Тест-штамм leptospira interrogans серогруппы icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к l. icterohaemorrhagiae

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae. Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni, обладающий выраженными антигенными и имунногенными свойствами, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» под регистрационным номером В-7745. Изобретение обеспечивает серологическую диагностику лептоспироза, мониторинг за распространением иктерогеморрагического лептоспироза как среди людей, так и среди различных видов животных. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой оригинальный штамм возбудителя лептоспироза, обладающий выраженной антигенной и иммуногенной активностью и используемый как тест-штамм для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae.

Лептоспироз регистрируется в России повсеместно, при этом наиболее высокие показатели заболеваемости характерны для Южного, Приволжского, Северо-Западного ФО. Лептоспироз, особенно иктерогеморрагический, относится к категории тяжело протекающих зооантропонозных инфекций с высокой частотой летальных исходов (Майорова C.O., Стоянова Н.А., Токаревич Н.К. Клинико-эпидемиологические особенности лептоспирозной инфекции в Санкт-Петербурге // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2007. - №1. - С. 12-15; Ананьина Ю.В. Лептоспирозы людей и животных: тенденции распространения и проблемы профилактики // Эпидемиология и Вакцинопрофилактики. - 2010. - №2. - С. 13-16).

Для лептоспироза характерен полиморфизм клинических проявлений, в связи с чем клиническая диагностика затруднена, особенно на ранних днях болезни, поэтому лабораторные методы исследования имеют решающее значение.

В серологической диагностике реакция микроагглютинации (РМА) остается «золотым стандартом». Для выявления антител в РМА рекомендован диагностический набор лептоспир (Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами: методические указания МУ 3.1.1128-02. / Москва; Минздрав России, 2002), в котором для определения антител к L. icterohaemorrhagiae рекомендован эталонный штамм М-20, выделенный в Дании от человека в 1938 году. Этот штамм был выбран за прототип. К недостаткам данного штамма можно отнести: во-первых, потерю ряда антигенных свойств в результате длительного (более 70 лет) культивтрования на искусственной питательной среде (Самохвалов А.П. Антигенные и иммуногенные свойства лептоспир в зависимости от сроков выделения // Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных: материалы Всесоюз. конф. - Львов, 1988. - С. 211). Во-вторых, возможная гетерогенность антигенных свойств штаммов лептоспир выделенных на отдаленных друг от друга географических территориях,

Изобретение направлено на получение тест-штамма для выявления антител к L. icterohaemorrhagiae.

Разработанный штамм позволит осуществлять выявление антител к L. icterohaemorrhagiae в крови людей и животных, диагностировать лептоспироз, установить серогрупповую принадлежность возбудителя, вызвавшего заболевание, установить источник инфекции в очаге, а также проводить мониторинг за циркуляцией иктерогеморрагических лептоспир на территории России.

Технический результат: обеспечение наиболее эффективного выявления антител к L. icterohaemorrhagiae, циркулирующих на территории России за счет сохранности штаммом выраженных антигенных свойств, что связано с небольшим числом пассажей на искусственной питательной среде, а также за счет выделения штамма на территории России. В связи с этим предлагаемый штамм может быть использован для серологической диагностики лептоспироза.

Полученный штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni 350 «Абайдулаев» депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» под номером В-7745. Штамм выделен в Санкт-Петербурге из крови больного умершего от лептоспироза в 2013 году.

Морфологические и физиологические характеристики. Грамотрицательные спирохеты с характерной морфологией и подвижностью, спор и капсул не образуют. Относятся к хемоорганотрофам и гидрофилам, культивируются на жидкой питательной среде. Лаг-фаза длится двое суток, экспотенциальная фаза характеризуется продолжительностью в 6 суток, время генерации 20 ч. В стационарной фазе наибольшая концентрация составляет (5,7±0,2)×107 лептоспир в 1 мл. Культивируются на жидкой фосфатно-сывороточной среде Терских, состоящей из 90% дистиллированной воды, 10% фосфатного буфера (рН=7,2) с добавлением 5% сыворотки кролика. Оптимальная температура культивирования - 28°С.

Генетические характеристики. На основании анализа нуклеотидной последовательности гена 16sRNA заявленного штамма, полученной в ходе секвенирования по Сенгеру, путем сравнения с известными нуклеотидными последовательностями, доступными в базе данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov), выявлено сходство с идентичностью 99% с нуклеотидной последовательностью гена 16SrRNA геномовида Leptospira interrogans, что позволяет отнести штамм к данному геномовиду.

Антигенные свойства: реакция микроагглютинации с сывороткой к L. icterohaemorrhagiae положительная в разведении 1:51200.

По сравнению со штаммом-аналогом в настоящем изобретении предлагается свежевыделенный штамм L. icterohaemorrhagiae, выделенный на территории России. Известно, что «свежевыделенные штаммы лептоспир обладают наиболее выраженной антигенной активностью нежели штаммы, выделенные 10-30 лет тому назад»

Изобретение реализуется следующим образом.

Пример 1. Способ получения штамма

Штамм получен путем посева крови больного лептоспирозом человека на жидкую питательную фосфатно-сывороточную среду Терских, состоящую из 90% дистиллированной воды, 10% фосфатного буфера (рН=7,2) с добавлением 5% сыворотки кролика. Культивирование штамма осуществлялось при температуре -28°С в течение 10 суток, с последующим определением серологической принадлежности и генотипированием штамма, изучением его биологических свойств.

Пример 2. Способ применения штамма

Для постановки РМА используют живую культуру L. icterohaemorrhagiae, выращенную на среде Терских с добавлением сыворотки кролика, со сроком культивировавния 7-14 суток. Культура должна иметь хорошую подвижность, накопление 5×107клеток на 1 мл, что соответствует 50-100 лептоспирам в поле зрения микроскопа при увеличении ×400.

Исследуемую сыворотку разводят и титруют в физиологическом растворе, начиная с 1:50 с последующим двукратным разведением. Разведенную сыворотку и живую культуру L. icterohaemorrhagiae смешивают в равных объемах по 50 мкл в лунках полистироловых планшет. После экспозиции в течение 30 минут при комнатной температуре производят учет реакции.

Пример использования штаммов М-20 и «Абайдулаев» для выявления антител к L. icterohaemorrhagiae в крови больных лептоспирозом людей в Санкт-Петербурге.

Предлагаемый штамм, по сравнению с прототипом, позволяет выявлять антитела к L. icterohaemorrhagiae в более высоком разведении сывороток (более высокие титры антител).

Таким образом, заявленный штамм пригоден для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae, что позволит диагностировать лептоспироз, установить серогрупповую принадлежность возбудителя, вызвавшего заболевание, установить источник инфекции в очаге, а также проводить мониторинг за циркуляцией иктерогеморрагических лептоспир на территории России.

Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni ГКПМ - Оболенск В-7745 для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae.



 

Похожие патенты:

Предложены штамм Lactobacillus mucosae для получения ферментированных пищевых продуктов и пищевой продукт, содержащий указанный штамм. Штамм Lactobacillus mucosae депонирован в CNCM под номером I-4429.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения капсульного полисахарида с пневмококковым серотипом.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для повышения продуктивности культивирования микроводорослей хлореллы. Способ предусматривает обработку микроводоросли Chlorella vulgaris ИФР № С-111 озоновоздушной смесью с концентрацией озона не более 7,2 мг/м3 в течение 6 минут в светлое время на первые и вторые сутки после их высева.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Предложен способ получения аллергена для дифференциации неспецифических реакций на ППД туберкулин для млекопитающих.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к штамму Pichia pastoris ВКПМ Y-4269. Настоящий штамм является продуцентом секретируемой термостабильной ксилоглюканазы класса GH74.

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и может быть использовано для производства спорового материала из бактерий штамма Bacillus sp. 1839.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения зрелого аполипопротеина A-I человека. Для увеличения выхода зрелого аполипопротеина A-I человека его получают путем ферментативного гидролиза SUMO-специфичной протеазой SP2 рекомбинантного химерного белка SUMO3-апоА-I, синтезированного штаммом дрожжей Pichia pastoris.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена ДНК-конструкция, кодирующая слитый белок-предшественник, в котором вспомогательная аминокислотная последовательность связана с N-концом последовательности зрелого целевого полипептида переходной областью, предназначенной для распознавания и расщепления гибридного предшественника специфической протеазой с образованием немодифицированной зрелой формы интересующего белка.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложена питательная среда для выращивания бактерий.

Предложены штамм Lactobacillus mucosae для получения ферментированных пищевых продуктов и пищевой продукт, содержащий указанный штамм. Штамм Lactobacillus mucosae депонирован в CNCM под номером I-4429.

Изобретение относится к медицине, а именно к применению препарата «Винфар» в качестве средства для стимуляции репаративного остеогенеза при лечении открытых переломов костей конечностей с помощью интрамедуллярного остеосинтеза.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения капсульного полисахарида с пневмококковым серотипом.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для создания функциональных продуктов питания. Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью на основе представителей нормальной кишечной микрофлоры человека, включающий выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий человека, культивирование их на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при температуре 37°C с последующим центрифугированием и выделением бактериального препарата.

Изобретения относятся к биотехнологии и могут быть использованы для производства масляной кислоты. Штамм анаэробных бактерий Clostridium tyrobutyricum, синтезирующий масляную кислоту с высокой селективностью (до 100%) и устойчивый к ее концентрации до 2,0 об.

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и может быть использовано для производства спорового материала из бактерий штамма Bacillus sp. 1839.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложена питательная среда для выращивания бактерий.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Serratia marcescens, являющийся продуцентом неспецифической бактериальной эндонуклеазы.

Изобретение относится к применению пробиотического препарата для облегчения симптомов синдрома раздраженного кишечника. Препарат содержит штамм Bifidobacterium bifidum MIMBb75, депонированный под регистрационным номером DSM 24514, и по меньшей мере один проглатываемый носитель.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства бифосфорного удобрения. Штамм Pseudomonas chlororaphis ssp chlororaphis Vsk-26a3, обладающий фунгицидной и бактерицидной активностью для защиты растений от болезней, вызываемых грибами и бактериями, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под номером В-7427.

Изобретение касается вакцинной композиции. Охарактеризованная вакцинная композиция содержит эффективное иммунизирующее количество инактивированной Ehrlichia canis (Е.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae. Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni, обладающий выраженными антигенными и имунногенными свойствами, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» под регистрационным номером В-7745. Изобретение обеспечивает серологическую диагностику лептоспироза, мониторинг за распространением иктерогеморрагического лептоспироза как среди людей, так и среди различных видов животных. 1 табл., 2 пр.

Наверх