Способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов


 


Владельцы патента RU 2606042:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к области медицины и фармации и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов, которую определяют по ацетилхолинэстеразной активности везикул. Способ включает хранение промытых эритроцитов при 4°C в течение 7 дней в присутствии лекарственных веществ, после чего эритроциты центрифугируют, к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют для осаждения везикул и в осадке определяют активность ацетилхолинэстеразы. Рассчитывают в процентах степень везикуляции эритроцитов. Изобретение обеспечивает простоту, доступность, отсутствие необходимости в сложном дорогостоящем оборудовании. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и фармации и может использоваться для оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов.

В качестве прототипа выбран способ оценки влияния аскорбиновой кислоты на образование везикул эритроцитов, который включает хранение эритроцитов при 4°C в присутствии аскорбиновой кислоты, выделение везикул и определение везикуляции эритроцитов с помощью проточной цитофлуориметрии (Stowell S.R. et al. Transfusion - 2013. - V. 53. - P. 2248-2257).

Однако этот способ требует дорогостоящего специального оборудования (проточный цитофлуориметр).

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - упрощение процесса определения влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови и хранение промытых эритроцитов при 4°C в течение 7 дней в присутствии лекарственных веществ, в супернатанте проводят осаждение везикул и определение в них ацетилхолинэстеразной активности. По активности ацетилхолинэстеразной активности везикул судят о степени везикуляции эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Кровь от здоровых добровольцев забирают в вакуумные пробирки, содержащие цитрат натрия. Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором. К 10 мл забуференного физиологического раствора (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, pH 7.4) добавляют 50 мкл промытых эритроцитов и лекарственные вещества. Эритроциты с лекарственными веществами и без них хранят при 4°C в течение 7 дней. Затем для получения супернатанта, содержащего везикулы, суспензию эритроцитов перемешивают и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. К 9 мл супернатанта добавляют 1 мл хлористого гадолиния до конечной концентрации 400-600 мкМ, перемешивают и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин для получения осадка везикул. В осадке определяют активность маркерного фермента везикул ацетилхолинэстеразы (Greenwalt T.J. Tranfusion. - 2005. - V. 46. - P. 143-152). Степень везикуляции эритроцитов определяют путем измерения активности ацетилхолинэстеразы. Степень везикуляции эритроцитов при хранении в присутствии лекарственных веществ рассчитывают в процентах. За 100 процентов принимается степень везикуляции эритроцитов при хранении в отсутствие лекарственных веществ.

Известно, что глюкоза (Lang F et al. Cell Physiol. Biochem. - 2008. - V. 22. - P. 373-380) и аденозин (Niemoeller O.M. et al. Pflugers Arch - Eur. J. Physiol. 2007. - V. 454. 427-439) подавляют апоптоз эритроцитов.

Пример 1. Промытые эритроциты хранили в забуференном физиологическом растворе при 4°C в течение 7 дней, как в присутствии глюкозы (5 мМ), так и без нее. Суспензию эритроцитов перемешивали и центрифугировали 5 мин при 3000 об/мин. Затем к супернатанту добавляли хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ и центрифугировали 5 мин при 3000 об/мин. В полученном осадке везикул определяли активность ацетилхолинэстеразы. Глюкоза снижает степень везикуляции эритроцитов на 54.90±3.70%.

Пример 2. Промытые эритроциты хранили в забуференном физиологическом растворе при 4°C в течение 7 дней, как в присутствии аденозина (1 мМ), так и без него. Суспензию эритроцитов перемешивали и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. Затем к супернатанту добавляли хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ и центрифугировали 5 мин при 3000 об/мин. В полученном осадке везикул определяли активность ацетилхолинэстеразы. Аденозин снижает степень везикуляции эритроцитов на 57.90±2,0%.

Преимуществом предлагаемого способа является простота, доступность, отсутствие необходимости в сложном дорогостоящем оборудовании.

Способ оценки влияния лекарственных веществ на степень везикуляции эритроцитов, включающий забор крови, промывание и хранение эритроцитов при 4°С, определение степени их везикуляции при хранении в присутствии лекарственных веществ, отличающийся тем, что промытые эритроциты хранят в присутствии лекарственных веществ в течение 7 дней при 4°С, после чего перемешивают и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до конечной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, в осадке везикул определяют активность ацетилхолинэстеразы, рассчитывают в процентах степень везикуляции эритроцитов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме. Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме заключается в заборе крови с антикоагулянтом, выделении эритроцитов, далее бестромбоцитарную плазму смешивают с эритроцитами, помещают на предметное стекло, опускают в каплю смеси объектив и проводят микрофотосъемку при определенных условиях.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики водянки оболочек яичек. Сущность способа состоит в том, что производят забор образца водяночной жидкости из собственной влагалищной оболочки яичка, аспирируют водяночную жидкость и направляют ее на исследование половых гормонов: общего тестостерона и эстрадиола, при этом одновременно производят забор образца сыворотки крови путем проведения пункции периферической вены локтевого сгиба того же пациента, в образцах сыворотки крови определяют уровень половых гормонов, а именно общего тестостерона крови (Tsкр), а также эстрадиола крови (Екр).

Изобретение относится к медицине и биохимии и может быть использовано для исследования биологической жидкости. В качестве биологической жидкости используют сыворотку крови пациента, которую возбуждают путем принудительного ее движения механическим, тепловым, или импульсно-электрическим воздействием.

Изобретение относится к области микробиологии. Способ обнаружения кластера микроорганизмов на поверхности предусматривает этапы, на которых: а) определяют топографическое представление упомянутой поверхности; b) обнаруживают на топографическом представлении, по меньшей мере, один контур, ограничивающий область, которая может соответствовать скоплению биологических частиц.

Изобретение относится к медицине, а именно к андрологии, эндокринологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения первичного бесплодия хорионическим гонадотропом у мужчин с гипогонадизмом.

Группа изобретений относится к измерительному кристаллу для использования с микрофлюидной резистивной схемой для проведения анализа. Измерительный кристалл (100) для использования с отдельной микрофлюидной резистивной схемой (20) содержит канал (104) пробы, канал (114) отходов, размеры которых являются одинаковыми.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для оценки тяжести полиорганной дисфункции и прогнозирования летального исхода у реанимационного пациента детского возраста.

Изобретение относится к способу оценки эффективности эрадикационной терапии у больных ишемической болезнью сердца с сочетанием гастродуоденальной патологии, заключающемуся в исследовании слюны, отличающемуся тем, что слюну больного в объеме 50-100 мкл, полученную после завершения эрадикационной терапии, наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препаратов в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°C и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении, сравнивают полученные кристаллоскопические фации с паттерном, характерным для успешной эрадикационной терапии, по четырем показателям, первым из которых является индекс структурности, вторым - кристаллизуемость, третьим - степень деструкции фации, четвертым - выраженность белковой краевой зоны, при этом при совпадении значений не менее трех из них с паттерном фиксируют эффективность эрадикационной терапии.
Изобретение касается способа определения моносахаридов в вагинальной жидкости и заключается в том, что используют метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.

Изобретение относится к медицине и трансфузиологии и касается выявления методов оценки восстановления микроциркуляции крови при лечении пострадавших с глубокими отморожениями конечностей.

Группа изобретений относится к упаковке для аналитического устройства. Изделие для биологического анализа имеет первый лист; второй лист, который наложен на указанный первый лист, причем указанные первый и второй листы скреплены по всем своим боковым сторонам, образуя закрытую упаковку; по меньшей мере одно аналитическое устройство, находящееся внутри указанной упаковки; а также жесткое влагопоглощающее средство. При этом влагопоглощающее средство является также средством перфорации первого или второго листа указанной упаковки, а один из указанных первого и второго листов содержит углубление, образующее зону предпочтительного сгиба. Также раскрывается применение изделия для биологического анализа. Группа изобретений обеспечивает облегчение процесса открывания упаковки за счет открывания упаковки с помощью средства для перфорации с использованием зоны предпочтительного сгиба. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики болезни Паркинсона на доклинической стадии. Сущность способа заключается в том, что проводят определение в плазме крови с помощью ВЭЖХ концентрации норадреналина (НА), дофамина (ДА), 3,4-диоксифениоаланина (L-ДОФА), 3,4-диоксифенилуксусной кислоты (ДОУФК), сравнение концентрации этих показателей с концентрацией, предварительно измеренной у здоровых людей. При снижении концентрации НА на 57-67% диагностируют дрожательную форму. При снижении концентрации норадреналина НА на 80-90% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации ДА в плазме крови на 69-79% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации L-ДОФА на 57-67% диагностируют дрожательную форму болезни Паркинсона. При снижении L-ДОФА на 78-88% диагностируют ригидную форму. При снижении концентрации ДОФУК на 69-79% диагностируют ригидную форму болезни Паркинсона. Использование способа позволяет с высокой точностью диагностировать различные формы болезни Паркинсона на доклинической стадии. 7 ил.

Группа изобретений относится к области определения концентрации глюкозы. Способ определения концентрации глюкозы осуществляется при помощи системы, включающей в себя тестовую полоску с контрольным электродом и рабочим электродом, который имеет покрытие из слоя реагента, нанесенного на слой матрикса, содержащего медиатор, и измерительный прибор. Способ содержит этапы: подачи тестового напряжения между контрольным и рабочим электродом; измерения первого, второго и третьего тестовых токов на рабочем электроде после нанесения образца крови, содержащего аналит; определения концентрации глюкозы по формуле: , где G - концентрация глюкозы; I1 - первый тестовый ток; I2 - второй тестовый ток; I3 - третий тестовый ток; р - степенной член, который равен значению, вычисляемому по формуле: , где а и b - корректировочные параметры; отрезок 1 - длина отрезка, определяемая с помощью линейной регрессии графика зависимости от контрольной концентрации глюкозы; и наклон 1 - значение наклона, определяемое с помощью линейной регрессии графика зависимости от контрольной концентрации глюкозы; и отображения концентрации глюкозы. Также раскрывается способ определения тестового тока с поправкой на гематокрит, а также система для измерения концентрации глюкозы. Группа изобретений обеспечивает повышение точности определения концентрации глюкозы. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 табл.

Группа изобретений относится к медицине и касается системы детекции для электрохимического выявления белкового аналита, включающей наноструктурированный микроэлектрод, содержащий линкер на своей поверхности, где линкер присоединен к антителу или его фрагменту, способным связывать белковый аналит; и редокс-репортер, способный к переносу электронов с указанным наноструктурированным микроэлектродом, где связывание белкового аналита с указанными антителом или его фрагментом препятствует переносу электронов между указанным редокс-репортером и указанным наноструктурированным микроэлектродом. Группа изобретений также касается способа электрохимической детекции белкового аналита; способа электрохимической детекции множества белковых аналитов; способа мониторинга прогрессирования или ответа у субъекта, имеющего злокачественную опухоль; набора для электрохимической детекции белкового аналита. Группа изобретений обеспечивает создание простого и надежного анализа белков на основе электрохимической детекции. 5 н. и 65 з.п. ф-лы, 3 пр., 5 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии, клинико-лабораторной диагностики, в частности к определению степени обсемененности пародонта патогенными бактериями с помощью ПЦР в реальном времени. Описан способ применения комплексной тест-системы для определения Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis и Treponema denticola, а также принцип использования порогового значения, позволяющего отличить патологическую обсемененность пародонта (способную служить причиной возникновения пародонтита) от нормальной, встречающейся у лиц без выраженного поражения пародонта или склонности к нему. Способ включает ПЦР в реальном времени для определения в смывах пародонта патогенов. Определяют относительное значение Ct для образца по следующему алгоритму: из усредненного по двум или большему числу независимых определений абсолютного значения Ct (определяется программным обеспечением термоциклера с оптической детекцией) для специфического набора праймеров и зонда вычитают усредненную величину Ct общей бактериальной массы для того же образца серии, после чего идентифицируют патологическую обсемененность пародонта при условии, что величина относительной Ct не превышает 15. Изобретение может быть использовано для выявления причины возникновения хронического пародонтита у индивидуального пациента, оценки риска возникновения у него этого заболевания в будущем и эффективности лечения как агрессивного, так и хронического пародонтита. 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к лучевой диагностике, и может быть использовано для прогнозирования годовой антиостеопоротической эффективности менопаузальной гормональной терапии (МГТ). Проводят определение уровня МПК трабекулярной костной ткани второго-четвертого поясничных позвонков. Дополнительно определяют индекс билатеральной асимметрии плотности трабекулярной кости второго-четвертого поясничных позвонков, уровень остеокальцина в сыворотке крови и длительность постменопаузального периода. Рассчитывают прогноз эффективности назначения гормональной терапии (Y) до ее назначения по формуле. Если значение Y больше или равно 2, прогнозируют положительный эффект МГТ в течение года и вероятный прирост костной массы. Если значение Y от -2 до 2, делают вывод о поддерживающем эффекте МГТ и стабильном течении остеопороза, что позволяет расценивать результат МГТ как удовлетворительный. Отсутствие эффекта от предполагаемого назначения терапии определяют при значении Y менее -2, что характеризует вероятные существенные потери костной массы, несмотря на использование МГТ в течение года. Способ позволяет повысить достоверность прогнозирования за счет оценки наиболее значимых показателей. 1 табл., 3 пр.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для ранней диагностики мастита у коров. Способ заключается в том, что молоко в объеме 100-200 мкл наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°С и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении. При обнаружении в образце многочисленных хаотично расположенных разломов краевой зоны и кристаллических элементов с выраженной деструкцией в центральной зоне фации диагностируют мастит. Заявленное изобретение позволяет быстро и точно диагностировать мастит у коров. 2 ил., 1 пр.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для ранней диагностики мастита у коров. Способ заключается в том, что молоко в объеме 100-200 мкл наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°С и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении. При обнаружении в образце многочисленных хаотично расположенных разломов краевой зоны и кристаллических элементов с выраженной деструкцией в центральной зоне фации диагностируют мастит. Заявленное изобретение позволяет быстро и точно диагностировать мастит у коров. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу неинвазивной экспресс-диагностики сахарного диабета 2 типа. Способ неинвазивной экспресс-диагностики сахарного диабета 2 типа, включающий сбор секретов больших слюнных желез, лиофильную сушку микропрепаратов, нанесенных в виде капли на поверхность обезжиренного предметного стекла, расположенного строго горизонтально, как при проведении метода клиновидной дегидратации в вакуумной камере, далее визуально выделяют наружный и промежуточный слои в периферической части микропрепарата; если ширина наружного слоя менее 13 мкм в секретах левой и правой околоушных, подчелюстных и подъязычных слюнных желез и ширина промежуточного слоя менее 88 мкм в секретах левой и правой околоушных желез и менее 42 мкм в секретах подчелюстных и подъязычных слюнных желез, диагностируют отсутствие сахарного диабета; а если величина ширины наружного слоя 13 мкм и более в секретах левой и правой околоушных, подчелюстных и подъязычных слюнных желез, ширина промежуточного слоя 88 мкм и более в секретах левой и правой околоушных желез и 42 мкм и более в секретах подчелюстных и подъязычных слюнных желез, свидетельствует о наличии сахарного диабета 2 типа. Вышеописанный способ позволяет повысить точность и сократить время диагностики сахарного диабета 2 типа без использования специальных реактивов и дорогостоящего оборудования. 1 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу неинвазивной экспресс-диагностики сахарного диабета 2 типа. Способ неинвазивной экспресс-диагностики сахарного диабета 2 типа, включающий сбор секретов больших слюнных желез, лиофильную сушку микропрепаратов, нанесенных в виде капли на поверхность обезжиренного предметного стекла, расположенного строго горизонтально, как при проведении метода клиновидной дегидратации в вакуумной камере, далее визуально выделяют наружный и промежуточный слои в периферической части микропрепарата; если ширина наружного слоя менее 13 мкм в секретах левой и правой околоушных, подчелюстных и подъязычных слюнных желез и ширина промежуточного слоя менее 88 мкм в секретах левой и правой околоушных желез и менее 42 мкм в секретах подчелюстных и подъязычных слюнных желез, диагностируют отсутствие сахарного диабета; а если величина ширины наружного слоя 13 мкм и более в секретах левой и правой околоушных, подчелюстных и подъязычных слюнных желез, ширина промежуточного слоя 88 мкм и более в секретах левой и правой околоушных желез и 42 мкм и более в секретах подчелюстных и подъязычных слюнных желез, свидетельствует о наличии сахарного диабета 2 типа. Вышеописанный способ позволяет повысить точность и сократить время диагностики сахарного диабета 2 типа без использования специальных реактивов и дорогостоящего оборудования. 1 ил., 1 табл., 2 пр.
Наверх