, при раннем назначении также оказывающего существенное воздействие на ангиогенез и др. Подавляют ангиогенез и цитостатические препараты, назначаемые в составе комбинированной терапии.

Далее способ иллюстрирован примерами, но не ограничен ими.

Пример 1.

Больной С., 52 лет, заболел остро в июне 2008 года: появился кашель, одышка, отеки ног. В июле 2008 года госпитализирован в отделение гематологии, где выявлено увеличение лимфатических узлов всех групп. Учитывая совокупность симптомов, была заподозрена неходжкинская лимфома и произведена биопсия лимфатического узла. При просмотре препарата обращало внимание обильное развитие сосудов в ткани лимфатического узла, при сохраненной структуре и нормальном гистохимическом распределении лимфоцитов с экспрессией CD3+, CD4+, CD19+, CD20+ с примесью плазматических клеток CD138+ в межфолликулярных зонах. Отмечено обилие гиалинизированных сосудов и отложений гиалина. Фолликулы имели типичный вид "луковой шелухи". Установлен диагноз: болезнь Кастлемана, смешанно-клеточный вариант.

При дополнительных исследованиях выявлены обильные площади сосудистой сети (>30%) и тотальная секреция большого количества эндотелиального фактора роста сосудов всеми клетками лимфатического узла. При нейромиографии зарегистрированы проявления демиелинизирующей периферической полинейропатии с прогрессирующими нарушением при повторном исследовании. По результатам гормонального исследования у больного было обнаружено снижение уровня тестостерона и повышение фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов гипофиза. При проведении магнитно-резонансной томографии с контрастированием сосудов гипофиза была выявлена микроаденома гипофиза. Указанные признаки характерны для POEMS-синдрома.

Учитывая наличие у больного болезни Кастлемана, осложненной POEMS-синдромом, была начата терапия по схеме СНОР-21 (циклофосфамид 750 мг/м2, адриамицин/доксорубицин 50 мг/м2, винкристина 1,5 мг/м2, внутривенно в первый день цикла, и ежедневно в течение 5 дней преднизолон по 50 мг/м2). Уже после первого цикла лечения у больного уменьшились отеки. После проведения 6 циклов по данным клинического исследования, уровня гормонов, результатов компьютерной томографии, нейромиографии и магнитно-резонансной томографии гипофиза установлена полная ремиссия болезни Кастлемана и POEMS-синдрома, которая сохранялась в течение 18 месяцев.

Таким образом, установление болезни Кастлемана и своевременное выявление POEMS-синдрома позволило назначить адекватную программу химиотерапии, оказывающей целенаправленное воздействие на опухолевые клетки, активность сосудистого эндотелиального фактора роста сосудов и образование патологических сосудов.

Пример 2 (контрольный)

Больная Ц. 1972 года рождения заболела в 2003 году (кашель, высокая температура). При рентгенологическом обследовании выявлен конгломерат увеличенных лимфатических узлов в легких. При оперативной биопсии конгломерата с гистологическим исследованием диагностирована карцинома трахеи.

Больной проведено пять курсов химиотерапии с доксорубицином, 5-фторурацилом, циклофосфаном, метотрексатом и винкристином. Удалось достичь стабилизации опухолевого процесса. В течение нескольких лет прогрессии не наблюдалось, однако сохранялось плохое самочувствие.

В 2008 году после переезда в Санкт-Петербург у больной появилась нарастающая слабость в ногах и нарушение походки в виде тетрапареза, сделавшее ее инвалидом-опорником. На коже появились ангиомы, увеличились лимфатические узлы в области шеи и в средостении.

Была проведена хирургическая биопсия лимфатических узлов с иммуногистохимическим исследованием, в результате которого диагностирован плазмоклеточный вариант болезни Кастлемана с монотипической экспрессией λ-цепи иммуноглобулинов. Электронейромиография подтвердила наличие дистальной, демиелинизирующей полинейропатии. При магнитно-резонансной томографии подтверждены нарушения периферических нервов. Поставлен диагноз POEMS-синдрома.

В 2010 г. было проведено 4 цикла терапии по схеме PAD (бортезомиб 1,3 мг/м2 1, 4, 8 и 11 дни, дексаметазон 40 мг 1-4, 8-11 и 15-18 дни 1 цикла и 1-4 дни 2-4 цикла; в течение 1-4 дней больная дополнительно получала 0,45 мг/м2 доксорубицина) с достижением частичной ремиссии и последующей аутологичной трансплантацией стволовых клеток периферической крови. Однако через 6 месяцев после аутотрансплантации вновь наблюдался рост лимфатических узлов и прогрессирование полинейропатии. Следует отметить, что лечение по схеме PAD сопровождалось развитием астенического синдрома, гастроинтестинальными проявлениями (тошнота, рвота, запоры, боли в эпигастральной области). Кроме того, усилились признаки периферической нейропатии - боли, нарушение функции и снижение ежедневной жизненной активности. Это было основанием для увеличения интервалов между циклами лечения и снижения дозы бортезомиба и, как следствие, раннего рецидива после аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

В связи с рецидивом был проведен курс локальной лучевой терапии на область конгломерата лимфатических узлов в средостении с временным эффектом в виде стабилизации размеров конгломерата. Контрольная биопсия лимфатических узлов, проведенная в 2011 году, показала, что площадь кровеносных сосудов занимает 50% от всей площади среза, что подтвердило наличие POEMS-синдрома и было основанием для смены терапии. Для подавления роста сосудов была начата терапия по схеме Rd: леналидомид (25 мг/день 1-21 день каждого 28-дневного цикла) и дексаметазон 40 мг 1-4, 9-12 и 17-20 дни (первые 4 цикла, затем только 1-4 дни).

На фоне постоянной терапии Rd у больной в течение трех лет отсутствует прогрессия роста лимфатических узлов и неврологических нарушений. Больная самостоятельно обслуживает себя и начала работать бухгалтером.

Пример 3.

Больной В., 47 лет, обратился в клинику в 2004 г. по поводу появления опухолевидного образования в области нижней челюсти справа. Был направлен в отделении челюстно-лицевой хирургии, где произведена биопсия этого образования. Была диагностирована плазмоцитарная опухоль (плазмоцитома), дифференцированная, с обилием сосудистой сети (>40%) и секрецией большого количества эндотелиального фактора роста сосудов всеми опухолевыми клетками, экспрессирующими CD 138. В связи с этим больной был переведен в отделение гематологии.

При осмотре больного обращало на себя внимание следующее: плеторический цвет кожных покровов, наличие ангиом кожи, похудание. В миелограмме обнаружено 28% плазматических клеток.

При иммуноэлектрофорезе белков сыворотки крови выявлен М-протеин в области γ-фракции (19,76 г/л), а содержание в крови свободной κ-цепи иммуноглобулина G составило 47,7 мкг/мл (норма 6-13 мкг/мл). Уровень IgG в сыворотке крови - 18,5 г/л.

При рентгенографии костей скелета в телах грудных позвонков Th3-12, задних отрезках 4 ребра слева и 7 ребра справа определялись очаги лизиса до 0,5 см в диаметре. В телах Th6,10,11 наряду с мелкими очагами лизиса определялись отграниченные склерозом очаги литической деструкции размером 1,0×1,4 см, 1,2×1,3 см, 1,0×2 см.

При электронейромиографическом исследовании установлены выраженные признаки дистальной аксонально-демиелинизирующей моторно-сенсорной нейропатии нижних конечностей.

Таким образом, выявление у больного плазмоцитомы, плазмоклеточной инфильтрации костного мозга, М-протеина при иммуноэлектрофорезе сывороточных белков, увеличение секреции свободной κ-цепи и литических очагов деструкции костной ткани позволили установить множественную миелому.

Изменение цвета кожных покровов, обнаружение ангиом кожи, остеолитического поражения костей с зонами остеосклероза, поражение периферических нервов по типу демиелинизации указывали на возможное развитие POEMS-синдрома.

При просмотре препарата биоптата плазмоцитарной опухоли установлено массивное развитие сосудистой сети (более 30% среза); установлена также усиленная секреция плазматическими клетками эндотелиального фактора роста сосудов. Эти показатели позволили диагностировать наличие POEMS-синдрома.

Учитывая наличие у больного множественной миеломы, осложненной POEMS-синдромом, была начата терапия по схеме VD (бортезомиб 1,3 мг/м2 1, 4, 8 и 11 дни + дексаметазон 20 мг 1, 2, 4, 5, 8, 9, 11, 12 дни 21-дневного цикла), оказывающей целенаправленное воздействие на опухолевые клетки, активность сосудистого эндотелиального фактора роста сосудов и образование новых сосудов (ангиогенез). После проведения 5 циклов лечения зарегистрирована частичная, а после 10 циклов - полная ремиссия, которая сохранялась в течение 3 лет.

Таким образом, ранняя диагностика POEMS-синдрома и назначение препаратов, влияющих на опухолевые клетки в костном мозге, блокирующих ангиогенез и препятствующих образованию новых сосудов, способствовали достижению полной ремиссии множественной миеломы и его осложнения (POEMS-синдрома).

Ранняя диагностика POEMS-синдрома и своевременное назначение химиотерапии, оказывающей влияние на опухолевые клетки, продуцирующие эндотелиальный фактор роста сосудов (ангиогенез), способствуют достижению полной ремиссии основного заболевания (болезни Кастлемана или множественной миеломы) и его осложнению (POEMS-синдрома). В то же время при поздней диагностике, как показано во втором случае, ситуация была иной. Назначение терапии по схеме PAD сопровождалось многочисленными побочными эффектами и осложнениями. Был получен лишь частичный ответ, а проведенная в последующем аутологичная трансплантация оказалась практически безрезультативной (ранний рецидив). И лишь после назначения терапии, направленной на подавление ангиогенеза (схема Rd), удалось достичь полной ремиссии.

Способ диагностики POEMS-синдрома, включающий биопсию ткани пораженного органа, окраску срезов лимфатического узла гематоксилином и эозином и подсчет на них CD138+ плазматических клеток, отличающийся тем, что дополнительно производится подсчет площади кровеносных сосудов относительно всей площади обзора среза, и при превышении этого показателя 30% площади обзора среза диагностируется POEMS-синдром.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ определения болевого синдрома при полинейропатии у больных вибрационной болезнью, включающий забор венозной крови, получение сыворотки крови и определение в ней количественного содержания серотонина.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ количественной оценки силы связывания сенсибилизированной полистироловой микросферы с эукариоцитом линии J-774.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано в технологии изготовления референс-панели сывороток, содержащих антигены и антитела к тестируемому вирусу, для контроля чувствительности, специфичности тест-систем иммуноферментных, иммунохемилюминесцентных и иммуноблотов.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития осложненного течения внебольничной пневмонии у детей.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для проведения иммуносупрессивной терапии после трансплантации печени детям раннего возраста.

Данное изобретение относится к области иммунологии. Предложена клеточная линия DSM АСС3076 и полученное из нее моноклональное антитело.

Данное изобретение относится к области иммунологии. Представлены моноклональное антитело и его фрагмент, которые связываются с K11-связанным полиубиквитином, охарактеризованные аминокислотными последовательностями гипервариабельных участков (HVR).

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для выбора тактики лечения у больных впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких.

Изобретение относится к области медицины, а именно к отоларингологии, и может быть использовано для дифференциальной экспресс-диагностики острых вирусных и бактериальных тонзиллитов у взрослых.

Изобретение относится к медицине, в частности - к кардиологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования аспиринорезистентности у больных артериальной гипертонией с высоким риском сердечно-сосудистых осложнений, длительно принимающих аспирин в профилактической дозе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, может быть использовано для дифференциальной диагностики первичного и вторичного иммунного ответа на вирус кори. Для этого проводят разделение типов иммунного ответа на первичный и вторичный, осуществляя на основании рассчитанных с помощью ROC-анализа пороговых критериев для IgG1 и IgG3 субклассов. Определение количества специфических противокоревых антител, принадлежащих к субклассам IgG1 и IgG3, проводят с помощью ИФА-анализа. При получении пороговых значений для IgG1<45,42% и для IgG3>42% от общего количества противокоревых IgG-антител диагностируют первичный иммунный ответ. При получении пороговых значений для IgG1>45,42% и для IgG3<42% от общего количества противокоревых IgG-антител диагностируют вторичный иммунный ответ. Использование данного способа позволяет осуществлять контроль за качеством противокоревого иммунитета и диагностировать случаи первичных и вторичных вакцинальных неудач. 3 табл., 2 ил.

Изобретение относится к области биохимии. Предложено антитело к человеческому СD52. Антитело применяется для лечения или диагностики заболеваний, связанных с клетками СD52+, таких как ХЛЛ и другие лейкозы, аутоиммунные заболевания, отторжение трансплантата органа, реакция «трансплантат-против-хозяина». Изобретение позволяет эффективно связывать CD52. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 14 ил., 2 табл., 11 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для измерения активности клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта. Для этого проводят контактирование образца цельной крови, представляющего собой источник лимфоцитов, с одним или более агентами, которые усиливают системы приобретенного и врожденного иммунитета. Измерение присутствия или повышения уровня иммунной эффекторной молекулы из иммунных клеток, где присутствие или уровень иммунной эффекторной молекулы показывает уровень клеточно-опосредованной реактивности у субъекта. Группа изобретений относится также к применению агентов, которые усиливают системы приобретенного и врожденного иммунитета, в производстве диагностического анализа клеточно-опосредованной иммунологической реактивности, а также к способу, позволяющему пользователю определить статус клеточно-опосредованной иммунологической реактивности у субъекта. Использование данной группы изобретений позволяет выявлять иммунные дисфункции путем использования системы цельной крови и объединения стимуляторов, которые усиливают системы приобретенного и врожденного иммунитете, обеспечивая синергетический эффект. 3 н. и 29 з.п. ф-лы, 7 пр., 7 ил.,7 табл.

Изобретение относится к психологии. Диагностику школьной дезадаптации у младших школьников осуществляют путем определения методом РИА уровня АКТГ в сыворотке крови ребенка. При значении уровня АКТГ от 16,90 пкг/мл до 19,30 пкг/мл диагностируют школьную дезадаптацию, а при уровне от 11,1 пкг/мл до 16,5 пкг/мл констатируют школьную адаптацию. Способ диагностики обеспечивает своевременное и рациональное проведение комплекса психологических мероприятий за счет простоты, высокой специфичности и быстроты диагностики дезадаптации. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения диагностикума для определения концентрации лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями. Для этого получают экспериментальные гипериммунные кроличьи сыворотки путем иммунизации кроликов весом от 2,5 до 3 кг с помощью введения препарата «Альтевир» в дозе 100 мкг по белку в паховый лимфатический узел в количестве 3-х инъекций с интервалом в 14 дней, затем через 14 дней после последней инъекции из крови готовят сыворотки с последующим определением титра антител; выделяют иммуноглобулины из кроличьих сывороток, для этого полученную сыворотку в количестве 4 мл соединяют с 2 мл забуференного физиологического раствора, помещают в центрифужные стаканы, ставят на лед и выливают в них сыворотку при температуре 0°С, затем добавляют забуференный физиологический раствор, перемешивают, вливают метанольную воду, при этом понижая температуру до -5°С, после стакан со смесью ставят в холодильник на 30-40 мин, а затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин при нулевой температуре, полученную надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют в от исходного объема сыворотки, определяют количество белка по методу Лоури, получая в результате сенситин; готовят полимерный носитель, используя метод анионной полимеризации мономера - акрилового альдегида в водно-щелочной среде с получением монодисперсных частиц сферической формы диаметром 1,2±0,1 мкм, которые окрашивают сафранином, после этого носитель отмывают дистиллированной водой при 100°С и обрабатывают танином; проводят иммобилизацию сенситина на носитель, для этого суспензию микросфер в количестве 100 мг помещают в центрифужный стакан, суспензируют в 5 мл забуферного физиологического раствора и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 20°С, отмытый носитель суспендируют в 2 мл забуференного физиологического раствора и при постоянном перемешивании соединяют с сенситином в количестве 1,2 мг белка, оставляют для контакта в течение 2-х ч при комнатной температуре, при этом дальнейшую иммобилизацию осуществляют при температуре 4-5°С в течение 16-18 ч; блокируют свободные альдегидные группы путем добавления к суспензии носителя с сенситином 2 мл 0,5% раствора желатозы в забуференном физиологическом растворе при рН 7,1, оставляют на 2 ч при помешивании на электромешалке при комнатной температуре; трижды отмывают полученный диагностикум забуференным физиологическим раствором при рН 7,1, предварительно центрифугируя при 3000 об/мин в течение 10 мин, конечный осадок суспендируют в 8 мл 0,1% раствора желатозы на забуференном физиологическом растворе при рН 7,1; определяют чувствительность препарата, для этого в лунки планшета вносят 50 мкл нормальной кроличьей сыворотки, затем в первую лунку первого ряда вносят 50 мкл «Альтевира» с содержанием белка 60 мкл/мл и двукратно титруют до 22-й лунки включительно, причем из последней 22-й лунки удаляют 50 мкл жидкости, 23-я и 24-я лунки служат контролем на спонтанную агглютинацию диагностикума, при этом во все лунки двух рядов вносят по 25 мкл взвеси диагностикума, через 2,5 ч инкубации при комнатной температуре проводят учет результатов реакции визуально, при этом последняя лунка, а именно 19-я, дающая положительный результат - розовый агломерат, разведение которой равно 23,5 пг белка/мл, что соответствует чувствительности диагностического препарата, а активность и специфичность жидкого антигенного препарата проверяют в реакции агломерации объемной (РАО); лиофилизацию диагностикума осуществляют путем суспендирования препарата в 20 мл 3% желатозно-сахарозной среды, затем суспензию разливают в ампулы по 1 мл с последующим высушиванием при комнатной температуре в течение суток. Использование данного диагностикума позволяет определить концентрацию лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями, что дает возможность оценить эффективность лечения. 2 з.п. ф-лы, 7 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения диагностикума для определения концентрации лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями. Для этого получают экспериментальные гипериммунные кроличьи сыворотки путем иммунизации кроликов весом от 2,5 до 3 кг с помощью введения препарата «Альтевир» в дозе 100 мкг по белку в паховый лимфатический узел в количестве 3-х инъекций с интервалом в 14 дней, затем через 14 дней после последней инъекции из крови готовят сыворотки с последующим определением титра антител; выделяют иммуноглобулины из кроличьих сывороток, для этого полученную сыворотку в количестве 4 мл соединяют с 2 мл забуференного физиологического раствора, помещают в центрифужные стаканы, ставят на лед и выливают в них сыворотку при температуре 0°С, затем добавляют забуференный физиологический раствор, перемешивают, вливают метанольную воду, при этом понижая температуру до -5°С, после стакан со смесью ставят в холодильник на 30-40 мин, а затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин при нулевой температуре, полученную надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют в от исходного объема сыворотки, определяют количество белка по методу Лоури, получая в результате сенситин; готовят полимерный носитель, используя метод анионной полимеризации мономера - акрилового альдегида в водно-щелочной среде с получением монодисперсных частиц сферической формы диаметром 1,2±0,1 мкм, которые окрашивают сафранином, после этого носитель отмывают дистиллированной водой при 100°С и обрабатывают танином; проводят иммобилизацию сенситина на носитель, для этого суспензию микросфер в количестве 100 мг помещают в центрифужный стакан, суспензируют в 5 мл забуферного физиологического раствора и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 20°С, отмытый носитель суспендируют в 2 мл забуференного физиологического раствора и при постоянном перемешивании соединяют с сенситином в количестве 1,2 мг белка, оставляют для контакта в течение 2-х ч при комнатной температуре, при этом дальнейшую иммобилизацию осуществляют при температуре 4-5°С в течение 16-18 ч; блокируют свободные альдегидные группы путем добавления к суспензии носителя с сенситином 2 мл 0,5% раствора желатозы в забуференном физиологическом растворе при рН 7,1, оставляют на 2 ч при помешивании на электромешалке при комнатной температуре; трижды отмывают полученный диагностикум забуференным физиологическим раствором при рН 7,1, предварительно центрифугируя при 3000 об/мин в течение 10 мин, конечный осадок суспендируют в 8 мл 0,1% раствора желатозы на забуференном физиологическом растворе при рН 7,1; определяют чувствительность препарата, для этого в лунки планшета вносят 50 мкл нормальной кроличьей сыворотки, затем в первую лунку первого ряда вносят 50 мкл «Альтевира» с содержанием белка 60 мкл/мл и двукратно титруют до 22-й лунки включительно, причем из последней 22-й лунки удаляют 50 мкл жидкости, 23-я и 24-я лунки служат контролем на спонтанную агглютинацию диагностикума, при этом во все лунки двух рядов вносят по 25 мкл взвеси диагностикума, через 2,5 ч инкубации при комнатной температуре проводят учет результатов реакции визуально, при этом последняя лунка, а именно 19-я, дающая положительный результат - розовый агломерат, разведение которой равно 23,5 пг белка/мл, что соответствует чувствительности диагностического препарата, а активность и специфичность жидкого антигенного препарата проверяют в реакции агломерации объемной (РАО); лиофилизацию диагностикума осуществляют путем суспендирования препарата в 20 мл 3% желатозно-сахарозной среды, затем суспензию разливают в ампулы по 1 мл с последующим высушиванием при комнатной температуре в течение суток. Использование данного диагностикума позволяет определить концентрацию лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями, что дает возможность оценить эффективность лечения. 2 з.п. ф-лы, 7 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и биологии, и может быть использовано для оценки биосовместимости имплантируемых изделий. Для этого получают клетки с поверхности имплантируемого изделия для оценки его биосовместимости. Животному после анестезии выполняют средне-срединную лапаротомию, в брюшную полость имплантируют тестируемый образец материала, укладывая его на петли тонкой кишки и укрывая большим сальником, рану послойно ушивают. Через 52 часа выполняют релапаротомию, тестируемый образец материала извлекают, обрабатывают 0.25% раствором трипсина "Gibco" с этилендиаминтетрауксусной кислотой in vitro. Снимают адгезированные клетки, которые затем трижды промывают средой DMEM/F12+HEPES, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотке и осаждают центрифугированием при 1000 оборотах в минуту, а осадок ресуспендируют эмбриональной телячьей сывороткой. Использование данного способа позволяет получить культуру клеток для комплексной оценки биосовместимости имплантируемых изделий в условиях для взаимодействия макрофагов с тестируемым материалом in vivo и оценить морфо-функциональные показатели клеток после такого взаимодействия в условиях in vitro.
Изобретение относится к области медицины и найдет применение в онкоурологии, в частности, при лечении рака предстательной железы для прогнозирования риска развития биохимического рецидива у больных. Сущность способа: в ядрах эпителиальных клеток предстательной железы иммуногистохимическим способом определяют экспрессию антител к AT2-рецептору, подсчитывают долю иммунопозитивных клеток от общего числа опухолевых клеток в поле зрения микроскопа ×40. При значениях этой доли менее 0,7 прогнозируют возникновение биохимического рецидива рака предстательной железы. Использование предлагаемого способа позволяет эффективно, с высокой точностью прогнозировать биохимический рецидив рака предстательной железы, дает возможность на дооперационном этапе проводить комплексную оценку наиболее информативных факторов риска в числовом эквиваленте, в том числе при низких значениях простостатического специфического антигена, учитывая индивидуальную клиническую значимость каждого фактора риска. 3 пр.
Наверх