Способ определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Способ определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) включает хроматографическое определение продуктов гидролиза. При этом анализ проводят на хроматографической колонке с фазой, представляющей собой диоксид кремния, модифицированный пентафторфенилом 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, при 28 °С. Причем адсорбировавшиеся на продукты гидролиза ДНК элюируют смесью воды с добавлением муравьиной кислоты и ацетонитрила в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 % за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 % ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 % водой с 0,1 % муравьиной кислотой со скоростью элюирования 0,6 мл/мин. Техническим результатом является обеспечение возможности приемлемого разделения продуктов химического гидролиза ДНК с целью идентификации аддуктов ДНК. 1 з.п. ф-лы, 2 ил.

 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).

В последние годы интенсивно развивается направление выявления маркеров, так или иначе связанных с ДНК опухолевых клеток. К этим маркерам относятся опухоле-специфичные мутации, метилированные фрагменты ДНК и аддукты ДНК. Аддукты ДНК аддукты могут быть потенциальными маркерами риска возникновения рака легкого, так как их содержание в тканях является результирующей взаимодействия канцерогенных факторов и реакцией организма с учетом индивидуальных особенностей систем метаболизма и репарации. Наличие патогенетически значимых для опухоли изменений ДНК в циркулирующих ДНК крови идентифицируют и количественно определяют методами масс-спектрометрии (TOF/TOF, TOF/MS, реже MS/MS). Для масс-спектрометрического анализа аддукты ДНК необходимо высвободить в виде отдельных модифицированных азотистых оснований и/или нуклеозидов. Для этого ДНК подвергается термическому, химическому или энзиматическому гидролизу. В то время как многие аддукты ДНК, включая 7-алкил-гуанин‚ 3-алкил-аденин и 8-нитро-гуанин, термически неустойчивы и могут быть селективно высвобождены из структуры ДНК путем нагрева [1, 2], другие повреждения ДНК стабильны и требуют расщепления. Этот шаг может быть выполнен либо путем ферментативного, либо путем химического гидролиза. При химическом гидролизе ДНК расщепляется путем разрыва обеих эфирных связей и фосфатных N-гликозидных между дезоксирибозой и пуриновым (пиримидиновым) основанием. В ходе такого гидролиза в смеси наблюдается большой набор соединений различных классов, но сходных по физико-химическим свойствам, что затрудняет их хроматографическое разделение. При этом очевидно, что без хроматографического разделения смеси невозможно корректно идентифицировать продукты гидролиза, в том числе и аддукты ДНК методами масс-спектрометрии.

Известны различные способы разделения продуктов химического гидролиза ДНК методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) – обращенно-фазовая хроматография и хроматография гидрофильного взаимодействия. Каждый из методов имеет ряд недостатков. Обращенно-фазовая хроматография не способна качественно разделить полярные компоненты, что вынуждает использовать более длинные колонки для увеличения времени удерживания, что приводит к удорожанию анализа, а также уменьшению стабильности масс-спектрометрической системы при дальнейшей идентификации аддуктов ДНК. Хроматография гидрофильного взаимодействия позволяет эффективно разделить все продукты гидролиза ДНК, но при этом требует длительной пробоподготовки, в ходе которой есть вероятность потери аддуктов ДНК и других продуктов гидролиза.

Известен способ хроматографического разделения продуктов гидролиза ДНК продуктов с помощью хроматографии гидрофильного взаимодействия (HILIC) - варианта нормальнофазной хроматографии на специальных колонках [3]. В качестве неподвижной фазы используется амидная колонка TSKgel Amide-80 2,0×150 мм с размером зерна 3 мкм. В качестве элюентов используется ацетонитрил и 10 миллимоль ацетата аммония в воде. Общее время анализа составляет 100 минут. Для проведения хроматографического разделения образец должен представлять собой смесь продуктов гидролиза в ацетонитриле или метаноле, для чего образец содержащий продукты гидролиза ДНК, упаривают под током азота и затем сухой остаток растворяют в ацетонитриле. Существенными недостатками данного метода являются трудоемкость пробоподготовки, а так же длительное время разделения продуктов гидролиза - 100 минут, что увеличивает стоимость одного анализа в несколько раз. Кроме того, для идентификации продуктов гидролиза необходимо растворение стандартных образцов веществ в ацетонитриле или метаноле, что не представляется возможным для некоторых соединений.

Известен другой способ разделения продуктов гидролиза ДНК с помощью обращенно-фазной хроматографии на колонках С18 [4]. Данный способ находит более широкое применение, так как анализируемая проба и стандарты веществ находятся в водном растворе. В качестве колонки для разделения используется Restec Ultra C18 4,6×250 мм с размером зерна 5 мкм. В качестве элюентов используются ацетонитрил и 85 миллимолярного ацетата аммония в воде. Недостатком данного способа недостаточное удерживание на колонке полярных компонентов, поэтому для улучшения разделения полярных компонентов в данном способе предлагается использовать более длинные колонки, но при этом увеличивается время анализа и расход элюентов, что также увеличивает стоимость разделения.

Технической задачей настоящего изобретения является разработка способа хроматографического разделения и определения продуктов химического гидролиза ДНК с целью идентификации аддуктов ДНК.

Поставленная задача решается тем, что способ определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), включает хроматографическое определение продуктов гидролиза, но в отличие от прототипа, анализ проводят на хроматографической колонке с фазой представляющей собой диоксид кремния, модифицированный пентафторфенилом 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, при 28 °С, причем адсорбировавшиеся на продукты гидролиза ДНК элюируют смесью воды с добавлением муравьиной кислоты и ацетонитрила в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 % за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 % ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 % водой с 0,1 % муравьиной кислотой со скорость элюирования 0,6 мл/мин.

При скорости потока 0,6 мл/мин, используют спектрофотометрический детектор с длиной волны 260 нм с последующим определением времени удержания и площадей хроматографических пиков продуктов химического гидролиза ДНК.

Для анализа используют колонки с сорбентом Luna PFP(2), обеспечивающим выдающуюся селективность для сильнополярных соединений, сложных природных продуктов, изомеров и других близко родственных соединений. Это достигается за счёт использования пентафлуорофенила на пропильном линкере, который обеспечивает множество механизмов удерживания в отличие от традиционных носителей с обратной фазой (С18, С8), в которых селективность обеспечивается только одним механизмом взаимодействия.

Механизмы взаимодействия, обеспечивающие селективность
колонкам Luna PFP(2):

• Водородные граничные взаимодействия;

• Диполь-дипольные взаимодействия;

• Ароматические и π-π взаимодействия;

• Гидрофобные взаимодействия.

Основными преимуществами Luna PFP(2) является превосходная селективность, достигаемая за счёт 4 механизмов взаимодействия и ортогональную селективность даже при использовании традиционных обращённо-фазовых систем с подвижной фазой.

Применение муравьиной кислоты позволяет использовать данный способ разделения продуктов гидролиза ДНК для масс-спектрометрического детектирования продуктов гидролиза ДНК, в отличие от фосфатных буферов. Также применение муравьиной кислоты позволяет повысить эффективность ионизации продуктов гидролиза в положительном режиме при масс-спектрометрическом детектировании.

Использование градиентного режима позволяет последовательно десорбировать компоненты смеси с неподвижной фазы, а также применение ацетонитрила до 25 % в качестве элюента позволяет существенно сократить стоимость анализа.

Использование заявляемых условий позволяет добиться приемлемого разделения продуктов химического гидролиза ДНК с целью идентификации аддуктов ДНК.

В дальнейшем способ поясняется примерами.

ПРИМЕР 1. Путем растворения готовят водный раствор стандартных веществ: аденин, гуанин, цитизин, цитидин, тимин, тимидин, 2-дезоксигуанозин. Далее из анализируемой смеси отбирают пробу объёмом 1 мкл и вводят в жидкостной хроматограф. Для разделения смеси используют колонку Phenomenex Luna PFP(2) 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, где разделение проводят в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 % за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 % ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 % водой с 0,1 % муравьиной кислотой. Скорость элюирования 0,6 мл/мин. Детекция продуктов гидролиза осуществляется спектрофотометрическим детектором при длине волны 260 нм. В результате анализа определяют времена удерживания продуктов гидролиза для идентификации: аденин (время удержания = 2,727 мин), гуанин (время удержания = 4,187 мин), цитизин (время удержания = 4,873 мин), цитидин (время удержания = 5,807 мин), тимин (время удержания = 7,940 мин), тимидин (время удержания = 8,073 мин), 2-дезоксигуанозин (время удержания = 8,560 мин).

На рисунке 1 представлена хроматограмма стандартных веществ, характерных для химического гидролиза ДНК.

ПРИМЕР 2. ДНК выделенную колоночным методом подвергают химическому гидролизу 0,1 М соляной кислотой при 70 °С в течение 4 часов. После охлаждают до комнатной температуры и нейтрализуют эквимолярным количеством гидроксида натрия. Далее из анализируемой смеси отбирают пробу объёмом 1 мкл и вводят в жидкостной хроматограф. Для разделения смеси используют колонку Phenomenex Luna PFP(2) 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, где разделение проводят в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 % за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 % ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 % водой с 0,1 % муравьиной кислотой. Скорость элюирования 0,6 мл/мин. Детекция продуктов гидролиза осуществляется спектрофотометрическим детектором при длине волны 260 нм. В результате анализа определяют времена удерживания продуктов гидролиза для идентификации: аденин (время удержания = 2,727 мин), гуанин (время удержания = 4,007 мин), цитизин (время удержания = 4,847 мин), цитидин (время удержания = 5,747 мин), тимин (время удержания = 7,933 мин), тимидин (время удержания = 8,180 мин), 2-дезоксигуанозин (время удержания = 8,607 мин).

На рисунке 2 представлена хроматограмма продуктов химического гидролиза ДНК.

Источники информации

1. Googin M., Loeber R., Prk S., Walker V., Wickliffe J., and Tretyakova N. HPLC-ESI+-MS/MS analysis of N7-gunine-N7-guanine DNA cross-links in tissues of mice exposed to 1,3-butadiene. 2007 // Chemical Research in Toxicology. 20, 5: 839-847.

2. Singer B., and Grunberger D. Molecular Biology of Mutagens and Carcinogens. 1983. Plenum Press, New York and London.

3. Chen P., Li W., Li Q., Wang Y., Li Z., Ni Y., Koike K.

4. Kelly M.C., White B., Smyth M.R. Separation of oxidatively damaged DNA nucleobases and nucleosides on packed and monolith C18 columns by HPLC-UV-EC // Journal of Chromatography B. 863 (2008) 181-186.

1. Способ определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), включающий хроматографическое определение продуктов гидролиза, отличающийся тем, что анализ проводят на хроматографической колонке с фазой, представляющей собой диоксид кремния, модифицированный пентафторфенилом 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, при 28 °С, причем адсорбировавшиеся на продукты гидролиза ДНК элюируют смесью воды с добавлением муравьиной кислоты и ацетонитрила в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 % за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 % ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 % водой с 0,1 % муравьиной кислотой со скорость элюирования 0,6 мл/мин.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при скорости потока 0,6 мл/мин используют спектрофотометрический детектор с длиной волны 260 нм с последующим определением времени удержания и площадей хроматографических пиков продуктов химического гидролиза ДНК.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области геологии и может быть использовано при поиске скоплений углеводородов. Предложен способ обнаружения углеводородов с использованием подводного аппарата, снабженного одним или несколькими измерительными компонентами.

Изобретение относится к цифровой фотографии для медицинских целей, в частности, такой как биологическая ткань, в ближней инфракрасной области спектра. Технический результат заключается в повышении контрастной чувствительности и отношения сигнал/шум видеосистемы для наблюдения малоконтрастных объектов, находящихся в мутной среде, упрощении устройства для формирования телевизионного изображения в мутных средах с преобладающим над поглощением рассеянием.

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к приборам для измерения концентрации газа, присутствующего в окружающей среде. Газоанализатор содержит два источника инфракрасного излучения, основной и дополнительный, измерительную кювету, интерференционный светофильтр, основной и дополнительный приемники инфракрасного излучения, два усилителя.

Изобретение относится к обработке изображений. Уменьшено влияние разницы между пробами клетки-мишени и разницы в условиях формирования изображения и так далее.

Рефрактометрический детектор содержит измерительный оптико-механический блок, включающий оптически связанные источник света, объектив, щелевую диафрагму, проточную кварцевую кювету, призму в виде трапеции с острыми углами 45° для юстировки детектора, плоскопараллельную кварцевую пластину зануления, двухплощадочный фотодиод, а также электронный блок.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтической стоматологии, и может быть использовано как способ и устройство для диагностики заболеваний слизистой оболочки полости рта, а именно для дифференциальной диагностики плоского лишая, лейкоплакии и глоссалгии.

Изобретение относится к технике измерений и может использоваться в автомобильной, сельскохозяйственной, авиационной, нефтеперерабатывающей и других отраслях промышленности, где необходимо проводить оперативный анализ качества моторного масла.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики заболеваний тканей пародонта на разных стадиях. Для осуществления способа исследуют слюну, в качестве показателя воспалительного процесса определяют концентрацию свободного оксипролина спектрофотометрическим методом.

Изобретение относится к измерительной технике и может быть использовано для измерения влажности древесины в процессе сушки и хранения. Способ измерения влажности древесины заключается в том, что устанавливают источник и приемник ИК-излучения поперек волокон древесины на выбранную глубину, измеряют поток ИК-излучения, прошедший через древесину, сравнивают полученные измерения с заранее определенной калибровочной зависимостью, связывающей изменение потока ИК-излучения, прошедшего через древесину с влажностью древесины, определенной весовым способом в фиксированные моменты времени, и вычисляют влажность древесины.

Изобретение относится к оптическим устройствам детектирования и идентификации газовых сред и предназначено для качественного анализа состава молекулярных газов, которое найдет применение в качестве оптоэлектронного идентификатора для детектирования токсичных газов, контроля качества пищевых продуктов, мониторинга окружающей среды и для профилактики болезней дыхания по составу выдыхаемого воздуха.

Изобретение относится к измерительной технике, в частности к оптическим методам измерения концентрации дисперсных частиц, взвешенных в жидкости. Способ оптического измерения счетной концентрации частиц в жидких средах включает измерение среднего гидродинамического диаметра частиц методом динамического рассеяния света, расчет по измеренному значению эффективности экстинкции частиц, измерение оптической плотности на одной из длин волн видимого диапазона и расчет по полученным данным счетной концентрации частиц. Устройство для оптического измерения счетной концентрации дисперсных частиц в жидких средах содержит лазер, светодиодный источник, направление излучения которого совпадает с направлением излучения лазера, поворотное зеркало, направляющее на образец излучение одного из этих источников, расположенные по ходу лазерного луча диафрагму, фокусирующую линзу, кювету с образцом, фотоприемник, измеряющий интенсивность проходящего излучения, и расположенную под углом к лазерному лучу систему сбора рассеянного излучения, включающую диафрагму, собирающую линзу и фотоприемник, измеряющий зависимость от времени интенсивности рассеянного излучения. Технический результат изобретения заключается в возможности осуществления измерений абсолютных концентраций частиц, расширении диапазона диаметров частиц, для которых применим метод, а также в повышении точности определения концентрации. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области экологии и может быть использовано для измерения концентрации парниковых газов в атмосфере. Сущность: система содержит тракт дистанционных измерений и тракт экспресс-анализа газовых компонент в предельном слое атмосферы. Тракт дистанционных измерений включает тракт регистрации сигнала отраженного от подстилающей поверхности светового потока, дважды прошедшего атмосферу, установленный на орбитальном носителе (3), Центр (5) управления полетом, радиолинии командного управления (6) и передачи (8) данных, наземные пункты (9) приема информации, средство (10) передачи информации, центр (11) тематической обработки информации. Упомянутый тракт регистрации сигнала состоит из спектрометра (1) и многоспектральной камеры (2), осуществляющих зондирование запланированных участков по программам, передаваемым из Центра (5) управления полетом. Упомянутый тракт экспресс-анализа газовых компонент размещен на тестовом участке и состоит из кассеты газовых датчиков (20) на каждый тип газа, канального коммутатора (24), аналого-цифрового преобразователя (22), буферного запоминающего устройства (23), синхронизируемых программируемой схемой (24) выборки измерений. Сигнал тракта экспресс-анализа газовых компонент используют для калибровки тракта дистанционных измерений. Технический результат: повышение точности определения концентрации парниковых газов в атмосфере. 5 ил.

Изобретение относится к устройствам измерения оптической плотности газовой среды. Способ включает наличие нескольких, связанных с опорным каналом, измерительных каналов, расположенных в пространстве на равном расстоянии от общего центра, выделение амплитуд разностных между измерительными каналами сигналов, сравнение максимальной из таких амплитуд со значением сигнала в опорном канале и при превышении порога по результатам сравнения формирование результатов измерения оптической плотности среды для установления факта наличия дыма. Технический результат заключается в существенном повышении скорости обнаружения пожара на ранних стадиях его возникновения. 2 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ идентификации микроводорослей. Способ включает воздействие методом лазерной индуцированной флуоресценции на образец пробы анализируемой среды в термокамере с последующим измерением спектра флуоресцентного излучения при изменении температуры в диапазоне 5-80°С. Измеренные температурные зависимости спектров флуоресценции пигментов клеток микроводоросли в указанном диапазоне температур сравнивают с соответствующими зависимостями для известных микроводорослей и определяют вид водоросли. Способ обеспечивает идентификацию микроводорослей с возможностью автоматизации процесса измерения. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области измерительной техники. Кювета для оптических микрорезонаторов с модами типа шепчущей галереи содержит корпус с отверстием в верхнем торце, выполненный с возможностью заполнения исследуемой средой и снабженный боковыми окнами для ввода и вывода излучения. Внутри корпуса с помощью крепежной лапки зафиксирован элемент оптической связи, напротив которого во фронтальной стенке корпуса выполнено окно для визуального наблюдения. Отверстие в верхнем торце снабжено патрубком, на котором в натяг установлен эластичный рукав для герметичного ввода системы позиционирования микрорезонаторов внутри кюветы и их оптической юстировки относительно элемента оптической связи. Технический результат заключается в повышении точности измерения и обеспечении доступа к управлению системой позиционирования для оптической юстировки микрорезонаторов внутри кюветы относительно элемента оптической связи непосредственно во время измерения. 6 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к конструкции электрохимических ячеек для исследований электрохимических систем методами in situ спектроскопии и микроскопии. Герметичная электрохимическая ячейка состоит из содержащего сквозную полость для размещения электролита корпуса, рабочего электрода, по крайней мере одного вспомогательного электрода и пластины, выполненной с возможностью герметичного закрепления со стороны нижнего торца корпуса. При этом рабочий электрод, который одновременно является окном для спектроскопических измерений, выполнен в виде размещенного на пористой подложке из нитрида кремния слоя графена. В корпусе ячейки предусмотрено пространство для размещения вспомогательного электрода и электрода сравнения, а также пористого стекла для разделения электролитов рабочего и вспомогательного электродов. Техническим результатом является возможность осуществления исследований электрохимических систем методами in situ спектроскопии, а также расширение диапазона рабочих давлений. 11 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к измерительной технике и может найти применение в процессах определения эффективного потенциала ионизации и эффективного сродства к электрону многокомпонентных ароматических конденсированных сред (органические полупроводники на основе ароматических углеводородов и смесей, нефтяные смолы, смолы пиролиза, каменноугольные смолы, высококипящие нефтяные фракции, легкие и тяжелые газойли коксования, каталитического крекинга деасфальтизаты, экстракты селективной очистки масляных фракций, асфальтосмолистые вещества, битуминозные материалы, кубовые остатки процессов нефтехимпереработки). Технический результат – расширение функциональных возможностей. Для этого эффективные потенциал ионизации и сродство к электрону определяются по координате синего цвета BsRGB, определяемой в колориметрической системе координат sRGB по фотоизображению растворов многокомпонентных конденсированных сред, которое регистрируется с люминесцентным источником излучения. При этом достигается повышение скорости определения эффективного потенциала ионизации (ЭПИ) и эффективного сродства к электрону (ЭСЭ), которая превышает время изменения физической структуры материала и его химического состава. 2 табл.

Изобретение относится к биологической химии, а именно к биохимии животных, и может быть использовано для определения выраженности карбонильного стресса при послеродовом эндометрите у коров. Способ оценки показателей окислительной модификации белков молока коров включает определение содержания карбонилированных белков, оценку показателей осуществляют по коэффициенту интенсивности карбонильного стресса, который рассчитывают по формуле: Kc=СКДНФГ нейтр / СКДНФГ осн, где СКДНФГ нейтр - содержание кетон-динитрофенилгидразонов нейтрального характера; СКДНФГ осн - содержание кетон-динитрофенилгидразонов основного характера, где Kc=1,5-1,9 свидетельствует о ранней стадии развития карбонильного стресса у коров; Kc=2,0-3,4 свидетельствует об отсутствии карбонильного стресса у клинически здоровых коров; Kc=3,5-4,5 свидетельствует о поздней стадии развития карбонильного стресса у коров. Заявляемый способ прост и экономичен в осуществлении. Расчет коэффициента интенсивности карбонильного стресса позволяет выявить глубокие нарушения соотношений производных аминокислот нейтрального и основного характера, что повышает информативную ценность лабораторного исследования.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения интегральной антиоксидантной активности (АОА) растительного сырья и продуктов питания на его основе. Способ включает взаимодействие реагента, иммобилизованного в оптическую полиметакрилатную мембрану, с аналитом, последующее ее отделение от раствора и оценку величины антиоксидантной активности. В качестве реагента применяют индикаторную систему медь(II) – неокупроин, иммобилизованную в полиметакрилатную матрицу, аналитический сигнал представляют в виде светопоглощения при 450 нм, или визуальной оценки интенсивности окраски оптической мембраны, количественную и/или качественную оценку интегральной антиоксидантной активности проводят по градуировочному графику и/или цветовой шкале, построенным для аскорбиновой кислоты, используемой в качестве вещества-стандарта. 2 ил., 7 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области физики, в частности к аналитическому приборостроению и может быть использовано в газоанализаторах, применяемых на установках извлечения серы. Cпособ оптического определения компонента, преимущественно сероводорода, и его концентрации в потоке газа включает облучение пробы исследуемого газа с использованием лазерного излучения с различными длинами волн, при котором производят сложение люминесцентного излучения в УФ или видимом диапазоне с лазерным излучением в ближнем ИК диапазоне для достижения порога интенсивности, при котором возникает эффект вынужденного рассеивания Мандельштама-Бриллюэна с образованием стоксовых составляющих. Далее регистрируют спектральное распределение интенсивности прошедшего через пробу излучения, определяют превышение полученного сигнала над пороговым уровнем шума и сравнивают абсолютные значения полученных пиков и главного максимума, соответствующего лазерному излучению. При этом пробу исследуемого газа облучают в камере газоанализатора, заполненной водой, температуру которой поддерживают в диапазоне 80-85°С. Присутствие компонента идентифицируют по частоте максимума излучения, полученного в результате вынужденного рассеивания Мандельштама-Бриллюэна, а его концентрацию определяют как логарифм интенсивности стоксовой составляющей. Газоанализатор размещают непосредственно в зоне движения потока газа, а в качестве источника лазерного облучения используют по меньшей мере один твердотельный лазер с полупроводниковой накачкой, встроенный в камеру газоанализатора. Длину волны лазерного излучения в УФ и видимом диапазоне выбирают в пределах 200-530 нм, а в ближнем ИК диапазоне - 810-1200 нм. Технический результат - возможность определения компонента, преимущественно сероводорода, и его концентрации в потоке газа с высокой точностью, а также непрерывный мониторинг процесса. 3 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты. Способ определения продуктов химического гидролиза дезоксирибонуклеиновой кислоты включает хроматографическое определение продуктов гидролиза. При этом анализ проводят на хроматографической колонке с фазой, представляющей собой диоксид кремния, модифицированный пентафторфенилом 4.6×150 мм с размером зерна 5 мкм, при 28 °С. Причем адсорбировавшиеся на продукты гидролиза ДНК элюируют смесью воды с добавлением муравьиной кислоты и ацетонитрила в градиентном режиме: на первом этапе градиент ацетонитрила изменяется линейно от 0 до 25 за 6 минут, затем в течение 4 минут выдерживается режим с 25 ацетонитрилом, на заключительном этапе происходит уравновешивание фазы в течение 4 минут 100 водой с 0,1 муравьиной кислотой со скоростью элюирования 0,6 млмин. Техническим результатом является обеспечение возможности приемлемого разделения продуктов химического гидролиза ДНК с целью идентификации аддуктов ДНК. 1 з.п. ф-лы, 2 ил.

Наверх