Способ диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного. Способ включает в себя типирование генов системы НРА и исследование антитромбоцитарных ауто- и аллоантител. Исследование генов НРА проводится методом ПЦР в режиме реального времени, определение антител к тромбоцитам - методом проточной цитометрии. При выявлении несовместимых сочетаний генов НРА у матери и ребенка НРА-1bb/HPA-1ab; НРА-5аа/HPA-5ab; НРА-15аа/HPA-1ab, выявлении в сыворотке крови матери IgG антител, адсорбирующихся более чем на 3% тромбоцитов ребенка, и при коэффициенте аутосенсибилизации тромбоцитов менее 5% диагностируют аллоиммунную тромбоцитопению новорожденного. Использование данного способа обеспечивает раннюю и точную диагностику аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного, что необходимо для назначения адекватной медикаментозной терапии, выбора компонентов крови при трансфузиях. 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к способу диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного (АТПН). Способ включает типирование генов системы НРА у матери и ребенка, исследование антитромбоцитарных антител классов IgG и IgM в сыворотке крови матери к собственным тромбоцитам и тромбоцитам ребенка. Способ обеспечивает раннюю и точную диагностику аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного.

Изобретение относится к медицине, а именно лабораторной диагностике, основанной на генетическом и проточно-цитометрическом методах выявления критериев, свидетельствующих об аллоиммунном характере разрушения тромбоцитов плода и новорожденного.

Тромбоцитопения, снижение уровня тромбоцитов в периферической крови менее 150×109/л, встречается у 1-5% новорожденных [3, 11]. Тромбоцитопения может возникнуть вследствие действия антитромбоцитарных антител; плацентарной недостаточности; внутриутробных инфекций (цитомегаловирусной инфекции, токсоплазмоза, краснухи); сепсиса; ДВС-синдрома; хромосомных нарушений (трисомии 18, 13, 21, триплодии); наследственных заболеваний (анемии Фанкони, TAR-синдрома); гемобластоза; аплазии мегокариоцитарного ростка кроветворения; тромбоза; гиперспленизма [4, 9]. Дифференциальная диагностика причин, вызвавших снижение числа тромбоцитов, является основой для назначения терапии, определения прогноза для жизни и здоровья ребенка, установления риска развития подобной патологии у сибсов [5, 17].

В патогенезе иммунной тромбоцитопении лежит реакция взаимодействия антител - иммуноглобулинов класса G с антигенами поверхности тромбоцитов, приводящая к разрушению клеток в ретикуло-эндотелиальной системе [9, 16, 19]. Кроме прямой деструкции тромбоцитов происходит также снижение их продукции мегакариоцитами [6, 8]. Во внутриутробном периоде и периоде новорожденности могут наблюдаться следующие варианты иммунной тромбоцитопении:

1) аллоиммунная тромбоцитопения, возникающая при несовместимости матери и плода по специфическим антигенам тромбоцитов системы НРА (Human Platelet Antigens) и сенсибилизации матери к данным антигенам;

2) трансиммунная тромбоцитопения, при которой разрушение тромбоцитов ребенка происходит аутоантителами матери, страдающей иммунной тромбоцитопенией (ИТП) или системными заболеваниями, сопровождающимися аутосенсибилизацией;

3) аутоиммунная тромбоцитопения, развивающаяся вследствие срыва иммунологической толерантности и выработкой антител к собственным тромбоцитам у ребенка.

Частота случаев возникновения аллоиммунной тромбоцитопении составляет от 1/800 до 1/1000 новорожденных [12, 15]. Наиболее опасным осложнением АТПН являются внутричерепные кровоизлияния во внутриутробном или раннем постнатальном периодах. Тяжелые нарушения, приводящие к инвалидности, регистрируются в 20% случаев АТПН, смертность составляет 15%. Установлено, что в 75% случаев АТПН возникает при несовместимости по гену НРА-1а, когда генотип матери - HPA-1bb, ребенка - HPA-1ab [10, 14]. Причиной АТПН в 15,5% случаев являются антитела к антигену НРА-5b, когда генотип матери - НРА-5аа, ребенка - НРА-5ab, и в 4% случаев - анти-15b антитела, когда генотип матери - НРА-15аа, ребенка - НРА-15ab. Сочетание антител указанных специфичностей выявляется в 5,5% случаев АТПН [18, 20].

При установлении диагноза АТПН учитывают данные акушерского анамнеза, состояния здоровья матери, клинической картины и результатов лабораторных тестов. Для решения вопроса об аллоиммунном характере разрушения тромбоцитов необходимо выявить различия генотипов системы НРА у матери и ребенка, установить наличие антител классов IgG, М в сыворотке крови матери, взаимодействующих с тромбоцитами ребенка, исключить присутствие антитромбоцитарных аутоантител у матери и новорожденного [11, 22]. Результаты исследования применимы для установления тактики ведения пациента, определения риска развития тромбоцитопении у сибсов ребенка [21].

Известен способ определения антитромбоцитарных аутоантител методом проточной цитометрии (Бутина Е.В. и соавт. Пат. №2488114 РФ. Опубл. 20.07.2013; Бюл. №20), который выявляет фиксированные и циркулирующие в плазме крови антитела классов G и М к собственным тромбоцитам. Представленный способ разработан для диагностики и контроля лечения аутоиммунной тромбоцитопении и может быть использован как один из составляющих тестов при исследовании причин тромбоцитопении новорожденного.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является алгоритм диагностики АТПН, включающий генетические (НРА-типирование) и иммунологические тесты (Kaplan С, 2008). Однако имеющийся алгоритм не предусматривает исследование аутосенсибилизации у матери и новорожденного, кроме того, при выявлении антител используются другие методы диагностики - MAIPA (monoclonal antibody specific immobilization of platelet antigens) и MACE (modified antigen capture enzyme-linked immunosorbent assay).

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание способа диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного, что необходимо для назначения ребенку адекватной медикаментозной терапии, определения возможности грудного вскармливания, тактики выбора компонентов крови при трансфузиях, установления риска развития тромбоцитопении у детей в данной семье.

Для достижения указанного результата в соответствии с прототипом исследуют НРА-генотипы матери и ребенка, изучают наличие антитромбоцитарных аллоантител в сыворотке крови матери. Отличительными особенностями предлагаемого способа от уже имеющегося являются обязательный скрининг аутоантител как у матери, так и ребенка, и применение метода проточной цитометрии вместо технологии MAIPA и МАСЕ. Данная замена проведена на основании проведенного ранее исследования, подтверждающего высокую специфичность и чувствительность метода проточной цитометрии при исследовании антител к тромбоцитам (Бутина Е.В., 2014).

Способ предусматривает следующую последовательность исследований:

1. Получение препаратов геномной ДНК из образцов периферической крови матери и ребенка. Предпочтение отдается методикам, использующим автоматические станции для выделения и очистки нуклеиновых кислот. Проведение процедуры НРА-типирования ДНК матери и ребенка. Анализ заключается в определении а- и b-форм генов локусов НРА-1, -2, -3, -4, -5, -15 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуориметрической регистрацией продуктов в ходе процесса (ПЦР в реальном времени) с помощью наборов реагентов ТромбоГенТест (Рег. удост. Росздравнадзора №ФСР 2011/12472).

2. Скрининг аутоантител к тромбоцитам в крови матери и ребенка. Исследование осуществляют в соответствии со способом, описанным в патенте на изобретение Российской Федерации №2488114. Способ заключается в определении методом проточной цитометрии процентного содержания тромбоцитов, покрытых иммуноглобулинами классов G и М. Для анализа исследуют собственные тромбоциты и сыворотку крови пациента, причем в качестве маркеров аутоиммунного процесса используют антитела, относящиеся к иммуноглобулинам классов G и М, при этом коэффициент аутосенсибилизции тромбоцитов рассчитывают как отношение количества Anti-Human IgG-позитивных клеток к числу клеток, адсорбирующих анти-СБ41 моноклональные антитела. Значение коэффициента аутосенсибилизции тромбоцитов более 2% без инкубации с аутосывороткой и более 5% после инкубации с аутосывороткой расценивают как наличие у пациента антитромбоцитарных аутоантител, фиксированных на клетках и/или циркулирующих в плазме крови.

3. Скрининг в сыворотке крови матери антител к антигенам тромбоцитов ребенка осуществляется следующим образом: выделение тромбоцитов из периферической крови (а), инкубацию тромбоцитов с аутосывороткой пациента (b), окрашивание моноклональными антителами (с), лазерную проточную цитометрию, анализ и интерпретацию полученных данных (d).

a) Выделение тромбоцитов проводят на градиенте плотности с использованием растворов Хенкса (НПО «Микроген» ТУ 9385-088-1423783-08) и фиколл-урографина (плотность 1,078) (Фиколл 400 NPS400, Урографин 76% N ЛС-001850) с центрифугированием 15 мин при 1200g. Клетки, находящиеся в интерфазном кольце, переносят в пластиковую пробирку и добавляют 4 мл раствора Хенкса, центрифугируют 5 мин при 700g. После удаления супернатанта осадок ресуспензируют в растворе Хенкса, доводя концентрацию тромбоцитов до 5×105/мкл.

b) В две пробирки для проточной цитофлуориметрии вносят по 100 мкл суспензии тромбоцитов ребенка. Затем в одну из пробирок добавляют 100 мкл сыворотки крови матери. Инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Далее в обе пробы вносят 2 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ) (БиолоТ), содержащего 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Sigma). Центрифугируют 5 мин при 3000 g. Надосадочную жидкость удаляют. Процедуру «отмывания» тромбоцитов повторяют 2 раза. Осадок клеток ресуспензируют в 100 мкл ФСБ.

c) В первую пробу вносят 10 мкл моноклональных антител CD41-FITC (Beckman Coulter IOTest pN IM0649V), во вторую - 100 мкл моноклональных антител Goat F(ab')2 Anti-Human IgG-FITC, предварительно разведенных в PBS в соотношении 1:20, в третью - 100 мкл моноклональных антител Anti-Human IgM heavy chain-FITC, предварительно разведенных в PBS в соотношении 1:20. Пробы инкубируют в темноте 20 минут. Затем добавляют по 5 мл буфера ФСБ+БСА и центрифугируют 5 мин при 3000g. Последнюю процедуру повторяют.

d) Образцы исследуют на проточном цитофлуориметре, оснащенном двумя или более флуоресцентными каналами и лазером (длина волны 488 нм). Анализ клеток в образце проводят по трем параметрам: интенсивности прямого и бокового (бидиректного) светорассеяния (линейная шкала), флуоресценции FITC. При анализе первой пробы на графике выбирают регион неповрежденных тромбоцитов и определяют количество клеток, окрашенных моноклональными антителами к CD41. Далее анализируют тот же регион, но во второй пробе. В каждом образце просматривают не менее 2×105 тромбоцитов.

Для определения уровня адсорбции антител на тромбоцитах в норме были исследованы сыворотки крови и тромбоциты 165 здоровых мужчин - доноров крови и/или ее компонентов. Установлено, что в 95,8% случаев относительное содержание тромбоцитов, адсорбировавших на себе аллоантитела IgG, к общему количеству тромбоцитов не превышает 3%. Также менее 3% от общего числа тромбоцитов у 95,1% здоровых лиц фиксируют IgM антитела. Данный показатель был принят за значение нормы. Следовательно, фиксация IgG и/или IgM антител более чем 3% тромбоцитов расценивается как критерий аллосенсибилизации.

Диагностика АТПН в соответствии с предлагаемым способом основана на анализе результатов проведенных исследований:

1. Определение степени совпадения НРА-генотипов матери и ребенка. Генотипы расцениваются как несовместимые при выявлении одного или нескольких сочетаний генов НРА у матери и ребенка: НРА-1bb/HPA-1ab; НРА-5аа/HPA-5ab; НРА-15аа/HPA-1ab.

2. Исследование наличия антитромбоцитарных аутоантител в крови матери. Данный анализ позволяет сделать заключение о возможном влиянии материнских аутоантител на число тромбоцитов у ребенка.

3. Выявление антитромбоцитарных аутоантител в крови ребенка. Диагностируется аутоиммунный механизм разрушения тромбоцитов как причина тромбоцитопении у ребенка.

4. Определение антител в сыворотке крови матери к тромбоцитам ребенка является диагностическим критерием АТПН.

Оценка результатов исследования представлена в таблице 1.

Полиморфизм генов системы НРА исследован у 320 доноров компонентов крови Кировского НИИ гематологии и переливания крови в 2013-2015 годах (Таблица 2). Диагностика иммунных причин тромбоцитопении проведена у 40 детей с числом тромбоцитов в периферической крови менее 150×109/л (от 39 до 133×109/л, медиана - 70×109/л), родившихся в Кировском областном клиническом перинатальном центре в 2015 году. Генетические и иммунологические исследования проведены также у их матерей (40 женщин). При установлении диагноза АТПН учитывались данные акушерского анамнеза, течения настоящей беременности, состояния здоровья женщины, клинической картины заболевания, динамики тромбоцитопении, результатов

При обследовании женщин, дети которых родились с тромбоцитопенией, «генотипы риска» выявлены у 18 из них: генотип HPA-1bb определен у 6 женщин, генотип НРА-5аа - у 8 и генотип НРА-15аа - у 4 женщин. Аллосенсибилизация к антигенам тромбоцитов установлена у восьми матерей: Аллоантитела к тромбоцитам ребенка выявлены у всех женщин с генотипом HPA-1bb и у двух - с генотипом НРА-5аа. Трансиммунный генез тромбоцитопении определен у 8 детей. Проведенный анализ выявил у матерей этих новорожденных наличие аутоантител к тромбоцитам и снижение у них числа тромбоцитов в периферической крови (от 44 до 105×109/л). В остальных случаях лабораторные данные, свидетельствующие об иммунном характере тромбоцитопении, получены не были. Таким образом, иммунный генез тромбоцитопении установлен у 40% детей с низким числом тромбоцитов при рождении. В 50% случаев причиной явились антитромбоцитарные аллоантитела, был поставлен диагноз АТПН. Также в 50% случаев снижение числа тромбоцитов у детей произошло в результате действия материнских аутоантител, был выставлен диагноз - трансиммунная тромбоцитопения.

Ниже приводятся клинические примеры.

Пример 1.

Новорожденный С, 6 день жизни, родился от 3 беременности, 1 родов. Срок гестации 39 недель. Вес при рождении 3440. Число тромбоцитов в периферической крови при рождении 100×109/л,

на 3 день жизни - 80×109/л, на 6 день жизни - 50×109/л. Уровень гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в норме. Признаки инфекционного процесса отсутствуют. Наследственных заболеваний не выявлено. Геморрагических признаков тромбоцитопении не обнаружено. Число тромбоцитов в периферической крови матери - 250×109/л. Клинический диагноз новорожденного: тромбоцитопения неясной этиологии. Образцы крови матери и ребенка направлены в лабораторию для проведения иммуногематологического и молекулярно-генетического анализа. Исследование осуществлялось в соответствии с предлагаемым способом диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного. Результаты исследований:

НРА-генотип матери: HPA-1bb, 2аа, 3ab, 4аа, 5ab, 15ab.

НРА-генотип ребенка: HPA-1ab, 2ab, 3ab, 4аа, 5ab, 15аа.

Коэффициент аутосенсибилизации к тромбоцитам у матери - 2,6%, у ребенка - 0,8% (оба значения в пределах нормы).

Методом проточной цитометрии в сыворотке крови матери выявлены антитела, адсорбирующиеся на 58,8% тромбоцитов ребенка (в норме не более 3%).

Заключение: Установлен высокий генетически обусловленный риск развития АТПН по антигену НРА-1а (генотип матери HPA-1bb). В сыворотке крови матери выявлены аллоантитела к тромбоцитам ребенка. Лабораторный диагноз: Аллоиммунная тромбоцитопения новорожденного.

Пример 2.

Новорожденный М., 4 день жизни, родился от 3 беременности, 2 родов. Срок гестации 35 недель. Вес при рождении 2440. Число тромбоцитов в периферической крови при рождении 80×109/л, на 4 день жизни - 85×109/л. Уровень гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в норме. При объективном осмотре клинических проявлений тромбоцитопении нет, очагов инфекции не выявлено, стигмы дизэмбриогенеза отсутствуют. Число тромбоцитов в периферической крови матери 85×109/л. Клинический диагноз новорожденного: тромбоцитопения неясной этиологии.

Образцы крови матери и ребенка направлены в лабораторию для проведения иммуногематологического и молекулярно-генетического анализа. Результаты исследований:

НРА-генотип матери: HPA-1aa, 2аа, 3bb, 4аа, 5ab, 15ab.

НРА-генотип ребенка: HPA-1aa, 2аа, 3bb, 4аа, 5аа, 15аа.

Коэффициент аутосенсибилизации к тромбоцитам у матери - 6,3%, у ребенка - 1,8% (в норме не более 5%).

Методом проточной цитометрии в сыворотке крови матери выявлены антитела, адсорбирующиеся на 10,3%) тромбоцитов ребенка (в норме не более 3%).

Заключение: НРА-генотипы матери и ребенка иммунологически совместимы. В сыворотке крови матери выявлены антитела, реагирующие как с собственными тромбоцитами, так и с тромбоцитами ребенка.

Лабораторный диагноз: Трансиммунная тромбоцитопения новорожденного.

Пример 3.

Новорожденный С., 3 день жизни, родился от 1 беременности, 1 родов. Срок гестации 34 недель. Вес при рождении 2020. Число тромбоцитов в периферической крови при рождении 70×109/л, на 4 день жизни - 55×109/л. Уровень гемоглобина и эритроцитов ниже нормы, лейкоцитов - в норме. При объективном осмотре выявляется петехиальная сыпь на нижних конечностях, очагов инфекции не выявлено. Число тромбоцитов в периферической крови матери 145×109/л. Клинический диагноз новорожденного: тромбоцитопения неясной этиологии.

Образцы крови матери и ребенка направлены в лабораторию для проведения иммуногематологического и молекулярно-генетического анализа. Результаты исследований:

НРА-генотип матери: HPA-1ab, 2аа, 3bb, 4аа, 5ab, 15ab.

НРА-генотип ребенка: HPA-1ab, 2аа, 3ab, 4аа, 5аа, 15аа.

Коэффициент аутосенсибилизации к тромбоцитам у матери - 0,3%, у ребенка - 0,8% (в норме не более 5%).

Методом проточной цитометрии в сыворотке крови матери антитела к тромбоцитам ребенка не выявлены - 0,3% (в норме не более 3%).

Заключение: НРА-генотипы матери и ребенка иммунологически совместимы. Антитромбоцитарные ауто- и аллоантитела не выявлены.

Лабораторный диагноз: Данных за иммунную тромбоцитопению не получено.

Список литературы:

1. Бутина Е.В., Ёлов А.А., Зайцева Г.А., Шерстнев Ф.С. Типирование генов системы НРА у доноров компонентов крови // Клинич. лаб. диагн. - 2011. - №9. - С. 30.

2. Бутина Е.В., Зайцева Г.А., Исаева Н.В. Определение IgG, связанного с тромбоцитами, у пациентов с тромбоцитопенией // Клинич. лаб. диагн. - 2014. - №10. - С. 23-25.

3. Головко O.К., Линчевский Г.Л., Воробьева О.В. Клинические аспекты иммунных тромбоцитопений в неонатологии // Здоровье ребенка. - 2006. - №2. - С. 115-122.

4. Закиров И.И., Сафина А.И. Тромбоцитопении новорожденных // Вестник современной клинической медицины. - 2013. - Т. 6, вып. 6. - С. 102-107.

5. Масчан А.А., Румянцев А.Г. Иммуно-опосредованные тромбоцитопении новорожденных: дифференциальный диагноз и принципы терапии // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2010. - Т. 9, №3. С. 13-18.

6. Масчан А.А., Румянцев А.Г. Иммунная тромбоцитопения у детей: от консенсуса в терминологии к консенсусу в лечении // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии - 2010. - Т. 9.- №1. - С. 5-13.

7. Патент №2488114 РФ. Опубл. 20.07.2013; Бюл. №20. «Способ определения аутоантител к тромбоцитам» ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России. Авторы: Бутина Е.В., Зайцева Г.А., Исаева Н.В., Васкина Е.А., Докшина И.А.

8. Bassler D, Greinacher A, Okascharoen С, et al. А systematic review and survey of the management of unexpected neonatal alloimmune thrombocytopenia // Transfusion. 2008. - №48. - P. 92-98.

9. Espinoza J.P., Caradeux J., Errol R. Norwitz, Illanes S.E. Fetal and Neonatal Alloimmune Thrombocytopenia // Rev Obstet Gynecol. - 2013. - №6 (1). - P. 15-21.

10. Ghevaert C, Campbell K, Walton J, et al. Management and outcome of 200 cases of fetomaternal alloimmune thrombocytopenia // Transfusion. - 2007. №47. - P. 901-910.

11. Kaplan C. Neonatal alloimmune thrombocytopenia // Haematologica. - 2008. - №93. P. 805-807.

12. Kaplan C. Foetal and neonatal alloimmune thrombocytopaenia // Orphanet J Rare Dis. - 2006. - №1. - P.36-39.

13. Kiefel V, Bassler D, Kroll H, et al. Antigen-positive platelet transfusion in neonatal alloimmune thrombocytopenia (NAIT) // Blood. - 2006. - №107. - P. 3761-3763.

14. Killie MK, Husebekk A, Kjeldsen-Kragh J, Skogen В. A prospective study of maternal anti-HPA la antibody level as a potential predictor of alloimmune thrombocytopenia in the newborn // Haematologica. - 2008. - №93. - P. 870-877.

15. Knight M, Pierce M, Allen D, et al. The incidence and outcomes of fetomaternal alloimmune thrombocytopenia: a UK national study using three data sources // Br J Haematol. - 2011. №152. - P. 460-468.

16. Porcelijn L, Van den Akker ES, Oepkes D. Fetal thrombocytopenia // Semin Fetal Neonatal Med. - 2008. - №13. - P. 223-230. Arnold DM, Smith JW, Kelton JG. Diagnosis and management of neonatal alloimmune thrombocytopenia // Transfus Med Rev. - 2008. - №22. - P. 255-267.

17. Roberts I, Stanworth S, Murray NA. Thrombocytopenia in the neonate // Blood Rev. - 2008. - P. 22. - P. 173-186.

18. Scheffer P, Ait Soussan A, Verhagen O, et al. Noninvasive fetal genotyping of human platelet antigen-la // BJOG. 2011. - №118 - P. 1392-1395.

19. Serrarens-Janssen VM, Semmekrot В A, Novotny VM, et al. Fetal/neonatal alloimmune thrombocytopenia (FMAIT): past, present and future // Obstet Gynecol Surv. - 2008. №63. - P. 239-252.

20. Skogen B, Killie MK, Kjeldsen-Kragh J, et al. Reconsidering fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia with a focus on screening and prevention // Expert Rev Hematol. - 2010. - №3. - P. 559-566.

21. Vinograd CA, Bussel JB. Antenatal treatment of fetal alloimmune thrombocytopenia: a current perspective // Haematologica. - 2010. - №95. - P. 1807-1811.

22. Wu GG, Kaplan C, Curtis BR, Pearson HA. Report of the 14th international society of blood transfusion platelet immunology workshop // Vox Sang. - 2010. - №99. - P. 375-381.

Заключение:

1. Диагностирована аллоиммунная тромбоцитопения новорожденного.

2. Диагностирована трансиммунная тромбоцитопения новорожденного.

3. Диагностирована аутоиммунная тромбоцитопения у ребенка.

4. Диагностирована аутосенсибилизация к антигенам тромбоцитов у матери.

5. Диагностирован генетически обусловленный риск развития АИТН без выявленных антитромбоцитарных антител. Исследование антител следует повторить через 2-6 недели.

6. Данных за иммунную тромбоцитопению новорожденного не получено.

Другие, кроме представленных, сочетания диагностических критериев свидетельствуют о комплексе иммунных процессов, приводящих к тромбоцитопении.

Способ диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного, включающий в себя типирование генов системы НРА и исследование антитромбоцитарных ауто- и аллоантител, отличающийся тем, что исследование генов НРА проводится методом ПЦР в режиме реального времени, определение антител к тромбоцитам - методом проточной цитометрии, и при выявлении несовместимых сочетаний генов НРА у матери и ребенка НРА-1bb/HPA-1ab; НРА-5аа/HPA-5ab; НРА-15аа/HPA-1ab, выявлении в сыворотке крови матери IgG антител, адсорбирующихся более чем на 3% тромбоцитов ребенка, и при коэффициенте аутосенсибилизации тромбоцитов менее 5% диагностируют аллоиммунную тромбоцитопению новорожденного.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования аллергических реакций при использования дентальных имплантатов на основе сплавов оксида титана в реконструктивной хирургии.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложены выделенные полинуклеотиды, кодирующие вариабельные области легкой и тяжелой цепи антитела против человеческого EGFR; анти-EGFR антитело и фрагмент антитела; а также вектор, клетка-хозяин и способ получения анти-EGFR антитела или его фрагмента.

Изобретение относится к способу получения сульфатированной формы тиреоидного гормона формулы II (T3S) по следующей реакции: Технический результат: полученное соединение T3S можно легко выделить в чистом виде в виде твердого вещества с хорошими выходами.

Изобретение относится к области медицины, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике гиперреактивности (ГР) к яду пчел.
Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано при получении эритроцитарного антигена для диагностики некробактериоза животных.

Группа изобретений предлагает связанные со стрептавидином магнитные частицы, имеющие высокую способность связывания биотина, и способ их изготовления. Связанная со стрептавидином магнитная частица имеет структуру, в которой молекулы стрептавидина сшиты друг с другом на магнитной частице, где связанную со стрептавидином магнитную частицу изготавливают способом, включающим следующие стадии: (1) изготовление суспензии, содержащей магнитные частицы, на поверхности которых находятся аминогруппы; и (2) реакция магнитных частиц со стрептавидином и глутаральдегидом путем введения глутаральдегида в присутствии стрептавидина в суспензию, изготовленную на стадии (1).

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для тестирования образца, полученного от человека. Для этого проводят измерение первого сигнала, полученного вследствие связывания первой части указанного образца с бактериальным липополисахаридом, и измерение второго сигнала, полученного вследствие связывания второй части указанного образца с нативным антигеном, выбранным по меньшей мере из одного из: (а) относящегося к кишечнику антигена и (б) относящегося к гематоэнцефалическому барьеру антигена.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и санитарной эпидемиологии. Предложен способ получения имитаторов патогенных биологических агентов путем обработки суспензии клеток возбудителя опасного инфекционного заболевания СВЧ-облучением с частотой 2450 МГц, мощностью 6 Вт/см3 двукратно по 5 минут.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ проверки безопасности исследуемого антитела, связывающегося с бета-амилоидом.

Группа изобретений относится к медицине и касается системы детекции для электрохимического выявления белкового аналита, включающей наноструктурированный микроэлектрод, содержащий линкер на своей поверхности, где линкер присоединен к антителу или его фрагменту, способным связывать белковый аналит; и редокс-репортер, способный к переносу электронов с указанным наноструктурированным микроэлектродом, где связывание белкового аналита с указанными антителом или его фрагментом препятствует переносу электронов между указанным редокс-репортером и указанным наноструктурированным микроэлектродом.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения продукции холерного токсина и дифференциации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов, включающего подготовку исследуемого образца, выявление холерного токсина методом ИФА, предусматривающим внесение антигенов в лунки планшета, инкубацию и учет результатов. Группа изобретений также касается набора для определения продукции холерного токсина и дифференциации эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов, осуществляющего указанный способ. Группа изобретений обеспечивает создание высокоспецифичного, чувствительного, простого и доступного для воспроизведения, без применения дополнительного оборудования, биологически безопасного, финансово не затратного (низкая себестоимость), выполняемого за малое количество времени способа для определения холерного токсина, продуцируемого штаммами возбудителя холеры классического и эльтор биоваров в условиях in vitro и in vivo, и дифференциации токсигенных (эпидемически значимых) штаммов V. cholerae. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 пр., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу дооперационного прогнозирования стадии и агрессивности рака предстательной железы. Способ дооперационного прогнозирования стадии и агрессивности рака предстательной железы, включающий определение в сыворотке крови больного до начала лечения уровней общего простатического антигена (ПСАобщ) с калибровкой Hybritech, свободного ПСА (ПСАсв) с калибровкой Hybritech, [-2]проПСА с калибровкой Hybritech, отличается тем, что высчитывают лабораторный индекс клинического стадирования (ЛИКС) рака предстательной железы по формуле: и если- ЛИКС < 500, то диагностируется локализованный индолентный рак предстательной железы, индекс Глисона ≤ 6;- ЛИКС > 5000, но ≤7000, то диагностируется агрессивный рак предстательной железы, индекс Глисона > 6 или стадия ≥Т3а;- ЛИКС > 7000, то диагностируется агрессивный рак предстательной железы, индекс Глисона > 6 и стадия ≥Т3а,далее на основании анализа совокупности полученных данных с использованием метода линейной регрессии по логарифмической шкале концентраций маркеров и возраста пациента рассчитывают новый показатель (ЛИКС-В) по формуле:ЛИКС-В = ЛИКС/100+1,5*В,где В - возраст пациента в годах, и если- ЛИКС-В < 100, то рак предстательной железы является локализованным индолентным, индекс Глисона ≤ 6, стадия ≤Т2;- ЛИКС-В > 150, то рак предстательной железы не локализованный индолентный, индекс Глисона ≥ 7, стадия ≥Т3а. Вышеописанный способ является эффективным для дооперационного прогнозирования стадии и агрессивности рака предстательной железы. 3 ил., 4 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для определения степени тяжести риносинусита. Сущность способа: обследуют больного риносинуситом и дополнительно до начала лечения в сыворотке крови больного определяют в пг/мл уровни цитокинов интерлейкина - 1β (IL-1β) и интерлейкина - 10 (IL-10), вычисляют с точностью до 0,1 соотношение IL-1β/IL-10. При значении соотношения менее 1,3 определяют легкую степень тяжести риносинусита; при значении от 1,3 до 5,5 включительно - среднюю степень тяжести риносинусита; при значении более 5,5 - тяжелую степень риносинусита. Применение способа обеспечивает повышение эффективности определения степени тяжести риносинусита за счет использования объективных критериев оценки, позволяющих четко, быстро и однозначно определить степень тяжести риносинусита. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития аллергического ринита. Для этого проводят оценку экспрессии генов дифференцировочных факторов субпопуляций Т-хелперов: Tbet, GATA3, RORC. Рассчитывают величину 2-ΔΔCt по формуле: , где 2-ΔΔCt - суммарный уровень экспрессии соответствующих генов в изучаемой фракции мононуклеаров, Ctк - номер порогового цикла в контроле, Cto - номер порогового цикла в опыте, В2М - ген β2-микроглобулина, Х - исследуемый ген, при значениях для Tbet, равных 2,56 и ниже, для GATA3, равных 8,92 и более, для RORC, равных 3,72 и более, прогнозируют развитие аллергического ринита. Использование данного способа позволяет прогнозировать развитие аллергического ринита под влияниям компонентов вредных производственных факторов и природных пыльцевых аллергенов. 1 ил., 4 табл., 5 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения неходжкинских лимфом орбиты. В биоптате опухоли определяют наличие вирусов ВЭБ, ВГЧ-6, ВГЧ-8. При выявлении хотя бы одного из указанных вирусов в составе комбинированного противоопухолевого лечения дополнительно используют общую и местную противовирусную терапию. Использование изобретения обеспечивает возможность выбора адекватной тактики лечения неходжкинских лимфом орбиты с дополнительным противовирусным эффектом. 5 пр.

Изобретение относится к медицине и касается способа дифференциальной диагностики начальных проявлений нейроинтоксикации винилхлоридом и парами металлической ртути, включающего проведение неврологического осмотра, где дополнительно определяют в сыворотке крови уровни антител к ацетилхолиновым рецепторам и антител к серотонинэргическим рецепторам, рассчитывают диагностические коэффициенты F1 и F2 по формулам. При F1<F2 диагностируют ранние проявления нейроинтоксикации хлорированными углеводородами, при F1>F2 диагностируют ранние проявления нейроинтоксикации парами металлической ртути. Изобретение обеспечивает повышение достоверности диагностики за счет использования специфических показателей - уровней аутоантител с направленностью к регуляторным белкам нервной ткани. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной недостаточности при оценке индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидроксихолестерина на третьем триместре гестации. Для этого при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, выполняют гистохимическую реакцию на 7-дегидроксихолестериндегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, уменьшении содержания 7-дегидрохолестерина в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты до 29,3±2,79 пикселей/мкм2 создается угроза формирования фетоплацентарной недостаточности. Способ позволяет оценить угрозу формирования фетоплацентарной недостаточности при простоте его исполнения. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно гастроэнтерологии, и может быть использовано для определения генерализации злокачественного процесса после оперативного лечения рака головки поджелудочной железы. Для этого в плазме крови больного на 15-е сутки после панкреатодуоденальной резекции определяют активность универсального ингибитора α2-макроглобулина. При значении этого показателя от 10,57 ИЕ/мл до 12,37 ИЕ/мл прогнозируют развитие генерализации злокачественного процесса в течение 2,5-6 месяцев после операции. При его значении от 5,18 ИЕ/мл до 5,98 ИЕ/мл прогнозируют течение послеоперационного периода без генерализации процесса в течение 12 месяцев. Использование данного способа позволяет осуществлять прогноз направленности патологического процесса при раке головки поджелудочной железы и проводить раннее выявление сроков генерализации злокачественного процесса. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к электрохимическому иммуноанализу. Предложен способ определения содержания грамотрицательных бактерий в анализируемой среде. В водной среде при температуре 37°С конъюгируют бактерии с магнитными наночастицами Fe3O4, Fe0, NiFe2O4 или MgFe2O4, модифицированными декстраном. Отделяют несвязавшиеся наночастицы с использованием магнитного поля. Помещают в среду рабочий электрод из золота, платины или графитсодержащих материалов, поверхность которого предварительно модифицируют антителами, специфичными к определяемому штамму бактерий, для образования иммунокомплекса на поверхности электрода в течение 20 мин при температуре 37°С. Промывают электрод буферным раствором, содержащим нормальную лошадиную сыворотку и твин-20. Помещают извлеченный из анализируемой среды рабочий электрод в электрохимическую ячейку, содержащую фоновый электролит. Определяют содержание бактерий по величине электрохимического отклика окисления наночастиц, локализованных в иммунокомплексе на поверхности рабочего электрода. Изобретение позволяет увеличить чувствительность и точность анализа, снизить предел обнаружения клеток бактерий до 10 КОЕ/мл, сократить время проведения анализа. 1 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогноза развития увеита у пациентов с ювенильным идиопатическим артритом (ЮИА). Для этого определяют ИЛ-10 и ИНФ-γ, после чего рассчитывают прогностический коэффициент по формуле ПК=(ИЛ-10/ИНФ-γ)100, и при прогностическом коэффициенте более 31,8±4,7 прогнозируют развитие увеита у пациентов с ювенильным идиопатическим артритом. Способ позволяет повысить точность прогноза развития увеита на раннем этапе заболевания с целью профилактики развития осложнений, приводящих к слепоте. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для диагностики аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного. Способ включает в себя типирование генов системы НРА и исследование антитромбоцитарных ауто- и аллоантител. Исследование генов НРА проводится методом ПЦР в режиме реального времени, определение антител к тромбоцитам - методом проточной цитометрии. При выявлении несовместимых сочетаний генов НРА у матери и ребенка НРА-1bbHPA-1ab; НРА-5ааHPA-5ab; НРА-15ааHPA-1ab, выявлении в сыворотке крови матери IgG антител, адсорбирующихся более чем на 3 тромбоцитов ребенка, и при коэффициенте аутосенсибилизации тромбоцитов менее 5 диагностируют аллоиммунную тромбоцитопению новорожденного. Использование данного способа обеспечивает раннюю и точную диагностику аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного, что необходимо для назначения адекватной медикаментозной терапии, выбора компонентов крови при трансфузиях. 2 табл., 3 пр.

Наверх