Способ получения препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к области клеточной биотехнологии и биофармакологии, конкретно к получению препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных. Изобретение может найти применение в ветеринарии для лечения и профилактики широкого круга заболеваний домашних и сельскохозяйственных животных. Способ включает введение в клеточно-культуральную среду, полученную из измельченной ткани селезенки свиней, обработанной 0,5%-ным раствором метронидазола и 0,05%-ным раствором хлоргексина с последующими дезагрегацией ее 0,25%-ным раствором трипсина и культивированием клеточного материала с концентрацией клеток 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶ на 1 мл ростовой среды Игла-MEM с добавлением 10-15% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота в присутствии стимулятора роста клеточных культур Пинексида, препарата «Повин ВМ», в состав которого входят водный раствор полиэтиленгликоля, водный раствор поливинилпирролидона, коммерческий раствор Версена, раствор тетрациклина и коммерческий раствор трипсина. Изобретение позволяет расширить группу препаратов на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных с расширенным спектром его применения в лечении и восстановлении структуры утраченных органов животных. 7 ил., 28 пр.

 

Изобретение относится к области клеточной биотехнологии и фармакологии и касается способа получения препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных, а также способа выделения культуры стволовых клеток из селезенки свиней. Изобретение может найти применение в ветеринарии для лечения и профилактики широкого спектра заболеваний домашних и сельскохозяйственных животных.

В настоящее время легочные и желудочно-кишечные заболевания сельскохозяйственных животных, имеющие повсеместное распространение и наносящие значительный ущерб, складывающийся из большого отхода и снижения веса молодняка сельскохозяйственных животных, пополнились рядом других серьезных заболеваний животных: дисплазией суставов у собак и кошек, микроспорией, трихофитией и другими грибковыми заболеваниями, маститами, эндометритами сельскохозяйственных и домашних животных, офтальмологическими заболеваниями, патологией сердечно-сосудистой системы и др.

Среди известных в ветеринарной медицине препаратов сложно найти средство, которое одновременно являлось бы лечебным и стимулирующим продуктивность животных.

Известные препараты для лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекций сельскохозяйственных животных бактериальной этиологии (патент №2053772, RU; патент №2214821, RU), а также вирусной этиологии (патент РФ №2286171, Кл. A61K 38/43, A61K 31/65, A61K 31/198, A61K 47/34, А61Р 31/12, А61Р 31/04, А61Р 11/00, А61Р 1/00, 2005, прототип), включающий водный раствор полиэтиленгликоля, водный раствор поливинилпирролидона, коммерческий раствор Версена, раствор тетрациклина и коммерческий раствор трипсина при следующем соотношении компонентов, об.%:

15-20%-ный водный раствор полиэтиленгликоля
(ММ 2000-6000). (ПЭГ)	10-15
15-20%-ный водный раствор поливинилпирролидона
(ММ 280000-360000), (ПВП)	10-20
0,01-0,02%-ный коммерческий раствор Версена	10-15
8-10%-ный водный раствор тетрациклина	10-15
0,20-0,25%-ный коммерческий
раствор трипсина (100-128 ЕД)	Остальное

оказались неэффективными для лечения таких заболеваний животных, как дисплазия суставов у собак и кошек, микроспория, трихофития и других грибковых заболеваниями, маститами, эндометритов сельскохозяйственных и домашних животных, офтальмологических заболеваний, патологии сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной систем и др. болезней.

Стимуляторы продуктивности сельскохозяйственных животных не имеют широкого распространения по целому ряду причин, в том числе по причине невозможности использования данных фармакологических средств в массовом порядке и при многократном применении.

В настоящее время в современной ветеринарной биомедицине формируется новый раздел - «клеточная терапия», которая позволяет с помощью трансплантации клеток восполнить недостаточную функциональную активность тканей и регенерировать поврежденные органы. Функцию обновления и восстановления тканей in vivo выполняют стволовые клетки, которые представляют собой пул запасных недифференцированных предшественников клеток различных типов. В связи с этим применение стволовых клеток является наиболее перспективным направлением клеточной терапии, и наибольшую актуальность приобретают работы по выделению стволовых клеток из тканей человека и животных.

Выделены различные типы стволовых клеток взрослого организма - гематопоэтические (предшественники клеток крови), нейрональные (предшественники клеток нервной ткани), мезенхимальные (клетки, способные дифференцироваться в клетки тканей мезенхимального происхождения, а также других зародышевых листков) и др.

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) отличаются относительной простотой выделения и культивирования, способностью пролиферировать в течение долгого времени in vitro и широким спектром дифференцировки. В связи с этим особое внимание уделяется способам изоляции МСК из тканей взрослого организма, однако универсального метода их получения до сих пор нет.

Известен способ получения биотрансплантанта для лечения остепороза (патент РФ №2265442, кл. А61К 35/28, 2004), состоящего из клеток МСК. В процессе получения МСК осуществляют ферментативную дезагрегацию, фильтрацию через мелкоячеистое сито, центрифугирование в солевом растворе Хенкса, ресуспендирование в ростовой среде ДМЕМ/F12, содержащий 15% эмбриональной телячьей сыворотки и глутамин Посев осуществляют на пластиковые чашки Петри при удалении через 1 сутки неприкрепившихся клеток. Инкубирование проводят при 37°C в атмосфере 5% СО₂ с последующей трипсинизацией и пересевом культуры. В результате нескольких пересевов получают культуру клеток МСК с преимущественной способностью к остеогенной дифференцировке, но эта культура является гетерогенной клеточной популяцией, не охарактеризованной фенотипированием.

Известен способ выделения мезенхимальных стволовых клеток (патент РФ №2252252, кл. C12N 5/08, 2004) из ткани человека, и может быть использован для лечения широкого круга заболеваний. Мезенхимальные стволовые клетки человека выделяют из жировой ткани, децидуальной или амниотической оболочки плаценты, или хориональной стромы плаценты. Ткани человека измельчают и обрабатывают раствором коллагеназы в среде Игла в модификации Дюльбекко, при этом жировую ткань, децидуальную или амниотическую оболочку плаценты обрабатывают коллагеназой типа I, а хориальную строму плаценты - коллагеназой типа IV. Затем полученную суспензию очищают от эритроцитов с помощью лизирующего раствора с последующей последовательной фильтрацией через фильтры с размером пор 100 и 10 мкм.

Известен способ выделения мезенхимальных стволовых клеток из тканей человека (патент РФ №2280462, кл. А61К 35/55, 2004), включающий измельчение и ферментативную обработку тканей раствором коллагеназы в среде Игла в модификации Дюльбекко, очистку от эритроцитов с помощью лизирующего раствора с последующей фильтрацией полученной суспензии. В качестве тканей человека используют тимус, для ферментативной обработки используют коллагеназу типа II, а фильтрацию проводят последовательно через фильтры с размером пор 100 и 10 мкм.

Известен способ получения МСК для имплантации с целью направленной остеорегенерации (патент РФ №2210352, кл. А61К 6/00, C12N 5/08, 2001), включающий выделение МСК путем дезагрегации ткани-источника МСК с последующим ресуспендированием суспензии и культивированием на ростовой среде.

Стволовые клетки и их использование в лечении многих заболеваний у человека на сегодняшний день является неоспоримым фактом. Уникальные свойства стволовых клеток дают возможность применять их при самых разных патологических процессах, на разных стадиях и лечить трудноизлечимые болезни. Путем трансплантации стволовых клеток лечат остеопороз (Патент РФ №2265442, RU), аллергические заболевания (Патент №2250773, RU), паркинсонизм (Патент №2259836, RU), травму головного мозга (Патент РФ №2216336, RU), онкологические заболевания (Патент №2257219, RU) и иные болезни.

В настоящее время ряд серьезных ветеринарных клиник мира с успехом используют подобные технологии в лечении заболеваний у животных. Наиболее распространенными проблемами являются артрозы у собак, травматические и дегенеративные заболевания спинного мозга, которые вызывают параличи у собак и кошек.

Задача, решаемая данным изобретением, заключается в создании препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных с расширенным спектром его применения в лечении, а также в реализации потенциальных возможностей препарата для восстановления структуры утраченных органов и тканей домашних и сельскохозяйственных животных, стимулирование их продуктивности.

Технический результат заключается в расширении группы препаратов на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных, а также в значительном стимулировании молочной продуктивности крупного рогатого скота, появлении возможностей и способов для реконструктивной клеточной терапии при патологии органов и тканей животных, возникших в результате инфекционных и других заболеваний.

Поставленная в изобретении задача решена тем, что в способе получения препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных, в состав которого входят водный раствор полиэтиленгликоля, водный раствор поливинилпирролидона, коммерческий раствор Версена, раствор тетрациклина и коммерческий раствор трипсина при следующем соотношении компонентов, об.%:

15-20%-ный водный раствор полиэтиленгликоля
(ММ 2000-6000). (ПЭГ)	10-15
15-20%-ный водный раствор поливинилпирролидона
(ММ 280000-360000), (ПВП)	10-20
0,01-0,02%-ный коммерческий раствор Версена	10-15
8-10%-ный водный раствор тетрациклина	10-15
0,20-0,25%-ный коммерческий
раствор трипсина (100-128 ЕД)	Остальное

известный состав вводят в клеточно-культуральную среду, полученную из ткани селезенки свиней. Измельченную ткань селезенки подвергают антисептической обработке 0,5%-ным раствором метронидазола и последующей обработке 0,05%-ным раствором хлоргексина с последующими дезагрегацией ткани селезенки 0,25%-ным раствором трипсина и культивированием клеточного материала с конечной концентрацией клеток 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶ на 1 мл на ростовой среде Игла-МЕМ с добавлением 10-15% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота в присутствии стимулятора роста клеточных культур Пинексида, состоящего из 9 частей питуитрина и 1 части диметилсульфоксида. Соотношение компонентов: известный препарат и клеточно-культуральная среда 5-5,5:1.

В ходе разработки способа получения препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных были проведены исследования по выбору:

1) источника стволовых клеток, который играет определенную роль в последующем использовании клеток при лечении больных («Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток», А.Г. Румянцев, А.А. Масчан. - Медицинское информационное агентство. М. - 2003 г. - 912 с.). Различные источники МСК подразумевают и разную обработку исходного биоматериала. Условия выделения МСК для дальнейшего культивирования и условия наработки нужной клеточной массы зависят от состава культуральной среды, условий посева и культивирования, посуды и др. Наилучшим материалом для наработки трансплантантных МСК является фетальный материал, т.к. клетки обладают выраженной способностью к дифференцировке, более активны функционально, обладают большим потенциалом пролиферации и роста, продуцируют факторы регенерации и роста; при пересадке они стимулируют ангиогенез. Остальные клетки лучше переносят гипоксию. Однако использование фетальных клеток связано с этическими проблемами и с труднодоступностью исходного материала.

В настоящем изобретении в качестве ткани-источника выбрана селезенка свиней, так как обладает большей клеточной массой для получения стволовых клеток и является убойным материалом в свиноводстве;

2) учитывая, что в работе с МСК используют традиционные методики работы с клетками (Культура животных клеток. Методы. Под ред. Р. Фрешни. М.: Мир. 1989 г.), в каждом случае подбирая индивидуальную последовательность действий, условия выделения и наработки клеточной массы, в настоящем изобретении разработан способ выделения стволовых клеток из селезенки свиней, который включает следующие операции:

- механическое измельчение ткани - источника стволовых клеток, в качестве которой используют селезенку свиньи, путем нарезания на мелкие фрагменты объемом 0,2-0,5 мм³,

- антисептическую обработку измельченной ткани селезенки путем промывки на Шуттель-аппарате в течение 2-4 часов при комнатной температуре в 0,5%-ном растворе метронидазола в соотношении, масс. 1:3 соответственно, с последующим удалением отработанного материала и промывкой на Шуттель-аппарате в течение 6-8 часов при комнатной температуре в 0,05%-ном растворе хлоргексина в соотношении, масс. 1:3 соответственно, с последующим удалением отработанного материала;

- дезагрегацию измельченной ткани селезенки путем обработки ферментами - 0,25%-ным раствором трипсина 37°C в соотношении, масс. 1:3, на магнитной мешалке в условиях термостата при температуре 37°C в течение 15-20 мин с последующим отделением надосадочной жидкости путем слива ее в стерильную емкость; данную операцию повторяют трижды, каждый раз сливая надосадочную жидкость в ту же стерильную емкость; по окончании обработки измельченной ткани селезенки ферментами, отработанный материал удаляют в отход, а клеточный материал с концентрацией клеток 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶/мл помещают в стерильный культуральный сосуд;

- культивирование клеток из клеточного материала с концентрацией клеток 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶/мл среды для роста стволовых клеток Игла-MEM с добавлением 10-15% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота в присутствии стимулятора роста клеточных культур Пинексида, состоящего из 9 частей питуитрина и 1 части диметилсульфоксида, в соотношении компонентов, масс. 1:3:0,45 соответственно; культивирование стволовых клеток осуществляют при температуре 37°C в течение 48-72 часов в стерильном культуральном сосуде, помещенном в термостат.

Через 48-72 часа клеточно-культуральную среду сливают в стерильную емкость. Стволовые клетки могут использоваться во многих целях, в частности для приготовления препарата для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных. С этой целью в полученную клеточно-культуральную среду вводят известный препарат под названием «Повин-ВМ» (препарат для профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекционных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии сельскохозяйственных животных, патент №2286171, RU, прототип), в соотношении, масс. 1:5-7 соответственно, при котором конечная концентрация клеточно-культуральной среды составляет 18-20%.

В результате получают новый препарат на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных.

Выбор концентрации клеточно-культуральной среды в 18-20% обусловлен следующим. Низкая концентрация ростовых факторов, выделяемых стволовыми клетками, в полученном препарате (меньше 18%) требует длительного лечения, что клинически и экономически неэффективно. Высокая концентрация ростовых факторов в препарате (больше 20%) вызывает аллергические реакции по месту применения, очаговые реакции в виде припуханий, покраснений, образование отеков. Возможны общие реакции в виде повышения температуры тела, отказа от корма и воды и др. признаков клинической депрессии физиологических функций.

Полученный заявленным способом препарат на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных является уникальным, сочетающим в себе компоненты клеточных фракций, антисептических соединений, полимерных соединений, и обладает высокой лечебной эффективностью, подтвержденной научными и клиническими исследованиями. Препарат безопасен в применения в клинике и на производстве, что также подтверждено клиническими исследованиями. Поскольку препарат представляет готовую лекарственную форму, он удобен и прост в применении.

Благодаря дополнению известного препарата по пат. №2286171, RU клеточно-культуральной средой новый препарат обладает гораздо большей эффективностью и расширенным спектром его применения. Кроме того, заявленный препарат обладает:

- мощным регенеративным потенциалом, проявляющимся в условиях раневого процесса, оптимизирует заживление раневого процесса; стимулирует репарации сухожилий, связок, раневых дефектов, ускоряет восстановление кожных покровов после ожогов большой площади;

- остеоиндуктивными свойствами (ускорение заживления переломов) и создает условия успешного репаративного остеогенеза при прогрессирующей резорбции (уменьшении) костной ткани;

- иммуностимулирующим и противовоспалительными свойствами, устраняет инфекционные очаги в мягких тканях и органах, обеспечивает длительную ремиссию и профилактику обострений.

Препарат нашел применение в ветеринарной медицине в следующих ее областях:

1. Акушерство и гинекология:

- профилактика и лечение маститов;

- лечение эндометритов;

- стимуляция рефлексов овуляции (течка, охота у коров);

- повышение надоев молока у лактирующих коров;

- лечение послеродовых осложнений (эклампсии, парезы).

2. Ветеринарная ортопедия:

- лечение дисплазии суставов;

- лечение переломов, ушибов, трещин костей;

- лечение разрывов связок и тендовагинитов;

- лечение бурситов;

- лечение папиллом на коже;

- лечение микозов.

3. Незаразные болезни:

- лечение ран, трофических язв, свищей;

- стимуляция заживления ран в послеоперационный период;

- лечение стоматитов.

4. Инфекционные заболевания:

- вирусный (инфекционный) перитонит у кошек;

- лейкозы у собак;

- гнойные раны у животных.

5. Реконструктивная ветеринарная медицина:

- восстановление анатомической целостности органов (лечение монорхизма у котов);

- удлинение культи ампутированной конечности у собак.

Выше изложенное говорит о большой сфере применения данного аппарата и иллюстрируется многочисленными примерами конкретного применения аппарата для лечения и профилактики инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных, что, несомненно, подтверждает расширенный спектр применения созданного препарата в лечении, а также в реализации потенциальных возможностей препарата для восстановления структуры утраченных органов и тканей домашних и сельскохозяйственных животных.

Заявленный препарат расширяет группу препаратов на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных. Это дает возможность значительно снизить ущерб от большого отхода и снижения веса молодняка сельскохозяйственных животных в результате инфекционных, вирусных и множества других заболеваний. Оптимальное сочетание результатов применения препарата и экономической целесообразности - перспектива для внедрения данного препарата в ветеринарную медицину.

Изобретение иллюстрируется чертежами.

На фиг. 1 изображена схема, поясняющая заявленный способ получения препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных; на фиг. 2 показан прирост массы тела кроликов, инъецированных заявленным препаратом, за сутки, в сравнении с приростом массы тела кроликов, не инъецированных заявленным препаратом, за сутки; на фиг. 3 - то же, для крольчат Калифорнийской породы; на фиг. 4 - фиг. 7 изображен клинический случай лечения гнойного миозита у коровы на производстве с помощью заявленного лекарственного средства (пример 23).

В описании раскрыт лучший способ осуществления заявленного изобретения.

Пример конкретного выполнения способа получения препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных.

Препарат получен и испытан в инновационной ветеринарной клинике Тверской ГСХА.

Способ получения препарата на основе стволовых клеток для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных осуществляют следующим образом.

Полученную селезенку свиньи массой 80 граммов подвергают механическому измельчению путем нарезания на мелкие фрагменты объемом 0,2-0,5 мм³, после чего проводят антисептическую обработку измельченной ткани селезенки. Для этого измельченную селезенку промывают на Шуттель-аппарате в течение 2-4 часов при комнатной температуре 240 мл 0,5%-ного раствора метронидазола, отработанный раствор метронидазола удаляют путем слива и затем осуществляют последующую промывку измельченной селезенки на Шуттель-аппарате в течение 6-8 часов при комнатной температуре 240 мл 0,05%-ного раствора хлоргексина с последующим его удалением. Прошедший промывку клеточный материал обрабатывают ферментом, который ослабляет или разрушает связи между клетками. Дезагрегацию измельченной ткани селезенки проводят обработкой 240 мл 0,25%-ного раствора трипсина на магнитной мешалке в условиях термостата при температуре 37°С в течение 15-20 мин

Стадия дезагрегации обычно дает взвесь или суспензию агрегированных клеток и жидкой фракции, содержащей обычно свободные стромальные клетки (например, эритроциты, гладкомышечные клетки, эндотелиальные клетки, фибробласты и стволовые клетки). Следующая стадия в способе отделения заключается в отделении агрегированных клеток от стромальных клеток.

После обработки измельченной ткани селезенки трипсином на магнитной мешалке в условиях термостата при температуре 37°С в течение 15-20 мин, надосадочную жидкость удаляю путем слива ее в стерильную емкость; данную операцию (дезагрегацию трипсином и слив надосадочной жидкости) повторяют трижды, каждый раз сливая надосадочную жидкость в одну и ту же стерильную емкость.

Обычными методами, например, с использованием красителя метилфиолетового, подсчитывают число ядросодержащих клеток селезенки в суспензии и разбавляют ростовую среду до концентрации, обеспечивающей содержание 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶ ядросодержащих клеток в 1 мл ростовой среды.

В качестве ростовой среды используют среду Игла-MEM с добавлением 10-15% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, предварительно обработанной ультрафиолетовыми лучами с длиной волны 244-264 нм, мощностью излучателя 30 Вт в течение 30-60 минут; для получения данной сыворотки ее размещают на расстоянии 15-20 см от источника излучения и наливают тонким слоем 0,8-1,0 см в стерильную чашку Петри, после чего ее вносят в суспензию стволовых клеток на среде Игла-MEM до конечной концентрации сыворотки 10-15%., и стимулятор роста клеточных культур Пинексид, состоящий из 9 частей питуитрина и 1 части диметилсульфоксида. Соотношение компонентов, масс. 1:3:0,45 соответственно.

Культивирование проводят в таком культуральном сосуде, как пластиковая матра емкостью 1,5 л. Культуральный сосуд помещают в термостат и в течение 48-72 часов при температуре 37°С осуществляют культивирование стволовых клеток селезенки свиньи.

Данная технология выделения стволовых клеток имеет непосредственную связь с исходным материалом, особенности которого диктуют выбор количества операций, параметры и условия их проведения.

В полученную клеточно-культуральную среду вводят известный препарат под названием «Повин-ВМ» (препарат для профилактики и лечения респираторных и желудочно-кишечных инфекционных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии сельскохозяйственных животных, патент №2286171, RU, прототип), в соотношении, масс. 1:5-5,5 соответственно, в результате конечная концентрация клеточно-культуральной среды составляет 18-20%.

Лечебный и профилактический эффект подтвержден результатами апробации заявляемого препарата в клинике и на производстве, приведенными в примерах конкретного применения.

Лечение и профилактика широкого спектра заболеваний животных, а так же реконструкция пораженных органов и тканей за короткий промежуток времени осуществляется в инновационной ветеринарной клинике Тверской ГСХА, в ветеринарных клиниках Тверской и Московской областей, где используются эксклюзивные методы восстановительной терапии с применением стволовых клеток.

Пример 1. В октябре 2012 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступил кот с клиническими признаками монорхизма (по данным УЗИ). В мошонку 1 раз в 7 дней вводили препарат в дозе 0,3-0,5 мл на одно введение. Через 8 инъекций препарата в мошонке появился второй семенник (по данным УЗИ).

Пример 2. В феврале 2014 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступил на лечение французский дог с клиникой дисплазии тазобедренных суставов. Отмечены нарушения походки, хромота, боли, бурсит, тендовагинит левых тазобедренного и локтевого сустава. Проводили внутрикожное обкалывание вдоль позвоночника в районе тазобедренного и локтевого сустава, околосуставных областей в дозе 0,2-0,4 мл на точку введения 1 раз в 7-14 дней в течение 4 месяцев. В результате лечения хромота и боли прекратились.

Пример 3. В марте 2014 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступила собака породы Шелти (мини Колли), у которой удалена нижняя треть левой задней конечности. В культю вводили препарат: 0,2-0,4 мл, 1 раз в 7-14 дней. После каждой инъекции культя вырастала на 1,7-2 см. При пальпации отмечена прочная хрящевая ткань. Собака, ранее перемещавшаяся на трех ногах, стала опираться на выросшую культю левой конечности.

Пример 4. В июне 2014 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступила кошка с клиникой инфекционного (вирусный) перитонита. Внутрикожное применение препарата вдоль позвоночника над областью печени на точку введения 0,2-0,3 мл и брюшной полости в дозе 2-3 мл препарата привело к полному выздоровлению.

Пример 5. В апреле 2014 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступила собака породы Восточно-европейская овчарка с клиникой микроспории. В очаг повреждения внутрикожно вводили препарат в дозе 0,2-0,4 мл на одну точку введения однократно или несколько раз. Отмечено быстрое восстановление очага: исчезли корки, появился рост волос.

Пример 6. В мае 2013 года в инновационную ветеринарную клинику Тверской ГСХА поступила собака породы Той-терьер с деформацией грудной клетки.

Показания к лечению:

- болезненность в области грудной клетки;

- две папилломы (одна на задней правой лапе, другая на спине);

Также отсутствовал передний резец (он выпал в возрасте 2 лет).

Лечение:

Курс терапии предлагаемым препаратом внутрикожно в дозе 0,2 мл на точку введения 1 раз в 7 дней в течение 1,5 месяцев вдоль позвоночника.

Результаты:

- боль в грудине уменьшилась, а через 2 месяца собака не испытывала боли при нажатии на грудину.

- папилломы исчезли через месяц после инъекций.

Через полгода после лечения неожиданно вырос новый зуб.

Результаты применения препарата для лечения маститов у коров и иммунной стимуляции молодняка в ООО «Орехово-Зуево-молоко» Орехово-зуевского района Московской области.

Пример 7. В марте 2013 года препарат был апробирован в ООО «Орехово-Зуево-молоко» Орехово-зуевского района Московской области. Всего обработано 40 голов. Выписано из маститной группы после полного выздоровления 22 головы. Из них:

- после однократного применения препарата - 12 голов;

- после двукратного применения - 7 голов;

- после трехкратного применения - 2 головы;

- после четырехкратного применения - 1 голова;

- на запуск - 1 голова.

Рецидив - 1 голова. Выбыло - 2 головы.

Пример 8. В марте 2013 года препарат был апробирован в ООО «Орехово-Зуево-молоко» Орехово-зуевского района Московской области. Всего обработано 74 головы. Выписано из маститной группы после полного выздоровления - 37 голов. Из них:

- после однократного применения - 17 голов;

- после двукратного применения - 12 голов;

- после трехкратного применения - 4 головы;

- после четырехкратного применения - 2 головы;

- запуск - 2 головы

Рецидив - 3 головы. Выбыло - 1 голова

Этим препаратом обрабатывали не только с острыми формами мастита, но и «хроников». Самые лучшие результаты были поучены у коров с повышенной соматикой, кровью в молоке и катаральными формами мастита. Наблюдались случаи, когда полное выздоровление коровы наступало через 3-4 недели после последнего применения препарата без какого-либо дополнительного лечения.

Пример 9. Профилактика заболеваний телят Орехово-зуевского района Московской области. В апреле 2013 года препарат был апробирован в ООО «Орехово-Зуево-молоко» Орехово-зуевского района Московской области. Мы вводили препарат на второй день жизни теленка подкожно в предлопаточную область в дозе 1 мл. До применения препарата нашей основной проблемой было заболевание гастроэнтеритами телят на телятнике после перевода из родильного отделения. После начала применения количество телят с заболеванием гастроэнтерита сократилось вдвое, переносили заболевание гораздо легче и курс лечения сократился на 1-2 дня.

Результаты применения препарата на кроликах в ООО «Беж-Миакро», Бежецкого района Тверской области.

Пример 10. В сентябре 2014 года препарат был апробирован в ООО «Беж-Миакро», Бежецкого района Тверской области. Все кролики находились в одинаковых условиях. С учетом породы, пола, возраста, массы тела отобрали 16 кроликов, из которых сформировали 2 группы. Первая группа контрольная, вторая группа опытная. В опытной группе были крольчата больные с диагнозом «Ринит», «Конъюнктивит». Крольчатам второй группы ввели препарат внутримышечно, в заднюю часть бедра, в дозе 0,2-0,5 мл - однократно. Крольчатам контрольной группы препарат не водился, проводили вакцинации против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, за это время обработали против эймериоза согласно плану противоэпизоотических мероприятий, не смотря на то, что крольчат обработали дважды Толукоксом 2,5% согласно наставлении появлялись клинические признаки эймериоза. Заболевания и падежа среди инъецированных заявленным препаратом кроликов не отмечалось. В течение первой недели клинические признаки ринита и конъюнктивита прекратились.

Таким образом, можно сделать заключение, что предлагаемый препарат:

- повышает сохранность крольчат после отъема 100%.

- увеличивает прирост живой массы.

- профилактирует болезни желудочно-кишечного тракта крольчат в период отъема и при смене комбикорма.

- повышает устойчивость крольчат на негативное влияние неблагоприятных, стрессовых факторов,

- активизирует рост и развитие крольчат.

- не специфическая профилактика и лечение инфекционных и инвазионных болезней.

- купирует воспалительный процесс.

Заявляемый препарат прост в применении, не оказывает побочных действий, не требует дополнительного применения антимикробного и противовоспалительных средств и кокцидиостатиков и будет целесообразен в комплексе со специфической профилактикой против ВГБК и миксоматоза кроликов.

За данным препаратом перспектива на будущее для получения экологически чистого мяса кроликов. Новорожденные крольчата растут очень быстро. Средняя живая масса 4,7-5,2 кг - крольчиха, 4,5-5 кг - кролик (фиг. 2 и фиг. 3).

Результаты применения препарата в Кашинской станции по борьбе с болезнями животных.

Пример 11. В мае 2014 года в деревне «Бузыково», ЛПХ Графова К.Н. был апробирован препарат при патологии репродуктивных органов молочной железы. Корова «Роза» возраст 12 лет №32. Животное обладает хорошей молочной продуктивностью, однако приходило в охоту и успешно крылось 1 раз в год, последний отел - весна 2013 года. Соответственно период лактации составлял не 300 дней а около двух лет. В течение этого времени молочная продуктивность снижалась, однако оставалась на приемлемом для владельцев уровне. В 29.05 и 05.06.2014 года двукратно, в пять точек (затылочная область одно введение и по 2 введения в предлопаточную и поясничную области отступая на 2 см от остистых отростков), вводили исследуемый препарат. Введение осуществлялось подкожно т.к. внутри кожное ведение в дозе 0,5 мл в пять точек достаточно болезненно для коровы и соответственно настороженно встречается владельцами, животных. Животное пришло в охоту через 5 суток после первого введения. До этого признаки охоты отмечались 6 месяцев назад. Суточный удой на дату первого введения составлял 18 литров. Через 3-е суток объем молока начал увеличиваться и через неделю после второго введения достиг 25-26 литров. Против 18-и на день первого введения. Молочная продуктивность держалась на высоком уровне до середины сентября.

Пример 12. В августе 2014 года в деревне «Первомайское», Крууз И.В. был апробирован препарат при патологии вымени и репродуктивных органов. Корова «Катя» №75 возраст 14 лет, удой 6 литров. С весны отмечалось ухудшение аппетита, шаткость походки, животное стало труднее выводить на привязь, т.к. до поля она ходила медленно с остановками. Препарат введен 08.08.14 г. в пять точек однократно, подкожно. Через 7 дней замечены признаки охоты. Животное водили к быку, однако после покрытия оплодотворения не произошло. Затем в течение недели отмечено улучшение аппетита, восстановилась походка, животное стало «резвиться», чего давно уже не было. Молочная продуктивность не возросла, однако восстановилась регулярная овуляция (1 раз в 3 недели), до этого последний раз признаки охоты замечались весной. Животное стало набирать вес. В настоящее время лоб ка ухудшения здоровья коровы у владельцев нет.

Вывод: В указанных выше случаях наблюдается очевидная связь между введением препарата и восстановлением овуляции животных, улучшением общего физиологического состояния, повышением молочной продуктивности, или, как во втором случае, прекращением потери веса и восстановлением прежней упитанности коровы. Таким образом, полученный результат позволяет предположить возможность эффективного использования заявляемого препарата для продления срока службы дойных коров и для улучшения предубойного откорма выбракованных животных, Эффект, полученный после применения препарата 14-летней, весьма пожилой корове, позволяет предположить очень хорошее восстанавливающее действие данного препарата и у более молодых животных, перенесших серьезное заболевание (на практике лечение проводится комплексно, что затрудняет возможность отдать приоритет какому-либо лекарственному средству.

Результаты применения апробируемого препарата в Торопецкой станции по борьбе с болезнями животных.

Пример 13. В апреле 2014 года в Торопецкую СББЖ поступила собака породы Лайка с рваной раной на теле. Проведен курс лечения собаки заявленным препаратом в период с 06.04 по 19.04.2014 г.

При клиническом осмотре при первичном посещении было установлено, что у собаки в области правого предплечья оторван кожно-мышечный лоскут, который держится на участке кожи мышц шириной около 15 мм. Рана сильно загрязнена, имеются участки некроза, ихорозный запах. Рана получена 7-10 дней назад. Все это время собаки не было дома (убежала во время охоты). При хирургическом вмешательстве мышцы и кожу очистили, удалили некротизированные участки, и оторванный лоскут соединили с тканями предплечья с помощью швов. Сразу после наложения швов собаке инъецировали данный препарат в дозе 3 мл подкожно в области правой лопатки.

Через пять дней при осмотре раны было заметно, что с латеральной стороны шов сильно воспален, рана как бы раскрыта, хотя швы сохранены. Из раны выделяется серозный экссудат с элементами фибрина. Швы обработали антисептическими растворами и сделали вторую инъекцию исследуемым препаратом в той же дозировке. Через пять дней выявлено полное заживление, восстановление иннервации и кровоснабжения. Через несколько дней восстановленный лоскут не выделялся над поверхностью лапы, не осталось рубцов. Собака активна и уже сопровождает хозяина на охоте.

Лечение заявляемым препаратом помогает восстановить пораженные ткани более полно и в более краткие сроки.

Пример 14. В апреле 2014 года в Торопецкую СББЖ поступила собака породы Среднеазиатская овчарка с травмой левого предплечья, с предполагаемым переломом плечевой кости. Проведен курс лечения собаки препаратом в период 26.04.-10.05.2014 г.

При клиническом осмотре при первичном посещении было установлено, что собака взята из приюта, и оттуда дали информацию о травме левого предплечья (возможно перелом). Оказывалось лечение или нет неизвестно. На момент осмотра предплечье имеет сильнейший отек, выделяется гнойный экссудат, у животного повышена температура. На рентгеновском снимке - остит. Экссудат эвакуировали, кожу в области отека обработали антисептическим раствором. Инъецировали данный препарат в область предполагаемой травмы, подкожно, в дозе 3 мл.

Через семь дней при осмотре было заметно, что отек спал. Температура в пределах физиологической нормы. Отек возник в области плечевого сустава, но, по словам владельца в эту область делали инъекции линкомицина, причем подкожно. Возможно, отек в области плечевого сустава есть следствие этого. Сделали вторую инъекцию данного препарата в той же дозировке, линкомицин отменили. Через семь дней собака пришла без отека, слегка прихрамывая. Исследуемый препарат больше не применяли. При последующих посещениях - хромота остается.

Лечение апробируемым препаратом купирует воспалительный процесс в глубоко лежащих тканях при последствиях застарелых травм.

Пример 15. В апреле 2014 года в Торопецкую СББЖ поступил беспородный кот с рваной инфицированной раной в области шеи. Проведен курс лечения кота препаратом в период 18.04.-16.05.2014 г.

При клиническом осмотре при первичном посещении диагностирована рваная инфицированная рана в области шеи, нанесенная около 10 дней назад. На момент осмотра - края рана омертвевшие, имеются наложения фибрина, кожного лоскута для закрытия раны нет. Площадь раны составляет 3×3 см. Кожа вокруг раны утолщена, неэластична. Края раны стянули швами. Инъецировали исследуемый препарат внутрикожно, в дозе 0,3 мл в одну точку, таких точек 4.

Попытка стянуть края раны не удалась, швы разошлись полностью уже через 4 дня. Но при этом кожа приобрела более живой вид, стала эластичнее, площадь раны уменьшилась. Провели еще одну инъекцию заявляемым препаратом по той же схеме, что и первый раз. Через семь дней при осмотре - кожа розовая, теплая эластичная, края раны сблизились. Кожный покров явно растет. Мышцы на поверхности раны приобрели розовый цвет, исчезли наложения фибрина. Данный препарат больше не применяли. При последующих осмотрах рана без осложнений закрылась, начался рост шерсти.

Лечение исследуемым препаратом ускоряет регенерацию поврежденных тканей.

Пример 16. В августе 2014 года в Торопецкую СББЖ поступил кот Персидской породы с клиникой демодекоза и стригущего лишая. Проведен курс лечения кота заявляемым препаратом в период 21.08.-28.08.2014 г.

При клиническом осмотре при первичном посещении диагностированы демодекоз и стригущий лишай. На момент осмотра - кожные проявления демодекоза, шерсть редкая, сальная, желтоватого цвета (природный окрас - чисто белый). Провели лечение препаратом «Вакдерм». Положительного результата не выявлено. При последующем приеме под участок кожи, пораженный стригущим лишаем ввели данный препарат в дозе 0,5 мл.

При приеме через 7 дней выявлено, что проявления на коже резко уменьшились как качественно, так и количественно. При этом (кот длинношерстный и с белым окрасом) шерсть приобрела яркий белый цвет и стала шелковистой на ощупь.

Через неделю лечение животного было прекращено в виду полного выздоровления.

Заявляемый препарат положительно влияет на качественное состояние кожи и шерсти.

Пример 17. В декабре 2014 года в Торопецкую СББЖ поступила беспородная собака с парезом задних конечностей. Проведен курс лечения собаки препаратом в период 14.12.2014 г. - 02.04.2015 г.

Со слов владельца установлено, что собака болеет около 3 месяцев. Развился парез задних конечностей. На момент осмотра - шатка походка, пальцы при ходьбе подворачиваются назад, хвост полностью потерял чувствительность. Животное часто падает при передвижении. Подкожно в области обоих тазобедренных суставов ввели данный препарат в дозе по 0,5 мл.

При приеме через 7 дней выявлено, что собака стала лучше подниматься, походка стала увереннее, хвостом может вилять, но поднять не может. Провели вторую инъекцию исследуемым препаратом по той же схеме. При последующем приеме заметно улучшение в двигательной активности и лучше владеет хвостом. Каждые семь дней в течение нескольких месяцев проводились инъекции данным препаратом по той же схеме (по просьбе владелицы). Полного выздоровления так и не наступило. В марте 2015 г. хозяйка отказалась продолжать лечение и собака в течение 5-7 дней вернулась в первоначальное состояние (парез задних конечностей и хвоста).

Пример 18. В апреле 2015 года в Торопецкую СББЖ поступил беспородный кот с раздробленной лапой. Проведен курс лечения кота препаратом в период 05.04.2015-15.04.2015 г.

Со слов владельца установлено, что кот беспризорный, подобран на улице с раздробленной лапой. Лапа ампутирована на 3 см ниже локтевого сустава. Заживление пошло неудовлетворительно, была постоянная, достаточно обильная экссудация. Через 5 дней швы разошлись, кость оголилась. Провели повторную операцию, ампутировали лапу по локтевой сустав. По окончании операции ввели внутрикожно 0,5 мл исследуемого препарата в области культи. Заживление прошло очень быстро, без осложнений. На седьмой день сняли швы, рубец практически незаметен.

Применение заявляемого препарата обеспечивает хорошую регенерацию тканей.

Пример 19. В апреле 2015 года в Торопецкую СББЖ поступила беспородная кошка с отсутствием шерсти на теле. Проведен курс лечения кошки заявляемым препаратом в период 18-28.04.2015 г.

Со слов владельца установлено, что кошка на фоне стресса, полученного в связи со сменой места жительства и владельца, облысела.

При клиническом осмотре установлено полное отсутствие шерсти на теле животного. На голове, шее, хвосте шерсть присутствует, но она редкая, жесткая.

Применен препарат в дозе 0,5 мл подкожно, в пять точек (в области затылочного бугра, слева и справа от позвоночного столба в области лопаток и крестца).

Уже через пять дней самочувствие кошки улучшилось, шерсть начала отрастать. Курс инъекций дынным препаратом повторили еще два раза. Качество шерсти улучшилось. Животное покрылось короткой шерсткой.

Заявляемый препарат благотворно влияет на обменные процессы, а также на нервную систему.

Пример 20. В июне 2015 года в Торопецкую СББЖ поступили кошки с сочетанной травмой тела. Проведен курс лечения кошек препаратом в период 08-18.06.2015 г.

С промежутком в два дня в ветлечебницу поступили две кошки с почти аналогичными травмами.

Первой была беспородная кошка. Беременность составляла 2 месяца. Кошку нашли избитой, странная форма живота, не встает, температура 39,7°C. При осмотре выявлено - разрыв брюшной стенки, выпадение беременной матки под кожу. При лапаротомии выявлены множественные разрывы матки, мертвые плоды в брюшной полости, только один из них в плодном пузыре, перитонит, гематомы брюшной стенки, подкожной клетчатки, внутреннего жира, в полости живота значительное количество прозрачного красного экссудата. Проведена ампутация матки, эвакуация плодов, эвакуация экссудата, удаление некротизированных участков.

Вторым поступил беспородный кот. Поступил с предварительным диагнозом - травматическая грыжа. При диагностической лапаротомии выявлены разрывы брюшной стенки в трех местах, размер разрывов от 4 до 10 см. Кишечник, мочевой пузырь, почки, селезенка выпали под кожу. Обе почки имеют размер куриного яйца, безболезненны, мочевой пузырь вишневого цвета. При операции - органы вправили, разрывы зашили.

Обоим животным после операции применили исследуемый препарат. Кошке - в дозе 1 мл по обе стороны шва по 0,5 мл.; коту - 1,5 мл подкожно в две точки в области почек. Через 7 дней животные предоставлены на осмотр, заживление идет хорошо, животные активны, температура в пределах физиологической нормы, охотно принимают корм. Данный препарат больше не применяли, швы сняли на 10-ый день.

Применение исследуемого препарата обеспечивает хорошую регенерацию тканей и благотворно влияет на иммунную систему и обменные процессы.

Пример 21. В мае 2015 года в Торопецкую СББЖ поступила беспородная лошадь с отеками в области холки и крупа неясной этиологии. Проведен курс лечения лошади заявляемым препаратом в период 15.05.-01.07.2015 г.

Со слов владельца установлено, что лошадь заболела около трех недель назад. На шее под гривой, в области холки и крупа возникли тестоватые безболезненные отеки, деревянная походка.

При клиническом осмотре установлено отсутствие аппетита, деревянная походка, нежелание двигаться, голова опущена, температура, пульс, дыхание в пределах физиологии. При пальпации обнаруживается слабая болезненность в области почек.

Применен апробируемый препарат в дозе 5 мл подкожно, в область почек. Никаких улучшений не произошло. Через несколько дней животное перестало вставать, симптоматическое лечение результатов не дало. Лошадь лежала на боку и отказывалась есть и пить. Введен данный препарат, который закапали в глаза животному в дозе по 5 капель. Лошадь стала держать голову, лежит на животе и охотно принимает корм и воду. В течение нескольких дней лошадь, при всей положительной динамике, так и не встала на конечности. Наблюдение проводилось еще некоторое время, но лошадь пришлось подвергнуть эвтаназии.

Результаты применения препарата в АО «Агрофирма Дмитрова Гора».

Пример 22. С января по сентябрь 2015 года производственно-хозяйственная апробация заявляемого препарата проводилась на новорожденных телятах в количестве 200 голов. Препарат вводили телятам трехдневного возраста подкожно в область поясничного и грудного отдела позвоночника с правой стороны на расстоянии 5-7 см от позвоночного столба, в дозе 2-4 мл на голову, однократно. Контрольную группу телят данным препаратом не обрабатывали.

На 7-ой день у контрольной и у опытной групп отмечалась диарея, однако, у телят, обработанных вышеуказанным препаратом, фекалии имели малый объем без специфического кислого запаха. У контрольной группы отмечалось выделение фекалий в очень большом количестве и с кислым запахом.

Через 2 месяца опытную и контрольную группу телят перевели на откормочные дворы. Через неделю в контрольной группе телят отмечалось угнетенное состояние, отказ от корма, кашель и другие признаки пастереллеза, а в группе, обработанной предлагаемым препаратом, вышеуказанная клиника отмечалась через 3 недели и протекала в более легкой форме.

Данный препарат также применяли при воспалении пупочного канатика у новорожденных телят. Результаты лечения показали 100%-ное выздоровление.

При гнойных миозитах всего лишь 2 инъекции заявляемого препарата привели к 100%-ому излечению через 20 дней, вместо 60 дней в контрольной группе (см. иллюстрации в конце акта в динамике лечения).

В результате проведенных исследований изучаемого препарата на телятах и коровах было отмечено:

1) Обработка телят препаратом в возрасте 3-х дней привела к прекращению клиники пастереллеза;

2) Предлагаемый препарат эффективно подавляет воспалительный процесс при гнойных заболеваниях телят и коров.

Пример 23. В январе 2015 года проведено лечение кров, страдающих гнойными миозитами, с помощью заявляемого препарата. В результате травмирования загрязненными предметами возникают гнойные миозиты у коров, которые в животноводстве не поддаются лечению. Причиной этому являются длительная антибиотикотерапия и низкая результативность лечения. Был апробирован заявляемый препарат для лечения данной патологии. Представляем результаты лечения исследуемым препаратом одной из коров, страдающих гнойными миозитами.

В результате гнойного расплавления мышечной ткани в области правого бедра коровы образовалась полость, в которую проникала кисть человека (Фиг 4).

В результате обкалывания мышц исследуемым препаратом полость стала уменьшаться через 5-7 дней, гнойные выделения прекратились, стали образовываться новые мышечно-кожные элементы. Улучшилась динамика движения коровы и прекратилась хромота опирающейся конечности (Фиг 5).

Через 5-6 дней полость интенсивно стянута, образовался плотный рубец из мышечных элементов и соединительной ткани (Фиг 6).

Результат лечения исследуемым препаратом на 20-е сутки показал: образовался плотный рубец, общее состояние коровы хорошее, хромоты нет (Фиг 7).

Таким образом, применение исследуемого средства позволяет восстановить функциональную активность конечности путем устранения гнойных полостей за значительно короткий период времени.

Результаты применения препарата в Кимрской станции по борьбе с болезнями животных.

Пример 24. Данный препарат начали применять с декабря 2014 года. Представляем несколько клинических случаев на разных животных при разных заболеваниях с помощью заявляемого лечебного средства. Собака породы Среднеазиатская овчарка страдала опухолью в области левой лопатки. Размер опухоли 35×25 см, двигаться собаке не мешает. Опухоль образовалась 2,5 месяца назад. В три точки опухоли был введен заявляемый препарат, по 2,5 мл на каждое введение. Через 10 дней при пальпации опухоль была мягкой и кожа в нескольких местах свисала по причине уменьшения опухоли, безболезненна. Через 16 дней опухоль полностью отсутствовала, и в образовавшиеся кожные карманы был введен предлагаемый препарат. Через 25 дней опухоль полностью исчезла.

Пример 25. В январе 2015 года кота сбила машина. Для лечения было применено предлагаемое средство в область затылка в три точки по 0,2 мл на инъекцию, затем 2 инъекции в область позвоночника за лопатками. При осмотре было отмечено, что у кота отмечались закрытые переломы передней и задней конечности с правой стороны, моча с кровью. Через каждые 3 дня применяли заявленный препарат в те же места инъекций. Через 14 дней кот поднялся на ноги, а еще через 4 недели стал перемещаться по поверхности без видимых признаков травм. Гипсовые повязки не накладывали, кроме перебинтовывания травмированных конечностей.

Пример 26. В феврале 2015 года к нам обратились с больной морской свинкой в возрасте 2-х лет с признаками отказа от корма, полной неподвижности, слабого сердцебиения. Было применено предложенное средство в область позвоночника за лопатками. Животное быстро пришло в норму, через 2 дня процедуру повторили.

Пример 27. В марте 2015 года поступила кошка с обширной мастоцитомой в возрасте 3,5 года. По причине слабости животного от операции отказались. Использовали заявленное лекарственное средство в объеме 5 мл однократно под опухоль и непосредственно в нее. После четырехкратного применения данного препарата опухоль уменьшилась в половину, а после 8-ой инъекции опухоли исчезли полностью.

Пример 28. Предложенный препарат был апробирован в апреле 2015 года в СПК «Ильинское» для лечения телят, страдающих диспепсией в тяжелой форме. На осмотре: выраженная слабость телят, признаки обезвоживания, обильное количество жидких каловых масс желтого цвета, смешанного типа отдышка, отказ от корма и молока. На фоне регидратационной терапии был применен заявленный препарат подкожно в дозе 2-3 мл на голову в межлопаточной и крестцовой области. Через 2 дня инъекции исследуемого препарата повторили. После первого введения лежащие телята стали подниматься, принимать молоко и корм, а через 3 дня понос полностью прекратился, телята выздоровели.

Заявленный препарат обладает рядом преимущественных качеств. Стволовые клетки, внесенные в рану, выделяют основной фактор роста фибробластов, влияющий на ускоренный ангиогенез. Этот процесс в тканях приводит к тому, что клетки, сопровождающие новообразованные сосуды (перициты), сохраняющие потенции стволовых клеток, являются стволовыми клетками (плюрипотентными) и способны к дифференцировке в фибробласты и остеобласты. Регенеративный остеогенез и гистогенез осуществляются за счет стимуляции остеогенных и других клеток, при обязательном участии растущих, новообразованных кровеносных сосудов.

Полученные положительные результаты применения заявленного препарата в эксперименте на животных позволили использовать его для пластики пораженных костных и мягких тканей, а так же органов, включая кожу и дериваты.

Введение разработанного препарата молодняку и взрослому поголовью сельскохозяйственных и домашних животных и приживление стволовых клеток среди патологически измененных клеток этого организма создает уникальную ситуацию: на клетки и органы взрослого или молодого организма начинают действовать стимулирующие факторы развития и обновления, характерные только для эмбрионального периода. Данный препарат способен оптимизировать процессы регенерации костной и мягких тканей, либо способствовать процессу заживления пораженных органов и тканей. Основной фактор роста стволовых клеток селезенки положительно влияет на развитие всех типов клеток в ране, пораженной костной ткани, связок суставов. Трансформирующий ростовой фактор стимулируют хемотаксис в пораженные очаги, стимулируют ангиогенез и канализацию регенерирующих тканей. Эти факторы роста могут ускорять восстановление пораженной дермы при различных кожных заболеваниях, поражениях глаз, внутренних органов, заживления переломов, восстановления функций внутренних органов и др.

Заявленный препарат апробируется с 2012 года по настоящее время с положительным результатом: он является безопасным и высокоэффективным лекарственным средством для лечения многих инфекционных и незаразных заболеваний животных. В частности, данный препарат способствует быстрому лечению таких заболеваний, как микроспория кошек и собак за несколько дней после однократного применения, при переломах костей обкалывание очага приводит к появлению костной мозоли и восстановлению костной ткани за 10-15 дней и даже меньше. За несколько дней данный препарат способен устранить клинические проявления целого ряда заболеваний глаз (воспаление роговицы, помутнение хрусталика, воспаление глазного яблока и конъюнктивы), при ринитах, отитах, дерматитах, перитонитах, гепатитах, асцитах исследуемый препарат способен, в значительной степени, улучшить качество жизни животного при тяжелых формах заболевания, а в большинстве случаев привести к полному выздоровлению. Все вышесказанное делает возможным его широкое внедрение в ветеринарную клинику и практику.

Просим присвоить предлагаемому препарату название «Теокомпозит», согласно утвержденной документации (Макарян, Э.А. Теокомпозит - биотехнологии на основе стволовых клеток в репродуктивной клеточной технологии: Методические рекомендации / Э.А. Макарян. - Тверь, Тверская ГСХА, 2014. - 15 с.).

Способ получения препарата на основе стволовых клеток, выделенных из ткани селезенки свиней, для профилактики и лечения инфекционных и незаразных болезней домашних и сельскохозяйственных животных, в состав которого входят водный раствор полиэтиленгликоля, водный раствор поливинилпирролидона, коммерческий раствор Версена, раствор тетрациклина и коммерческий раствор трипсина при следующем соотношении компонентов, об./%:

15-20%-ный водный раствор полиэтиленгликоля
(ММ 2000-6000), (ПЭГ)	10-15
15-20%-ный водный раствор поливинилпирролидона
(ММ 280000-360000), (ПВП)	10-20
0,01-0,02%-ный коммерческий раствор Версена	10-15
8-10%-ный водный раствор тетрациклина	10-15

0,20-0,25%-ный коммерческий раствор трипсина

(100-128 ЕД)

Остальное

отличающийся тем, что известный состав вводят в клеточно-культуральную среду с конечной концентрацией клеток 1,5⋅10⁶-2,0⋅10⁶/мл, полученную из измельченной ткани селезенки свиней, обработанной 0,5%-ным раствором метронидазола и 0,05%-ным раствором хлоргексина с последующими дезагрегацией ее 0,25%-ным раствором трипсина и культивированием клеточного материала в ростовой среде Игла-MEM с добавлением 10-15% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота в присутствии стимулятора роста клеточных культур Пинексида, в соотношении, масс. 5-5,5:1.