Способ оценки риска прогрессирования хронической болезни почек у детей


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2605575:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки риска прогрессирования хронической болезни почек (ХБП) у детей. У ребенка с подозрением на ХБП забирают кровь из периферической вены и с помощью метода аллель-специфичной полимеразной цепной реакции проводят идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов генов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) Alu Ins/Del I>D, ангиотензина (AGT) Thr174Met и Met235Thr, рецепторов 1 типа ангиотензина 2 (R1AGT) С1166С и эндотелина-1 (ЕТ-1) Lys198Asn. При выявлении Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT оценивают риск прогрессирования ХБП как легкий. При выявлении Met174Met AGT и Alu Ins/Del АСЕ оценивают средний риск. При выявлении сочетания однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ оценивают высокий риск прогрессирования ХБП. Изобретение позволяет с высокой достоверностью оценивать риск прогрессирования ХБП у детей на основании раннего выявления генетических предикторов - однонуклеотидных полиморфизмов генов. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки риска прогрессирования хронической болезни почек у детей. Использование способа позволяет с высокой точностью оценить дальнейшее течение нефропатий с целью выявления групп высокого риска прогрессирования ХБП и раннего назначения нефропротективной терапии с оптимальным выбором ее схемы.

Генетические факторы являются ведущими, определяя клиническое течение и гистологические изменения, влияя на прогрессирование заболевания. На сегодняшний день наиболее доступными маркерами прогрессирования ХБП являются: снижение скорости клубочковой фильтрации, изменение кровотока в почечных сосудах [2], появление и/или усиление протеинурии [4, 3], артериальная гипертензия, нарушение тубулярных функций и нарушение выведения азотистых шлаков [1].

Наиболее близкими аналогами предлагаемого способа является определение предикторов прогноза у детей со стероид-резистентным нефротическим синдромом [6] и способ прогнозирования прогрессирующего течения стероид-резистентного нефротического синдрома при гломерулонефрите у детей [7]. Авторы исследований установили два предиктора неблагоприятного прогноза течения заболевания: снижение функции почек при манифестации заболевания и наличие фокально-сегментарного гломерулосклероза в биоптате почки.

Недостатками указанных способов является отсутствие подхода к прогнозированию, так как оценка прогнозирования осуществлялась по уже манифестировавшим признакам, инвазивность, узкий круг показаний для биопсии почек. Способы оценки скорости клубочковой фильтрации малочувствительны и становятся диагностически значимы при длительно текущем заболевании, когда перестают функционировать 60-70% нефронов.

Целью изобретения является создание информативного и точного способа оценки риска прогрессирования хронической болезни почек у детей, позволяющего вовремя осуществлять превентивные мероприятия.

Эта цель достигается тем, что у ребенка с подозрением на ХБП забирают кровь из периферической вены и с помощью метода аллель-специфичной полимеразной цепной реакции проводят идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов генов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) Alu Ins/Del I>D, ангиотензина (AGT) Thr174Met и Met235Thr, рецепторов 1 типа ангиотензина 2 (R1AGT) С1166С и эндотелина-1 (ЕТ-1) Lys198Asn и при выявлении Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как легкий; при выявлении гомозиготного варианта однонуклеотидного полиморфизма Met174Met гена AGT и гетерозиготного варианта Alu Ins/Del гена АСЕ оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как средний; при выявлении сочетания однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr гена AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ оценивают высокий риск прогрессирования ХБП у детей.

Сравнение предлагаемого способа с другими, известными в области медицины, показало его соответствие критериям изобретения.

Способ реализуется следующим образом. У ребенка с подозрением на ХБП забирают кровь из периферической вены и проводят идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов генов с помощью метода аллель-специфичной полимеразной цепной реакции [5] согласно протоколам производителей («СибЭнзим», Россия; «Fermentas», Латвия). Оценивают полученные значения генных однонуклеотидных полиморфизмов и сопоставляют их с клинико-параклиническими признаками нефропатии. По варианту выявленных однонуклеотидных полиморфизмов вышеуказанных генов оценивают риск прогрессирования ХБП и при его наличии назначают нефропротективные препараты.

При выявлении Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как легкий; при выявлении гомозиготного варианта однонуклеотидного полиморфизма Met174Met гена AGT и гетерозиготного варианта Alu Ins/Del гена АСЕ оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как средний; при выявлении сочетания однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr гена AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ оценивают высокий риск прогрессирования ХБП у детей.

При отсутствии в генотипе однонуклеотидных полиморфизмов генов, определяющих прогрессирующее течение заболевания, дополнительная нефропротективная терапия не требуется, в этом случае планируется динамическое наблюдение пациента.

Способ испытан на базе регионального детского нефрологического центра - нефрологического отделения ГБУЗ СОКБ имени В.Д. Середавина, лабораторные исследования выполнены в генетической лаборатории ГБУЗ СО «МСЧ №2».

В основу работы положены результаты комплексного клинико-параклинического обследования 46 детей в возрасте от 1 до 17 лет с разными нозологическими формами нефропатий и с разной стадией ХБП. Группу контроля составили 30 условно здоровых детей, сопоставимых по возрасту и полу. У пациентов с сочетанием однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr гена AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ наблюдалось тяжелое быстропрогрессирующее течение и в течение 2-3 лет заболевания наблюдалось снижение СКФ и нарушение азотовыделительной функции почек. Пациенты этой группы страдают артериальной гипертензией с дебюта заболевания, независимо от схемы лечения у них сохраняется протеинурия. У детей с гломерулонефритом из этой группы была проведена нефробиопсия, при гистологическом исследовании выявлены признаки гломеруло- и тубулосклероза (более 25%). Дети со средней степенью тяжести заболевания чаще были носителями гомозиготного варианта однонуклеотидного полиморфизма Met174Met гена AGT и гетерозиготного варианта Alu Ins/Del гена АСЕ. У данной группы детей наблюдались эпизоды повышения артериального давления и сохранялся умеренный или следовый уровень протеинурии. При проведении нефробиопсии выявлен гломерулосклероз до 10-15% и дистрофия канальцев. Легкое течение заболевания было у пациентов с однонуклеотидным полиморфизмом Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT. Данная группа пациентов отличалась быстрым ответом на проводимую патогенетическую терапию.

Способ иллюстрируется клиническими примерами.

Пример 1. Больной Ж., 13 лет, поступил в ГБУЗ СОКБ им. В.Д. Середавина на нефроурологическое обследование. Из анамнеза известно, что при проведении УЗИ почек выявлена асимметрия их размеров. В анализах мочи регистрировалась следовая протеинурия. При динамическом обследовании ребенка через 6 месяцев отмечались выраженные признаки нефросклероза слева, вклад левой почки составлял менее 5% (по результатам динамической нефросцинтиграфии с технемагом). У мальчика забрали кровь из периферической вены и провели исследование на однонуклеотидный полиморфизм генов. Обнаружено сочетание однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr гена AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ, что указывает на высокий риск прогрессирования ХБП и требует назначения нефропротективного лечения с включением ингибиторов АПФ, блокаторов рецепторов 1 типа ангиотензина 2 на длительный период под контролем ультразвукового исследования почек (УЗИ) с цветным доплеровским картированием (ЦДК) сосудов.

Пример 2. Больной С., 4 года, поступил в ГБУЗ СОКБ им. В.Д. Середавина с вторичным гломерулонефритом, развившимся на фоне геморрагического васкулита. У ребенка наблюдался смешанный вариант иммуновоспалительного заболевания почек с эпизодами повышения артериального давления. Мальчик получал глюкокортикостероиды и пульс-терапию циклофосфаном. У мальчика забрали кровь из периферической вены и провели исследование на однонуклеотидный полиморфизм генов. Обнаружен гомозиготный вариант однонуклеотидного полиморфизма Met174Met гена AGT и гетерозиготного варианта Alu Ins/Del гена АСЕ, что в соответствии с предлагаемым способом оценили как средний риск прогрессирования ХБП. Назначена нефропротективная терапия ингибиторами АПФ, длительность терапии контролируется состоянием кровотока почек по данным УЗИ.

Пример 3. Больная З., 15 лет, находилась в отделении нефрологии ГБУЗ СОКБ им. В.Д. Середавина с вторичным, на фоне нефролитиаза, пиелонефритом. У девочки забрали кровь из периферической вены и провели исследование на однонуклеотидный полиморфизм генов. Были обнаружены Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT, что соответствует легкому риску прогрессирования ХБП. В план диспансерного наблюдения включено проведение УЗИ почек с ЦДК. При отсутствии нарушения кровотока в сосудах почек в нефропротективной терапии девочка не нуждается.

Предлагаемый нами способ позволяет оценить риск прогрессирования ХБП у детей в дебюте основного заболевания до манифестации клинико-параклинических признаков нефросклероза, обладает большой диагностической значимостью, доступный, не инвазивный, повторного проведения не требует, позволяет оптимизировать лечение с ранним использованием нефропротективных препаратов у детей с разными формами нефропатии.

Технический результат: способ позволяет с высокой достоверностью оценивать риск прогрессирования ХБП у детей на основании раннего выявления генетических предикторов - однонуклеотидных полиморфизмов генов. Известно, что прогрессирование хронических заболеваний почек может начинаться достаточно рано в условиях функциональной компенсации и даже при сохранной массе действующих нефронов и продолжается на всем протяжении заболевания. Поэтому раннее определение вышеуказанных генетических предикторов с оценкой риска прогрессирования ХБП позволит своевременно проводить нефропротективную терапию, что будет способствовать замедлению прогрессирования болезни.

Данный способ может широко применяться в терапевтических, нефрологических отделениях.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Мухин Н.А., Балкаров И.М., Моисеев B.C. и др. Хронические прогрессирующие нефропатии и образ жизни современного человека. Тер. арх. 2004; 76(9): 5-10.

2. Пыков М.И., Ватолин К.В. Детская ультразвуковая диагностика. - Москва: Видар - М, 2001. - 680 с.

3. Смирнов А.В., Добронравов В.А., Каюков И.Г. и др. Рекомендации Научно-исследовательского института нефрологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова: определение, классификация, диагностика и основные направления профилактики хронической болезни почек у взрослых. Левша, СПб., 2008;51.

4. Levey A.S., de Jong Р.Е., Coresh J. et al., The definition, classification and prognosis of chronic kidney disease: a KDIGO Controversies Conference report. Kidney Int 2010; http:/www.kidney-international.org, James W. et al., "Development of a Nonisotopic Multiplex Amplification Sets for Analysis of Polymorphic STR Loci," Fourth International Symposium on Human Identification (1993), pp. 177-187.

5. Schumm, James W. et al., "Development of a Nonisotopic Multiplex Amplification Sets for Analysis of Polymorphic STR Loci," Fourth International Symposium on Human Identification (1993), pp.177-187.

6. Abeyagunawardena AS, Sebire NJ, Risdon RA. et al., Predictors of long-term outcome of children with focal segmented glomerulosclerosis. Pediatr Nephrol 2007; 22: 215-221.

7. Длина B.B., Игнатова M.C., Приходина Л.С. Способ прогнозирования прогрессирующего течения стероид-резистентного нефротического синдрома при гломерулонефрите у детей. Номер патента: RU 02414852 С1, 2009.

Способ оценки риска прогрессирования хронической болезни почек (ХБП) у детей, отличающийся тем, что у ребенка с подозрением на ХБП забирают кровь из периферической вены и с помощью метода аллель-специфичной полимеразной цепной реакции проводят идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов генов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) Alu Ins/Del I>D, ангиотензина (AGT) Thr174Met и Met235Thr, рецепторов 1 типа ангиотензина 2 (R1AGT) С1166С и эндотелина-1 (ЕТ-1) Lys198Asn и при выявлении Alu Ins/Ins АСЕ и Thr174Met AGT оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как легкий; при выявлении гомозиготного варианта однонуклеотидного полиморфизма Met174Met гена AGT и гетерозиготного варианта Alu Ins/Del гена АСЕ оценивают риск прогрессирования ХБП у детей как средний; при выявлении сочетания однонуклеотидных полиморфизмов Thr235Thr гена AGT, С1166С R1AGT, Lys198Asn ЕТ-1 и Alu Del/Del АСЕ оценивают высокий риск прогрессирования ХБП у детей.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у недоношенных новорожденных при церебральной ишемии средней степени тяжести, обусловленной врожденной цитомегаловирусной инфекцией.

Изобретение относится к медицине, а именно к гемокоагулологии, и касается способа выявления в крови продуктов паракоагуляции. Способ выявления в крови продуктов паракоагуляции, включающий забор крови, стабилизацию ее 3,8%-ным цитратом натрия, отделение плазмы от форменных элементов крови и определение в ней массы образующегося сгустка, при этом плазму разделяют по 1 мл на контрольную и опытные пробы, в контрольную пробу вводят 0,1 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия, в опытные - по 0,1 мл 0,03-0,09%-ного раствора гипохлорита натрия, проводят инкубацию проб в течение 30 мин при комнатной температуре, определяют в каждой пробе концентрацию фибриногена по методу Рутберг с последующим расчетом разности концентраций опытной пробы с максимальным значением и контрольной пробы, положительное значение которой 0,25 г/л и выше указывает на наличие в плазме продуктов паракоагуляции.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу ранней диагностики ангиопатии при метаболическом синдроме. Способ ранней диагностики ангиопатии при метаболическом синдроме включает определение индекса массы тела (ИМТ), содержания в периферической венозной крови триглицеридов и N-концевого фрагмента мозгового натрийуретического пептида (Nt-pro-BNP) и при увеличении содержания Nt-pro-BNP более 500 фмоль/мл, триглицеридов более 3,0 ммоль/л и ИМТ более 35 кг/м2 диагностируют метаболический синдром, включающий ангиопатию.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к скринингу веществ, оказывающих регулирующее вес действие, и может быть использовано в медицине. Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включает приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина.

Изобретение относится к микрофлюидной системе и может быть использовано для количественного определения отклика живых клеток на определенные молекулы. Микрофлюидная система для управления картой концентраций молекул, пригодных для возбуждения клеток-мишеней, включает: микрофлюидное устройство (1); камеру (8) или дополнительный микрофлюидный канал, содержащий основание (6), предназначенное для приема клетки-мишени; микропористую мембрану (5), покрывающую сеть отверстий (47, 470); одно или несколько средств снабжения для снабжения одного или каждого из микрофлюидных каналов текучей средой, причем по меньшей мере одна из этих текучих сред содержит стимулирующие молекулы клетки-мишени.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и касается способа выбора длительности терапии Церулоплазмином у пациентов с бронхиальной астмой. Сущность способа заключается в том, что у пациентов с бронхиальной астмой определяют в крови супкроксиддисмутазу (СОД) и малоновый альдегид (МА) и их соотношения МДА/СОД после лечения Церулоплазмином в дозе 100 мг внутривенно 1 раз в сутки в течение 7 дней.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на скелет эритроцитов.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики предрасположенности к посттравматическому остеоартрозу коленного сустава. У пациентов существляют генотипирование полиморфизма rs2276109 (A-82G) гена ММР-12.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования ответа онкологического пациента с неходжкинской лимфомой на противораковую терапию, включающую бортезомиб и ритуксимаб, отличающийся тем, что способ включает определение уровня или количества первого прогностического фактора и определение присутствия или количества второго прогностического фактора, причем низкий уровень СD68 или присутствие полиморфизма PSMB1 (P11A) коррелирует по меньшей мере с одним положительным исходом.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения степени гетероплазмии мутаций митохондриального генома. Проводят полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени, вычисляют значение ΔCt, определяют коэффициент эффективности амплификации и рассчитывают степень гетероплазмии мутаций митохондриального генома по формуле.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способы определения наличия или отсутствия вставленной нуклеотидной последовательности в определенном сайте вставки в нуклеиновой кислоте включают: выделение нуклеиновой кислоты из одного образца или порций; приведение нуклеиновой кислоты в контакт с прямым праймером, способным связываться с нуклеиновой кислотой выше сайта вставки; первым обратным праймером, специфичным для вставленной нуклеотидной последовательности, и вторым обратным праймером, способным связываться с нуклеиновой кислотой ниже сайта вставки.

Изобретение относится к молекулярной биологии. Способ включает: экстракцию препаратов суммарной РНК, получение комплементарной ДНК с помощью реакции обратной транскрипции на РНК-матрице и последующую амплификацию в режиме реального времени с использованием высокоспецифичных праймеров для генов PTEN, CYP1B1 и АСТВ (референтный локус), а также расчет коэффициента относительной экспрессии генов PTEN и CYP1B1 (КPTEN и КCYP1B1) методом RT-PCR.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных молекул МНС II класса, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантная молекула МНС II класса включает: (i) весь или часть внеклеточного участка α-цепи МНС II класса; (ii) весь или часть внеклеточного участка β-цепи МНС II класса; при этом (i) и (ii) обеспечивают функциональный пептид-связующий домен и при этом (i) и (ii) соединены дисульфидной связью между остатками цистеина, расположенными на α2 домене указанной α-цепи и β2 домене указанной β-цепи, при этом указанные остатки цистеина не присутствуют в нативных доменах α2 и β2 МНС II класса и полученная рекомбинантная молекула не включает мотив лейциновой молнии.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к агенту для придания растению устойчивости к ингибитору 4-HPPD, включающему ДНК, кодирующую белок, обладающий активностью, придающей растению устойчивость к ингибитору 4-HPPD.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ получения гетерогенного набора одноцепочечных фрагментов ДНК для мультиплексного генетического анализа.

Настоящее изобретение относится к области биоинформатики. Предложен способ для приготовления улучшенной вычислительной системы, основанной на нуклеиновых кислотах, включающий синтезирование в водном растворе варианта системы молекулярных вычислений, отличающегося включением химической модификации, изменяющей энергию гибридизации молекул нуклеиновых кислот в системе.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к скринингу веществ, оказывающих регулирующее вес действие, и может быть использовано в медицине. Способ скрининга веществ, оказывающих регулирующее вес действие, включает приведение тестируемого вещества в контакт с клетками, экспрессирующими ген синовиолина, и идентификацию того, имеет или нет указанное тестируемое вещество ингибирующее влияние на экспрессию гена синовиолина.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения и секвенирования неизвестных последовательностей ДНК, которые фланкируют известные последовательности в выделенной ДНК.

Изобретение относится к области биохимии. Представлен набор синтетических олигодезоксирибонуклеотидов для детекции гена msp1α риккетсии Anaplasma marginale методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени».

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ амплификации нуклеиновых кислот, в котором наночастицы в объеме реакционной смеси переносят тепло в окружающую их среду посредством возбуждения.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и молекулярной биологии. Предложен способ диагностики папиллярной почечноклеточной карциномы (ППК), включающий стадии получения исходной пары образцов ткани от пациента, выделение и очистку препаратов РНК, синтез кДНК на матрице РНК с использованием олигонуклеотидных праймеров, проведение количественной реакции амплификации фрагмента гена CALL и сравнение количества амплифицированного фрагмента CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани. Уменьшение содержания мРНК гена CALL от 4-х до 45-ти раз служит диагностическим признаком ППК. Изобретение позволяет с высокой достоверностью диагностировать ППК, в том числе на ранней стадии опухолевого заболевания. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 6 пр.
Наверх