Соединения диоксин- и оксазин[2,3-d]пиримидина в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы и способы их применения

Изобретение относится к соединению формулы I

,

которые используются в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы (PI3-киназы), обладающие противораковой активностью, противовоспалительной активностью или иммунорегуляторными свойствами. Технический результат: получены новые соединения формулы I, а также фармацевтические композиции на их основе, которые могут быть использованы для производства лекарственного препарата для лечения рака, в частности рака головного мозга. 7 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 табл., 41 пр.

 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Данная заявка является непервоначальной заявкой, поданной согласно 37 CFR (свода федеральных правил США) §1,53(b), и заявляет приоритет согласно 35 USC (сводной кодификации федерального законодательства США) §119(e) по первоначальной заявке №61/694,898 поданной 30 августа 2012, содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.

Область техники

Настоящее изобретение относится, в целом, к соединениям, обладающим противораковой активностью или противовоспалительной активностью, и более конкретно, к соединениям, которые ингибируют активность PI3-киназы (фосфоинозитид-3-киназы). Настоящее изобретение также относится к способам применения указанных соединений для in vitro, in situ и in vivo диагностики или лечения клеток млекопитающих, или связанных патологических состояний.

Уровень техники

Фосфатидилинозитол является одним из ряда фосфолипидов, обнаруженных в клеточных мембранах, который играет важную роль во внутриклеточной передаче сигналов. Передача сигналов клетками посредством 3'-фосфорилированных фосфоинозитидов вовлечена во множество клеточных процессов, например, в злокачественное перерождение, передачу сигналов посредством факторов роста, процессы воспаления и иммунитета (Rameh et al (1999) J. Biol Chem, 274: 8347-8350). Действие фермента, ответственного за образование данных фосфорилированных сигнальных молекул, фосфатидилинозитол-3-киназы (также именуемой в настоящей заявке как PI3-киназа или PI3K), первоначально было обнаружено как активность, связанная с вирусными онкобелками и тирозинкиназами рецептора фактора роста, которые фосфорилируют фосфатидилинозитол (PI) и его фосфорилированные производные по 3'-гидроксильной группе инозитольного кольца (Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2: 358-60).

Фосфоинозитид-3-киназы (PI3K) представляют собой киназы липидов, которые фосфорилируют липиды по гидроксильному остатку в положении 3 инозитольного кольца (Whitman et al (1988) Nature, 332: 664). 3-фосфорилированные фосфолипиды (PIP3), образованные PI3-киназами, выступают в качестве вторичных мессенджеров, рекрутирующих киназы, содержащие липид-связывающие домены (в том числе области гомологии плекстрина (РН)), такие как Akt и фосфоинозитид-зависимая киназа-1(PDK1). Связывание Akt с мембранными PIP3 приводит к транслокации Akt в плазматическую мембрану, в результате чего осуществляется контакт Akt с киназой PDK1, отвечающей за активацию Akt. Онкосупрессорная фосфатаза PTEN дефосфорилирует PIP3 и посредством этого выступает в качестве отрицательного регулятора активации Akt. PI3-киназы Akt и PDK1 принимают участие в регуляции многих клеточных процессов, в том числе в регуляции клеточного цикла, пролиферации, жизнеспособности, апоптоза и подвижности, и являются важными компонентами молекулярных механизмов развития заболеваний, таких как рак, диабет и иммунное воспаление (Vivanco et al (2002) Nature Rev. Cancer 2: 489; Phillips et al (1998) Cancer 83: 41).

Основной изоформой PI3-киназы при раке является PI3-киназа класса I, р110 α (альфа) (патент США 5824492; патент США 5846824; патент США 6274327). Другие изоформы вовлечены в сердечно-сосудистые и иммуно-воспалительные заболевания (Workman Р (2004) Biochem Soc Trans 32: 393-396; Patel et al. (2004) Proceedings of the American Association Cancer Research (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA; Ahmadi K and Waterfield MD (2004) Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press). Путь передачи сигналов PI3-Киназа/Akt/PTEN представляет собой привлекательную мишень для разработки лекарственного препарата против рака, поскольку, как ожидают, подобные модулирующие или ингибирующие агенты будут ингибировать пролиферацию, подавлять репрессию апоптоза и преодолевать резистентность к цитотоксическим агентам в раковых клетках (Folkes et al. (2008) J. Med. Chem. 51: 5522-5532; Yaguchi et al. (2006) Jour, of the Nat. Cancer Inst. 98(8): 545-556).

Злокачественные глиомы представляют собой наиболее распространенные первичные опухоли головного мозга у взрослых. При глиобластоме (ГБМ), наиболее агрессивном подтипе глиомы, образование и рост опухоли, по видимости, поддерживается амплификацией или сверхэкспрессией продуктов генов, которые вовлечены в передачу сигналов, инициированную факторами роста, и которые действуют совместно с генетическими изменениями, нарушающими контроль над клеточным циклом (Holland EC (2001) Nat Rev Genet 2: 120-129). Среди изменений генома, которые регистрируются при ГБМ, мутация и/или делеция PTEN является наиболее распространенной; согласно имеющимся оценкам, частота данного события составляет 70-90% (Nutt C, Louis DN (2005) Cancer of the Nervous System (McGraw-Hill, New York), 2nd Ed, pp 837-847.).

Приведенные данные в совокупности с прогностической значимостью статуса PTEN в случаях ГБМ (Phillips HS, et al. (2006) Cancer Cell 9: 157-163) свидетельствуют о важности пути передачи сигналов фосфоинозитид-3-киназа (PI3K)/Akt для стимулирования высоко агрессивных злокачественных образований глии, а также о возможностях лечения ингибиторами PI3K, которые обладают свойством проникать через гематоэнцефалический барьер. Злокачественные глиомы лечат комбинацией хирургического вмешательства, ионизирующего излучения и темозоломида (TEMODAR™), однако в большинстве случаев данные варианты терапии в конечном итоге оказываются неэффективными в связи с рецидивами опухоли. Для лечения гиперпролиферативных нарушений, таких как глиобластома и метатстатический рак головного мозга, необходимы дополнительные варианты терапии для доставки эффективных концентрацией эффективных лекарственных препаратов в головной мозг.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится, в целом, к соединениям диоксин- и оксазин-[2,3-d]пиримидина формулы I в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы, обладающим противораковой активностью, противовоспалительной активностью или иммунорегуляторными свойствами, и более конкретно, обладающим активностью модулировать или ингибировать PI3-киназу. Определенные гиперпролиферативные нарушения характеризуются модулированием функции PI3-киназы, например, в результате мутаций или сверхэкспрессии белков. Соответственно, соединения согласно настоящему изобретению можно применять для лечения гиперпролиферативных нарушений, таких как рак. Указанные соединения могут ингибировать рост опухоли у млекопитающих и могут быть пригодными для лечения страдающих от рака пациентов, которые являются людьми.

Настоящее изобретение также относится к способам применения соединений диоксин- и оксазин-[2,3-d]пиримидина формулы I в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы для in vitro, in situ и in vivo диагностики или лечения клеток и организмов млекопитающих, или связанных патологических состояний. Соединения формулы I включают:

и стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения. Заместители представляют собой такие, как описано в настоящей заявке.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение диоксин[2,3-d]пиримидина формулы I в качестве ингибитора PI3K и фармацевтически приемлемый носитель. Указанная фармацевтическая композиция может также содержать один или несколько дополнительных терапевтических агентов.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложены способы ингибирования активности PI3-киназы, включающие осуществление контакта PI3-киназы с эффективным ингибирующим количеством соединения формулы I.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложены способы предотвращения или лечения гиперпролиферативного заболевания или нарушения, модулируемого PI3-киназами, причем указанные способы включают введение млекопитающему, которое нуждается в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I. Примеры подобного гиперпролиферативного заболевания или нарушения включают, но не ограничиваются им, рак.

Согласно другому аспекту в настоящем изобретении предложены способы предотвращения или лечения гиперпролиферативного нарушения, включающие введение млекопитающему, которое нуждается в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I самого по себе или в комбинации с одним или несколькими дополнительными соединениями, обладающими противогиперпролиферативными свойствами.

Согласно следующему аспекту в настоящем изобретении предложен способ применения соединения согласно настоящему изобретению для лечения гиперпролиферативного заболевания или состояния, модулируемого PI3-киназой, у млекопитающего.

Дополнительный аспект настоящего изобретения представляет собой применение соединения согласно настоящему изобретению для лечения рака, модулируемого PI3-киназой, в том числе рака головного мозга, у млекопитающего.

Другой аспект настоящего изобретения включает наборы, содержащие соединение формулы I, контейнер и необязательно листок-вкладыш или этикетку, в которых содержатся указания о лечении.

Другой аспект настоящего изобретения включает способы получения, способы разделения и способы очистки соединений формулы I.

Другой аспект настоящего изобретения включает новые промежуточные соединения, применяемые для получения соединений формулы I.

Подробное описание изобретения

В настоящей заявке подробно приведены определенные варианты реализации настоящего изобретения, примеры которых сопровождаются структурами и формулами. Несмотря на то, что настоящее изобретение описано в соответствии с приведенными вариантами реализации, следует понимать, что не предполагается, что настоящее изобретение ограничивается исключительно данными вариантами реализации. Напротив, предполагается, что настоящее изобретение включает все альтернативные варианты, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения, как определено формулой изобретения. Специалистам в данной области техники известны многие способы и материалы, аналогичные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящей заявке, которые можно применять при реализации настоящего изобретения на практике. Настоящее изобретение никоим образом не ограничивается описанными способами и материалами. В случае если одна или несколько из приведенных ссылок на литературные источники, патенты и аналогичные материалы отличаются или противоречат настоящей заявке, включая, но не ограничиваясь ими, определенные термины, применение терминов, описанные методики или тому подобное, настоящая заявка является определяющей.

Определения

Термин «алкил» в настоящей заявке относится к моновалентному углеводородному радикалу с насыщенной линейной или разветвленной цепью, содержащему от одного до двенадцати атомов углерода (C1-C12), причем указанный алкильный радикал может быть необязательно замещен независимо одним или несколькими заместителями, описанными ниже. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения алкильный радикал содержит от одного до восьми атомов углерода (C1-C8) или от одного до шести атомов углерода (C1-C6). Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (Me, -CH3), этил (Et, -CH2CH3), 1-пропил (n-Pr, н-пропил, -CH2CH2CH3), 2-пропил (i-Pr, и-пропил, -CH(CH3)2), 1-бутил (n-Bu, н-бутил, -CH2CH2CH2CH3), 2-метил-1-пропил (i-Bu, и-бутил, -CH2CH(CH3)2), 2-бутил (s-Bu, в-бутил, -CH(CH3)CH2CH3), 2-метил-2-пропил (t-Bu, т-бутил, -C(CH3)3), 1-пентил (н-пентил, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-пентил (-СН(CH3)CH2CH2CH3), 3-пентил (-СН(CH2CH3)2), 2-метил-2-бутил (-С(CH3)2CH2CH3), 3-метил-2-бутил (-СН(CH3)СН(CH3)2), 3-метил-1-бутил (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-метил-1-бутил (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-гексил (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-гексил (-СН(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-гексил (-СН(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-метил-2-пентил (-С(CH3)2CH2CH2CH3), 3-метил-2-пентил (-СН(CH3)СН(CH3)CH2CH3), 4-метил-2-пентил (-СН(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-метил-3-пентил (-С(CH3)(CH2CH3)2), 2-метил-3-пентил (-СН(CH2CH3)СН(CH3)2), 2,3-диметил-2-бутил (-С(CH3)2СН(CH3)2), 3,3-диметил-2-бутил (-СН(CH3)С(CH3)3, 1-гептил, 1-октил и тому подобное.

Термин «алкенил» относится к моновалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащему от двух до восьми атомов углерода (C2-C8), с по меньшей мере одним участком, в котором присутствует ненасыщенная связь, т.е. углерод-углерод sp2-двойная связь, причем указанный алкенильный радикал может быть необязательно замещен независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке, и включает радикалы, имеющие «цис» и «транс» ориентацию, или в качестве альтернативы, «E» и «Z» ориентацию. Примеры включают, но не ограничиваются ими, этиленил или винил (-CH=CH2), аллил (-CH2CH=CH2) и тому подобное.

Термин «алкинил» относится к моновалентному углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, содержащему от двух до восьми атомов углерода (C2-C8), с по меньшей мере одним участком, в котором присутствует ненасыщенная связь, т.е. углерод-углерод-sp тройная связь, причем указанный алкинильный радикал может быть необязательно замещен независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке. Примеры включают, но не ограничиваются ими, этинил (-C≡CH), пропинил (пропаргил, -CH2C≡СН) и тому подобное.

Термины «углеродный цикл», «карбоциклил», «карбоциклическое кольцо» и «циклоалкил» относятся к моновалентному неароматическому насыщенному или частично ненасыщенному кольцу, содержащему от 3 до 12 атомов углерода (С3-C12) в виде моноциклического кольца или от 7 до 12 атомов углерода в виде бициклического кольца. Бициклические углеродные циклы, содержащие от 7 до 12 атомов, могут быть организованы, например, в виде бициклической [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] системы, и бициклические углеродные циклы, содержащие 9 или 10 атомов кольца, могут быть организованы в виде бициклической [5,6] или [6,6] системы или в виде систем с мостиковой связью, таких как бицикло[2,2,1]гептан, бицикло[2,2,2]октан и бицикло[3,2,2]нонан. Примеры моноциклических углеродных циклов включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогексадиенил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил и тому подобное.

«Арил» означает моновалентный ароматический углеводородный радикал, состоящий из 6-20 атомов углерода (C6-C20), полученный путем удаления одного атома водорода от единичного атома углерода родительской ароматической кольцевой системы. Некоторые арильные группы представлены на иллюстративных структурах как «Ar». Арил включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом, или ароматическое карбоциклическое кольцо. Типичные арильные группы включают, но не ограничиваются ими, радикалы, полученные из бензола (фенил), замещенных бензолов, нафталина, антрацена, бифенила, инденила, инданила, 1,2-дигидронафталина, 1,2,3,4-тетрагидронафтила и тому подобное. Арильные группы являются необязательно замещенными независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке.

Термины «гетероцикл», «гетероциклил» и «гетероциклическое кольцо» используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к насыщенному или частично ненасыщенному (т.е. содержащему одну или несколько двойных и/или тройных связей в кольце) карбоциклическому радикалу, состоящему из от 3 до приблизительно 20 атомов кольца, в котором по меньшей мере один атом кольца представляет собой гетероатом, который выбирают из азота, кислорода, фосфора и серы, а остальные атомы кольца представляют собой C, причем один или несколько атомов кольца являются необязательно замещенными независимо одним или несколькими заместителями, описанными ниже. Гетероцикл может представлять собой моноцикл, содержащий от 3 до 7 членов в кольце (от 2 до 6 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, которые выбирают из N, O, P и S), или бицикл, содержащий от 7 до 10 членов в кольце (от 4 до 9 атомов углерода и от 1 до 6 гетероатомов, которые выбирают из N, O, P и S), например: бициклическую [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систему. Гетероциклы описаны в Paquette, Leo А.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), в частности, в главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), в частности, в томах 13, 14, 16, 19 и 28; и J. Am. Chem. Soc. (1960) 82: 5566. «Гетероциклил» также включает радикалы, в которых гетероциклические радикалы конденсированы с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим или гетероциклическим кольцом. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваются ими, морфолин-4-ил, пиперидин-1-ил, пиперазинил, пиперазин-4-ил-2-он, пиперазин-4-ил-3-он, пирролидин-1-ил, тиоморфолин-4-ил, S-диоксотиоморфолин-4-ил, азокан-1-ил, азетидин-1-ил, октагидропиридо[1,2-a]пиразин-2-ил, [1,4]диазепан-1-ил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидино, морфолино, тиоморфолино, тиоксанил, пиперазинил, гомопиперазинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинилимидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3,1,0]гексанил, 3-азабицикло[4,1,0]гептанил, азабицикло[2,2,2]гексанил, 3H-индолил, хинолизинил и N-пиридилмочевины. Спиро-группы также включены в объем данного определения. Примерами гетероциклической группы, в которой 2 атома кольца замещены оксо (=O) группами, являются пиримидинонил и 1,1-диоксо-тиоморфолинил. Гетероциклические группы в настоящей заявке необязательно замещены независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке.

Термин «гетероарил» относится к моновалентному ароматическому радикалу, состоящему из 5-, 6- или 7-членных колец, и включает конденсированные кольцевые системы (по меньшей мере одна из которых является ароматической), состоящие из 5-20 атомов, содержащие один или несколько гетероатомов, которые независимо выбирают из азота, кислорода и серы. Примерами гетероарильных групп являются пиридинил (включая, например, 2-гидроксипиридинил), имидазолил, имидазопиридинил, пиримидинил (включая, например, 4-гидроксипиримидинил), пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксадиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, хинолинил, изохинолинил, тетрагидроизохинолинил, индолил, бензимидазолил, бензофуранил, циннолинил, индазолил, индолизинил, фталазинил, пиридазинил, триазинил, изоиндолил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, тиадиазолил, фуразанил, бензофуразанил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридинил. Гетероарильные группы являются необязательно замещенными независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке.

Гетероциклические или гетероарильные группы могут быть присоединены через углерод (углерод-связанные) или азот (азот-связанные) в случаях, когда такое возможно. В качестве примера, но не ограничения, гетероциклы или гетероарилы, присоединенные через углерод, соединены в положениях 2, 3, 4, 5 или 6 пиридина, положениях 3, 4, 5 или 6 пиридазина, положениях 2, 4, 5 или 6 пиримидина, положениях 2, 3, 5 или 6 пиразина, положениях 2, 3, 4 или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, тиофена, пиррола или тетрагидропиррола, в положениях 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола, в положениях 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола, в положениях 2 или 3 азиридина, в положениях 2, 3 или 4 азетидина, в положениях 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или в положениях 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина.

В качестве примера, но не ограничения, гетероциклы или гетероарилы, присоединенные через азот, соединены в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина, 1H-индазола, в положении 2 изоиндола или изоиндолина, в положении 4 морфолина и в положении 9 карбоазола или β-карболина.

Термины «лечить» и «лечение» относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мероприятиям, целью которых является предотвращение или замедление (ослабление) нежелательного физиологического изменения или нарушения, такого как развитие или распространение рака. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, облегчение симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизацию (т.е. отсутствие ухудшения) состояния заболевания, отсрочивание или замедление прогрессии заболевания, ослабление или временное облегчение состояния заболевания и ремиссию (частичную либо полную), которые поддаются обнаружению или не поддаются обнаружению. «Лечение» может также означать продление срока жизни по сравнению с ожидаемым сроком жизни при отсутствии лечения. Лица, которые нуждаются в лечении, включают лиц, у которых уже возникло состояние или нарушение, а также лиц, склонных к возникновению состояния или нарушения, или лиц, у которых возникновение состояния или нарушения необходимо предотвратить.

Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество соединения согласно настоящему изобретению, которое (i) лечит или предотвращает конкретное заболевание, состояние или нарушение, (ii) ослабляет, облегчает или устраняет один или несколько симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, или (iii) предотвращает или отсрочивает манифестацию одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, описанных в настоящей заявке. В случае рака, терапевтически эффективное количество лекарственного препарата может уменьшить количество раковых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать (т.е. замедлить до некоторой степени и предпочтительно остановить) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (т.е. замедлить до некоторой степени и предпочтительно остановить) метастазирование опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или облегчить до некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком. В зависимости от степени, в которой лекарственный препарат может предотвратить рост и/или уничтожить существующие раковые клетки, он может являться цитостатическим и/или цитотоксическим. В случае противораковой терапии эффективность можно измерить, например, путем оценки времени до прогрессирования заболевания (TTP, time to progression) и/или определением частоты ответа (RR, response rate).

Термин «рак» относится к физиологическому состоянию у млекопитающих или описывает такое физиологическое состояние, которое, как правило, характеризуется неконтролируемым ростом клеток. «Опухоль» содержит одну или несколько раковых клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфонеоплазию. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак (например, плоскоклеточный рак эпителия), рак легкого, в том числе мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого («НМКРЛ»), аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легкого, рак брюшной полости, гепатоклеточный рак, рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак толстой и прямой кишок, карциному эндометрия или карциному матки, карциному слюнных желез, рак почки, рак предстательной железы, рак наружных женских половых органов, рак щитовидной железы, карциному печени, карциному анального канала, карциному полового члена, а также рак головы и шеи.

«Химиотерапевтический агент» представляет собой химическое соединение, применяемое для лечения рака, независимо от механизма действия такого соединения. Классы химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются ими: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды веретенного дерева, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназ. Химиотерапевтические агенты включают соединения, применяемые в «направленной терапии» и в общепринятой химиотерапии. Примеры химиотерапевтических агентов включают: эрлотиниб (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (фторурацил, 5-фторурацил, CAS №51-21-8), гемцитабин (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS №391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диаминдихлорплатина (II), CAS №15663-27-1), карбоплатин (CAS №41575-94-4), паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), пеметрексед (ALIMTA®, Eli Lilly), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло [4,3,0] нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид, CAS №85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), тамоксифен ((Z)-2-[4-(1,2-дифенилбут-1-енил)фенокси]-N,N-диметилэтанамин, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) и доксорубицин (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.

Дополнительные примеры химиотерапевтических агентов включают: оксалиплатин (ELOXATIN®, Sanofi), бортезомиб (VELCADE®, Millennium Pharm.), сутент (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), летрозол (FEMARA®, Novartis), иматиниба мезилат (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (ингибитор Mek, Exelixis, международная заявка WO 2007/044515), ARRY-886 (ингибитор Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (ингибитор PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (ингибитор PI3K, Novartis), XL-147 (ингибитор PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), фулвестрант (FASLODEX®, AstraZeneca), лейковорин (фолиевая кислота), рапамицин (сиролимус, RAPAMUNE®, Wyeth), лапатиниб (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), гефитиниб (IRESSA®, AstraZeneca), иринотекан (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), типифарниб (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (без кремафора), альбумин-инжиниринговые препараты паклитаксела на основе наночастиц (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), вандетаниб (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), хлорамбуцил, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), темсиролимус (TORISEL®, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфосфамид (TELCYTA®, Telik), тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN®, NEOSAR®); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метилмеламины, в том числе альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; ацетогенины (в особенности буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; CC-1065 (включая его синтетические аналоги адоцелезин, карцелезин и бицелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1); элеутеробин; панкратистатин; сакродистиин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид мехлоретаминоксида, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихимицин, калихимицин гамма1I, калихимицин омегаI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33: 183-186); динемицин, динемицин A; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и родственные хромопротеиновые хромофоры энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, катитомицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, морфолинодоксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, неморубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин C, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, хеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пуринов, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидинов, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксиридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; вещества, подавляющие деятельность надпочечников, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазихон; эльфорнитин; ацетат эллиптиния; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; маитансиноиды, такие как маитансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазихон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ara-С»); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин, винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (XELODA®, Roche); ибандронат; CPT-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из соединений, указанных выше.

В определение «химиотерапевтический агент» также включены: (i) противогормональные агенты, которые выступают в качестве регуляторов или ингибиторов действия гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы эстрогенового рецептора (SERM, selective estrogen receptor modulators), в том числе, например, тамоксифен (включая NOLVADEX®; тамоксифена цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и FARESTON® (торемифина цитрат); (ii) ингибиторы ароматазы, ингибирующие фермент ароматазу, которая регулирует продукцию эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглютетимид, MEGASE® (мегестрола ацетат), AROMASIN® (экземестан; Pfizer), форместанин, фадрозол, RIVISOR® (ворозол), FEMARA® (летрозол; Novartis) и ARIMIDEX® (анастрозол; AstraZeneca); (iii) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый нуклеозидный цитозиновый аналог); (iv) ингибиторы протеинкиназы, такие как ингибиторы MEK (международная заявка WO 2007/044515); (v) ингибиторы липидкиназы; (vi) антисмысловые олигонуклеотиды, в частности, такие антисмысловые олигонуклеотиды, которые ингибируют экспрессию генов путей передачи сигналов, связанных с отклонениями пролиферации клеток, такие как, например, PKC-альфа, Ralf и Н-Ras, такой как облимерсен (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии VEGF (например, ANGIOZYME®) и ингибиторы экспрессии HER2; (viii) вакцины, такие как вакцины генной терапии, например, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® и VAX ID®; PROLEUKIN® rIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) противоангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых из указанных выше соединений.

Также в определение «химиотерапевтический агент» включены терапевтические антитела, такие как алемтузумаб (Campath), бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); цетуксимаб (ERBITUX®, Imclone); панитумумаб (VECTIBIX®, Amgen), ритуксимаб (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idee), пертузумаб (OMNITARG®, 2C4, Genentech), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), тоситумомаб (Bexxar, Corixia) и конъюгат антитела с лекарственным препаратом, гемтузумаб озогамицин (MYLOTARG®, Wyeth).

Гуманизированные моноклональные антитела с терапевтической активностью в качестве химиотерапевтических агентов в комбинации с ингибиторами PI3K согласно настоящему изобретению включают: алемтузумаб, аполизумаб, аселизумаб, атлизумаб, бапинеузумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделизумаб, цертолизумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, ресивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадокизумаб, тализумаб, тефибазумаб, токилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, тукуситузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и визилизумаб. «Метаболит» представляет собой продукт, образованный в результате метаболизма конкретного соединения или его соли в организме. Метаболиты соединения можно обнаружить с применением стандартных методик, известных в данной области техники, и активность таких метаболитов можно определить с применением тестов, таких как тесты, описанные в настоящей заявке. Данные продукты могут образовываться, например, в результате окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления и тому подобное, введенного соединения. Соответственно, настоящее изобретение включает метаболиты соединений согласно настоящему изобретению, в том числе соединения, полученные в результате процессов, включающих осуществление контакта соединения согласно настоящему изобретению с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения продукта метаболизма указанного соединения.

Термин «листок-вкладыш» используется в отношении инструкций, которые традиционно вкладывают в серийные упаковки терапевтических препаратов и которые содержат информацию относительно показаний к применению, применения, доз, введения, противопоказаний и/или предостережений, касающихся применения таких терапевтических препаратов.

Термин «хиральный» относится к молекулам, которые обладают свойством неналожимости зеркальных изображений партнера, тогда как термин «ахиральный» относится к молекулам, зеркальные изображения которых можно наложить друг на друга.

Термин «стереоизомеры» относится к соединениям, которые обладают идентичным химическим составом, но отличаются расположением атомов или групп в пространстве.

«Диастереомер» относится к стереоизомеру с двумя или более центрами хиральности, молекулы которого не являются зеркальными изображениями друг друга. Диастереомеры обладают различными физическими свойствами, например, температурами плавления, температурами кипения, спектральными свойствами и реакционными способностями. Смеси диастереомеров можно разделить с помощью аналитических методик высокого разрешения, таких как электрофорез и хроматография.

Термин «энантиомеры» относится к двум стереоизомерам соединения, которые являются зеркальными изображениями друг друга, не совпадающими при наложении.

Стереохимические определения и условные обозначения, используемые в настоящей заявке, как правило, соответствуют руководствам S.P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать центры асимметрии или хиральные центры и вследствие этого могут существовать в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений согласно настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, диастереомеры, энантиомеры и атропоизомеры, а также смеси указанных соединений, такие как рацемические смеси, образуют часть настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения приставки D и L, или R и S, используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра или центров. Приставки d и I или (+) и (-) применяются для обозначения знака вращения плоскополяризованного света соединением, где (-) или I означает, что соединение является левовращающим. Соединение с приставкой (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры данные стереоизомеры идентичны за исключением того, что они являются зеркальными изображениями друг друга. Конкретный стереоизомер можно также обозначить как энантиомер, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров в соотношении 50:50 называют рацемической смесью или рацематом; подобная смесь может образоваться при отсутствии стереоселективности или стереоспецифичности химической реакции или процесса. Термины «рацемическая смесь» и «рацемат» относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных молекул, которая не обладает оптической активностью.

Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам различной энергии, взаимное превращение которых имеет низкий энергетический барьер. Например, протонная таутомерия (также известная как прототропная таутомерия) включает взаимные превращения в результате миграции протона, такие как кето-енольная и имин-енаминная изомеризация. Валентные таутомеры включают взаимные превращения в результате перераспределения некоторых электронов в связях.

Фраза «фармацевтически приемлемая соль» в настоящей заявке относится к фармацевтически приемлемым органическим или неорганическим солям соединения согласно настоящему изобретению. Типичные соли включают, но не ограничиваются ими, сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантозенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат «мезилат», этансульфонат, бензенсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Фармацевтически приемлемая соль может содержать другую молекулу, такую как ион ацетата, ион сукцината или другие противоионы. Противоион может представлять собой любую органическую или неорганическую группу, которая стабилизирует заряд родительского соединения. Более того, фармацевтически приемлемая соль может содержать в своей структуре более одного заряженного атома. Когда многозарядные атомы являются частью фармацевтически приемлемой соли, такая соль может иметь несколько противоионов. Вследствие этого фармацевтически приемлемая соль может содержать один или несколько заряженных атомов и/или один или несколько противоионов.

В случае если соединение согласно настоящему изобретению представляет собой основание, требуемую фармацевтически приемлемую соль можно получить любым подходящим способом, доступным в данной области техники, например, обработкой свободного основания неорганической кислотой, такой как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, метансульфоновая кислота, фосфорная кислота и тому подобное, или органической кислотой, такой как уксусная кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, пиранозидиловой кислотой, такой как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфа-гидрокси кислотой, такой как лимонная кислота или винная кислота, аминокислотой, такой как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматической кислотой, такой как бензойная кислота или коричная кислота, сульфоновой кислотой, такой как п-толуолсульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, или тому подобное.

В случае если соединение согласно настоящему изобретению представляет собой кислоту, требуемую фармацевтически приемлемую соль можно получить любым подходящим способом, например, обработкой свободной кислоты неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксид щелочного металла или гидроксид щелочноземельного металла или тому подобное. Иллюстративные примеры подходящих солей включают, но не ограничиваются ими, органические соли, полученные из аминокислот, таких как глицин и аргинин, аммиака, первичных, вторичных и третичных аминов и циклических аминов, таких как пиперидин, морфолин и пиперазин, и неорганические соли, полученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.

Фраза «фармацевтически приемлемый» указывает, что данное вещество или композиция должны быть совместимы химически и/или токсикологически с другими компонентами, содержащимися в составе, и/или с млекопитающим, которое получает лечение данным составом.

«Сольват» относится к объединению или комплексу одной или нескольких молекул растворителя и соединения согласно настоящему изобретению. Примеры растворов, которые образуют сольваты, включают, но не ограничиваются ими, воду, изопропанол, этанол, метанол, DMSO (диметилсульфоксид), этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.

Термины «соединение согласно настоящему изобретению», «соединения согласно настоящему изобретению» и «соединения формулы I» включают соединения формулы I, а также стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры, сольваты, метаболиты и фармацевтически приемлемые соли и пролекарства указанных соединений.

Любая формула или структура, приведенная в настоящей заявке, в том числе соединения формулы I, также призвана представлять гидраты, сольваты и полиморфные формы такого соединения, и смеси указанных соединений.

Соединения диоксин- и оксазин-[2,3-d]пиримидина в качестве ингибиторов PI3K.

В настоящем изобретении предложены соединения диоксин- и оксазин-[2,3-d]пиримидина формулы I в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы, а также фармацевтические составы указанных соединений, которые можно потенциально применять для лечения заболеваний, состояний и/или нарушений, модулируемых киназами PI3 (PI3K). Более конкретно, в настоящем изобретении предложены соединения формулы I

и стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомеры и фармацевтически приемлемые соли указанных соединений, где:

R1 и R2 независимо выбирают из H, =O, C1-C6 алкила, C2-C8 алкенила, C2-C8 алкинила и C3-C12 карбоциклила, причем указанные алкил и карбоциклил необязательно замещены одной или несколькими группами групп, которые независимо выбирают из F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -СН(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH3, -CH2CN, -CN, -CF3, -CH2OH, -CO2H, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -OH, =O, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC(=O)NHCH3, -NHC(=O)NHCH2CH3, -NHC(=O)NHCH(CH3)2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(=O)OC(CH3)3, -S(O)2CH3, бензила, бензилокси, циклопропила, морфолинила, морфолинометила и 4-метилпиперазин-1-ила; или

группы R1 или группы R2 образуют спиро-группу, от 3- до 6-членное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо;

R3 выбирают из С620 арила, С220 гетероциклила и C1-C20 гетероарила, каждый из которых необязательно замещен одной или несколькими группами, которые независимо выбирают из F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -СН(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH3, -CH2CN, -CN, -CF3, -CH2OH, -CO2H, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC(=O)NHCH3, -NHC(=O)NHCH2CH3, -NHC(=O)NHCH(CH3)2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(=O)OC(CH3)3, -S(O)2CH3, бензила, бензилокси, морфолинила, морфолинометила и 4-метилпиперазин-1-ила;

X выбирают из О, S и NR;

R представляет собой Н или C1-C6 алкил.

Также следует понимать, что каждый вариант реализации настоящего изобретения, относящийся к конкретному остатку R1, R2, R3, раскрытый в настоящей заявке, можно объединить с любым другим вариантом реализации настоящего изобретения, относящимся к другому остатку R1, R2, R3, раскрытому в настоящей заявке.

Примеры вариантов реализации соединений согласно настоящему изобретению включают формулы Ia и Ib:

Примеры вариантов реализации соединений формулы I включают варианты, в которых R1 независимо выбирают из Н, -CH3, -CH2CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2ОН, -CH2OCH3, -CN, -CH2F, -CHF2 и -CF3.

Примеры вариантов реализации соединений формулы I включают варианты, в которых R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила.

Примеры вариантов реализации соединений формулы I включают варианты, в которых R2 независимо выбирают из Н, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила.

Примеры вариантов реализации соединений формулы I включают варианты, в которых каждый R2 представляет собой CH3.

Примеры вариантов реализации соединений формулы I включают варианты, в которых два R2 образуют =O или циклопропил.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -СН(CH3)2, -CN, -CF3, -CH2OH, -CO2H, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -NO2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC(=O)NHCH3, -NHC(=O)NHCH2CH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(=O)OC(CH3)3 и -S(O)2CH3.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых R3 необязательно замещен бициклической гетероарильной группой, которую выбирают из 1Н-индазола, 1Н-индола, индолин-2-она, 1-(индолин-1-ил)этанона, 1H-бензо[d][1,2,3]триазола, 1H-пиразоло[3,4-b]пиридина, 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина, 1H-бензо[d]имидазола, 1Н-бензо[d]имидазо-2(3H)-она, 1Н-пиразоло[3,4-с]пиридина, 1H-пирроло[2,3-с]пиридина, 3H-имидазо[4,5-с]пиридина, 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина, 7Н-пурина, 1Н-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина, 2-амино-1H-пурин-6(9H)-она, хинолина, хиназолина, хиноксалина, изохинолина, изохинолин-1(2Н)-она, 3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-она, 3,4-дигидрохинолина-2(1Н)-она, хиназолин-2(1Н)-она, хиноксалин-2(1Н)-она, 1,8-нафтиридина, пиридо[3,4-d]пиримидина и пиридо[3,2-b]пиразина.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых необязательно замещенный R3 выбирают из:

где волнистая линия показывает место присоединения.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения R3 представляет собой 1Н-индазол-4-ил.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых R3 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из 2-фуранила, 3-фуранила, 2-имидазолила, 4-имидазолила, 3-изоксазолила, 4-изоксазолила, 5-изоксазолила, 2-оксазолила, 4-оксазолила, 5-оксазолила, 3-пиразолила, 4-пиразолила, 2-пиразинила, 3-пиридазинила, 4-пиридазинила, 5-пиридазинила, 2-пиримидинила, 5-пиримидинила, 6-пиримидинила, 2-пиридила, 3-пиридила, 4-пиридила, 2-пирролила, 3-пирролила, 2-тиенила, 3-тиенила, 5-тетразолила, 1-тетразолила, 2-тетразолила, 2-тиазолила, 4-тиазолила, 5-тиазолила, 3-триазолила и 1-триазолила.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых необязательно замещенный R3 выбирают из:

где волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых R3 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила.

Примеры соединений формулы I включают варианты, в которых R3 представляет собой необязательно замещенный пиримидинил.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения R3 представляет собой 2-аминопиримидин-5-ил.

Примеры соединений формулы I включают необязательно замещенный R3:

где волнистая линия показывает место присоединения.

Примеры вариантов реализации соединений согласно настоящему изобретению включают формулу Ia:

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой:

моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -OCH3, или

бициклическую гетероарильную группу, которую выбирают из 1Н-индазола, 1Н-индола, индолин-2-она, 1-(индолин-1-ил)этанона, 1Н-бензо[d][1,2,3]триазола, 1Н-пиразоло[3,4-b]пиридина, 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина, 1H-бензо[d]имидазола, 1H-бензо[d]имидазол-2(3H)-она, 1H-пиразоло[3,4-с]пиридина, 1H-пирроло[2,3-с]пиридина, 3H-имидазо[4,5-с]пиридина, 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина, 7Н-пурина, 1Н-пиразоло[4,3-d]пиримидина, 5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина, 2-амино-1Н-пурин-6(9Н)-она, хинолина, хиназолина, хиноксалина, изохинолина, изохинолин-1(2H)-она, 3,4-дигидроизохинолин-1(2H)-она, 3,4-дигидрохинолин-2(1Н)-она, хиназолин-2(1Н)-она, хиноксалин-2(1Н)-она, 1,8-нафтиридина, пиридо[3,4-d]пиримидина и пиридо[3,2-b]пиразина.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ia:

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой

моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -OCH3.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ia:

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой 1H-индазол-4-ил или 2-аминопиримидин-5-ил.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ia:

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой 2-аминопиримидин-5-ил.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ia:

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

группы R2 образуют от 3- до 6-членное карбоциклическое кольцо;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -OCH3.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ib

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ib

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, =O, -CH3, -С(CH3)3, -CH2OH, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой:

фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и -NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -OCH3 и

R представляет собой алкил.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ib

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н и =O;

R3 представляет собой моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила, пиримидинила или пиразолила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -OCH3, и

R представляет собой C1-6 алкил.

Примеры вариантов реализации соединения согласно настоящему изобретению включают формулу Ib

где

R1 независимо выбирают из Н, -CH3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н и =O;

R3 представляет собой 2-аминопиримидин-5-ил и

R представляет собой -CH3.

Соединения формулы I согласно настоящему изобретению могут содержать центры асимметрии или хиральные центры, и вследствие этого указанные соединения могут существовать в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений согласно настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, диастереомеры, энантиомеры и атропоизомеры, а также смеси указанных соединений, такие как рацемические смеси, образуют часть настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение охватывает все геометрические и позиционные изомеры. Например, если соединение формулы I содержит двойную связь или конденсированное кольцо, цис- и транс-формы, а также их смеси включены в объем настоящего изобретения. Как отдельные позиционные изомеры, так и смеси позиционных изомеров также включены в объем настоящего изобретения.

В случае если в структурах, представленных в настоящей заявке, стереохимия какого-либо конкретного хирального атома не показана, рассматриваются все стереоизомеры и все стереоизомеры включены в качестве соединений согласно настоящему изобретению. В тех случаях, когда стереохимия показана «жирным клином» или пунктирной линией, представляющих конкретную конфигурацию, данный стереоизомер таким образом показан и определен.

Соединение согласно настоящему изобретению может существовать в несольватированной, а также в сольватированной формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и тому подобное, и предполагается, что настоящее изобретение охватывает как сольватированные, так и несольватированные формы.

Соединение согласно настоящему изобретению может также существовать в различных таутомерных формах, и все подобные формы включены в объем настоящего изобретения. Термин «таутомер» или «таутомерная форма» относится к структурным изомерам различной энергии, взаимное превращение которых имеет низкий энергетический барьер. Например, протонная таутомерия (также известная как прототропная таутомерия) включает взаимные превращения в результате миграции протона, таких как кето-енольная и имин-енаминная изомеризация. Валентные таутомеры включают взаимные превращения в результате перераспределения некоторых электронов в связях.

Настоящее изобретение также охватывает меченное изотопной меткой соединение согласно настоящему изобретению, которое является идентичным соединению, представленному в настоящей заявке, за исключением того факта, что один или несколько атомов данного соединения замещены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, которое отличается от атомной массы или массового числа, которые обычно встречаются в природе. Все изотопы любого конкретного атома или элемента, как указано, включены в объем соединений согласно настоящему изобретению, а также варианты их применения. Примеры изотопов, которые могут быть введены в соединения согласно настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора и иода, такие как 2H (D), 3Н, 11С, 13C, 14С, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I, и 125I. Определенные соединения согласно настоящему изобретению, меченные изотопной меткой (например, соединения, меченные 3H и 14С), можно применять в анализах распределения соединения и/или субстрата в тканях. Тритиевые (3Н) изотопы и изотопы углерод-14 (14С) являются пригодными благодаря простоте их получения и обнаружения. Также замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. 2H), может обеспечить определенные терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильности (например, увеличение периода полужизни in vivo или уменьшение количества требуемой дозы) и вследствие этого данное замещение может быть предпочтительным при некоторых обстоятельствах. Позитронно-активные изотопы, такие как 15O, 13N, 11С и 18F, применяют для исследований методом позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ) для изучения степени заполнения рецептора субстратом. Меченное изотопной меткой соединение согласно настоящему изобретению можно, как правило, получить с помощью процедур, аналогичных процедурам, раскрытым в схемах и/или в примерах, представленных в настоящей заявке ниже, в результате замещения меченного изотопной меткой реактива не меченным изотопной меткой реактивом.

Биологическая оценка

Определение активности соединений формулы I по ингибированию PI3-киназы можно осуществить рядом прямых и косвенных методов определения. Анализировали активность связывания р110α (альфа) и других изоформ PI3K (пример 901) определенными иллюстративными соединениями, описанными в настоящей заявке, а также анализировали активность указанных соединений, направленную против клеток опухоли, in vitro (пример 902). Определенные иллюстративные соединения согласно настоящему изобретению обладают значением IC50 PI3K-связывающей активности, которое составляет менее 10 нМ. Определенные соединения согласно настоящему изобретению обладают значением IC50 активности, направленной на опухолевые клетки, которое составляет менее 100 нМ.

Цитотоксическую или цитостатическую активность иллюстративных соединений формулы I измеряли путем: создания пролиферирующей клеточной линии опухоли млекопитающего в клеточной культуральной среде, добавления соединения формулы I, культивирования клеток в течение от приблизительно 6 часов до приблизительно 5 дней; и измерения жизнеспособности клеток (пример 902). Клеточные анализы in vitro применяли для определения жизнеспособности, т.е. пролиферации (IC50), цитотоксичности (EC50) и индукции апоптоза (активации каспаз).

Активность иллюстративных соединений формулы I in vitro измеряли в ходе анализа пролиферации клеток, CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay, коммерчески доступного от компании Promega Corp., Madison, WI (пример 902). Данный метод гомогенного анализа основан на рекомбинантной экспрессии люциферазы Coleoptera (патенты США US 5583024; US 5674713; US 5700670); в ходе данного анализа определяют количество жизнеспособных клеток в культуре на основании количественного подсчета присутствующего АТФ, показателя метаболически активных клеток (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160: 81-88; патент США US 6602677). Анализ CellTiter-Glo® проводили в 96- или 384-луночном формате, что делает его пригодным для автоматизированного скрининга высокой производительности (HTS, high-throughput screening) (Cree et al (1995) Anticancer Drugs 6: 398-404). Процедура гомогенного анализа включает добавление одного реактива (CellTiter-Glo® Reagent) непосредственно к клеткам, которые культивируются в сывороточной среде. Этапы промывки клеток, удаления среды и многократного пипетирования не требуются. Система позволяет обнаружить минимум 15 клеток/лунку в 384-луночном формате через 10 минут после добавления реактива и перемешивания.

Гомогенный формат «добавить-перемешать-измерить» приводит к лизису клеток и образованию люминесцентного сигнала, пропорционального количеству присутствующего АТФ. Количество АТФ прямо пропорционально количеству клеток, которые присутствуют в культуре. Анализ CellTiter-Glo® генерирует люминесцентный сигнал «типа свечения», образующийся в результате люциферазной реакции, который обладает периодом полужизни, как правило, большим, чем пять часов, в зависимости от типа клеток и применяемой среды. Количество жизнеспособных клеток выражают в относительных единицах люминесценции (RLU, relative luminescence units). Субстрат, люциферин светлячков, подвергается окислительному декарбоксилированию рекомбинантной люциферазой светлячка с сопутствующим преобразованием АТФ в АМФ и образованием фотонов. Увеличение периода полужизни позволяет избежать необходимости применять устройства для ввода реактивов и обеспечивает гибкость обработки нескольких планшетов в непрерывном или периодическом режиме. Данный анализ пролиферации клеток можно применять в различных многолуночных форматах, например, в 96- или 384-луночном формате. Данные можно регистрировать люминометром или устройством CCD (camera imaging device, устройство для визуализации). Выход люминисценции представляют в виде относительных световых единицах (RLU, relative light units), измеренных в течение времени.

Антипролиферативное действие иллюстративных соединений формулы I измеряли в ходе анализа CellTiter-Glo® (пример 902) на нескольких линиях клеток опухоли. Для исследуемых соединений определяли значения ЕС50 активности. Диапазон клеточной активности in vitro составлял от приблизительно 100 нМ до приблизительно 10 мкМ. Определенные исследуемые соединения обладали значениями ЕС50, составляющими менее 1 микромоль (1 мкМ), по остановке пролиферации определенных линий клеток опухоли.

Определенные свойства всасывания, распределения, метаболизма и выведения измеряли для определенных иллюстративных соединений с помощью анализов, включающих: проницаемость Caco-2 (пример 903), клиренс гепатоцитов (пример 904), ингибирование цитохрома Р450 (пример 905), индукцию цитохрома Р450 (пример 906), связывание с белками плазмы (пример 907) и блокирование канала hERG (пример 908).

Изучали эффективность определенных иллюстративных соединений в исследованиях с увеличением дозы на модели голых мышей Taconic NCR, несущих опухоль (пример 909). Мышиную модель с подкожным ксенотрансплантатом клеток U-87 MG Merchant (внутрилабораторные производные клеток U-87 MG из ATCC (American Type Culture Collection, Американская коллекция типовых культур), Manassas, VA) применяли для исследования соединения формулы I в увеличивающихся дозах вместе с наполнителем (MCT, отрицательный контроль). Отсрочивание роста опухоли измеряли после перорального введения один раз в день в течение <28 дней. Изменение массы тела в течение курса лечения измеряли в качестве показателя безопасности. Также на этой же модели с подкожными ксенотрансплантатами опухоли изучали фармакокинетические и фармакодинамические ответы введения препарата в зависимости от дозы и от времени (пример 913).

Потенциал [свойства] соединений проникать через гематоэнцефалический барьер оценивали in vitro с применением клеток MDCK, стабильно трансфицированных P-гликопротеином (MDR1) или bcrp1 (пример 911). Проникновение соединения в головной мозг определяли in vivo в результате измерения концентраций соединения (пример 912) и/или в результате измерения модуляции пути передачи сигналов PI3K (пример 913) в головном мозге мышей после однократного BB (внутривенного) или перорального введения. Эффективность действия соединения на опухоли головного мозга измеряли в примере 914 на линии клеток GS-2 (полученная генно-инженерным способом линия клеток мультиформной глиобластомы человека (ГБМ), экспрессирующая люциферазу). Действие перорального введения соединения один раз в день на рост внутричерепных имплантатов GS-2 измеряли методом магнитно-резонансного исследования (MRI, magnetic resonance imaging). Мышам с ксенотрансплантатами опухоли клеток U-87 MG вводили лекарственный препарат или наполнитель, после чего образцы анализировали для определения ФК (фармакокинетики), ФД (фармакодинамики) и/или ИГХ (иммуногистохимии) (пример 915).

Были получены и охарактеризованы иллюстративные соединения формулы I №101-118, приведенные в таблице 1; также было изучено ингибирование указанными соединениями PI3K альфа (значения IC50 или Ki связывания с p110 альфа менее 1 микромоль, мкМ) и селективность в соответствии со способами согласно настоящему изобретению. Указанные соединения имеют следующие структуры и соответствующие наименования (ChemBioDraw Ultra, Version 11,0, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA).

Введение соединений формулы I

Соединения формулы I согласно настоящему изобретению можно вводить любым путем, подходящим для состояния, которое подвергают лечению. Подходящие пути включают пероральный, парентеральный (в том числе подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (включая буккальный и сублингвальный), вагинальный, внутрибрюшинный, внутрилегочный и интраназальный пути введения. В случае местной иммуносупрессивной терапии указанные соединения можно вводить посредством внутриочагового введения, включая перфузирование или осуществление каким-либо другим способом контакта имплантата с ингибитором перед трансплантацией. Следует принимать во внимание, что предпочтительный путь введения может варьировать, например, в зависимости от состояния реципиента. В том случае если соединение вводят перорально, его можно приготовить в состав в форме пилюли, капсулы, таблетки и т.д. с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. В том случае если соединение вводят парентерально, его можно приготовить в состав с фармацевтически приемлемым парентеральным наполнителем и получить в виде инъецируемой единичной лекарственной формы, как детально описано ниже.

Доза для лечения пациентов, которые являются людьми, может варьировать от приблизительно 10 мг до приблизительно 1000 мг соединения формулы I. Стандартная доза может составлять от приблизительно 100 мг до приблизительно 300 мг соединения. Доза может быть введена один раз в день (ОРД), два раза в день (ДРД) или более часто, в зависимости от фармакокинетических и фармакодинамических свойств, в том числе всасывания, распределения, метаболизма и выделения конкретного соединения. Кроме того, показатели токсичности могут влиять на дозу и режим введения. При пероральном введении пилюли, капсулы или таблетки можно принимать ежедневно или менее часто в течение определенного периода времени. Режим можно повторять для некоторого количества циклов терапии.

Способы лечения соединениями формулы I

Соединения формулы I согласно настоящему изобретению являются пригодными для лечения гиперпролиферативных заболеваний, состояний и/или нарушений, включая, но не ограничиваясь ими, такие заболевания, состояния и/или нарушения, которые характеризуются сверхэкспрессией липидкиназ, например, PI3-киназы. Соответственно, один аспект настоящего изобретения включает способы лечения или предотвращения заболеваний или состояний, которые можно лечить или которые можно предотвращать ингибированием липидкиназ, в том числе PI3. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения указанный способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или стереоизомера, геометрического изомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения пациент, который является человеком, получает лечение соединением формулы I и фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или наполнителем, причем указанное соединение формулы I присутствует в количестве, которое способно обнаруживаемо ингибировать активность PI3-киназы.

Один вариант реализации настоящего изобретения включает способ лечения рака у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению, причем указанный рак представляет собой рак молочной железы, яичника, матки, предстательной железы, яичка, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легкого, эпидермоидную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легкого (НМККЛ), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак кости, толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных протоков, карциному почки, рак почек, поджелудочной железы, миелоидные заболевания, лимфому, рак ворсистых клеток, щечной полости, носоглотки, глотки, губы, языка, ротовой полости, тонкой кишки, толстой и прямой кишок, толстой кишки, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина или лейкоз. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения указанный рак представляет собой рак головного мозга. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения указанный способ дополнительно включает введение пациенту дополнительного терапевтического агента, который выбирают из химиотерапевтического агента, противоангиогенного терапевтического агента, противовоспалительного агента, иммуномодулирующего агента, нейротропного фактора, агента для лечения сердечно-сосудистого заболевания, агента для лечения заболевания печени, противовирусного агента, агента для лечения заболеваний крови, агента для лечения диабета и агента для лечения иммунодефицитного состояния. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения дополнительный терапевтический агент представляет собой бевацизумаб.

Соединения формулы I можно также применять для лечения гиперпролиферативных заболеваний, которые характеризуются сверхэкспрессией протеинкиназ, таких как протеинкиназы, которые кодируются PIM; гены Pim-1, Pim-2 и Pim-3 (провирусный сайт инсерции вируса мышиной лейкимии Молони, Proviral insertion, Moloney) вовлечены в развитие лимфомы и солидной опухоли (Cuypers et al. (1984) Cell, vol. 37 (1) pp. 141-50; Selten et al. (1985) EMBO J. vol. 4 (7) pp. 1793-8; van der Lugt et al. (1995) EMBO J. vol. 14 (11) pp.2536-44; Mikkers et al. (2002) Nature Genetics, vol. 32 (1) pp. 153-9; van Lohuizen et al. (1991) Cell, vol. 65 (5) pp. 737-52.

Виды рака, которые можно подвергать лечению в соответствии со способами согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, рак молочной железы, яичника, матки, предстательной железы, яичка, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легкого, эпидермоидную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легкого (НМККЛ), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак кости, рак толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных протоков, карциному почки, миелоидные заболевания, лимфоидные заболевания, рак ворсистых клеток, щечной полости и глотки (ротовой полости), губы, языка, ротовой полости, глотки, тонкой кишки, толстой и прямой кишок, толстой кишки, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина и лейкоз.

Соединения формулы I могут быть пригодными для in vitro, in situ и in vivo диагностики или лечения клеток и организмов млекопитающих, или связанных патологических состояний, таких как системное и местное воспаление, иммуновоспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, угнетение иммунитета, отторжение трансплантатов органов, аллергии, язвенный колит, болезнь Крона, дерматит, астма, системная эритематозная волчанка, синдром Шегрена, множественный склероз, склеродерма/системный склероз, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), васкулит, ассоциированный с антителами против нейтрофилов в плазме (ANCA, anti-neutrophil cytoplasmic antibodies), хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), псориаз, а также для общего действия, направленного на защиту суставов.

Соединения формулы I могут быть пригодными для лечения состояний головного мозга и центральной нервной системы, которые требуют проникновения соединений через гематоэнцефалический барьер. Определенные соединения формулы I обладают благоприятными свойствами проникать через гематоэнцефалический барьер и поступать в головной мозг. Заболевания головного мозга, которые можно эффективно лечить соединениями формулы I, включают метастатирующие и первичные опухоли головного мозга, такие как глиобластома и меланомы.

Соединения формулы I могут быть пригодными для лечения заболеваний глаз, таких как влажная и сухая возрастная дегенерация макулы (ВДМ) и отек сетчатки, посредством локализированной доставки в глаз. Определенные соединения формулы I обладают благоприятными свойствами для доставки в глаз и поступления в глаз. Определенные соединения формулы I могут повышать эффективность и увеличивать длительность ответа на лечение влажной ВДМ в комбинации с ранибизумабом (LUCENTIS®, Genentech, Inc.) и бевацизумабом (AVASTIN®, Genentech, Inc.).

В другом аспекте настоящего изобретения предложено соединение согласно настоящему изобретению для применения при лечении заболеваний или состояний, описанных в настоящей заявке, у млекопитающего, например, человека, страдающего от такого заболевания или состояния. Также предложено применение соединения согласно настоящему изобретению для приготовления лекарственного препарата для лечения заболеваний и состояний, описанных в настоящей заявке, у теплокровного животного, такого как млекопитающее, например, человек, страдающий от подобного нарушения.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения согласно настоящему изобретению для производства лекарственного препарата для лечения рака, причем указанный рак представляет собой рак молочной железы, яичника, матки, предстательной железы, яичка, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легкого, эпидермоидную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легкого (НМККЛ), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак кости, толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных протоков, карциному почки, рака почек, поджелудочной железы, миелоидные заболевания, лимфому, рак ворсистых клеток, щечной полости, носоглотки, глотки, губы, языка, ротовой полости, тонкой кишки, толстой и прямой кишок, толстой кишки, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина или лейкоз.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения согласно настоящему изобретению для лечения рака, причем указанный рак представляет собой рак молочной железы, яичника, матки, предстательной железы, яичка, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легкого, эпидермоидную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легкого (НМККЛ), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак кости, толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных протоков, карциному почки, рака почек, поджелудочной железы, миелоидные заболевания, лимфому, рак ворсистых клеток, щечной полости, носоглотки, глотки, губы, языка, ротовой полости, тонкой кишки, толстой и прямой кишок, толстой кишки, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина или лейкоз.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено соединение согласно настоящему изобретению для применения при лечении рака, причем указанный рак представляет собой рак молочной железы, яичника, матки, предстательной железы, яичка, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легкого, эпидермоидную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легкого (НМККЛ), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легкого, рак кости, толстой кишки, аденому, рак поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных протоков, карциному почки, рака почек, поджелудочной железы, миелоидные заболевания, лимфому, рак ворсистых клеток, щечной полости, носоглотки, глотки, губы, языка, ротовой полости, тонкой кишки, толстой и прямой кишок, толстой кишки, прямой кишки, головного мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина или лейкоз.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено изобретение, как описано в настоящей заявке выше.

Фармацевтические композиции

С целью применения соединения формулы I для терапевтического лечения (включая профилактическое лечение) млекопитающих, в том числе людей, указанное соединение, как правило, приготавливают в состав согласно стандартной фармацевтической практике в виде фармацевтической композиции. Согласно данному аспекту в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Один вариант реализации настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, содержащую соединение согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, вещество, способствующее скольжению, разбавитель или эксципиент.

Один вариант реализации настоящего изобретения включает процесс для приготовления фармацевтической композиции, причем указанный процесс включает объединение соединения согласно настоящему изобретению с фармацевтически приемлемым носителем.

Один вариант реализации настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, описанную выше, также содержащую дополнительный терапевтический агент, который выбирают из химиотерапевтического агента, противовоспалительного агента, иммуномодулирующего агента, нейротропного фактора, агента для лечения сердечно-сосудистого заболевания, агента для лечения заболевания печени, противовирусного агента, агента для лечения заболеваний крови, агента для лечения диабета и агента для лечения иммунодефицитного состояния.

Стандартную композицию получают в результате смешивания соединения формулы I и носителя, разбавителя или эксцилиента. Подходящие носители, разбавители и эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники и включают материалы, такие как углеводы, воски, водорастворимые и/или поддающиеся разбуханию полимеры, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, воду и тому подобное. Выбор конкретного носителя, разбавителя или эксципиента, который будут применять, зависит от способа и цели, для достижения которой применяется соединение согласно настоящему изобретению. Растворители, как правило, выбирают из растворителей, которые признаются специалистами в данной области техники безопасными (GRAS, Generally Recognised as Safe) для введения млекопитающему. Как правило, безопасные растворители представляют собой нетоксичные водные растворители, такие как вода и другие нетоксичные растворители, которые являются растворимыми или поддающимися смешиванию с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 400, ПЭГ 300) и т.д., а также смеси указанных растворителей. Составы могут также включать один или несколько буферов, стабилизирующих веществ, поверхностно-активных веществ, увлажняющих веществ, смягчающих веществ, эмульгаторов, суспендирующих веществ, консервантов, антиоксидантов, веществ для придания непрозрачности, веществ, способствующих скольжению, технологических добавок, окрашивающих веществ, подслащивающих веществ, ароматизирующих добавок, вкусовых веществ и других известных добавок для обеспечения наилучшего внешнего вида лекарственного препарата (т.е. соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или облегчения изготовления фармацевтического препарата (т.е. лекарственного препарата). Составы могут быть приготовлены с применением общепринятых процедур растворения и перемешивания. Например, нерасфасованную (in-bulk) фармацевтическую субстанцию (т.е. соединение согласно настоящему изобретению или стабилизированную форму соединения формулы I (например, комплекс с производным циклодекстрина или другим известным агентом, способствующим комплексообразованию), растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или нескольких эксципиентов, описанных выше. Соединение согласно настоящему изобретению, как правило, приготавливают в фармацевтические лекарственные формы для обеспечения легко контролируемого введения дозы лекарственного препарата и для облегчения соблюдения пациентом предписанного режима.

Фармацевтическую композицию (или состав) можно упаковать рядом способов в зависимости от способа введения лекарственного препарата. Как правило, изделие для продажи включает контейнер, в который помещен фармацевтический состав в соответствующей форме. Подходящие контейнеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают материалы, такие как бутыли (пластиковые и стеклянные), саше, ампулы, полиэтиленовые пакеты, металлические цилиндрические банки и тому подобное. Контейнер может содержать наклейку для защиты от неумелого обращения для предотвращения несанкционированного доступа к содержимому упаковки. Кроме того, контейнер содержит внутри этикетку, в которой описано содержание контейнера. Этикетка может также содержать информацию о подходящих мерах предосторожности.

Фармацевтические композиции соединений согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены для различных путей и типов введения. Например, соединение формулы I, обладающее требуемой степенью чистоты, можно необязательно смешивать с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.) в форме лиофилизированного состава, порошка, полученного в результате перемалывания, или водного раствора. Приготовление композиции можно проводить путем смешивания соединения при температуре окружающей среды при соответствующем pH и при требуемой степени чистоты с физиологически приемлемыми носителями, т.е. носителями, которые являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозах и концентрациях. Величина pH композиции зависит, в основном, от конкретного применения и концентрации соединения, но может изменяться в пределах, например, от приблизительно 3 до приблизительно 8. Приготовление состава в ацетатном буфере при pH 5 представляет собой подходящий вариант реализации настоящего изобретения.

Соединение согласно настоящему изобретению для применения в настоящей заявке является предпочтительно стерильным. В частности, составы, предназначенные для введения in vivo, должны быть стерильными. Такая стерилизация легко достигается в результате фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны.

Соединение, как правило, можно хранить в виде твердой композиции, лиофилизированного состава или в виде водного раствора.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, содержащие соединения формулы I, будут приготовлены в состав, разделены на дозы и введены определенным образом, т.е. в количествах, в концентрациях, при режиме, курсе, с наполнителями и путем введения, которые согласуются с надлежащей медицинской практикой. Факторы, которые необходимо учитывать в данном контексте, включают конкретное нарушение, которое подвергают лечению, конкретное млекопитающее, которое получает лечение, клиническое состояние пациента, причину нарушения, участок доставки агента, способ введения, режим введения, а также другие факторы, известные практикующим врачам. «Терапевтически эффективное количество» соединения, которое будет введено, будет определяться указанными факторами, и такое «терапевтически эффективное количество» представляет собой минимальное количество, необходимое для предотвращения, облегчения или лечения нарушения, опосредованного фактором коагуляции. Такое количество предпочтительно является меньшим, чем количество, которое является токсичным по отношению к хозяину или делает хозяина значительно более подверженным кровотечению. В качестве общей нормы, первоначальное фармацевтически эффективное количество соединения формулы I вводят парентерально в дозе, которая находится в диапазоне приблизительно 0,01-100 мг/кг, а именно приблизительно от 0,1 до 20 мг/кг массы тела пациента в день, причем стандартный первоначальный диапазон применяемого соединения составляет от 0,3 до 15 мг/кг/день.

Приемлемые разбавители, носители, эксципиенты и стабилизаторы являются нетоксичными по отношению к реципиентам в используемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид, гексаметионина хлорид, бензалкония хлорид, бензетония хлорид, фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен, катехол, резорцин, циклогексанол, 3-пентанол; и м-крезол); полипептиды с низкой молекулярной массой (менее чем приблизительно 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота); сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Активные фармацевтические компоненты можно также помещать в микрокапсулы, полученные, например, методом коацервации или межфазной полимеризации, например, микрокапсулы из гидроксиметилцеллюлозы или желатина и поли((метилметакрилата), соответственно; в коллоидные системы для доставки лекарственных препаратов (например, липосомы, микросферы альбумина, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики раскрыты в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

Можно приготовить препараты соединения формулы I пролонгированного действия. Подходящие примеры препаратов пролонгированного действия включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих соединение формулы I, в которых указанные матрицы присутствуют в виде формованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц с пролонгированным действием включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтил-метакрилат) или поли(виниловый спирт)), полилактиды (патент США №3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты - гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (пригодные для инъекции микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты - гликолевой кислоты и ацетата лейпролида), а также поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту.

Составы включают такие составы, которые являются подходящими для путей введения, подробно описанных в настоящей заявке. Для удобства составы могут быть представлены в единичной лекарственной форме и могут быть приготовлены любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Описание методик и составов, как правило, можно найти в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Данные способы включают этап обеспечения смешивания активного компонента с носителем, который состоит из одного или нескольких вспомогательных компонентов. Как правило, указанные составы приготовлены в результате создания равномерной и однородной смеси активного компонента с жидкими носителями или тонкодисперсными твердыми носителями или обоими указанными носителями, а затем, при необходимости, в результате формования продукта.

Составы соединения формулы I, подходящие для перорального введения, могут быть приготовлены в виде дискретных единиц, таких как пилюли, капсулы, саше или таблетки, каждая из которых содержит заданное количество соединения формулы I.

Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в соответствующем устройстве активного компонента, находящегося в сыпучем состоянии, например, в виде порошка или гранул, которые можно смешать со связующим, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим веществом. Таблетки, полученные путем формования, могут быть приготовлены формованием в соответствующем устройстве смеси порошкообразного активного компонента, смоченного жидким инертным разбавителем. Таблетки можно необязательно покрыть оболочкой либо на таблетки можно нанести риски; таблетки можно необязательно приготовить таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение из них активного компонента.

Таблетки, пастилки, пастилки для рассасывания, водные или масляные суспензии, дисперсные порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сироп или эликсир могут быть приготовлены для перорального применения. Составы соединения формулы I, предназначенные для перорального применения, могут быть получены согласно любому известному способу приготовления фармацевтически приемлемых составов; и такие составы могут содержать один или несколько агентов, включая: подслащивающие вещества, ароматизирующие вещества, окрашивающие вещества и стабилизирующие вещества, с целью сделать внешний вид препарата более приемлемым. Таблетки, содержащие активный компонент в сочетании с нетоксичным фармацевтически приемлемым эксципиентом, который является подходящим для изготовления таблеток, являются приемлемыми. Данные эксципиенты могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия; гранулирующие и разрыхляющие вещества, например, кукурузный крахмал или альгиновую кислоту; связующие вещества, например, крахмал, желатин или аравийскую камедь; и смазывающие вещества, например, стеарат магния, стеариновую кислоту или тальк. Таблетки можно не покрывать или покрывать оболочкой с помощью известных методик, включая методики инкапсулирования для замедления разрушения и всасывания в желудочно-кишечном тракте, и посредством этого обеспечивать пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, можно применять вещество, замедляющее время, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, само по себе или совместно с воском.

Для лечения глаз или других внешних тканей, например, ротовой полости и кожи, можно применять составы в виде мази или крема для наружного применения, содержащего активный компонент (или компоненты) в количестве, которое составляет, например, от 0,075 до 20% масс./масс. В том случае, если композиция представляет собой мазь, активный компонент используют в сочетании с парафиновой или смешивающейся с водой мазевой основой. В качестве альтернативы, активные компоненты могут быть приготовлены в состав в виде крема с применением в качестве основы крема масла в воде.

При желании водная фаза основы крема может содержать многоатомный спирт, т.е. спирт, содержащий две или более гидроксильные группы, например, пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннитол, сорбитол, глицерол, полиэтиленгликоль (в том числе ПЭГ 400), а также смеси указанных спиртов. Составы для местного применения могут желательно содержать соединение, которое увеличивает абсорбцию или проникновение активного компонента через кожу или другие подвергаемые воздействию поверхности. Примеры таких соединений, повышающих способность активных компонентов проникать через кожу, включают диметилсульфоксид и родственные ему аналоги.

Масляная фаза эмульсий согласно настоящему изобретению может состоять из известных компонентов и может быть приготовлена известными способами. Хотя указанная фаза может содержать только эмульгатор, желательно, чтобы она содержала смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом, или как с жиром, так и с маслом. Предпочтительно в состав включают гидрофильный и липофильный эмульгатор, который выступает в качестве стабилизатора. Вместе взятые эмульгатор (эмульгаторы) с добавлением стабилизатора (стабилизаторов) или без них образуют так называемый эмульгирующий воск, и данный воск с маслом и жиром образуют так называемую эмульгирующую основу мази, образующую масляную дисперсную фазу составов-кремов. Подходящие для применения в составах согласно настоящему изобретению эмульгаторы и стабилизаторы включают Tween® 60, Span® 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.

Водные суспензии соединения формулы I содержат активные материалы, смешанные с эксципиентами, подходящими для получения водных суспензий. Данные эксципиенты включают суспендирующие вещества, например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, кроскармеллозу, повидон, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовую камедь и аравийскую камедь; и диспергирующие или смачивающие вещества, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами (например, полиоксиэтиленстеарат), продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, образованными из жирных кислот и ангидридов гексита (например, моноолеата полиоксиэтиленсорбитана). Указанная водная суспензия может также содержать один или несколько консервантов, таких как этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, одно или несколько окрашивающих веществ, одно или несколько ароматизирующих веществ и одно или несколько подслащивающих веществ, таких как сахароза или сахарин.

Фармацевтические композиции соединений формулы I могут находиться в форме стерильного инъецируемого препарата, такого как стерильная инъецируемая водная или масляная суспензия. Данная суспензия может быть приготовлена в состав в соответствии с известными в науке способами, с применением тех подходящих диспергирующих или смачивающих веществ, которые упоминались выше. Стерильный инъецируемый препарат может также представлять собой стерильный раствор или суспензию в нетоксичном, приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле, или может быть приготовленным в виде лиофилизированного порошка. В качестве приемлемых носителей и растворителей можно применять воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла, как правило, применяют в качестве растворителей или суспендирующих сред. Для этой цели обычно можно применять любые мягкие нелетучие масла, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, для приготовления препаратов для инъекций можно аналогичным образом применять жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Количество активного компонента, которое можно объединить с материалом-носителем для получения единичной лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от субъекта, лечение которого проводят, и конкретного пути введения. Например, состав с замедленным высвобождением, предназначенный для перорального введения людям, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного материала, объединенного с соответствующим и пригодным количеством материала-носителя, которое может варьировать от приблизительно 5 до приблизительно 95 масс. % от общей массы композиции.

Фармацевтическую композицию можно приготовить для обеспечения простоты измерения количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенной инфузии, может содержать от приблизительно 3 до 500 мкг активного компонента на миллилитр раствора для того, чтобы обеспечить инфузию подходящего объема при потоке приблизительно 30 мл/ч.

Составы, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъецируемые растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые придают композициям изотоничность с кровью пациента; а также водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие и загущающие вещества.

Составы, подходящие для местного введения в глаз, также включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в особенности в водном растворителе для активного компонента. Активный компонент предпочтительно присутствует в таких составах в концентрации от приблизительно 0,5 до 20% масс./масс., приблизительно от 0,5 до 10% масс./масс. или приблизительно 1,5% масс./масс.

Составы, подходящие для местного введения в полость рта, включают пастилки для рассасывания, содержащие активный компонент в ароматизированной основе, обычно сахарозе и аравийской камеди или траганте; пастилки, содержащие активный компонент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахарозе и аравийской камеди; а также жидкости для полоскания рта, содержащие активный компонент в подходящем жидком носителе. Составы для ректального введения могут быть приготовлены в виде суппозиториев на подходящей основе, например, кокосовом масле или салицилате.

Составы, подходящие для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне от 0,01 до 500 мкм (включая размер частиц в диапазоне от 0,01 до 500 мкм с шагом, например, 0,5, 1, 30 мкм, 35 мкм и т.д.); данные составы вводят путем быстрых ингаляций через носовой канал или путем ингаляций через ротовую полость так, чтобы достичь альвеолярных мешочков. Подходящие составы включают водные или масляные растворы активного компонента. Составы, подходящие для введения в виде аэрозолей или сухих порошков, могут быть приготовлены в соответствии с обычными способами и могут быть введены с другими терапевтическими агентами, такими как соединения, ранее используемые для лечения или профилактики нарушений, как описано ниже.

Составы, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены пессариями, тампонами, кремами, гелями, пастами, пенками или спреями, которые содержат в дополнение к активному компоненту (компонентам) эксципиенты, о которых известно, что они являются подходящими в данной области техники.

Составы можно упаковывать в контейнеры на одну или несколько доз, например, в запаянные ампулы или пузырьки, и можно хранить в высушенном вымораживанием (лиофилизованном) состоянии, которое требует только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекции, непосредственно перед применением. Импровизированные инъекционные растворы и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного вида. Предпочтительные составы для единичного дозирования представляют собой такие составы, которые содержат единичную дневную дозу или единичную дневную поддозу активного компонента, как приведено в описании выше, или их соответствующие части.

В настоящем изобретении также предложены ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный компонент, как определено выше, вместе с пригодным для ветеринарных целей носителем. Пригодные для ветеринарных целей носители являются материалами, пригодными для целей введения композиции, и могут представлять собой твердые вещества, жидкости или газообразные материалы, которые, иначе, являются инертными или приемлемыми в области ветеринарии и являются совместимыми с активным компонентом. Данные ветеринарные композиции могут быть введены парентерально, перорально или посредством любого другого желаемого пути.

Комбинированная терапия

Соединения формулы I можно применять сами по себе или в комбинации с другими терапевтическими агентами для лечения заболевания или нарушения, описанного в настоящей заявке, такого как гиперпролиферативное нарушение (например, рак). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения соединение формулы I объединяют в фармацевтическом комбинированном составе или в режиме введения доз в виде комбинированной терапии со вторым соединением, которое обладает противогиперпролиферативными свойствами или которое является пригодным для лечения гиперпролиферативного нарушения (например, рака). Второе соединение фармацевтического комбинированного состава или комбинированного режима введения доз предпочтительно обладает комплементарной активностью по отношению к соединению формулы I так, что данные соединения не оказывают неблагоприятного действия друг на друга. Такие соединения, предпочтительно, присутствуют при комбинированной терапии в количествах, которые являются эффективными для достижения предполагаемой цели. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению содержит соединение формулы I в комбинации с химиотерапевтическим агентом, таким как агенты, описанные в настоящей заявке.

Комбинированную терапию можно осуществлять в режиме одновременного или последовательного введения. При последовательном введении комбинацию можно вводить двумя или более чем двумя введениями. Комбинированное введение включает совместное введение с применением отдельных составов или одного фармацевтического состава, а также последовательное введение в любом порядке, при котором предпочтительно существует период времени, когда оба (или все) из активных компонентов одновременно проявляют свою биологическую активность.

Подходящими дозами для любого из вышеуказанных совместно вводимых агентов являются такие дозы, которые применяют в настоящее время, и данные дозы могут быть уменьшены за счет комбинированного действия (синергии) нового обнаруженного агента и других химиотерапевтических агентов или вариантов лечения.

Комбинированная терапия может обеспечивать «синергию» и быть «синергичной», т.е. эффект, достигаемый при совместном использовании активных компонентов, является большим по сравнению с суммой эффектов, которые являются результатом применения соединений по отдельности. Синергический эффект можно обеспечить, когда активные компоненты: (1) приготавливают в состав совместно и вводят или доставляют одновременно в комбинированном единичном лекарственном составе; (2) вводят по очередности или параллельно в виде отдельных составов или (3) вводят согласно другому режиму. При доставке посредством терапии с чередующимися введениями синергический эффект можно достичь, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например, посредством различных инъекций в отдельных шприцах, в отдельных пилюлях или капсулах или в отдельных инфузиях. Как правило, во время терапии с чередующимися введениями эффективную дозу каждого активного компонента вводят последовательно, например, поочередно, тогда как в комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных компонентов вводят одновременно.

Согласно конкретному варианту реализации противораковой терапии соединение формулы I или стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит или фармацевтически приемлемую соль или пролекарство указанного соединения можно объединить с другими химиотерапевтическими, гормональными агентами или агентами на основе антител, таким как агенты, описанные в настоящей заявке, а также объединить с хирургическим лечением и лучевой терапией. Таким образом, комбинированные терапии согласно настоящему изобретению включают введение по меньшей мере одного соединения формулы I или стереоизомера, геометрического изомера, таутомера, сольвата, метаболита или фармацевтически приемлемой соли или пролекарства указанного соединения, и применение по меньшей мере одного другого способа лечения рака. Количества соединения (соединений) формулы I и другого фармацевтически активного химиотерапевтического агента (агентов) и относительное время их введения будут выбраны для достижения желаемого комбинированного терапевтического действия.

Метаболиты соединений формулы I

Также объем настоящего изобретения охватывает продукты метаболизма соединений формулы I in vivo, описанные в настоящей заявке. Данные продукты могут образовываться, например, в результате окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, этерификации, деэтерификации, ферментативного расщепления и тому подобное, введенного соединения. Соответственно, настоящее изобретение включает метаболиты соединений формулы I, в том числе соединения, полученные в результате процессов, которые включают осуществление контакта соединения согласно настоящему изобретению с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для получения продукта метаболизма указанного соединения.

Продукты метаболизма обнаруживают, как правило, путем получения меченного радиоактивной меткой (например, изотопами 14C или 3H) соединения согласно настоящему изобретению, введения его парентеральным способом в поддающейся обнаружению дозе (например, большей, чем приблизительно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна, или человеку, предоставления достаточного времени для протекания процесса метаболизма (как правило, от приблизительно 30 секунд до 30 часов) и выделения продуктов превращения указанного соединения из мочи, крови или других биологических образцов. Данные продукты легко выделить, поскольку они являются меченными (другие продукты выделяют с применением антител, способных связываться с эпитопами, сохранившимися на метаболите). Структуры метаболитов определяют общепринятыми способами, например, в ходе анализа методами МС (масс-спектрометрии), ЖХ/МС (жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии) или ЯМР (ядерного магнитного резонанса). Как правило, анализ метаболитов осуществляют тем же способом, что и общепринятые исследования метаболизма лекарственных препаратов, хорошо известные специалисту в данной области техники. Продукты метаболизма, поскольку они иначе не обнаруживаются in vivo, могут применяться в диагностических анализах для терапевтического введения доз соединения согласно настоящему изобретению.

Изделия

Согласно другому варианту реализации в настоящем изобретении предложено изделие, или «набор», содержащий материалы, подходящие для лечения заболеваний и нарушений, описанных выше. Указанный набор включает контейнер, содержащий соединение формулы I. Набор может дополнительно включать этикетку на контейнере или листок-вкладыш внутри контейнера. Термин «листок-вкладыш» используется в отношении к инструкциям, которые традиционно вкладывают в серийные упаковки терапевтических препаратов и которые содержат информацию относительно показаний к применению, применения, доз, введения, противопоказаний и/или предостережений, касающихся применения таких терапевтических препаратов.

Один вариант реализации настоящего изобретения включает набор для лечения состояния, опосредованного PI3K, содержащий соединение согласно настоящему изобретению и инструкции по его применению.

Подходящие контейнеры включают, например, бутыли, флаконы, шприцы, блистерную упаковку и т.д. Контейнер может быть изготовлен из различных материалов, таких как стекло или пластик. В контейнере может содержаться соединение формулы I или состав, содержащий указанное соединение, которые являются эффективными для лечения состояния; указанный контейнер может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой мешок для внутривенных растворов или флакон, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой соединение формулы I. Этикетка или листок-вкладыш содержат указание на то, что данную композицию применяют для лечения выбранного состояния, такого как рак. Кроме того, этикетка или листок-вкладыш могут содержать указания на то, что пациент, который получает лечение, представляет собой пациента, имеющего нарушение, такое как гиперпролиферативное нарушения, нейродегенерация, гипертрофия сердца, боль, мигрень или нейротравматическое заболевание или осложнение. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения этикетка или листки-вкладыши могут содержать указания на то, что композицию, содержащую соединение формулы I, можно применять для лечения нарушения, которое является следствием аномального роста клеток. Этикетка или листок-вкладыш могут содержать указания на то, что указанную композицию можно применять для лечения других нарушений. В качестве альтернативы или в дополнение к этому изделие может дополнительно включать в себя второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI, bacteriostatic water for injection), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера и раствор декстрозы. Указанное изделие может дополнительно содержать другие вещества, которые являются желательными с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Набор может дополнительно включать указания по введению соединения формулы I и, при его наличии, второго фармацевтического состава. Например, если набор включает первую композицию, содержащую соединение формулы I, и вторую фармацевтическую композицию, указанный набор может дополнительно включать указания по одновременному, последовательному или раздельному ведению первой и второй фармацевтических композиций пациенту, который нуждается в лечении.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения наборы являются подходящими для доставки твердых форм соединения формулы I для перорального введения, таких как таблетки или капсулы. Данный набор предпочтительно содержит несколько единичных лекарственных форм. Данные наборы могут содержать карточку с дозами, ориентированными в порядке их предполагаемого применения. Примером такого набора является «блистерная упаковка». Блистерные упаковки хорошо известны в упаковочной промышленности и широко применяются для упаковки единичных фармацевтических лекарственных форм. При желании, блистерная упаковка может быть снабжена памяткой, например, в виде чисел, букв или других знаков, или календарем-вкладышем, в котором указаны дни в схеме лечения, в которые могут быть введены дозы.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения указанный набор может содержать (а) первый контейнер с помещенным в него соединением формулы I; и необязательно (b) второй контейнер с помещенным в него вторым фармацевтическим составом, причем указанный второй фармацевтический состав содержит второе соединение с противогиперпролиферативной активностью. В качестве альтернативы или в дополнение к этому набор может дополнительно включать третий контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера и раствор декстрозы. Указанный контейнер может дополнительно содержать другие вещества, которые являются желательными с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Согласно другим определенным вариантам реализации настоящего изобретения, в которых набор содержит композицию формулы I и второй терапевтический агент, указанный набор может содержать контейнер для отдельных композиций, такой как разделенный на секции флакон или разделенный на секции пакет из фольги, однако отдельные композиции также могут находиться в едином, неразделенном контейнере. Как правило, набор содержит указания по введению отдельных компонентов. Форма набора является особенно подходящей в тех случаях, когда отдельные компоненты предпочтительно вводят в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), вводят при различных интервалах введения доз или в тех случаях, когда по предписанию врача требуется титрование отдельных компонентов комбинации.

Получение соединений формулы I

Трициклические соединения формулы I можно синтезировать в результате синтетических путей, которые включают процессы, аналогичные процессам, хорошо известным в области химии, в частности, в свете описания, содержащегося в настоящей заявке. Исходные материалы являются, как правило, доступными из коммерческих источников, таких как Aid rich Chemicals (Milwaukee, WI), или их легко приготовить с применением способов, хорошо известных специалисту в данной области техники (например, приготовить с применением способов, в общем смысле описанных в руководствах Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), или Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, включая приложения (также доступные в онлайн базе данных Beilstein).

Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения соединения формулы I можно легко приготовить с применением хорошо известных процедур для приготовления гетероциклических соединений, описанных в руководствах Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, например, Volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9): 1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41: 1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12): 1328-31, (1990).

Соединения формулы I можно приготовить по отдельности или в виде компонентов библиотек, содержащих по меньшей мере 2, например, от 5 до 1000 соединений, или от 10 до 100 соединений. Библиотеки соединений формулы I могут быть приготовлены посредством комбинаторного подхода «разделения и смешивания» («split and mix») или в результате множественных параллельных синтезов с применением жидкофазной или твердофазной химии, с помощью процедур, известных специалистам в данной области техники. Вследствие этого согласно следующему аспекту настоящего изобретения предложена библиотека соединений, содержащая по меньшей мере 2 соединения или фармацевтически приемлемые соли соединений.

С целью иллюстрации в разделе «Общие процедуры» представлены общие способы, которые можно применять для получения соединений формулы I, а также ключевые промежуточные продукты. Раздел «Примеры» содержит более детальное описание отдельных этапов реакции. Специалистам в данной области техники следует понимать, что для синтеза соединений согласно настоящему изобретению можно использовать другие пути синтеза. Несмотря на то, что конкретные исходные вещества и реактивы представлены на схемах, в «Общих процедурах» и «Примерах», для обеспечения разнообразия производных и/или условий реакции можно легко использовать другие аналогичные исходные вещества и реактивы. Кроме того, многие из соединений, полученных описанными ниже способами, можно дополнительно модифицировать в свете данного описания с применением стандартных химических методов, хорошо известных специалистам в данной области техники.

При получении соединений формулы I может потребоваться защита удаленной функциональной группы (например, первичного или вторичного амина) промежуточных продуктов. Потребность в такой защите варьирует в зависимости от природы удаленной функциональной группы и условий способа получения. Подходящие аминозащитные группы включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (ВОС), бензилоксикарбонил (CBz) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Потребность в такой защите легко определяется специалистом в данной области техники. Общее описание защитных групп и их применения см. в руководстве Т.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

Способы разделения

При использовании любого из способов синтеза для получения соединений формулы I может быть предпочтительно разделить продукты реакции друг от друга и/или от исходных материалов. Целевые продукты каждого этапа или серии этапов разделяют и/или очищают (здесь и далее разделяют) до желаемой степени гомогенности при помощи широко известных в данной области техники методик. Как правило, подобное разделение включает многофазную экстракцию, кристаллизацию раствора или смеси растворов, дистилляцию, сублимацию или хроматографию. Хроматография может включать любое количество методов, в том числе, например: обращенно-фазовую и нормально-фазовую; эксклюзионную; ионообменную хроматографию; методы и устройства для жидкостной хроматографии высокого, среднего и низкого давления; малообъемную аналитическую хроматографию; хроматографию на псевдоподвижном слое (SMB, simulated moving bed) и препаративную тонкослойную или толстослойную хроматографию, а также методики малообъемной тонкослойной и флэш-хроматографии.

Другой класс способов разделения включает обработку реакционной смеси реактивом, выбранным с целью связывания целевого продукта, непрореагировавшего исходного материала, побочного продукта реакции или тому подобное, или с целью обеспечения возможности разделения указанных соединений иным образом. Подобные реактивы включают адсорбенты или абсорбенты, такие как активированный уголь, молекулярные сита, ионообменная среда или тому подобное. В качестве альтернативы, указанные реактивы могут представлять собой кислоты в случае, если материал является основанием, основания в случае, если материал является кислотой, связывающие реактивы, такие как антитела, связывающие белки, селективные хелаторы, такие как краун-эфиры, реактивы выделения ионов жидкость-жидкость (LIX, liquid/liquid ion extraction reagents) или тому подобное.

Выбор подходящих способов разделения зависит от природы используемых материалов. Например, температура кипения и молекулярная масса имеют значение при дистилляции и сублимации, наличие или отсутствие полярных функциональных групп имеют значение при хроматографии, стабильность материалов в кислой и щелочной среде имеет значение при многофазной экстракции и тому подобное. Специалисту в данной области техники будет нетрудно выбрать методики, с помощью которых можно с наибольшей вероятностью достичь желаемого разделения.

Смеси диастереомеров могут быть разделены на отдельные диастереомеры на основании их физико-химических различий методами, хорошо известными специалисту в данной области техники, такими как хроматография и/или фракционная кристаллизация. Энантиомеры могут быть разделены путем превращения смеси энантиомеров в смесь диастереоизомеров в результате реакции с подходящим оптически активным соединением (например, хиральным вспомогательным веществом, таким как хиральный спирт или хлорид кислоты Мошера), разделения диастереомеров и превращения (например, гидролиза) отдельных диастереоизомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Также некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут представлять собой атропоизомеры (например, замещенные биарилы), которые также рассматриваются в качестве части настоящего изобретения. Энантиомеры также можно разделить при помощи хиральной колонки ВЭЖХ.

Отдельный стереоизомер, например, энантиомер, по существу не содержащий своего стереоизомера, может быть получен путем разделения рацемической смеси с применением такого метода, как образование диастереомеров при использовании оптически активных разделяющих агентов (Eliel, Е. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C.H., (1975) J. Chromatogr., 113(3): 283-302). Рацемические смеси хиральных соединений согласно настоящему изобретению могут быть разделены и выделены любым подходящим способом, включая: (1) образование ионных диастереоизомерных солей с хиральными соединениями и их разделение путем фракционной кристаллизации или других методов, (2) образование диастереоизомерных соединений с хиральными реактивами, используемыми для получения производных, разделение диастереомеров и превращение в чистые стереоизомеры, и (3) разделение по существу чистых или обогащенных стереоизомеров напрямую в хиральных условиях. См.: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).

При применении способа (1) диастереоизомерные соли могут быть получены путем реакции энантиомерно чистых хиральных оснований, таких как бруцин, хинин, эфедрин, стрихнин, α-метил-β-фенилэтиламин (амфетамин) и тому подобное, с асимметричными соединениями, содержащими кислотные функциональные группы, такими как карбоновая кислота и сульфоновая кислота. Разделение диастереоизомерных солей можно спровоцировать путем фракционной кристаллизации или ионной хроматографии. При разделении оптических изомеров аминосоединений добавление хиральных карбоновых или сульфоновых кислот, таких как камфорсульфоновая кислота, винная кислота, миндальная кислота или молочная кислота, может привести к образованию диастереоизомерных солей.

В качестве альтернативы, субстрат, который подвергают разделению согласно способу (2), вводят в реакцию с одним энантиомером хирального соединения с целью образования пары диастереоизомеров (Е. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322). Диастереоизомерные соединения могут быть получены путем реакции асимметричных соединений с энантиомерно чистыми хиральными реактивами, используемыми для получения производных, такими как производные ментила, с последующим разделением диастереомеров и гидролизом с получением чистого или обогащенного энантиомера. Способ определения оптической чистоты включает приготовление сложных хиральных эфиров рацемической смеси, таких как сложный эфир ментила, например, (-) ментилхлорформиат, в присутствии основания или сложного эфира Мошера, α-метокси-α-(трифторметил)фенилацетата (Jacob III. J. Org. Chem., (1982) 47: 4165), и анализ спектра 1H-ЯМР на наличие двух атропизомерных энантиомеров или диастереомеров. Стабильные диастереомеры атропизомерных соединений могут быть разделены и выделены при помощи обращенно-фазовой и нормально-фазовой хроматографии, после применения методов разделения атропизомерных нафтилизохинолинов (международная заявка WO 96/15111). При использовании способа (3) рацемическую смесь двух энантиомеров можно разделить при помощи хроматографии с применением хиральной неподвижной фазы ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513: 375-378). Обогащенные или очищенные энантиомеры могут быть разделены с помощью способов, используемых для разделения других хиральных молекул с асимметричными атомами углерода, например, оптическим вращением или круговым дихроизмом.

Общие процедуры получения

Реакция сочетания Сузуки:

Реакция сочетания типа Сузуки является пригодной для присоединения моноциклического гетероарила, конденсированного бициклического гетероцикла, конденсированного бициклического гетероарила или фенила во втором положении пиримидинового кольца 2-хлорпиримидина 1, промежуточного соединения для получения соединения формулы 1. Например, 1 можно объединить с арилом или гетероарилборонатным реактивом 2, где R представляет собой Н или защищенный боронат, такой как пинакол. Например, 1,5 эквивалентов 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 24 растворяют в приблизительно 3 эквивалентах карбоната натрия в виде приблизительно 1 молярного раствора в воде и приблизительно равном объеме ацетонитрила. Добавляют каталитическое количество или более реактива, содержащего низковалентный палладий, такого как дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия (II), с получением 3. Заместители R1', R2', R3' могут представлять собой R1, R2, R3 как определено, или защищенные формы либо предшественники указанных соединений.

Вместо указанного индазольного эфира бороновой кислоты можно применять ряд бороновых кислот или бороновых сложных эфиров. Также в качестве альтернативы можно защищать атом азота индазола, например, N-THP-защищенное соединение 25. В некоторых случаях для регулирования pH водного слоя можно применять ацетат калия вместо карбоната натрия. Реакция сочетания Сузуки в присутствии палладия может быть оптимизирована и/или ускорена в условиях микроволнового реактора. Реакционную смесь можно нагреть до температуры приблизительно 100-150°C под давлением в микроволновом реакторе, таком как Biotage Optimizer (Biotage, Inc.), в течение от 10 до 30 минут. Затем содержимое охлаждают, концентрируют и экстрагируют этилацетатом или другим органическим растворителем. После выпаривания органического слоя продукты реакции сочетания Сузуки 3 можно очистить на геле диоксида кремния или методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Ряд палладиевых катализаторов можно применять в опосредованной палладием реакции сочетания Сузуки галида 1 с бориновой кислотой или сложным эфиром 2, таким как 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазол 24 или 4-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил(1,3,2-диоксаборолан-2-ил))пиримидин-2-иламин 26. В реакции сочетания Сузуки можно применять низковалентные катализаторы Pd(II) и Pd(0), в том числе PdCl2(PPh3)2, Pd(t-Bu)3, PdCl2 dppf CH2Cl2, Pd(PPh3)4, Pd(OAc)/PPh3, Cl2Pd[(Pet3)]2, Pd(DIPHOS)2, Cl2Pd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2, Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(фурил)3, Cl2Pd[P(фурил)3]2, Cl2Pd(PmePh2)2, Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2, и инкапсулированные катализаторы Pd EnCat™ TPP30 и Pd(II)EnCat™ BINAP30 (патент США US 2004/0254066). Один подобный палладиевый катализатор реакции Сузуки представляет собой [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II), комплекс с дихлорметаном, представленный как Pd (dppf)Cl2.

Примеры

Химические реакции, описанные в примерах, можно легко приспособить для получения ряда других ингибиторов PI3K согласно настоящему изобретению, и подразумевается, что альтернативные способы получения соединений согласно настоящему изобретению включены в объем настоящего изобретения. Например, синтез отсутствующих в примерах соединений согласно настоящему изобретению можно успешно проводить с помощью модификаций, очевидных специалистам в данной области техники, например, с помощью соответствующей защиты реакционноспособных функциональных групп, применения других подходящих реактивов, известных в данной области техники, отличных от описанных, и/или осуществления стандартных изменений условий реакций. В качестве альтернативы, другие реакции, раскрытые в настоящем изобретении или известные в данной области техники, будут считаться обладающими применимостью для получения других соединений согласно настоящему изобретению.

В примерах, описанных ниже, если не указано обратное, все температуры приводятся в градусах Цельсия. Реактивы получали из коммерческих источников, таких как Sigma Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI или Maybridge, и применяли без дополнительной очистки, если не указано обратное. Реакции, приведенные ниже, как правило, проводили при избыточном давлении азота или аргона или с осушающей трубкой (если не указано обратное) в безводных растворителях, и реакционные колбы, как правило, снабжали резиновой мембраной для введения субстратов и реактивов через шприц. Стеклянную посуду сушили в печи и/или сушили нагреванием. Колоночную хроматографию проводили на системе Biotage (производитель: Dyax Corporation), содержащей колонку с гелем диоксида кремния, или на картридже SEP РАК® с диоксидом кремния (Waters). 1Н-ЯМР спектры регистрировали при 400 МГц в растворах дейтерированного CDCl3, d6-DMSO, CH3OD или d6-ацетона (представлены в м.д. (миллионных долях)) с применением хлороформа в качестве внутреннего стандарта (7,25 м.д.). При регистрации мультиплетности пиков применяли следующие сокращения: с (синглет), д (дублет), т (триплет), м (мультиплет), уш. (уширенный), дд (дублет дублетов), дт (дублет триплетов). Константы взаимодействия, в случае, когда они приводятся, представлены в герцах (Гц).

Анализ ВЭЖХ проводили следующими иллюстративными методами:

(A) ЖХ/МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия), короткий метод - время анализа 10 мин

ВЭЖХ-Agilent 1200
Подвижная фаза A Вода с 0,05% TFA (трифторуксусной кислотой)
Подвижная фаза B Ацентонитрил с 0,05% TFA
Колонка Agilent ZORBAX SD-C18, 1,8 мкм, 2,1×30 мм
Температура колонки 40 градусов C
Градиент ЖХ 3-95% B через 8,5 мин, 95% через 2,5 мин
Скорость потока ЖХ 400 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора 220 нм и 254 нм

Масс-спектрометрия - Agilent quadrupole 6140

ESI (electrospray ionization, ионизация
Ионизация электроспрея) положительная
Диапазон сканирования 110-800 а.е.м. (атомных единиц массы)

(B) Waters Acquity/LCT, длительный метод - время анализа 20 мин

Waters Acquity UPLC
Подвижная фаза A Вода с 0,05% TFA
Подвижная фаза B Ацентонитрил с 0,05% TFA
Колонка Acquity UPLC ВЕН С18, 1,7 мкм, 2,1×50 мм
Температура колонки 40 градусов C
Градиент ЖХ 2-98% B через 17,0 мин, 98% через 1,5 мин
Скорость потока ЖХ 600 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора 254 нм

Масс-спектрометрия - Waters LCT Premier XE

Ионизация ESI положительная
Диапазон сканирования 100-800 а.е.м.

(С) ЖХ/МС, 2,5 мин, хиральный метод

Подвижная фаза A: CO2

Подвижная фаза B: метанол

Изократические условия: 25% B

Скорость потока: 5 мл/мин

Выходное давление: 120 бар

Температура: 40°C

Колонка: ChiralCel OJ (4,6×50 мм, 3 мкм)

УФ-детектор: 230 нм

Система: Berger Analytical SFC/MS

Хиральная очистка:

Условия A:

Подвижная фаза A: CO2

Подвижная фаза B: метанол

Изократические условия: 25% B

Скорость потока: 60 мл/мин

Выходное давление: 100 бар

Температура: 40 градусов C

Колонка: ChiralCel OJ (21,2×250 мм, 5 мкм)

УФ-детектор: 230 нм

Система: Berger MGII

Пример 1. Натриевая соль 6-гидрокси-5-метокси-1H-пиримидин-2,4-диона

К этанолу (высушенному над молекулярными ситами, 4 Å, 50 мл) добавляли по частям металлический натрий (1,15 г, 0,05 моль) в атмосфере азота при температуре 40°C, полученную смесь перемешивали до образования раствора. Добавляли мочевину (3,0 г, 0,05 моль), смесь нагревали при температуре 100°C в течение 15 минут до полного растворения навесок. Реакционной смеси позволяли медленно остыть, после чего добавляли метоксиметилмалонат (8,1 г, 0,05 моль), практически немедленно образовывался розово-белый преципитат. Затем для поддержания перемешиваемой смеси добавляли сухой этанол (10 мл). Полученную в результате суспензию нагревали при температуре 100°C (в колбе с обратным холодильником) в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, осадок высушивали в высоком вакууме с получением натриевой соли 6-гидрокси-5-метокси-1Н-пиримидин-2,4-диона в виде розово-белого твердого вещества, которое применяли на последующем этапе без анализа или очистки.

Пример 2. 2,4,6-Трихлор-5-метокси-пиримидин

Натриевую соль 6-гидрокси-5-метокси-1Н-пиримидин-2,4-диона (21 ммоль) суспендировали в оксихлориде фосфора (20 мл), полученную смесь разделяли и помещали в два флакона для микроволнового реактора объемом 20 мл. Реакционные смеси нагревали при температуре 130-140°C (~10-12 бар) в течение 30 минут с применением микроволнового излучения (ОСТОРОЖНО! ЗНАЧИТЕЛЬНОЕ УВЕЛИЧЕНИЕ ДАВЛЕНИЯ!). Охлажденные реакционные смеси объединяли, вливали в теплую (приблизительно 40°C) воду (ОСТОРОЖНО!), и полученную в результате смесь экстрагировали дважды этилацетатом, после чего объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2,4,6-трихлор-5-метокси-пиримидина в виде кристаллического бело-коричневого твердого вещества (3,75 г, 84%). 1Н-ЯМР (CDCl3): 3,98 (3H, с).

Пример 3. 2,4,6-Трихлор-5-гидрокси-пиримидин

Раствор 2,4,6-трихлор-5-метокси-пиримидина (4,0 г, 18,7 ммоль) в DCM (дихлорметан) (200 мл) в атмосфере азота охлаждали до температуры 0°C и добавляли по каплям трибромид бора (6,6 мл, 65 ммоль). После перемешивания в течение 18 часов при к.т. реакционную смесь охлаждали и разводили метанолом (25 мл, ОСТОРОЖНО, ЭКЗОТЕРМИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ!), после чего реакционную смесь разводили водой (200 мл). Водный слой экстрагировали DCM, объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2,4,6-трихлор-5-гидрокси-пиримидина в виде бледного желтовато-коричневого твердого вещества (2,55 г, 71%). 13С-ЯМР (DMSO-d6): 149,23 (C), 145,25 (С), 145,08 (С). ЖХ/МС (метод С): RT=2,65/2,77. [M-H]-197/199.

Пример 4. 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазол 24 - способ 1

К раствору 3-бром-2-метиланилина (5,0 г, 26,9 ммоль) в хлороформе (50 мл) добавляли ацетат калия (1,05 экв., 28,2 ммоль, 2,77 г). Затем при одновременном охлаждении в ледяной воде добавляли уксусный ангидрид (2,0 экв., 53,7 ммоль, 5,07 мл). Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, в результате чего образовывалось белое студенистое твердое вещество. Добавляли 18-краун-6 (0,2 экв., 5,37 ммоль, 1,42 г), после чего добавляли изо-амилнитрит (2,2 экв., 59,1 ммоль, 7,94 мл), и полученную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционной смеси позволяли остыть, после чего смесь разделяли между хлороформом (3×100 мл) и насыщенным водным гидрокарбонатом натрия (100 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (100 мл), разделяли и высушивали (MgSO4). Неочищенный продукт выпаривали на диоксиде кремния и очищали методом хроматографии при элюировании от 20% до 40% смеси EtOAc-петролейный эфир с получением 1-(4-бром-индазол-1-ил)-этанона A (3,14 г, 49%) в виде оранжевого твердого вещества и 4-бром-1H-индазола B (2,13 г, 40%) в виде бледно-оранжевого твердого вещества. А: 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,80 (3H, с), 7,41 (1Н, т, J=7,8 Гц), 7,50 (1Н, д, J=7,8 Гц), 8,15 (1Н, с), 8,40 (1Н, д, J=7,8 Гц). В: 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) 7,25 (1Н, т, J=7,3 Гц), 7,33 (1Н, д, J=7,3 Гц), 7,46 (1Н, д, J=7,3 Гц), 8,11 (1Н, с), 10,20 (1Н, уш. с).

К раствору 1-(4-бром-индазол-1-ил)-этанона A (3,09 г, 12,9 ммоль) в MeOH (50 мл) добавляли 6 н водный раствор HCl (30 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. MeOH выпаривали, и смесь разделяли между EtOAc (2×50 мл) и водой (50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), разделяли и высушивали (MgSO4).

Растворитель удаляли выпариванием при пониженном давлении с получением 4-бром-1H-индазола B (2,36 г, 93%).

К раствору 4-бром-1H-индазола В (500 мг, 2,54 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (1,5 экв., 3,81 ммоль) в DMSO (диметилсульфоксид) (20 мл) добавляли ацетат калия (3,0 экв., 7,61 ммоль, 747 мг; высушивали в сушильном пистолете) и PdCl2(dppf)2 (3 мол. %, 0,076 ммоль, 62 мг). Смесь дегазировали аргоном и нагревали при температуре 80°C в течение 40 ч. Реакционной смеси позволяли остыть, и смесь разделяли между водой (50 мл) и эфиром (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), разделяли и высушивали (MgSO4). Неочищенный материал очищали методом хроматографии при элюировании от 30% до 40% смеси EtOAc-петролейный эфир с получением неразделимой смеси в соотношении 3:1 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 24 (369 мг, 60%) и индазола (60 мг, 20%), выделенной в виде желтой смолы, которая затвердевала при стоянии и образовывала белое твердое вещество с желтоватым оттенком. 1Н-ЯМР (400 МГц, d6-DMSO) 1,41 (12Н, с), 7,40 (1Н, дд, J=8,4 Гц, 6,9 Гц), 7,59 (1Н, д, J=8,4 Гц), 7,67 (1Н, д, J=6,9 Гц), 10,00 (1Н, уш. с), 8,45 (1Н, с) и индазол: 7,40 (1Н, т), 7,18 (1Н, т, J=7,9 Гц), 7,50 (1Н, д, J=9,1 Гц), 7,77 (1Н, д, J=7,9 Гц), 8,09 (1Н, с); примесь при 1,25.

Пример 5. 4-(4,4,5,5-Тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазол 24 - способ 2

К раствору 2-метил-3-нитроанилина (2,27 г, 14,91 ммоль) в уксусной кислоте (60 мл) добавляли раствор нитрита натрия (1,13 г, 1,1 экв.) в воде (5 мл). Через 2 ч темно-красный раствор выливали на воду со льдом, и полученный в результате преципитат собирали фильтрацией с получением 4-нитро-1H-индазола C (1,98 г, 81%).

Смесь 4-нитро-1Н-индазола C (760 мг, 4,68 ммоль), палладия на древесном угле (10%, кат.) и этанола (30 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 4 ч. Затем реакционную смесь фильтровали через Celite, и растворитель удаляли в вакууме с получением 1H-индазол-4-иламина D (631 мг, 100%).

К суспензии 1H-индазол-4-иламина D (631 мг, 4,74 ммоль) в 6 М растворе хлористоводородной кислоты (7,2 мл) добавляли по каплям водный раствор нитрита натрия (337 мг, 4,89 ммоль) в воде (2 мл) при температуре ниже 0°C. После перемешивания в течение 30 минут к реакционной смеси добавляли тетрафторборат натрия (724 мг). В результате получали вязкий раствор, который фильтровали и быстро промывали водой с получением тетрафторборатной соли 1H-индазол-4-диазония E (218 мг, 20%) в виде темно-красного твердого вещества.

Сухой метанол (4 мл) продували аргоном в течение 5 минут. К полученному веществу добавляли тетрафторборатную соль 1H-индазол-4-диазония (218 мг, 0,94 ммоль), бис-пинаколатодибор (239 мг, 1,0 экв.) и хлорид [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия (II) (20 мг). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч, затем фильтровали через Celite. Осадок очищали методом флэш-хроматографии с получением 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола 24 (117 мг).

Пример 6. 1-(Тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазол 25 (способ А)

Этап A: Приготовление 4-хлор-1H-индазола: В колбу вместимостью 250 мл с магнитной мешалкой добавляли 2-метил-3-хлоранилин (8,4 мл, 9,95 г, 70,6 ммоль), ацетат калия (8,3 г, 84,7 ммоль) и хлороформ (120 мл). Полученную смесь охлаждали до температуры 0°C при перемешивании. К охлажденной смеси добавляли по каплям в течение 2 минут уксусный ангидрид (20,0 мл, 212 ммоль). Реакционную смесь нагревали до температуры 25°C и перемешивали в течение 1 часа. На данном этапе реакционную смесь нагревали до температуры 60°C. Добавляли изоамилнитрит (18,9 мл, 141 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 60°C. По окончании реакции добавляли воду (75 мл) и THF (тетрагидрофуран) (150 мл), и реакционную смесь охлаждали до температуры 0°C. Затем добавляли LiOH (20,7 г, 494 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 3 часов. Добавляли воду (200 мл), и продукт экстрагировали EtOAc (300 мл, 100 мл). Органические слои объединяли, высушивали над MgSO4 и концентрировали в вакууме с получением 4-хлор-1Н-индазола 11,07 г (100%) в виде оранжевого твердого вещества. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,18 (д, J=1 Гц, 1Н), 7,33 (д, J=8 Гц 1Н), 7,31 (т, J=7 Гц, 1Н), 7,17 (дд, J=7 Гц, 1 Гц 1Н). ЖХ/МС (ESI положит.) м/е 153 (М+1).

Этап B: Приготовление 4-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-индазола: В колбу вместимостью 1 л с механической мешалкой добавляли 4-хлор-1Н-индазол (75,0 г, 0,492 моль), п-толуолсульфонат пиридиния (1,24 г, 4,92 ммоль), CH2Cl2 (500 мл) и 3,4-дигидро-2Н-пиран (98,6 мл, 1,08 моль). Полученную смесь нагревали до температуры 45°C в течение 16 часов при перемешивании. Анализ реакционный смеси продемонстрировал образование обоих изомеров продукта. Реакционную смесь охлаждали до температуры 25°C и добавляли CH2Cl2 (200 мл). Раствор промывали водой (300 мл) и насыщенным NaHCO3 (250 мл). Органические слои высушивали над MgSO4 и концентрировали досуха. Неочищенный продукт очищали растворением в смеси EtOAc/гексан (4:6, 1 л) и добавлением SiO2 (1,2 л). Смесь фильтровали, и полученный осадок промывали смесью EtOAc/гексан (4:6, 2 л). Органические слои концентрировали в вакууме с получением 4-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-индазола 110,2 г (95%) в виде оранжевого твердого вещества. Изомер 1: 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,10 (д, J=1 Гц, 1Н), 7,50 (дд, J=9 Гц, 1 Гц 1Н), 7,29 (дд, J=9 Гц, 8 Гц 1Н), 7,15 (дд, J=8 Гц, 1 Гц 1Н) 5,71 (дд, J=9 Гц, 3 Гц 1Н) 4,02 (м, 1Н) 3,55 (м, 1Н) 2,51 (м, 1Н) 2,02 (м, 2Н) 1,55 (м, 3H). ЖХ/МС (ESI положит.) м/е 237 (М+1); Изомер 2: 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,25 (д, J=1 Гц, 1Н), 7,62 (дд, J=9 Гц, 1 Гц 1Н), 7,20 (дд, J=9 Гц, 8 Гц 1Н), 7,06 (дд, J=8 Гц, 1 Гц 1Н) 5,69 (дд, J=9 Гц, 3 Гц 1Н) 4,15 (м, 1Н) 3,80 (м, 1Н) 2,22 (м, 2Н) 2,05 (м, 1Н) 1,75 (м, 3H). ЖХ/МС (ESI положит.) м/е 237 (М+1).

Этап C: Приготовление 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазола: в колбу вместимостью 500 мл с магнитной мешалкой добавляли 4-хлор-1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-индазол (10,0 г, 42,2 ммоль), DMSO (176 мл), PdCl2(PPh3)2 (6,2 г, 8,86 ммоль), трициклогексилфосфин (0,47 г, 1,69 ммоль), бис(пинаколато)дибор (16,1 г, 63,4 ммоль) и ацетат калия (12,4 г, 0,127 моль). Смесь нагревали до температуры 130°C в течение 16 часов при перемешивании. Реакционную смесь охлаждали до температуры 25°C, добавляли EtOAc (600 мл) и промывали водой (2×250 мл). Органические слои высушивали над MgSO4 и концентрировали в вакууме досуха. Неочищенный продукт очищали пропусканием через слой SiO2 (120 г) при элюировании 10% смесью EtOAc/гексан (1 л) и 30% смесью EtOAc/гексан (1 л). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением 13,9 г (100%) 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола в виде 20% (масс/масс.) раствора этилацетатоме. 1Н-ЯМР продемонстрировал наличие приблизительно 20% (масс./масс.) бис(пинаколато)дибора. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,37 (с, 1Н), 7,62 (дд, J=14 Гц, 2 Гц 1Н), 7,60 (дд, J=7 Гц, 1 Гц 1Н), 7,31 (дд, J=8 Гц, 7 Гц 1Н) 5,65 (дд, J=9 Гц, 3 Гц 1Н) 4,05 (м, 1Н) 3,75 (м, 1Н) 2,59 (м, 1Н) 2,15 (м, 1Н) 2,05 (м, 1Н) 1,75 (м, 3H) 1,34 (с, 12Н). ЖХ/МС (ESI положит.) м/е 245 (М+1).

Пример 7. 1-(Тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2 диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазол 25 (способ В)

Этап A: Приготовление 4-нитро-1H-индазола: Смесь 2-метил-3-нитроанилина (200 г, 1,315 моль) и уксусной кислоты (8000 мл) охлаждали до температуры 15-20°C, и в данную смесь медленно добавляли в течение 30 мин раствор нитрита натрия (90,6 г, 1,315 моль) в воде (200 мл). После добавления температуру реакционной смеси увеличивали до 25-30°C, и реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 2-3 ч. Протекание реакции контролировали методом ТСХ (тонкослойной хроматографии). По окончании реакции продукт фильтровали, осадок промывали уксусной кислотой (1000 мл). Уксусную кислоту дистиллировали в вакууме (550 мм Hg) при температуре ниже 80°C, добавляли воду (8000 мл), охлаждали до температуры 25-30°C и перемешивали в течение 30 мин. Полученную суспензию фильтровали и промывали водой (1000 мл). Неочищенный продукт высушивали при нагревании при температуре 70-80°C в течение 2 часов, а затем переносили в 5% раствор этилацетата/н-гексана (100:2000 мл) и перемешивали в течение 1-1,5 ч при температуре окружающей среды. Суспензию фильтровали и промывали смесью 5% этилацетат/н-гексан (25:475 мл). Полученный продукт высушивали в вакууме при температуре ниже 80°C в течение 10-12 ч с получением 4-нитро-1H-индазола в виде коричневого твердого вещества (150 г, 70%): Т.п. (температура плавления): 200-203°C; 1Н-ЯМР (200 МГц, CDCl3) δ 13,4 (уш., 1Н), 8,6 (с, 1Н), 8,2-7,95 (дд, 2Н), 7,4 (м, 1Н). ЭСМС (масс-спектрометрия с электрораспылением) м/z 164 (М+1). Чистота: 95% (ВЭЖХ).

Этап B: Приготовление 4-амино-1Н-индазола: Смесь 4-нитро-1H-индазола (200 г, 1,22 моль) и 10% палладия на угле (20,0 г,) в EtOH (3000 мл) гидрировали при температуре окружающей среды (реакция была экзотермической и температура увеличилась до 50°C). После окончания реакции катализатор удаляли в результате фильтрации. Растворитель выпаривали в вакууме при температуре ниже 80°C, охлаждали до комнатной температуры, добавляли к осадку н-гексан (1000 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Выделенное твердое вещество фильтровали и промывали н-гексаном (200 мл). Продукт высушивали в вакууме при температуре 70-80°C в течение 10-12 ч с получением 4-амино-1Н-индазола в виде коричневого твердого вещества (114 г, 70%), Т.п.: 136-143°C. 1Н-ЯМР (200 МГц, CDCl3) δ 12 (уш., 1Н), 8,0 (с, 1Н), 7,1-7,0 (дд, 2Н), 6,5 (д, 1Н), 3,9 (м, 2Н). ЭСМС м/z 134 (М+1). Чистота: 90-95% (ВЭЖХ).

Этап C: Приготовление 4-иод-1H-индазола: смесь 4-амино-1H-индазола (50,0 г, 0,375 моль) в воде (100 мл) и конц. хлористоводородную кислоту (182 мл) охлаждали до температуры -10°C. К полученной смеси добавляли по каплям в течение приблизительно 30-60 мин раствор нитрита натрия (51,7 г, 0,75 моль) в воде (75 мл) при температуре -10°C (во время добавления наблюдалось образование пены). В другой колбе приготовили смесь иодида калия (311 г, 1,87 моль) в воде (3000 мл) при комнатной температуре, и к полученной смеси добавляли в течение приблизительно 30-40 мин предварительно охлажденную соль диазония при температуре 30-40°C. Температуру реакции поддерживали равной 30°C в течение 1 ч, по окончании реакции добавляли этилацетат (500 мл), и реакционную смесь фильтровали через Celite. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×500 мл). Объединенные органические слои промывали 5% раствором гипосульфита (2×500 мл), солевым раствором (500 мл), высушивали (Na2SO4) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали методом хроматографии (гель диоксида кремния, гексан, 15-20% этилацетат/гексан) с получением 4-иод-1H-индазола в виде оранжевого твердого вещества (23,0 г, 25%). Т.п.: 151-177 С: 1Н-ЯМР (200 МГц, CDCl3) δ 12,4 (уш., 1Н), 8,0 (с, 1Н), 7,6 (дд, 2Н), 7,1 (д, 1Н). ЭСМС м/z 245 (М+1). Чистота: 95-98% (ВЭЖХ).

Этап D: Приготовление 4-иод-1-(2-тетрагидропиранил)индазола: Смесь 4-амино-1H-индазола (250,0 г, 1,024 моль), 3,4-дигидро-2Н-пирана (126,0 г, 1,5 моль) и PPTS (п-толуолсульфонат пиридиния) (2,57 г, 0,01 моль) в CH2Cl2 (1250 мл) нагревали до температуры 50°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и вливали в воду (625 мл), слои разделяли, и водный слой экстрагировали CH2Cl2 (250 мл). Объединенные органические слои промывали водой (625 мл), высушивали (Na2SO4) и концентрировали. Неочищенный осадок очищали методом хроматографии (гель диоксида кремния, гексан, 5-10% этилацетат/гексан) с получением 4-иод-1-(2-тетрагидропиранил)индазола в виде масла (807,0 г, 60%). 1Н-ЯМР (200 МГц, CDCl3) δ 8,5 (с, 1Н), 7,8 (м, 1Н), 7,6 (д, 1Н), 7,25 (м, 1Н), 5,7 (дд, 1Н), 4,2-3,8 (дд, 1Н), 2,2-2,0 (м, 4Н) 2,0-1,8 (м, 4Н). ЭСМС м/z 329 (М+1).

Этап E: Приготовление 1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола: смесь 4-иод-1-(2-тетрагидропиранил) индазола (100 г, 0,304 моль), биспинаколатодибора (96,4 г, 0,381 моль), PdCl2 (dppf) (8,91 г, 0,012 моль) и ацетата калия (85,97 г, 0,905 моль) в DMSO (500 мл) нагревали до температуры 80°C в течение 2-3 ч. После окончания реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (1500 мл). Реакционную массу экстрагировали этилацетатом (3×200 мл), объединенные органические слои выпаривали, высушивали (Na2SO4) и концентрировали. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии (гель диоксида кремния, гексан, 5-10% этилацетат/гексан) с получением 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-индазола 25 в виде вязкого коричневого масла (70,0 г, 70%). 1Н-ЯМР (CDCl3) δ 8,5 (с, 1Н), 7,8 (м, 1Н), 7,6 (д, 1Н), 7,25 (м, 1Н), 5,7 (дд, 1Н), 4,2-3,8 (дд, 1Н), 2,2-2,0 (м, 4Н) 2,0-1,8 (м, 4Н) 1,4-1,2 (с, 12Н). ЭСМС м/z 329 (М+1).

Пример 8. 4-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил (1,3,2-диоксаборолан-2-ил))пиримидин-2-иламин 26

К раствору 4-метилпиримидин-2-иламина (8,0 г, 0,073 моль) в хлороформе (320 мл) добавляли N-бромсукцинимид (13,7 г, 0,077 моль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в течение 18 часов. Анализ методом ЖХ/МС свидетельствовал об окончании реакции. Смесь разводили DCM, затем промывали 1 н водн. раствором NaOH и солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением 5-бром-4-метилпиримидин-2-иламина (12 г, выход: 86%).

Смесь 5-бром-4-метилпиримидин-2-иламина (5,0 г, 26 ммоль), ацетата калия (7,83 г, 79,8 ммоль), 4,4,5,5-тетраметил-2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1,3,2-диоксаборолана (7,43 г, 29,2 ммоль) в диоксане (140 мл) перемешивали в атмосфере азота в течение 20 мин. К реакционной смеси добавляли аддукт хлорида 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладия (II) и дихлорметана (1,08 г, 1,33 ммоль). Реакционную смесь нагревали в атмосфере азота до температуры 115°C в течение 18 ч. После окончания реакции смесь охлаждали и добавляли EtOAc. Полученную в результате смесь обрабатывали ультразвуком и фильтровали. Дополнительное количество EtOAc использовали для промывания твердого вещества. Объединенные органические экстракты промывали водой, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали методом хроматографии при элюировании 20-100% смеси EtOAc/гексан с получением 4,5 г 4-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил (1,3,2-диоксаборолан-2-ил))пиримидин-2-иламина 26 (выход: 74%). 1Н-ЯМР (DMSO, 400 МГц): δ 8,28 (с, 1Н), 6,86 (уш. с, 2Н), 2,35 (с, 3H), 1,25 (с, 12H). МС (ESI) м/е (М+Н+) 236,15, 154,07.

Пример 101. 5-(4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 101

Этап 1: Этиловый сложный эфир (2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты

Смесь 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (3,0 г, 15,0 ммоль), этилгликолята (16,7 мл, 17,3 ммоль), трифенилфосфина (4,5 г, 17,3 ммоль) и DIAD (азодикарбоксилат диизопропила) (3,4 мл, 17,3 ммоль) в диоксане (100 мл) перемешивали при к.т. в течение 18 часов, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-15% этилацетата в циклогексане) с получением этилового сложного эфира (2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты в виде белого твердого вещества (2,67 г, 62%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,77 (2H, с), 4,28 (2H, к (квадруплет), J=7,14 Гц), 1,32 (3H, т, J=7,15 Гц).

Этап 2: Этиловый сложный эфир (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты

Смесь этилового сложного эфира (2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (2,67 г, 9,35 ммоль), морфолина (815 мкл, 9,35 ммоль) и триэтиламина (2,6 мл, 18,7 ммоль) в IMS (технический денатурированный спирт) (50 мл) перемешивали при к.т. в течение 2 часов, после чего реакционную смесь концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок разделяли между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Затем водную фазу экстрагировали этилацетатом, объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением этилового сложного эфира (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (2,97 г, 95%). ЖХ/МС: RT=3,35 мин, [М+Н]+=336/338/340.

Этап 3: 2-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанол

К раствору этилового сложного эфира (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (188 мг, 0,56 ммоль) в THF (2,5 мл) добавляли DIBAL-Н (гидрид диизобутилалюминия) (2,0 мл, 2,0 ммоль, 1 М раствор в THF) при температуре -78°C, и полученную в результате смесь нагревали до температуры 0°C в течение 30 минут. Реакционную смесь гасили метанолом и сегнетовой солью (1 М водный раствор), и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола в виде масла (156 мг, 95%). ЖХ/МС: RT=2,60 мин, [М+Н]+=294/296/298.

Этап 4: 2-Хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола (145 мг, 0,49 ммоль) в THF (5 мл) добавляли гидрид натрия (59 мг, 1,50 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 30 минут. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (114 мг, 90%). ЖХ/МС: RT=2,62 мин, [М+Н]+=258/260.

Этап 5: Смесь 2-хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (114 мг, 0,44 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (196 мг, 0,88 ммоль), PdCl2dppf.DCM (36 мг, 0,04 ммоль) и карбоната цезия (430 мг, 1,32 ммоль) в диоксане (5 мл) и воду (0,5 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 100°C в течение 2 часов. Затем добавляли 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламин (100 мг, 0,44 ммоль) и PdCl2dppf.DCM (36 мг, 0,04 ммоль), и смесь нагревали до температуры 100°C в течение еще 2 часов. Реакционную смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-10% метанола в DCM), после чего растирали в диэтиловом эфире с получением 101 (37 мг, 27%). ЖХ/МС: RT=2,75 мин, [М+Н]+=317. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 8,90 (2H, с), 7,01 (2H, с), 4,42-4,36 (2H, м), 4,25-4,18 (2H, м), 3,70 (8H, с).

Пример 102. 5-[(6R)-6-метил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил]пиримидин-2-амин 102

Этап 1: Этиловый сложный эфир (R)-2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты

Смесь 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (600 мг, 3,01 ммоль), этилового сложного эфира (R)-2-гидрокси-пропионовой кислоты (411 мкл, 3,60 ммоль), трифенилфосфина (906 мг, 3,45 ммоль) и DIAD (678 мкл, 3,45 ммоль) в диоксане (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 18 часов, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-25% этилацетата в циклогексане) с получением этилового сложного эфира (R)-2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты (522 мг, 52%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,30-4,16 (2H, м), 4,12 (1H, к, J=7,14 Гц), 1,70 (3H, д, J=6,78 Гц), 1,29 (3H, т, J=7,19 Гц).

Этап 2: Этиловый сложный эфир (R)-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты

Смесь этилового сложного эфира (R)-2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты (522 мг, 1,74 ммоль), морфолина (152 мкл, 1,74 ммоль) и триэтиламина (484 мкл, 3,48 ммоль) в этаноле (15 мл) перемешивали при к.т. в течение 18 часов, затем разделяли между этилацетатом и водой. Водную фазу экстрагировали дополнительным количеством этилацетата, объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением этилового сложного эфира (R)-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты (490 мг, 80%). ЖХ/МС: RT=3,57 мин, [М+Н]+=350/352.

Этап 3: (R)-2-Хлор-6-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору этилового сложного эфира (R)-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропионовой кислоты (175 мг, 0,50 ммоль) в THF (5 мл) добавляли DIBAL-H (2,0 мл, 2,0 ммоль, 1 М раствор в THF) при температуре -78°C, и полученную в результате смесь нагревали до температуры 0°C в течение 30 минут. Реакционную смесь гасили сегнетовой солью (1 М водный раствор), и водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок переносили в THF (10 мл), к полученному раствору добавляли гидрид натрия (60 мг, 1,50 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 18 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением (R)-2-хлор-6-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (157 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=2,89 мин, [М+Н]+=272/274.

Этап 4: Смесь (R)-2-хлор-6-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (65 мг, 0,24 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (80 мг, 0,36 ммоль), Pd(OAc)2 (1 мг, 10 мол. %), (S)-phos (2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенил) (4,1, 20 мол. %) и фосфата калия трехосновного (106 мг, 0,50 ммоль) в н-бутаноле (2,25 мл) и воду (0,25 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 100°C в течение 18 часов. Реакционную смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-5% метанола в DCM) с получением 102 (23 мг, 29%). ЖХ/МС: RT=3,09 мин, [М+Н]+=331. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 9,15 (2H, с), 5,73 (2H, с), 4,44 (1H, дд, J=11,44, 2,17 Гц), 4,31-4,24 (1H, м), 4,08 (1H, дд, J=11,45, 8,21 Гц), 3,89-3,73 (8H, м), 1,42 (3H, д, J=6,38 Гц).

Пример 103. 5-(7-метил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 103

Этап 1: (2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусная кислота

К раствору этилового сложного эфира (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (581 мг, 1,73 ммоль) в THF (10 мл) и воды (2,5 мл) добавляли LiOH (951 мкл, 1,90 ммоль, 2 М водный раствор), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2,5 часов. Реакционную смесь гасили 1 М HCl и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты в виде белого твердого вещества (515 мг, 97%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,59 (2H, с), 3,93-3,87 (4Н, м), 3,81-3,75 (4Н, м).

Этап 2: 2-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-N-метокси-N-этил-ацетамид

Смесь (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (722 мг, 2,34 ммоль) и CDI (N,N'-карбонилдиимидазол) (493 мг, 3,04 ммоль) в DCM (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 1,5 часов, после чего добавляли триэтиламин (457 мкл, 3,28 ммоль) и гидрохлорид O,N-диметил-гидроксиламина (320 мг, 3,28 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 18 часов, после чего гасили 1 М HCl. Водный слой экстрагировали DCM, объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, затем высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-N-метокси-N-этил-ацетамида в виде желтого масла (830 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=2,83 мин, [М+Н]+=351/353/355.

Этап 3: 1-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-он

К раствору 2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-N-метокси-N-этил-ацетамида (200 мг, 0,60 ммоль) в THF (4 мл) при температуре -78°C добавляли метилмагнийбромид (1,28 мл, 1,79 ммоль, 1,4 М раствор в смеси THF/толуол), полученную в результате смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 3 часов. Полученную в результате смесь гасили 1 М HCl и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, затем высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-она в виде белого твердого вещества (146 мг, 80%). ЖХ/МС: RT=2,90 мин, [М+Н]+=306/308/310.

Этап 4: 1-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-ол

К раствору 1-(2,4-дихлор-6-морфол ин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-она (146 мг, 0,48 ммоль) в THF (5 мл) добавляли DIBAL-H (580 мкл, 0,58 ммоль, 1 М раствор в толуоле) при температуре -78°C, полученную в результате смесь нагревали до температуры 0°C и перемешивали в течение 1,5 часов. Реакционную смесь охлаждали до температуры -78°C, после чего добавляли дополнительное количество DIBAL-H (480 мкл, 0,48 ммоль), смесь нагревали до температуры 0°C и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили сегнетовой солью (1 М водный раствор) и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, затем высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-ола (148 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=2,84 мин, [М+Н]+=308/310/312.

Этап 5: 2-Хлор-7-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-пропан-2-ола (148 мг, 0,48 ммоль) в THF (8 мл) добавляли гидрид натрия (58 мг, 1,44 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле), полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 4 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-хлор-7-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества с желтоватым оттенком (139 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=2,94 мин, [М+Н]+=272/274.

Этап 6: Смесь 2-хлор-7-метил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (99 мг, 0,36 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (97 мг, 0,44 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (28 мг, 0,04 ммоль) и карбоната натрия (1,2 мл, 1,20 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,2 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 140°C в течение 25 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь фильтровали, промывали этилацетатом. Отфильтрованные фазы разделяли, и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-4% метанола в DCM), после чего растирали в диэтиловом эфире с получением 103 в виде белого твердого вещества (12 мг, 11%). ЖХ/МС: RT=3,06 мин, [М+Н]+=331. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 8,90 (2H, с), 7,01 (2H, с), 4,57-4,47 (1H, м), 4,36 (1H, дд, J=11,41, 2,34 Гц), 3,82 (1H, дд, J=11,43, 7,60 Гц), 3,77-3,61 (8H, м), 1,34 (3H, д, J=6,44 ГЦ).

Пример 104. 5-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 104

Этап 1: 1-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-2-метил-пропан-2-ол

К раствору этилового сложного эфира (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты из примера 101 (2,45 г, 7,29 ммоль) в THF (100 мл) добавляли метилмагнийбромид (14,58 мл, 43,74 ммоль, 3,0 М раствор в диэтиловом эфире) при температуре -78°C, и полученную в результате смесь перемешивали в течение 2 часов при температуре 0°C. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-2-метил-пропан-2-ола в виде смолы янтарного цвета (2,18 г, 93%). ЖХ/МС: RT=3,00 мин, [М+Н]+=322/324/326.

Этап 2: 2-Хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-2-метил-пропан-2-ола (2,18 г, 6,77 ммоль) в THF (150 мл) добавляли гидрид натрия (812 мг, 20,31 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 5 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок растирали в циклогексане с получением 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (1,35 г, 70%). ЖХ/МС: RT=3,03 мин, [М+Н]+=286/288.

Этап 3: 5-(7,7-Диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)-пиримидин-2-иламин

Смесь 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (285 мг, 1,00 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (440 мг, 1,99 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (70 мг, 0,10 ммоль) и карбоната натрия (3,3 мл, 3,3 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (7 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь разводили метанолом и DCM и абсорбировали на диатомитовой земле. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-4% метанола в DCM, затем SiO2, градиент 0-100% этилацетата в циклогексане) с получением 104 в виде белого твердого вещества (245 мг, 71%). ЖХ/МС: RT=3,28 мин, [М+Н]+=345. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 8,90 (2H, с), 7,00 (2H, с), 3,97 (2H, с), 3,70 (8H, с), 1,35 (6H, с).

Пример 105. 5-[4-Морфолино-7-(трифторметил)-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил]пиримидин-2-амин 105

Этап 1: 2-Хлор-4-морфолин-4-ил-7-трифторметил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ол (200 мг, 1,00 ммоль) и 2-трифторметил-оксиран (429 мкл, 5,01 ммоль), после чего флаконы закупоривали. Реакционную смесь нагревали при температуре 95°C в течение 48 часов, затем охлаждали и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок растворяли в IMS (5 мл), после чего обрабатывали триэтиламином (198 мкл, 1,42 ммоль) и морфолином (83 мкл, 0,95 ммоль). Полученную оранжевую смесь перемешивали в течение 18 часов при к.т., после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-20% этилацетата в циклогексане) с получением 2-хлор-4-морфолин-4-ил-7-трифторметил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (105 мг, 32%). ЖХ/МС: RT=3,20 мин, [М+Н]+=326/328.

Этап 2: Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-4-морфолин-4-ил-7-трифторметил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин (105 мг, 0,32 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламин (143 мг, 0,64 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (23 мг, 0,03 ммоль) и карбонат натрия (1,06 мл, 1,06 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,6 мл), после чего из флакона откачивали воздух, и флакон заполняли аргоном (x3). Смесь нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с помощью микроволнового реактора. Реакционную смесь разводили смесью Н2О/DCM/метанол, после чего абсорбировали на диатомитовой земле, а затем очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-4% метанола в DCM, затем SiO2, градиент 0-90% этилацетата в циклогексане), после чего растирали в диэтиловом эфире с получением 105 в виде белого твердого вещества (60 мг, 49%). ЖХ/МС: RT=3,52 мин, [М+Н]+=385. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 8,92 (2H, с), 7,08 (2H, с), 5,51-5,41 (1H, м), 4,53-4,41 (2H, м), 3,78-3,65 (8H, м).

Пример 106. 5-(4-Морфолиноспиро[6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-7,1'-циклопропан]-2-ил)пиримидин-2-амин 106

Этап 1: Метиловый сложный эфир 1-(2,6-дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропанкарбоновой кислоты

К раствору 2,4,6-трихлор-5-метокси-пиримидина (213 мг, 1,00 ммоль) и метилового сложного эфира 1-гидрокси-циклопропанкарбоновой кислоты (139 мг, 1,20 ммоль) в THF (4 мл) добавляли гидрид натрия (48 мг, 1,20 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) при температуре -78°C. Полученной в результате смеси позволяли нагреться до к.т., после чего смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением метилового сложного эфира 1-(2,6-дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропанкарбоновой кислоты в виде белого твердого вещества (300 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=3,49 мин, [М+Н]+=341/343/345.

Этап 2: [1-(2,6-Дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропил]-метанол

К раствору метилового сложного эфира 1-(2,6-дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропан-карбоновой кислоты (293 мг, 1,00 ммоль) в DCM (8 мл) добавляли DIBAL-H (4,00 мл, 4,00 ммоль, 1 М раствор в THF) при температуре -78°C, полученную в результате смесь нагревали до температуры 0°C и перемешивали в течение 90 минут. Реакционную смесь гасили метанолом, а затем сегнетовой солью (1 М водный раствор) и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением [1-(2,6-дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропил]-метанола в виде масла (220 мг, 83%). ЖХ/МС: RT=2,86 мин, [М+Н]+ 195/197/199.

Этап 3: 2,4-Дихлор-6-(1-гидроксиметил-циклопропокси)-пиримидин-5-ол

Смесь [1-(2,6-дихлор-5-метокси-пиримидин-4-илокси)-циклопропил]-метанола (800 мг, 3,02 ммоль) и хлорида лития (600 мг, 14,15 ммоль) в безводном DMF (3 мл) нагревали при температуре 140°C в течение 10 минут с применением микроволнового излучения, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-5% метанола в DCM) с получением 2,4-дихлор-6-(1-гидроксиметил-циклопропокси)-пиримидин-5-ола (300 мг, 40%). ЖХ/МС: RT=2,52 мин, [M-H]-=249/251/253.

Этап 4: 7-Циклопропил-2,4-дихлор-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 2,4-дихлор-6-(1-гидроксиметил-циклопропокси)-пиримидин-5-ола (135 мг, 0,54 ммоль) и трифенилфосфина (180 мг, 0,65 ммоль) в THF (8 мл) добавляли DIAD (128 мкл, 0,65 ммоль), смесь перемешивали при к.т. в течение 30 минут, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-25% этилацетата в циклогексане) с получением 7-циклопропил-2,4-дихлор-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (90 мг, 72%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,30 (2Н, с), 1,36-1,29 (2Н, м), 1,01-0,95 (2Н, м).

Этап 5: 2-Хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

Смесь 7-циклопропил-2,4-дихлор-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (93 мг, 0,40 ммоль), морфолина (150 мкл, 1,71 ммоль) и триэтиламина (80 мкл, 0,57 ммоль) в IMS (3 мл) нагревали при температуре 140°C в течение 35 минут с применением микроволнового излучения, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, 0-20% этилацетата в циклогексане) с получением 2-хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (98 мг, 87%). ЖХ/МС: RT=3,02 мин, [М+Н]+=284/286.

Этап 6: Смесь 2-хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина (98 мг, 0,34 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (144 мг, 0,65 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (25 мг, 0,035 ммоль) и карбоната натрия (1,0 мл, 1,0 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (4 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 106 в виде белого твердого вещества (41 мг, 35%). ЖХ/МС: RT=3,24 мин, [М+Н]+=343. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,12 (2Н, с), 5,20 (2Н, уширенный с), 4,16 (2Н, с), 3,82 (8Н, с), 1,29 (2Н, т, J=6,89 Гц), 0,88 (2Н, т, J=6,88 Гц).

Пример 107 5-(6-циклопропил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 107

Этап 1: Метиловый сложный эфир циклопропил-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты

К раствору 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (250 мг, 1,25 ммоль), метилового сложного эфира циклопропил-гидрокси-уксусной кислоты (245 мг, 1,88 ммоль) и трифенилфосфина (493 мг, 1,88 ммоль) в THF (12 мл) добавляли по каплям DIAD (370 мкл, 1,88 ммоль). Полученную в результате суспензию перемешивали в течение 18 часов, после чего добавляли диоксан (10 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение еще 6 часов. Гетерогенную смесь концентрировали в вакууме, и полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-30% этилацетата в циклогексане) с получением метилового сложного эфира циклопропил-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты в виде белого твердого вещества (224 мг, 32%). ЖХ/МС: RT=3,66 мин, [М+Н]+=311/313/315.

Этап 2: Метиловый сложный эфир циклопропил-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты

К суспензии метилового сложного эфира циклопропил-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (224 мг, 0,72 ммоль) в IMS (4 мл) добавляли триэтиламин (150 мкл, 1,08 ммоль), а затем морфолин (63 мкл, 0,72 ммоль). Полученный желтый раствор перемешивали в течение 2,5 часов при к.т., после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-20% этилацетата в циклогексане) с получением метилового сложного эфира циклопропил-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты в виде бесцветной смолы (233 мг, 89%). 1Н-ЯМР (CDCl3): δ 3,99 (1H, д, J=9,54 Гц), 4,03-3,83 (4H, м), 3,80-3,75 (4Н, м), 3,78 (3H, с), 1,32-1,21 (1H, м), 0,70-0,57 (2H, м), 0,52-0,45 (1H, м), 0,33-0,26 (1H, м).

Этап 3: 2-Циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанол

К раствору метилового сложного эфира циклопропил-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (233 мг, 0,64 ммоль) в THF (6,5 мл) добавляли по каплям DIBAL-H (1,93 мл, 1,93 ммоль, 1,0 М в толуоле) в атмосфере азота при температуре -78°C. Реакционную смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 20 часов, после чего гасили сегнетовой солью (15 мл, 1 М водный раствор). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×30 мл), объединенные органические фазы высушивали (Na2SO4), после чего концентрировали в вакууме с получением 2-циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола в виде бесцветной смолы (215 мг, количественно). 1Н-ЯМР (CDCl3): δ 3,94-3,88 (2H, м), 3,87-3,82 (4H, м), 3,79-3,73 (4H, м), 3,48-3,41 (1H, м), 1,11-0,99 (1H, м), 0,60-0,51 (1H, м), 0,51-0,42 (1H, м), 0,19-0,11 (1H, м), 0,03-0,05 (1H, м).

Этап 4: 2-Хлор-6-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 2-циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола (215 мг, 0,64 ммоль) в THF (10 мл) добавляли гидрид натрия (71 мг, 1,93 ммоль, 65% дисперсия в минеральном масле), и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (15 мл) и водой (5 мл), после чего экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (15 мл), высушивали (Na2SO4), после чего концентрировали в вакууме с получением 2-хлор-6-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (191 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=3,18 мин, [М+Н]+=298/300.

Этап 5: Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-6-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин (191 мг, 0,64 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламин (283 мг, 1,28 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (45 мг, 0,06 ммоль), карбонат натрия (2,11 мл, 2,11 ммоль, 1 М водный раствор) и ацетонитрил (2,5 мл). Флакон закупоривали, после чего из флакона откачивали воздух, и флакон заполняли аргоном (x3), а затем нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь фильтровали, затем очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-4% метанола в DCM). Полученный в результате осадок растирали в диэтиловом эфире с получением 107 в виде белого твердого вещества (21 мг, 9%). ЖХ/МС: RT=3,54 мин, [М+Н]+=357. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,89 (2H, с), 7,00 (2H, с), 4,53 (1H, дд, J=11,48, 2,34 Гц), 4,22 (1H, дд, J=11,50, 7,87 Гц), 3,75-3,67 (8H, м), 3,65-3,58 (1H, м), 1,01-0,99 (1H, м), 0,63-0,55 (2H, м), 0,51-0,42 (2H, м).

Пример 108. 5-(7-трет-бутил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 108

Этап 1: 3,3-Диметил-1-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-бутан-2-ол

Смесь 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (400 мг, 2,01 ммоль) и 2-трет-бутил оксирана (3 мл) нагревали при температуре 100°C в течение 3 часов, после чего охлаждали и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок растирали в горячем метаноле, нерастворившееся вещество отбрасывали. Фильтрат концентрировали в вакууме, и полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, 0-15% этилацетата в циклогексане) с получением 3,3-диметил-1-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-бутан-2-ола в виде белого твердого вещества (275 мг, 52%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,28 (1H, дд, J=9,38, 2,19 Гц), 4,00 (1H, т, J=9,19 Гц), 3,76-3,69 (1H, м), 2,53 (1H, д, J=3,48 Гц), 0,95 (9H, с).

Этап 2: 1-(2,4-Дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-3,3-диметил-бутан-2-ол

К раствору 3,3-диметил-1-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-бутан-2-ола (275 мг, 1,05 ммоль) в IMS (3 мл) добавляли триэтиламин (291 мкл, 2,09 ммоль), а затем морфолин (100 мкл, 1,15 ммоль), и полученную смесь перемешивали при к.т. в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, после чего экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4), после чего концентрировали в вакууме с получением 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-3,3-диметил-бутан-2-ола (255 мг, 77%). ЖХ/МС: RT=3,57 мин, [М+Н]+=350/352/354.

Этап 3: 7-трет-Бутил-2-хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 1-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-3,3-диметил-бутан-2-ола (255 мг, 0,73 ммоль) в THF (10 мл) добавляли гидрид натрия (87 мг, 2,18 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле), и смесь перемешивали при к.т. в течение 1,5 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония, после чего экстрагировали этилацетатом (x2). Объединенные органические слои высушивали (Na2SO4), затем пропускали через слой диоксида кремния и элюировали этилацетатом. Целевые фракции концентрировали в вакууме с получением 7-трет-бутил-2-хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (250 мг, 100%). ЖХ/МС: RT=3,64 мин, [М+Н]+=314/316.

Этап 4: Во флакон для микроволнового реактора вносили 7-трет-бутил-2-хлор-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин (50 мг, 0,16 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламин (70 мг, 0,32 ммоль) и бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлорпалладий (II) (11 мг, 0,02 ммоль, 10 мол. %), после чего флакон закупоривали. Воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, а затем добавляли карбонат натрия (0,25 мл, 0,25 ммоль, 1 М водный раствор) и ацетонитрил (0,75 мл). Смесь нагревали при температуре 150°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения, после чего смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, 0-5% метанол в DCM), затем растирали в циклогексане/диэтиловом эфире с получением 108 в виде белого твердого вещества (13 мг, 22%). ЖХ/МС: RT=4,04 мин, [М+Н]+=373. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,14 (2H, с), 5,25 (2H, с), 4,44 (1H, дд, J=11,08, 1,92 Гц), 3,99 (1H, дд, J=8,97, 1,89 Гц), 3,91-3,69 (9H, м), 1,12 (9H, с).

Пример 109. 3-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенол 109

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), 3-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенол (58 мг, 0,26 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле.

Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали путем растирания с диэтиловом эфире с получением 109 в виде белого твердого вещества (38 мг, 63%). ЖХ/МС: RT=4,13 мин, [М+Н]+=344. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,87-7,82 (2H, м), 7,26 (1H, т, J=7,6 Гц), 6,91 (1H, дд, J=2,4, 7,6 Гц), 3,92 (2H, с), 3,90-3,80 (8H, м), 1,47 (6H, с).

Пример 110. 2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин 110

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), 2-метоксипиримидин-5-илбориновую кислоту (42 мг, 0,27 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали путем растирания с диэтиловым эфиром с получением 110 в виде белого твердого вещества (30 мг, 17%). ЖХ/МС: RT=4,18 мин, [М+Н]+=360. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,33 (2H, с), 4,07 (3H, с), 3,92 (2H, с), 3,83 (8H, с), 1,47 (6H, с).

Пример 111. 5-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиридин-2-амин 111

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиридин-2-иламин (58 мг, 0,26 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ C18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 111 в виде белого твердого вещества (32 мг, 53%). ЖХ/МС: RT=2,73 мин, [М+Н]+=344. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,01 (1H, д, J=2,1 Гц), 8,33 (1H, дд, J=2,1, 8,5 Гц), 6,50 (1H, д, J=8,5 Гц), 4,61 (2H, уширенный с), 3,89 (2H, с), 3,86-3,77 (8H, м), 1,43 (6H, с).

Пример 112. N-[4-(7,7-Диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенил]ацетамид 112

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-ацетамид (69 мг, 0,26 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ C18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 112 в виде белого твердого вещества (40 мг, 59%). ЖХ/МС: RT=2,73 мин, [М+Н]+=344. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,28 (2H, д, J=8,8 Гц), 7,54 (2H, д, J=8,8 Гц), 7,22 (1H, уширенный с), 3,90 (2H, с), 3,87-3,78 (8H, м), 2,19 (3H, с), 1,46 (6Н, c).

Пример 113. 5-(7,7-Диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)-N-метил-пиридин-2-амин 113

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), трет-бутиловый сложный эфир метил-[5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиридин-2-ил]-карбаминовой кислоты (88 мг, 0;26 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 113 в виде белого твердого вещества (20 мг, 32%). ЖХ/МС: RT=2,79 мин, [М+Н]+=358. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,04 (1H, д, J=2,4 Гц), 8,35 (1H, дд, J=2,4, 8,6 Гц), 6,39 (1Н, д, J=8,6 Гц), 4,84 (1H, уширенный с), 3,89 (2H, с), 3,85-3,76 (8H, м), 2,97 (3H, д, J=5,2 Гц), 1,45 (6H, с)

Пример 114. N-[3-(7,7-Диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенил]метансульфонамид 114

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), 3-(метансульфониламино)фенилбориновую кислоту (57 мг, 0,27 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 114 в виде белого твердого вещества (11 мг, 15%). ЖХ/МС: RT=4,22 мин, [М+Н]+=421. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,19-8,12 (1H, м), 8,05-8,02 (1H, м), 7,44-7,37 (2H, м), 6,34 (1H, уширенный с), 3,92 (2H, с), 3,88-3,79 (8H, м), 3,00 (3H, с), 1,47 (6Н, с).

Пример 115. 2-(1H-Индол-5-ил)-7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин 115

Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7,7-диметил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин из примера 104 (50 мг, 0,18 ммоль), 5-индолилбориновую кислоту (42 мг, 0,26 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг, 0,02 ммоль) и карбонат натрия (0,5 мл, 0,5 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (1,5 мл). Затем воздух из флакона откачивали, и флакон заполняли азотом, после чего нагревали до температуры 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 115 в виде белого твердого вещества (11 мг, 17%). ЖХ/МС: RT=4,37 мин, [М+Н]+=367. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,67 (1H, с), 8,28-8,20 (2H, м), 7,39 (1H, д, J=8,6 Гц), 7,23-7,19 (1H, м), 6,61 (1H, уширенный с), 3,91 (2H, с), 3,90-3,82 (8H, м), 1,48 (6H, с).

Пример 118. 5-(7-Циклопропил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амин 118

Этап 1: Метиловый сложный эфир (трет-бутил-диметил-силанилокси)-циклопропил-уксусной кислоты

К раствору метилового сложного эфира циклопропил-гидрокси-уксусной кислоты (1,00 г, 7,68 ммоль) в DCM (9 мл) добавляли хлорид трет-бутилдиметилсилила (1,27 г, 8,45 ммоль) и имидазол (628 мг, 9,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 65 часов, после чего гасили водой (10 мл) и 1 М HCl (5 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×15 мл), объединенные органические фазы промывали 1 М HCl (10 мл), солевым раствором (10 мл) и высушивали (Na2SO4), после чего концентрировали в вакууме с получением метилового сложного эфира (трет-бутил-диметил-силанилокси)-циклопропил-уксусной кислоты в виде янтарного масла (1,66 г, 88%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 3,81 (1H, д, J=6,33 Гц), 3,74 (3H, с), 1,23-1,13 (1H, м), 0,89 (9H, с), 0,52-0,0,38 (4H, м), 0,06 (3H, с), 0,04 (3H, с).

Этап 2: 2-(трет-Бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этанол

К раствору метилового сложного эфира (трет-бутил-диметил-силанилокси)-циклопропил-уксусной кислоты (1,66 г, 6,79 ммоль) в DCM (27 мл) добавляли по каплям DIBAL-H (20,37 мл, 20,37 ммоль, 1,0 М в толуоле) в атмосфере азота при температуре -78°C. Реакционную смесь перемешивали при температуре -78°С в течение 2,5 часов, затем при температуре 0°C в течение 1 часа, после чего гасили сегнетовой солью (30 мл, 1 М водный раствор). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×30 мл), после чего объединенные органические фазы высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этанола в виде бледно-оранжевого масла (764 мг, 52%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 3,66-3,49 (2H, м), 3,09 (1H, ддд (дублет дублетов дублетов), J=7,96, 6,40, 3,80 Гц), 1,96 (1H, дд, J=7,43, 5,46 Гц), 0,91 (9H, с), 0,91-0,82 (1H, м), 0,57-0,43 (2H, м), 0,34-0,24 (1H, м), 0,23-0,14 (1H, м), 0,11 (3H, с), 0,07 (3H, с).

Этап 3: 5-[2-(трет-Бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,4,6-трихлор-пиримидин

К раствору 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (250 мг, 1,25 ммоль), 2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этанола (407 мг, 1,88 ммоль) и трифенилфосфина (493 мг, 1,88 ммоль) в THF (12 мл) добавляли DIAD (370 мкл, 1,88 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 18 часов, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-30% этилацетата в циклогексане) с получением 5-[2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,4,6-трихлор-пиримидина в виде вязкого желтого масла (411 мг, 83%). 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 4,14 (1H, дд, J=8,83, 6,02 Гц), 3,99 (1H, дд, J=8,82, 4,21 Гц), 3,60-3,53 (1H, м), 1,13-1,03 (1H, м), 0,89 (9H, с), 0,56-0,50 (2H, м), 0,46-0,28 (2H, м), 0,10 (3H, с), 0,07 (3H, с).

Этап 4: 4-{5-[2-(трет-Бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,6-дихлор-пиримидин-4-ил}-морфолин

К раствору 5-[2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,4,6-трихлор-пиримидина (411 мг, 1,03 ммоль) в IMS (5 мл) добавляли триэтиламин (215 мкл, 1,55 ммоль), а затем морфолин (94 мкл, 1,08 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 4 часов, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-20% этилацетата в циклогексане) с получением 4-{5-[2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,6-дихлор-пиримидин-4-ил}-морфолина в виде бесцветной смолы (387 мг, 84%). ЖХ/МС: RT=5,22 мин, [М+Н]+=448/450/452.

Этап 5: 1-Циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанол

К раствору 4-{5-[2-(трет-бутил-диметил-силанилокси)-2-циклопропил-этокси]-2,6-дихлор-пиримидин-4-ил}-морфолина (386 мг, 0,86 ммоль) в THF (10 мл) добавляли по каплям TBAF (фторид тетрабутиламмония) (947 мкл, 0,95 ммоль, 1,0 М раствор в THF). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 3 часов, после чего реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (20 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×20 мл), затем объединенные органические фазы промывали солевым раствором (10 мл), высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-50% этилацетата) с получением 1-циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола в виде бесцветной смолы (196 мг, 68%). ЖХ/МС: RT=3,04 мин, [М+Н]+=334/336.

Этап 6: 2-Хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин

К раствору 1-циклопропил-2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этанола (196 мг, 0,59 ммоль) в THF (10 мл) добавляли гидрид натрия (65 мг, 1,77 ммоль, 65% дисперсия в минеральном масле), и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 4 часов. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (15 мл), после чего экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические фазы высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением 2-хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина в виде белого твердого вещества (205 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=3,19 мин, [М+Н]+=298/300.

Этап 7: Во флакон для микроволнового реактора вносили 2-хлор-7-циклопропил-4-морфолин-4-ил-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин (205 мг, 0,49 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламин (324 мг, 1,47 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (51 мг, 0,07 ммоль), карбонат натрия (2,41 мл, 2,41 ммоль, 1 М водный раствор) и ацетонитрил (2,5 мл). Флакон закупоривали, после чего из флакона откачивали воздух, и флакон заполняли аргоном (x3), а затем нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-4% метанола в DCM), затем растирали в смеси диэтиловый эфир/пентан. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом метанола 10-98%) с получением 118 в виде белого твердого вещества с желтоватым оттенком (4,5 мг, 3%). ЖХ/МС: RT=3,52 мин, [М+Н]+=357. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 8,91 (2H, с), 7,01 (2H, с), 4,40 (1H, дд, J=11,38, 2,41 Гц), 4,01 (1H, дд, J=11,41, 7,52 Гц), 3,80-3,60 (9H, м), 1,11-0,98 (1H, м), 0,69-0,41 (4H, м).

Пример 119 5-(8-Метил-4-морфолино-7,8-дигидро-6Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин-2-ил)пиримидин-2-амин 119

Этап 1: трет-Бутиловый сложный эфир метил-[2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-этил]-карбаминовой кислоты

Смесь 2,4,6-трихлор-пиримидин-5-ола (300 мг, 1,50 ммоль), трет-бутилового сложного эфира (2-гидрокси-этил)-метил-карбаминовой кислоты (300 мг, 1,71 ммоль), трифенилфосфина (455 мг, 1,73 ммоль) и DIAD (339 мкл, 1,73 ммоль) в диоксане (2,5 мл) перемешивали при к.т. в течение 1,5 часов, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-50% этилацетата в циклогексане) с получением трет-бутилового сложного эфира метил-[2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-этил]-карбаминовой кислоты (666 мг, количественно). ЖХ/МС: RT=3,09 мин, [М-Boc+Na]+=279.

Этап 2: трет-Бутиловый сложный эфир [2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этил]-метил-карбаминовой кислоты

Смесь трет-бутилового сложного эфира метил-[2-(2,4,6-трихлор-пиримидин-5-илокси)-этил]-карбаминовой кислоты (1,50 ммоль), морфолина (130 мкл, 1,50 ммоль) и триэтиламина (417 мкл, 3,00 ммоль) в этаноле (5 мл) перемешивали при к.т. в течение 1 часа, а затем разделяли между этилацетатом и водой. Водную фазу экстрагировали дополнительным количеством этилацетата, и объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме с получением трет-бутилового сложного эфира [2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этил]-метил-карбаминовой кислоты (количественно). ЖХ/МС: RT=3,89 мин, [M-CH2CH2NMeBoc+H]+=250/252/254.

Этап 3: 2-Хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-7,8-дигидро-6Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин

Смесь трет-бутилового сложного эфира [2-(2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-этил]-метил-карбаминовой кислоты (1,50 ммоль) и 4 М HCl в метаноле (10 мл) перемешивали при к.т. в течение 1,5 часов, после чего концентрировали в вакууме и подвергали азотропной перегонке с этанолом. Полученный в результате осадок растворяли в метаноле (10 мл), после чего обрабатывали триэтиламином (3,0 мл), и полученную смесь перемешивали при к.т. в течение 30 минут, после чего концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-50% этилацетата в циклогексане) с получением 2-хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-7,8-дигидро-6Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазина (368 мг, 91% за 3 этапа). ЖХ/МС: RT=2,94 мин, [М+Н]+=271/273.

Этап 4: Смесь 2-хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-7,8-дигидро-6Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазина (120 мг, 0,44 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (196 мг, 0,88 ммоль), PdCl2dppf. DCM (36 мг, 0,04 ммоль) и карбоната цезия (573 мг, 1,76 ммоль) в диоксане (5 мл) и воду (0,5 мл) дегазировали и нагревали при температуре 100°C в течение 18 часов. Реакционную смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, градиент 0-5% метанола в DCM), после чего растирали в диэтиловом эфире с получением 119 (357 мг, 24%). ЖХ/МС: RT=3,04 мин, [М+Н]+=330. 1Н-ЯМР (400 МГц, DMSO): δ 8,94 (2H, с), 6,92 (2H, с), 4,16 (2H, т, J=4,37 Гц), 3,67 (4H, т, J=4,57 Гц), 3,52 (4H, т, J=4,56 Гц), 3,48 (2H, т, J=4,36 Гц), 3,13 (3H, с).

Пример 120. 2-(2-Аминопиримидин-5-ил)-8-метил-4-морфолино-6Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин-7(8Н)-он 120

Этап 1: 2-Хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-8Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин-7-он

Смесь этилового сложного эфира (2,4-дихлор-6-морфолин-4-ил-пиримидин-5-илокси)-уксусной кислоты (501 мг, 1,49 ммоль), метиламина (1,0 мл, 2,0 ммоль, 2 М в THF) и триэтиламина (250 мкл, 1,79 ммоль) в IMS (10 мл) нагревали при температуре 140°C в течение 35 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и полученный в результате осадок очищали методом колоночной хроматографии (SiO2, 0-20% этилацетата в циклогексане) с получением 2-хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-8Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин-7-она (159 мг, 38%). ЖХ/МС: RT=2,93 мин, [М+Н]+=285/287.

Этап 2: Смесь 2-хлор-8-метил-4-морфолин-4-ил-8Н-пиримидо[5,4-b][1,4]оксазин-7-она (100 мг, 0,35 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиримидин-2-иламина (116 мг, 0,53 ммоль), Pd(PPh3)2Cl2 (25 мг, 0,035 ммоль) и карбоната натрия (1,0 мл, 1,0 ммоль, 1 М водный раствор) в ацетонитриле (4 мл) дегазировали, а затем нагревали при температуре 120°C в течение 30 минут с применением микроволнового излучения. Реакционную смесь загружали на картридж Isolute® SCX-2, картридж промывали метанолом, и продукт элюировали 2 М раствором аммиака в метаноле. Щелочные фракции объединяли и концентрировали в вакууме. Полученный в результате осадок очищали методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкМ С18, 0,1% HCO2H в воде с градиентом ацетонитрила 5-98%) с получением 120 в виде белого твердого вещества (86 мг, 71%). ЖХ/МС: RT=3,04 мин, [М+Н]+=344. 1Н-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,14 (2Н, с), 5,25 (2Н, уширенный с), 4,62 (2Н, с), 3,81 (8Н, с), 3,49 (3H, с).

Пример 901. Анализ связывания PI3K р110α (альфа)

Анализы связывания: эксперименты по первичной поляризации проводили на приборе Analyst НТ 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA.). Образцы для измерения аффинности с помощью флуоресцентной поляризации получали в результате добавления в соотношении 1:3 растворов последовательного разведения PI3K р110 альфа (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA), начиная с конечной концентрации 20 мкг/мл, в буфере для поляризации (10 мМ Tris (трис(гидроксиметиламинометан)), pH 7,5, 50 мМ NaCl, 4 мМ MgCl2, 0,05% Chaps (3-[(3-холанидопропил)диметиламмоний]-1-пропансульфонат) и 1 мМ DTT (дитиотриэтол)), к раствору PIP2 (Echelon-lnc, Salt Lake City, UT.) с конечной концентрацией 10 мМ. После инкубирования в течение 30 минут при комнатной температуре реакции останавливали добавлением GRP-1 и зонда PIP3-TAMRA (Echelon-lnc, Salt Lake City, UT.) в конечных концентрациях 100 нМ и 5 нМ, соответственно. Величины флуоресцентной поляризации, зарегистрированные со стандартными фильтрами с ограниченной полосой пропускания для родаминового флуорофора (λex=530 нм; λem=590 нм) в 384-луночных темных планшетах с низким объемом Proxiplates® (PerkinElmer, Wellesley, MA.), использовали для построения графика функции концентрации белка, и значения EC50 получали приведением данных к 4-х параметровому уравнению с применением программного обеспечения KaleidaGraph® (Synergy software, Reading, PA). С помощью данного эксперимента также была установлена подходящая концентрация белка для применения в последующих конкурентных экспериментах с ингибиторами.

Значения IC50 ингибитора определяли добавлением 0,04 мг/мл PI3K p110 альфа (конечная концентрация), смешанной с PIP2 (конечная концентрация 10 мМ), в лунки, содержащие растворы в соотношении 1:3 последовательного разведения антагонистов с раствором АТФ с конечной концентрации 25 мМ (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) в буфере для поляризации. После инкубирования в течение 30 минут при комнатной температуре реакции останавливали добавлением GRP-1 и зонда PIP3-TAMRA (Echelon-lnc, Salt Lake City, UT.) в конечных концентрациях 100 нМ и 5 нМ, соответственно. Величины флуоресцентной поляризации, зарегистрированные со стандартными фильтрами с ограниченной полосой пропускания для родаминового флуорофора (λex=530 нм; λem=590 нм) в 384-луночных темных планшетах с низким объемом Proxiplates® (PerkinElmer, Wellesley, MA.), использовали для построения графика функции концентрации антагониста, и значения IC50 получали в результате приведения данных к 4-х параметровому уравнению с применением программного обеспечения Assay Explorer (MDL, San Ramon, CA.). В качестве альтернативы, ингибирование PI3K определяли радиометрическим анализом с применением очищенного рекомбинантного фермента и АТФ в концентрации 1 мкМ. Соединение формулы I последовательно разбавляли в 100% DMSO. Киназную реакцию инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре, и реакцию останавливали добавлением ФБР (фосфатного буферного раствора). Затем значения IC50 определяли с применением аппроксимации сигмоидальной кривой «доза-эффект» (переменная крутизна).

Пример 902. Анализ пролиферации клеток in vitro

Эффективность соединений формулы I измеряли в ходе анализа пролиферации клеток с применением следующего протокола (Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62: 5485-5488):

1. Аликвоту клеточной культуры объемом 100 мкл, содержащую приблизительно 104 клеток (РС3 (рака предстательной железы), Detroit562 (карциномы глотки) или MDAMB361,1 (рака молочной железы)) в среде наносили в каждую лунку 384-луночного планшета с непрозрачными стенками.

2. Приготавливали контрольные лунки, содержащие среду без клеток.

3. В экспериментальные лунки вносили соединение и инкубировали в течение 3-5 дней.

4. Температуру планшетов уравновешивали до комнатной температуры в течение приблизительно 30 минут.

5. Добавляли объем реактива CellTiter-Glo®, равный объему среды с клеточной культурой, присутствующей в каждой лунке.

6. Содержимое лунок перемешивали в течение 2 минут на орбитальном шейкере для того, чтобы вызвать лизис клеток.

7. Планшет выдерживали при комнатной температуре в течение 10 минут для стабилизации сигнала люминесценции.

8. Люминесценцию регистрировали и откладывали на графиках в виде RLU-относительных единиц люминесценции.

В качестве альтернативы, клетки высевали при оптимальной плотности в 96-луночном планшете и выдерживали в течение 4 дней в присутствии исследуемого соединения. Затем к среде для анализа добавляли Alamar Blue™, и клетки выдерживали в течение 6 часов, после чего регистрировали сигнал при длине волны возбуждения 544 нм и длине волны эмиссии 590 нм. Значения EC50 рассчитывали с применением аппроксимации сигмоидальной кривой «доза-эффект». Термин EC50 относится к половине максимальной эффективной концентрации и представляет собой концентрацию, в которой лекарственный препарат вызывает ответ, соответствующий половине между базовой линией и максимальным ответом после определенного времени воздействия. Данный показатель широко используют для измерения активности лекарственного препарата.

Антипролиферативное действие иллюстративных соединений формулы I измеряли в ходе анализа CellTiter-Glo® на различных линиях клеток опухоли, включая следующие:

Пример 903. Проницаемость Сасо-2

Клетки Caco-2 высевали на планшетах Millipore Multiscreen® с плотностью 1×105 клеток/см2 и культивировали в течение 20 дней. Затем проводили оценку проницаемости соединений. Соединения наносили на апикальную поверхность (A) монослоев клеток и измеряли проникновение соединения в базолатеральный (B) участок. Аналогичное измерение проводили в обратном направлении (B-A) для исследования активного транспорта. Рассчитывали значение коэффициента проницаемости, Papp, для каждого соединения, и скорость прохождения соединений через мембрану. Соединения объединяли в группы с низким (Papp</=1,0×106 м/с) или высоким (Papp>/=1,0×106 см/с) абсорбционным потенциалом на основании сравнения с контрольными соединениями с установленной для человека абсорбцией.

Для оценки способности соединений подвергаться активному оттоку определяли соотношение базолатерального транспорта (В) к апикальному транспорту (А) по сравнению с соотношением A к B. Значения В-А/А-В>/=1,0 свидетельствуют о наличии активного оттока из клеток.

Пример 904. Клиренс гепатоцитов

Применяли суспензии замороженных человеческих гепатоцитов. Инкубирование проводили при концентрации соединения 1 мМ или 3 мкМ при плотности 0,5×106 жизнеспособных клеток/мл. Конечная концентрация DMSO в инкубационной смеси составляла приблизительно 0,25%. Также проводили контрольное инкубирование при отсутствии клеток для того, чтобы выявить любое неферментативное разложение. Дублирующие объемы образцов (50 мкл) отбирали из инкубационной смеси через 0, 5, 10, 20, 40 и 60 минут (контрольный образец только через 60 минут) и добавляли к внутреннему стандарту, содержащему метанол (100 мкл), для остановки реакции. В качестве контрольных соединений можно применять толбутамид, 7-гидроксикумарин и тестостерон. Образцы центрифугировали, и супернатанты, отобранные в каждый момент времени, объединяли для анализа методом ЖХ/МС/МС (жидкостной храматографии и тандемной масс-спектрометрии). Истинный клиренс (CLint) рассчитывали из графика соотношения площадей пиков In (площадь пика исходного соединения/площадь пика внутреннего стандарта) относительно времени следующим образом: CLmt (мкл/мин/миллион клеток)=V×k, где k представляет собой константу скорости элиминации, полученную из градиента концентрации In, отложенного относительно времени; V представляет собой объемный компонент, полученный из объема инкубирования и выраженный в мкл 106 клеток-1.

Пример 905. Ингибирование цитохрома Р450

Можно провести скрининг соединений формулы I в отношении мишеней CYP450 (1А2, 2С9, 2С19, 2D6, 3A4) в приблизительно 10 концентрациях в двух повторах с максимальной концентрацией, составляющей приблизительно 100 мкМ. В качестве контроля можно применять стандартные ингибиторы (фурафуллин, сульфафеназол, транилципромин, хинидин, кетоконазол). Планшеты можно анализировать с применением прибора BMG Lab-Technologies PolarStar™ в флуоресцентном режиме.

Пример 906. Индукция цитохрома Р450

Свежевыделенные человеческие гепатоциты от одного донора можно выращивать в течение 48 часов перед добавлением соединения формулы I в трех концентрациях и инкубирования в течение 72 часов. Маркерные субстраты для CYP3A4 и CYP1A2 добавляют за 30 минут и 1 час до окончания инкубирования. Через 72 часа клетки и среду удаляют, и степень метаболизма каждого маркерного субстрата количественно определяют методом ЖХ/МС/МС. Эксперимент контролируют с применением индукторов конкретных Р450, которые инкубируют в одной концентрации в трех повторах.

Пример 907. Связывание с белками плазмы

Растворы соединения формулы I (5 мкм, конечная концентрация DMSO 0,5%) готовили в буфере и 10% плазме (об./об. в буфере). 96-луночный НТ планшет для диализа собирали таким образом, чтобы каждая лунка была разделена на две части полупроницаемой целлюлозной мембраной. В лунку с одной стороны мембраны добавляли буферный раствор, с другой стороны - раствор плазмы; затем проводили инкубирование планшетов при 37°C в течение 2 часов в трех повторах. После этого клетки удаляли, и растворы для каждой серии соединений объединяли в две группы (без плазмы и содержащие плазму), затем анализировали методом ЖХ/МС/МС с применением двух наборов калибровочных стандартов для растворов без плазмы (6 точек) и растворов, содержащих плазму (7 точек). Рассчитывали количество несвязанной фракции соединения.

Пример 908. Блокирование канала hERG

Оценивали способность соединений формулы I модулировать отток рубидия из клеток НЕК-294, стабильно экспрессирующих калиевые каналы hERG, с применением стандартного метода исследования истечения. Клетки приготавливали в среде, содержащей RbCl, высевали на 96-луночных планшетах и выращивали в течение ночи для образования монослоев. Эксперимент по изучению оттока начинали с отсасывания среды и промывки каждой лунки 3×100 мкл буфера для предынкубации (содержащего низкую концентрацию [K+]) при комнатной температуре. После последнего отсасывания в каждую лунку добавляли 50 мкл рабочего исходного (2×) раствора соединения и выдерживали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем к каждой лунке добавляли 50 мкл буфера для стимулирования (содержащего высокую концентрацию [K+]), в результате чего образовывались конечные концентрации исследуемых соединений. Затем планшеты с клетками инкубировали при комнатной температуре в течение дополнительных 10 минут. После этого 80 мкл супернатанта из каждой лунки переносили в эквивалентные лунки 96-луночного планшета и анализировали методом атомной эмиссионной спектроскопии. Соединение исследовали в виде кривых IC50, которые состояли из 10 точек и которые были получены в двух повторах, n=2, с максимальной концентрацией 100 мкМ.

Пример 909. Ксенотрансплантаты опухоли in vivo

Голым мышам NCR (Taconic Farms, IN) инокулировали подкожно в правую латеральную часть грудной клетки 5 миллионов клеток U-87 MG Merchant (внутрилабораторные производные клеток U-87 MG из АТСС, Manassas, VA) в растворе HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнка)/Matrigel (1:1, об./об.). Мышам, несущим ксенотрансплантаты опухоли, после разделения на различные группы доз с опухолями аналогичного размера вводили ежедневно перорально через желудочный зонд в течение <28 дней лекарственный препарат или наполнитель. Размеры опухоли фиксировали по меньшей мере два раза в неделю в течение курса исследования. Массу тела мышей также регистрировали по меньшей мере два раза в неделю, и за мышами наблюдали ежедневно. Объем опухоли измеряли в двух перпендикулярных измерениях (длина и ширина) с применением циркуля Ultra Cal-IV (Model 54-10-111; Fred V. Fowler Co., Inc.; Newton, MA) и анализировали с помощью программного обеспечения Excel v.11.2 (Microsoft Corporation; Redmond, WA). Графики ингибирования опухоли строили с применением программного обеспечения GraphPad Prism™, Version 5.0 с (GraphPad Software, Inc.; La Jolla, CA). Объем опухоли рассчитывали по формуле: Размер опухоли (мм3) = (максимальное измерение×минимальное измерение2) × 0,5

Массу тела животных измеряли с помощью весов Adventurer Pro™ AV812 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). Графики строили с применением GraphPad Prism™, Version 5.0c. Процент изменения массы рассчитывали по формуле: индивидуальный процент изменения массы = ((новая масса / исходная масса)-1) × 100.

Мышей, объем опухоли которых превышал 2000 мм3 или уменьшение массы тела которых превышало 20% от исходной массы, подвергали эвтаназии в соответствии с регуляторными руководствами.

Процент ингибирования роста опухоли (% TGI, tumor growth inhibition) по окончании исследования (EOS, end of study) рассчитывали по формуле: % TGI = (1-[(AUC / День)Лечение + (AUC/День)Контроль]) × 100, где AUC/День означает площадь под построенной кривой роста опухоли в натуральном масштабе, разделенную на количество дней исследования. Показатели роста Log2 (объем опухоли) откладывали для группы с каждой дозой с ограниченными кубическими сплайнами для фиксированного времени и эффекта дозы в каждой группе. Отложение проводили посредством линейной модели со смешанными эффектами, с применением пакета программ R 'nlme', версия 3.1-97 (11) в версии R 2.12.0 (R Development Core Team 2008; R Foundation for Statistical Computing; Vienna, Austria).

Частичный ответ (PR, partial response) определяли как уменьшение исходного объема опухоли, составляющее >50%, которое никогда не становилось полным ответом (CR, complete response) в какой-либо день исследования. CR определяли как 100% уменьшение исходного объема опухоли в любой день исследования. Показатель распространенности исследуемой опухоли (STI, study tumor incidence) выражал количество животных в группе с измеряемой опухолью для последнего измерения объема опухоли.

Линейный анализ смешанных эффектов также применяли для моделирования процента изменения массы тела в течение времени и в ответ на введение дозы.

Пример 910. Анализ индукции фосфорилирования АКТ.

В 6-луночных планшетах для культивирования тканей клетки высевали в концентрации 5×105 клеток на лунку в течение ночи. Клетки обрабатывали соединением формулы I в концентрации ЕС80. После обработки клетки промывали один раз холодным ФБР и лизировали в 1x буфере для экстракции клеток от Biosource (Carlsbad, CA) с добавлением ингибиторов протеаз (Roche, Mannheim, Германия), 1 мМ PMSF (фторид фенилметилсульфонила) и коктейля ингибиторов фосфатазы 1 и 2 от Sigma (St. Louis, MO). Определение концентрации белка проводили с применением аналитического набора Pierce ВСА Protein Analysis Kit (Rockford, IL). Содержание pAkt (Ser473) и суммарного Akt оценивали с применением наборов бусин от Biosource (Carlsbad, СА) и системы Luminex™ Bio-Plex (Bio-Rad, Hercules, СА).

Пример 911. Анализ активности по проникновению через гематоэнцефалический барьер на клетках MDCKI-MDR1 и анализы на клетках MDCKII-Bcrp1

Клетки почки собаки Madin-Darby (MDCK), гетерологически экспрессирующие Pgp человека или Bcrp1 мыши, применяли для определения того, являются ли исследуемые соединения субстратами данных транспрортеров, и посредством этого оценивали потенциал проникновения указанных соединений через гематоэнцефалический барьер. Клетки MDR1-MDCKI и разрешение на их использование были получены из NCI (National Cancer Institute, Национальный Институт Рака, Bethesda, MD), клетки Bcrpl-MDCKII были получены из Института Рака Нидерландов (Амстердам, Нидерланды). Клетки высевали на 24-луночных фильтровальных планшетах Millipore за 4 дня до начала исследования (полиэфирная мембрана, размер пор 1 мкМ; Millipore; Billerica, MA) с плотностью высевания 1,3×105 клеток/мл. Соединения исследовали в концентрации 5 мкМ в направлениях от апикального до базолатерального (А-В) и от базолатерального до апикального (В-А). Соединения растворяли в буфере для транспортирования, который состоял из сбалансированного солевого раствора Хэнка (HBSS) с 10 мМ HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин этансульфоновоя кислота) (Invitrogen Corporation, Grand Island, NY). В качестве параклеточного маркера применяли люцифер желтый (Sigma-Aldrich, St. Louis, МО). Кажущуюся проницаемость (Papp) в направлениях А-В и В-А рассчитывали после 2-х часовой инкубации с применением следующего уравнения:

Papp=(dQ/dt)×1/C0×1/A,

где dQ/dt представляет собой степень появления соединения в компартменте-получателе, C0 представляет собой концентрацию в компартменте-доноре и A представляет собой площадь целевой поверхности. Степень оттока (efflux ratio), которое определяют как Papp(B-A)/Papp A-B), применяли для оценки степени активного оттока, которому подвергаются соединения с исследуемым транспортером (P-гликопротеин или bcrp1). Соединения анализировали методом ЖХ/МС/МС.

Связывание с белками головного мозга у крыс измеряли для иллюстративных соединений формулы I, в том числе для следующих соединений:

Пример 912. Определение концентрации соединения в головном мозге

Головной мозг отбирали через 1 и 6 часов после введения дозы от 3 различных животных для каждой временной точки, промывали ледяным солевым раствором, взвешивали и хранили при температуре -80°C до проведения анализа. Для количественного определения соединения головной мозг мыши гомогенизировали в 3 объемах воды. Гомогенаты экстрагировали преципитацией белка ацетонитрилом, содержащим внутренний стандарт. Проводили анализ методом ЖХ/МС/МС. Концентрации соединений в гомогенатах головного мозга преобразовывали в концентрации в головном мозге для расчета соотношения головной мозг-плазма.

Пример 913. Измерение модуляции пути передачи сигналов PI3K в головном мозге

Для анализа модуляции пути передачи сигналов PI3K к буферу для экстракции клеток (Invitrogen, Camarillo, CA), содержащему 10 мМ Tris, pH 7,4, 100 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1 мМ EGTA, 1 мМ NaF, 20 мМ Na4P2O7, 2 мМ Na3VO4, 1% Triton Х-100, 10% глицерол, 0,1% SDS (додецилсульфат натрия) и 0,5% дезоксихолат, добавляли ингибиторы фосфатазы и протеазы (Sigma, St. Louis, MO) и 1 мМ PMSF. Данный буфер добавляли к замороженным образцам, полученным в результате биопсии головного мозга. Головной мозг отбирали через 1 и 6 часов после введения дозы и гомогенизировали с помощью небольшого пестика (Konte Glass Company, Vineland, NJ), осторожно подвергали обработке ультразвуком на льду и центрифугировали при 20000 g в течение 20 минут при температуре 4°C. Концентрацию белка определяли с применением набора для анализа белка ВСА (Pierce, Rockford, IL). Белки разделяли электрофорезом и переносили на нитроцеллюлозные мембраны NuPage (Invitrogen, Camarillo, СА). Систему детекции Licor Odyssey™ Infrared (Licor, Lincoln, NE) применяли для оценки и количественного определения экспрессии белка. Маркеры пути передачи сигналов PI3K оценивали методом иммуноблотинга с применением антител против pAktser473 и суммарного Akt (Invitrogen, Camarillo, CA и Cell Signaling, Danvers, MA).

Пример 914. Анализ эффективности на опухолях головного мозга in vivo Голым мышам CD-1 (Charles River Laboratories, Hollister, СА) внутричерепным способом посредством стереотаксической хирургии инокулировали внутрилабораторные клетки GS-2 (мультиформной глиобластомы человека), экспрессирующие люциферазу, которые были получены генно-инженерным методом, в HBSS. Мышам, наличие ксенотрансплантатов головного мозга у которых было подтверждено методом магнитно-резонансного исследования (MRI), на четвертую неделю после инокуляции клеток после разделения на группы с опухолями аналогичного размера вводили один раз в день перорально через желудочный зонд в течение 28 дней лекарственный препарат или наполнитель. Исследование методом MRI (4,7T, Varian, Inc., Palo Alto, CA) повторяли в конце 28-дневного периода введения доз для оценки ответа на лечение.

Массу тела мышей измеряли по меньшей мере два раза в неделю, и за мышами наблюдали ежедневно. Массу тела животных измеряли с применением весов Adventurer Pro™ AV812 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). Графики строили с применением программного обеспечения GraphPad Prism™, Version 5.0 с. Процент изменения массы рассчитывали по формуле: индивидуальный процент изменения массы = ((новая масса / исходная масса)-1) × 100. Мышей, объем опухоли которых превышал 2000 мм3 или уменьшение массы тела которых превышало 20% от исходной массы, подвергали эвтаназии в соответствии с регуляторными руководствами.

Изменение объема опухоли моделировали как линейное между двумя моментами времени, в которые каждое животное подвергали исследованию. Для обработки полученных данных использовали линейную модель со смешанными эффектами с применением пакета программ R 'nlme', версия 3.1-97 (11) в версии R 2.12.0 (R Development Core Team 2008; R Foundation for Statistical Computing; Vienna, Austria). Модель со смешанными эффектами учитывает повторяющиеся измерения на отдельных мышах в течение времени и позволяет соответствующим образом рассчитать корреляцию для каждой мыши. Линейный анализ смешанных эффектов также применяли для моделирования процента изменения массы тела в течение времени.

Образцы плазмы и головного мозга отбирали через 2 и 8 часов после последнего введения соединения для анализа фармакокинетики (ФК), фармакодинамики (ФД) и/или иммунногистохимии (ИГХ).

Пример 915. Исследование ФК/ФД на ксенотрансплантатах опухоли in vivo

Голым мышам NCR (Taconic Farms, IN) инокулировали подкожно в правую латеральную часть грудной клетки 5 миллионов клеток U-87 MG Merchant (внутрилабораторные производные клеток U-87 MG из АТСС, Manassas, VA) в растворе HBSS/Matrigel™, BD Biosciences (1:1, об./об.). Мышам, несущим ксенотрансплантаты опухоли размером >600 мм3, после разделения на группы с опухолями аналогичного размера вводили один раз лекарственный препарат или наполнитель. Образцы плазмы, подкожных ксенотрансплантатов опухоли, скелетных мышц и головного мозга отбирали через 1, 4, 12 и 24 часа после введения лечения для анализа ФК, ФД и/или ИГХ.

Слова «содержит», «содержащий» и «включает», «включающий» при их использовании в данной спецификации и последующих пунктах формулы изобретения указывают на наличие заданных свойств, целых, компонентов или этапов, однако при этом данные слова не исключают наличия или добавления одного или нескольких других свойств, целых, компонентов, этапов или их групп. Хотя вышеизложенное изобретение было описано в некоторых деталях путем иллюстрации и примера для ясности понимания, приведенные описания и примеры не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Раскрытия, описанные во всей патентной и научной литературе, ссылки на которую содержатся в настоящей заявке, явным образом включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.

1. Соединение формулы Ia:

и стереоизомеры и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения, где

R1 и R2 независимо выбирают из Н, C1-C6 алкила и С312 карбоциклила, причем указанный алкил R2 необязательно замещен одной или несколькими группами, которые независимо выбирают из F, Cl, Br, I и -ОН; или

группы R2 образуют 3-6-членное карбоциклическое кольцо;

R3 выбирают из С6 арила, 6-членного гетероарила, содержащего один или два гетероатома, представляющих собой N, где указанный арил и гетероарил необязательно замещены одной или несколькими группами, которые независимо выбирают из -NH2, -NHCH3, -NHCOCH3, -ОН, -ОСН3 и -NHS(O)2CH3, или индолила.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R1 независимо выбирают из Н, -СН3, -СН2СН3, -С(СН3)3.

3. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R1 независимо выбирают из Н, -СН3 и циклопропила.

4. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R2 независимо выбирают из Н, -СН3, -С(СН3)3, -СН2ОН, -CF3, -CH2F и циклопропила.

5. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что каждый R2 представляет собой -СН3.

6. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что два R2 образуют циклопропил.

7. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NH2, -NHCH3, -NHCOCH3, -ОН, -ОСН3, -NHS(O)2CH3.

8. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R3 представляет собой бициклическую гетероарильную группу, представляющую собой 1Н-индол.

9. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R3 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из 2-пиразинила, 3-пиридазинила, 4-пиридазинила, 5-пиридазинила, 2-пиримидинила, 5-пиримидинила, 6-пиримидинила, 2-пиридила, 3-пиридила и 4-пиридила.

10. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что R3 представляет собой 2-аминопиримидин-5-ил.

11. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что необязательно замещенный R3 выбирают из:

где волнистая линия показывает место присоединения.

12. Соединение по п. 1

отличающееся тем, что

R1 независимо выбирают из Н, -СН3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -СН3, -С(СН3)3, -СН2ОН, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой

моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила и пиримидинила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -ОСН3, или

бициклическую гетероарильную группу, представляющую собой 1Н-индол.

13. Соединение по п. 1

отличающееся тем, что

R1 независимо выбирают из Н, -СН3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -СН3, -С(СН3)3, -СН2ОН, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила и пиримидинила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -ОСН3.

14. Соединение по п. 1

отличающееся тем, что

R1 независимо выбирают из Н, -СН3 и циклопропила;

R2 независимо выбирают из Н, -СН3, -С(СН3)3, -СН2ОН, -CF3, -CH2F и циклопропила;

R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой 2-аминопиримидин-5-ил.

15. Соединение по п. 1

отличающееся тем, что

R1 независимо выбирают из Н, -СН3 и циклопропила;

группы R2 образуют 3-6-членное карбоциклическое кольцо;

R3 представляет собой фенил, замещенный одной или несколькими группами, которые выбирают из -NHCOCH3, -ОН и NHS(O)2CH3; или

R3 представляет собой моноциклическую гетероарильную группу, которую выбирают из пиридила и пиримидинила, необязательно замещенного заместителем, который выбирают из -NH2, -NHCH3 и -ОСН3.

16. Соединение по п. 1, которое выбирают из:

5-(4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина;

5-[(6R)-6-метил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил]пиримидин-2-амина;

5-(7-метил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина;

5-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина;

5-[4-морфолино-7-(трифторметил)-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил]пиримидин-2-амина;

5-(4-морфолиноспиро[6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-7,1'-циклопропан]-2-ил)пиримидин-2-амина;

5-(6-циклопропил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина;

5-(7-трет-бутил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина;

3-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенола;

2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина;

5-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиридин-2-амина;

N-[4-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенил]ацетамида;

5-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)-N-метил-пиридин-2-амина;

N-[3-(7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)фенил]метансульфонамида;

2-(1Н-индол-5-ил)-7,7-диметил-4-морфолино-6Н-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидина;

5-[7-(фторметил)-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил]пиримидин-2-амина;

[2-(2-аминопиримидин-5-ил)-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-7-ил]метанола;

5-(7-циклопропил-4-морфолино-6,7-дигидро-[1,4]диоксин[2,3-d]пиримидин-2-ил)пиримидин-2-амина.

17. Фармацевтическая композиция, ингибирующая активность PI3-киназы (фосфоинозитид-3-киназы), содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-16 и фармацевтически приемлемый носитель, вещество, способствующее скольжению, разбавитель или эксципиент.

18. Способ лечения рака у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что указанный рак представляет собой рак головного мозга.

19. Способ получения фармацевтической композиции, включающий объединение соединения по любому из пп. 1-16 с фармацевтически приемлемым носителем.

20. Набор для лечения состояния, опосредованного фосфоинозитид-3-киназой (PI3K), причем указанный набор содержит:

a) первую фармацевтическую композицию, содержащую соединение по любому из пп. 1-16; и

b) инструкции по применению.

21. Применение соединения по любому из пп. 1-16 для производства лекарственного препарата для лечения рака, где указанный рак представляет собой рак головного мозга.

22. Применение соединения по любому из пп. 1-16 для лечения рака, где указанный рак представляет собой рак головного мозга.

23. Соединение по любому из пп. 1-16 для применения при лечении рака, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой рак головного мозга.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новым производным витамина В6 общей формулы (I), обладающим высокой антибактериальной активностью. где при R1=R4=N+(CH3)2C8H17, R2+R3=-С(СН3)2O-, R5=Н, n=2, m=0; при R1=R4=N+(CH3)2C12H25, R2+R3=-C(CH3)2O-, R5=H, n=2, m=0; при R1=R4=N+(CH3)2C18H37, R2+R3=-C(CH3)2O-, R5=H, n=2, m=0; при R1=R4=N+(CH3)2C8H17, R2=R5=H, R3=OH, n=2, m=1; при R1=R4=N+(CH3)2C12H25, R2=R5=H, R3=OH, n=2, m=1; при R1=R4=N+(СН3)2C18H37, R2=R5=H, R3=OH, n=2, m=1; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C2H5)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C3H7)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C4H9)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C(CH3)3)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C8H17)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(CH2CH(CH3)C9H19)O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH2O-, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-С(цикло-С4Н8)О-, R4=N+(СН3)2С18Н37, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C3H7)O-, R4=N+(CH3)2C8H17, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH(C3H7)O-, R4=N+(CH3)2C12H25, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH2O-, R4=N+(CH3)2C8H17, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-CH2O-, R4=N+(CH3)2C12H25, n=1, m=0; при R1=R5=H, R2+R3=-C(CH3)2O-, R4=N+(CH3)2C12H25, n=1, m=0; при R1=R2=R5=H, R3=OH, R4=N+(CH3)2C12H25, n=1, m=1; при R1=R3=R5=H, R2=C(O)CH3, R4=N+(СН3)2С8Н17, n=1, m=0; при R1=R3=R5=H, R2=C(O)CH3, R4=N+(СН3)2С12Н25, n=1, m=0; при R1=R3=R5=H, R2=C(O)CH3, R4=N+(СН3)2С18Н37, n=1, m=0; при R1=R2=R3=R5=H, R4=N+(CH3)2C8H17, n=1, m=1; при R1=R2=R3=R5=H, R4=N+(CH3)2C12H25, n=1, m=1; при R1=R2=R3=R5=H, R4=N+(CH3)2C18H37, n=1, m=1; при R1=N+(СН3)2С8Н17, R2+R3=-C(CH3)2O-, R4+R5=-OC(CH3)2OCH2-, n=1, m=0; при R1=N+(CH3)2C18H37, R2+R3=-C(CH3)2O-, R4+R5=-OC(CH3)2OCH2-, n=1, m=0; при R1=N+(CH3)2C8H17, R2+R3=-C(CH3)2O-, R4=OH, R5=CH2OH, n=1, m=1; при R1=N+(СН3)2С18Н37, R2=H, R3=R4=OH, R5=CH2OH, n=1, m=1.

Изобретение относится к соединению формулы I и его фармацевтически приемлемым солям , где R представляет собой водород, РО(ОН)2, Р(=O)(O-(С1-С6)алкиленфенил)2 или Р(=O)(ОМ)2; W представляет собой 2-галогенофенил, 3-галогенофенил или 4-галогенофенил; R5 представляет собой (С1-С6)алкокси, гидроксил или OR8; R6 представляет собой гидроксил или (С1-С6)алкокси; R7 представляет собой водород, гидроксил или O-(С1-С6)алкиленфенил; R8 представляет собой РО(ОН)2, Р(=O)(O-(С1-С6)алкиленфенил)2 или Р(=O)(ОМ)2, и М представляет собой моновалентный ион металла; или где R представляет собой водород, РО(ОН)2, Р(=O)(O-(С1-С6)алкиленфенил)2 или Р(=O)(ОМ)2; W представляет собой 2-галогенофенил, 3-галогенофенил или 4-галогенофенил; R5 представляет собой водород, (С1-С6)алкокси, гидроксил или OR8; R6 представляет собой (С1-С6)алкокси; R7 представляет собой гидроксил или O-(С1-С6)алкиленфенил; R8 представляет собой РО(ОН)2, Р(=O)(O-(С1-С6)алкиленфенил)2 или Р(=O)(ОМ)2, и М представляет собой моновалентный ион металла.

Изобретение относится к соединению, которое имеет изображенную ниже формулу (I), или к его фармакологически приемлемой соли. Данное соединение может ингибировать киназы семейства рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) в раковых тканях.

Изобретение относится к cоединениям формулы А, В или С, где каждый из R1 и R2 независимо представляет собой метил, этил, пропил или изопропил; или R1 и R2 вместе с атомом N, к которому они присоединены, образуют 3-7-членное кольцо, которые являются промежуточными соединениями для получения икотиниба-ингибитора тирозинкиназы, а также изобретение относится к способам получения икотиниба, гидрохлорида икотиниба и указанных соединений.

Изобретение относится к синтетическим биологически активным веществам гетероциклического ряда, обладающим высокой антиадренергической активностью, представляющим собой бета-замещенные спирты, содержащие фрагмент пиридоксина общей формулы 1: , где: Соединения общей формулы 1 обладают высокой эффективностью и продолжительностью антиадренергических свойств на фоне короткого времени наступления действия и низкой токсичности.

Изобретение относится к новым производным пиридоксина общей формулы (I), обладающим высокой антибактериальной активностью. где при R1+R2=-С(СН3)2-, R3+R4=-CH2N+(C8H17)2CH2-, n=1, X=Cl, m=0, при R1=R2=Η, R3+R4=-CH2N+(C8H17)2CH2-, n=1, Χ=Cl, m=1, при R1+R2=-С(СН3)2-, R3=R4=CH2N+(CH3)2C8H17, n=2, Χ=Cl, m=0, при R1=R2=Η, R3+R4=CH2N+(CH3)2C8H17, n=2, X=Cl, m=1, при R1+R2=-C(CH3)2-, R3=CH2OH, R4=CH2N+(CH3)2C8H17, n=1, X=Br, m=0, при R1+R2=-C(CH3)2-, R3=CH2OH, R4=CH2N+(CH3)2C18H37, n=1, X=Br, m=0, при R1=R2=H, R3=CH2OH, R4=CH2N+(CH3)2C8H17, n=1, X=Br, m=1, при R1=R2=H, R3=CH2OH, R4=CH2N+(CH3)2C18H37, n=1, X=Br, m=1, при R1+R2=-C(CH3)2-, R3=CH2N+(CH3)2C8H17, R4=Η, n=1, X=Cl, m=0, при R1+R2=-C(CH3)2-, R3=CH2N+(CH3)2C18H37, R4=Η, n=1, X=Cl, m=0, при R1=R2=R4=H, R3=CH2N+(CH3)2C8H17, n=1, X=Cl, m=1, при R1=R2=R4=H, R3=CH2N+(CH3)2C18H37, n=1, X=Cl, m=1. Изобретение может найти применение в медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к производным никотинамида формулы (I), обладающим свойством ингибитора Syk-киназы, и к фармацевтической композиции на их основе. В общей формуле (I) R1 обозначает атом галогена; R2 обозначает заместитель, представленный следующей формулой (II-1) , в R3 обозначает пиридильную группу, представленную следующими формулами (VIII-1) или (VIII-2), R4 и R5 обозначают атом водорода.

Изобретение относится к синтетическим биологически активным веществам гетероциклического ряда, обладающим антагонистической активностью по отношению к пуринорецепторам и представляющим собой продукты модификации пиридоксина, а именно n-(1,5-дигидро-3-R-8-метил-9-гидрокси-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридинил-6-азо)фенилсульфокислоты и их солевые формы общей формулы I, где R выбран из группы: атом водорода, этил, гептил или октил.

Изобретение относится к применению в качестве антагонистов пуринорецепторов синтетических биологически активных веществ гетероциклического ряда, обладающих антагонистической активностью по отношению к пуринорецепторам и представляющих собой продукты модификации пиридоксина, а именно n-(1,5-дигидро-3-R1-3-R2-8-метил-9-гидрокси-[1,3]диоксепино[5,6-с] пиридинил-6-азо)фенилсульфокислоты и их солевые формы общей формулы I, где R1 - атом водорода или метил, R2- метил, изо-пропил.

Изобретение относится к синтетическим биологически активным веществам гетероциклического ряда, обладающим антихолинэстеразной активностью, и представляет собой продукты модификации ацеталей пиридоксина, а именно 1,5-дигидро-3-R1-3-R2-7,8-диметил-9-диметилкарбамоилокси-[1,3]диоксепино[5,6-с]пиридиний бромиды общей формулы I, где R1 - атом водорода или метил,R2 выбраны из группы: метил, этил, пропил, изо-пропил, трет-бутил, гептил, октил или (1-метилдецил).Соединения формулы (I) обладают высокой антихолинэстеразной активностью и могут найти применение в медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к конкретным аналогам диазонамида, структуры которых приведены в формуле изобретения. Соединения по изобретению применяют для изготовления фармацевтической композиции, предназначенной для применения в качестве антипролиферативного средства, содержащей терапевтически эффективное количество соединения в единичной лекарственной форме по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем.

Изобретение относится к соединениям формулы I, приведенной ниже, или к их стереомерам, таутомерам или фармацевтически приемлемым солям. R1, R2, Ra, Rb, Rc, Rd, X, Y, B и кольцо C являются такими, как определено в формуле изобретения.

Изобретение относится к соединениям Формулы I, их стереоизомерам и фармацевтически приемлемым солям, в которой R1, R2, R3, R4 и R10 имеют значения, указанные в формуле изобретения.

Изобретение относится к селенофеновому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или гидрату. Кольцо А представляет собой сопряженное бензольное кольцо; 6-членное ароматическое сопряженное кольцо, содержащее один атом азота; 5-членное ароматическое сопряженное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбираемых из серы, кислорода, азота и селена, при условии, что присутствует не более одного атома кислорода, или серы, или селена; такие кольца включают пиридин, пиридазин, пиразин, пиримидин, тиофен, фуран, пиррол, селенофен, пиразол, имидазол, оксазол, изоксазол, тиазол и изотиазол; где кольцо А замещено одной, двумя или более группами, независимо друг от друга выбираемыми из водорода, амино, тиола, С1-6 алкила и С1-6 алкокси.

Изобретение относится к N-гетероарильным соединениям и к их фармацевтически приемлемым солям, сольватам или N-оксидам общей формулы (I), где R1: галоген, С1-С6-алкил, С1-С6-алкилокси, С1-С6-алкилтио, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил, С1-С6-алкилокси-С1-С6-алкил, C1-С6-алкил-карбонил, SF5, С1-С6-алкилсульфонил, где каждый углеродосодержащий радикал необязательно замещен одним или несколькими атомами галогена, R2: водород, С1-С6-алкил, R3, R4 и R7 водород, С1-С6-алкил, R5: водород, C1-С6-алкил, C1-С6-ацил или С1-С6-алкилоксикарбонил, R6: водород, С1-С6-алкил, С1-С6-алкилоксикарбонил, фенил, фенил-С1-С6-алкил, n=1-3, X: карбонильная, тиокарбонильная или сульфонильная группа, А является связью, Е является связью или NR9, где R9 - водород, В представляет собой N, D представляет собой N или CR11, где R11 - водород, Y1 представляет собой С или N, где С замещен R12, который является водородом, С1-С6-алкилом, C1-С6-галоалкилом, нитро, Y2 представляет собой С или N, где С замещен R13, который является водородом, галогеном, C1-С6-алкилом, С1-С6-галоалкилом, С1-С6-алкокси, С1-С6-галоалкокси, нитрило, ди(С1-С6-алкил)амино, N-пирролидинилом, С1-С6-алкилтио, С1-С6-алкилкарбонилом, аминокарбонилом, С1-С6-алкиламино-карбонилом, С1-С6-алкоксикарбонилом, Y3 представляет собой С, где С замещен R14, который является водородом, С1-С6-алкилом, С1-С6-алкокси, амино, N-пирролидинилом, N-пиперидинилом, N-морфолинилом, С1-С6-алкилкарбонилом, 1,3-диоксоланом, являющимся незамещенным или замещенным С1-С6-алкилом, Y4 представляет собой С или N, где С замещен R15, который является водородом, С1-С6-алкилом, причем два из Y1, Y2 и Y4 могут представлять собой N, или Y3 и Y4 соединены с образованием кольцевой системы, выбранной из фенила, тиофена, имидазола, пиридина, фурана, 1,4-диоксана, триазола, и где по меньшей мере один из В и D является атомом азота.

Изобретение относится к конденсированному гетероциклическому производному формулы (I), выбранной из структур А, В, С, D и Е, где R1 выбран из (1-4С)алкила; (3-6С)циклоалкила; инданила, необязательно замещенного галогеном; фенила, необязательно замещенного одним - тремя заместителями, независимо выбранными из галогена, циано, (1-4С)алкила, необязательно замещенного одним или несколькими атомами фтора, (1-4С)алкокси, необязательно замещенного одним или несколькими атомами фтора; пиридила, необязательно замещенного одним атомом галогена; Z представляет собой линкерную группу -W-(Cn-алкилен)-Т-, где W связан с R1 и выбран из связи, -О-, -S-, -SO2-, -NH-, -СН=СН-, -С≡С- и транс-циклопропилена; n представляет собой целое число от 0 до 2; Т связан с фрагментом фенилена и выбран из связи, -О-, -S-, -SO2-, -NH-, -СО-, -С=С-, -С≡С- и транс-циклопропилена; R2 представляет собой Н или один или два заместителя, независимо выбранных из галогена, (1-4С)алкила, необязательно замещенного одним - тремя атомами галогена, или (1-4С)алкокси; X выбран из С или N; если X представляет собой С, R3 выбран из Н и (1-4С)алкила, в ином случае R3 отсутствует; Y выбран из NH, О и S; R4 представляет собой (1-4С)алкилен-R5, где один или несколько атомов углерода в алкиленовой группе может быть независимо замещен одним или двумя атомами галогена или (СН2)2, образуя циклопропильную часть, R5 представляет собой -СООН.

Изобретение относится к способу получения новых алкилзамещенных 4-галоген-3-гидроксифуро[3,4-с]пиридин-1(3H)-онов общей формулы I, где R1=R2=CH3, Hlg=Cl; R1=СН3, R2=C2H5, Hlg=Cl; R1=CH3, R2=C3H7, Hlg=Cl; R1=R2=CH3, Hlg=Br; R1=CH3, R2=C2H5, Hlg=Br; R1=СН3, R2=C3H7, Hlg=Br, заключающемуся в том, что соответствующий 3-амино-8-гидрокси-1,6-диоксо-2,7-диазаспиро[4.4]нон-3-ен-4-карбонитрил растворяют в 2-5-кратном избытке концентрированной галогеноводородной кислоты, затем добавляют 5-7-кратный избыток галогенида фосфора (III), реакционную массу кипятят 40-50 минут, охлаждают, разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к конкретным трициклическим производным пирролидина, их применению и фармацевтической композиции на их основе.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям. Соединения изобретения обладают свойствами антагониста орексинового рецептора.

Изобретение относится к производным никотинамида формулы (I), обладающим свойством ингибитора Syk-киназы, и к фармацевтической композиции на их основе. В общей формуле (I) R1 обозначает атом галогена; R2 обозначает заместитель, представленный следующей формулой (II-1) , в R3 обозначает пиридильную группу, представленную следующими формулами (VIII-1) или (VIII-2), R4 и R5 обозначают атом водорода.
Изобретение относится к медицине, а именно к оторинолярингологии и онкологии. Выполняют ангиографическое исследование непосредственно в рентгеноперационной, перед процедурой введения препарата платины.

Изобретение относится к соединению формулы I ,которые используются в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназы, обладающие противораковой активностью, противовоспалительной активностью или иммунорегуляторными свойствами. Технический результат: получены новые соединения формулы I, а также фармацевтические композиции на их основе, которые могут быть использованы для производства лекарственного препарата для лечения рака, в частности рака головного мозга. 7 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 табл., 41 пр.

Наверх