Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов



Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов
Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов

 


Владельцы патента RU 2613139:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области молекулярной онкологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов. Способ включает получение ДНК, выделенной из биопсийного материала; амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров; количественную интерпретацию результатов амплификации. Осуществление способа возможно с операционным материалом и тканевыми биоптатами, полученными во время гастроскопии; регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 10 часов. Способ позволяет эффективно и своевременно идентифицировать аденокарциному G3 и перстневидноклеточный рак желудка, дает возможность уточнения предоперационного прогноза, что способствует принятию правильной тактики лечения и улучшению его результатов. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной онкологии, и касается способа дифференцировки аденокарциномы G3 и перстневидноклеточного рака с помощью сравнительного определения копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в опухолевой и условно здоровой ткани желудка.

Своевременность выявления рака желудка, занимающего пятое место в мире по распространенности среди онкологических заболеваний, играет существенную роль в формировании прогноза течения заболевания. Рак желудка, являясь гетерогенным заболеванием, классифицируется в зависимости от гистологических, анатомических, эпидемиологических и молекулярных особенностей. Разные молекулярные первопричины малигнизации и биология опухоли подразумевают разные молекулярные мишени и прогностические биомаркеры для каждого подтипа рака желудка. Тем не менее в литературе недостаточно данных о корреляции между клинико-морфологическими классификациями и молекулярно-генетическими изменениями, характерными для каждого подтипа.

Изменение числа копий гена является одним из основных механизмов контроля раковой клеткой генов, ключевых для выживания и малигнизации, так как результатом этого генетического полиморфизма может стать снижение или повышение экспрессии продукта гена - белка или не кодирующей РНК. Таким образом, изменение копийности генов может представлять инициаторную точку генетических изменений при малигнизации тканей и прогрессии злокачественных новообразований.

Ген GSTP1 кодирует глутатион-S-трансферазу пи, один из ферментов второй фазы системы детоксикации гидрофобных и электрофильных ксенобиотиков и канцерогенов, который осуществляет их превращение из активных метаболитов в нетоксичные водорастворимые компоненты и предотвращает, таким образом, повреждение ДНК. Клиническая роль этого фермента при раке до сих пор неясна, в литературе имеются данные о снижении его экспрессии при плоскоклеточном раке полости рта и данные об увеличении количества копий этого гена в клеточных линиях рака головы и шеи (см. Ma et al. Decreased expression of glutathione S-transferase pi correlates with poorly differentiated grade in patients with oral squamous cell carcinoma// J of Oral Pathology&Medicine. 2015. V. 44, p. 193-200). Кроме того, показано, что потеря экспрессии GSTP1 преимущественно отмечается в случае Эпштейн-Барр-ассоциированного рака желудка, причем эффект глушения осуществляется путем метилирования промотора гена GSTP1 (Kim J. et al. Silencing and CpG Island Methylation of GSTP1 is Rare in Ordinary Gastric Carcinomas but Common in Epstein-Barr Virus-associated Gastric Carcinomas // Anticancer Research 2005. V. 25. N. 6B. P. 4013-4019.

NFKB1 кодирует транскрипционный фактор NF-κBI (ядерный фактор «каппа-би») - универсальный фактор транскрипции, контролирующий экспрессию генов иммунного ответа, апоптоза и клеточного цикла. В норме активность сигнального пути NF-κВ в клетке находится под строгим контролем, однако мутации различных генов могут стать причиной его конститутивной активации. Это имеет место при лимфомах и аденокарциномах различного происхождения, а также множественной миеломе (см. Staudt L.M. Oncogenic activation of NF-kappaB // Cold Sprin Harb Perspect Biol. 2010. B.6. N.2. C.a0001098. DOL10.1101/cshperspect.a000109 - PMID 20516126).

HV2 - локус D-петли митохондриальной ДНК (мтДНК) относится к регуляторным не кодирующим элементам и обладает высокой мутабельностью. Уровень мтДНК в лейкоцитах крови определяли во многих исследованиях различных видов рака, хотя вопрос о ценности показателя копийности мтДНК в лейкоцитах для диагностики и прогноза лечения опухолей желудка остается дискуссионным. Так, в широкомасштабном исследовании, включавшем группы пациентов с раком желудка на различных стадиях и условно здоровых доноров, не было обнаружено значимой ассоциации между числом копий мтДНК в лейкоцитах и риском развития рака желудка, но тем не менее была показана достоверная корреляция данного показателя и прогрессии заболевания (Liao L.M. et al. Mitochondrial DNA Copy Number and Risk of Gastric Cancer: a Report from the Shanghai Women's Health Study // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2011, 20(9); 1944-9). Результаты другого исследования продемонстрировали достоверную ассоциацию копийности мтДНК с риском малигнизации тканей желудка (Fernfndes J. et al. Circulating Mitochondrial DNA Level, a Noninvasive Biomarker for the Early Detection of Gastric Cancer // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2014. 23(11); 2430-8).

Изобретение «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» является новым, так как не известна корреляция копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 с классификацией опухоли при диагностике рака желудка.

Целью заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, недорогостоящего способа предварительной идентификации типов и стадии рака желудка.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет коэффициентов копийности генов по формуле K=rCcancer/rCnormal, где

K - коэффициент относительной копийности,

rCcancer - относительная копийность гена в опухолевой ткани,

rCnormal - относительная копийность гена в условно нормальной ткани, сравнивают полученные значения со стандартными коэффициентами копийности, при значении KGSTP1=0,85±0,11, KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06 диагностируют аденокарциному G3, при значении KGSTP=1,21±0,02, KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10 диагностируют перстневидноклеточный рак желудка.

Заявленный анализ основан на определении показателей относительной копийности генов (rC), нормализованных относительно референтного локуса гена В2М (β-2 микроглобин), и последующем вычислении коэффициента копийности генов (К) в опухолевой ткани по отношению к копийности генов в нормальной ткани.

Заявленный способ включает следующие приемы:

- выделение тотальной ДНК из тканевых проб с помощью метода фенол-хлороформной экстракции;

- определение относительной копийности генетических локусов методом ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA-Green и специфичных праймеров на матрице выделенной ДНК;

- анализ первичных данных с помощью программного продукта амплификатора;

- расчет относительной копийности гена (rC) на основании соотношения сигналов, продуцируемых амплификатами изучаемой и референсной последовательностей,

- статистическая обработка данных и расчет коэффициентов копийности (Kобразец) с последующим сравнением со значениями коэффициентов копийности (Kстандарт), определенных для разных стадий и типов рака желудка.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

На первом этапе отбираются образцы тканей - опухолевые и условно здоровые, из операционного или биопсийного материала. Для транспортировки в лабораторию и хранения образцы замораживаются в жидком азоте.

Фрагменты ткани измельчаются скальпелем и/или ножницами, затем растираются в фарфоровых ступках в присутствии лизирующего SDS-содержащего буфера. К лизатам добавляется протеиназа К и инкубируется при t=56°C в течение 1 часа.

ДНК выделяется из прозрачного лизата тканей с использованием фенол-хлороформной экстракции (см. Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П. и др. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел. - Ростов-н/Д : ООО Ростиздат, 2001).

Концентрация полученных препаратов ДНК измеряется на флюориметре. Для проведения ПЦР-РВ концентрацию ДНК в каждом образце нормализовывают до 2нг/мкл.

Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 25 мкл ПЦР-смеси, содержащей 10 нг геномной ДНК, 0,2 мМ dNTPs, 2,5 мМ MgCl2, 1x-ый ПЦР-буфер, 0,1 е.а. ДНК-полимеразы Thermus aquaticus («Синтол», Россия), краситель SYBR@Green I (Invitrogen, США) и по 100 нМ прямого и обратного праймеров для референтного гена (β-2 микроглобин) или гена-мишени. Прямые и обратные праймеры были разработаны для нуклеотидных последовательностей, содержащих интронные и экзонные участки генетических локусов, с использованием данных NCBI GenBank (таблица 1).

Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта и не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов. Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрация MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров. В результате оптимизации подобрали одинаковую температуру отжига праймеров для всех локусов.

В таблице 1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ПЦР-РВ.

Количественную ПЦР-РВ амплификацию проводят на термоциклере, например, Bio-Rad CFX96 (USA), в соответствии с инструкциями производителя по следующей программе. Первичная денатурация: t=95°C в течение 3 мин. 40 циклов: t=95°C в течение 10 с, t=58°C в течение 30с, t=72°C в течение 15с. В одной постановке в качестве матрицы используют одновременно ДНК опытной (опухоль) и контрольной (условно здоровая ткань) пробы для определения сигналов, продуцируемых амплификатами локусов GSTP1, NFKB1, HV2 и референсного В2М; каждый вариант в трех повторностях.

Относительную копийность генетических локусов определяют, последовательно рассчитывая среднее значение сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам и уровень копийности исследуемого локуса относительно референсного гена В2М, по формуле rC=2-ΔCt, где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего Ct гена мишени и среднего Ct референтного гена: ΔCt=Ct(ген мишень) - Ct(B2M).

Расчет коэффициентов копийности проводят по формуле K=rCcancer/rCnormal (где K - коэффициент относительной копийности, rCcancer - относительная копийность в опухолевой ткани, rCnormal - относительная копийность в условно нормальной ткани). Характеристика копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 для разных гистологических типов рака желудка представлена в таблице 2.

Идентификацию стадий и типов рака проводят согласно значениям коэффициентов копийности, составляющими для аденокарциномы G3 KGSTP1=0,85±0,11; KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06; а для перстневидноклеточного рака желудка KGSTP1=1,21±0,02; KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример №1.

Больной Д., 1951 г.р., обратился в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на периодические боли в эпигастрии, подреберьях, тошноту, периодическую рвоту, слабость, похудание на 15 кг, отечность нижних конечностей, одышку при нагрузке. Считает себя больным более года, ухудшение с весны 2013, когда в течение месяца был черный стул, повторно черный стул был в сентябре 2013 в течение 10 дней. Трижды терял сознание, чему предшествовало жжение в эпигастрии, выраженная слабость. Находился на стационарном обследовании и лечении по месту жительства, при ФГС выявлена опухоль желудка.

При обследовании в поликлинике РНИОИ была выявлена инфильтративно-язвенная опухоль тела желудка (ФГС №30/68672 от 14.01.2014 г.). Гистоанализ 632-35/14: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. СРКТ от 14.01.2014 г. - многоузловая опухоль желудка 9,5×6,7×4,5 см с внутрипросветным ростом, парагастральные лимфоузлы до 1,5 см. МРТ головного мозга 15.01.2014: метастазов нет.15.01.2014 консультация невролога: ДЭП. Больному был поставлен предварительный диагноз: рак тела желудка, T3-4N1M0, стадия 3, гр. 2.

В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больному было выполнено определение уровня копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=0,74; KNFKB1=0,79 и KHV2=0,48) свидетельствовали о наличии у больного G3 аденокарциномы желудка.

В связи с высокой чувствительностью G3 аденокарциномы желудка к полихимиотерапии и местнораспространенным характером опухоли у пациента, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с курсов полихимиотерапии. Проведено 3 курса полихимиотерапии по схеме: карбоплатин, фторурацил, лейковарин, с интервалом 21 день. При контрольном СРКТ-исследовании отмечалось уменьшение размеров опухоли желудка до 7,5×5,0×3,2 см, парагастральных лимфоузлов до 0,8 см.

15.04.2014 г. больному выполнена лапаротомия, при которой выявлено: опухоль тела желудка размером 7,5×5×3,5 см, плотная, регинарные лимфоузлы до 1 см, отдаленных метастазов нет. Выполнена гастрэктомия с расширенной лимфаденэктомией.

Препарат: желудок с опухолью, поражающей тело желудка, экзофитной, с папиллярными разрастаниями, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники, регионарные лимфоузлы до 1 см; дистальная линия резекции в 5 см от опухоли, проксимальная линия резекции в 6 см от опухоли.

Послеоперационный гистоанализ 4541-54/14 подтвердил наличие у больного низкодифференцированной аденокарциномы желудка: G3 аденокарцинома желудка, инвазия всей толщи стенки желудка, в 3 лимфоузлах - метастазы рака, по линиям резекции опухоли нет.

Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2. Больному было проведено еще 3 курса полихимиотерапии по прежней схеме. Динамическое наблюдение за больным (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больного рецидива и метастазов опухоли.

Анализ представленного клинического случая свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения.

Пример №2.

Больная Ш., 1956 г. р. обратилась в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на боли в эпигастрии, отрыжку, слабость, небольшое похудание.

Считает себя больной с ноября 2013 г, когда впервые стала отмечать периодические боли в эпигастрии. Обратилась в декабре 2013 г. по месту жительства, где на ФГС выявлена опухоль желудка. На СРКТ в РНИОИ - утолщение стенки желудка, отдаленных метастазов нет, лимфоузлы перигастральные до 1,0 см. Гистологический анализ №82128-30: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. Консультация гинеколога: онкогинекологической патологии не выявлено. Больной был установлен диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2.

В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больной было выполнено определение уровня копийности генов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=1,22; KNFKB1=0,98 и KHV2=0,29) свидетельствовали о наличии у больной перстневидноклеточного рака желудка.

В связи с низкой чувствительностью перстневидноклеточного рака желудка к полихимиотерапии, несмотря на местнораспространенный характер опухоли у пациентки, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с оперативного вмешательства.

20.01.2014 больной выполнена лапаротомия, при которой выявлено: инфильтративная опухоль кардиального отдела желудка по малой кривизне и задней стенке размерами до 6×5×3 см, не прорастающая серозную оболочку, регионарные лимфоузлы до 0,8 см, отдаленных метастазов нет. Больной выполнена гастрэктомия с расширенной лимфодиссекцией D2.

Препарат: 1) единым блоком - желудок с инфильтративной опухолью кардиального отдела желудка, размерами 6×5×3 см, не прорастает серозную оболочку, плотной консистенции, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники; 2) 12 лимфоузлов сальников и области чревного ствола до 0,5-1.0 см в диаметре.

Гистологический анализ 3074-98/14-перстневидноклеточный и слизистый рак с инвазией всех слоев, по линиям резекции опухоли нет, в 13 регионарных лимфоузлах метастазов рака нет. Послеоперационный гистоанализ подтвердил наличие у больной перстневидноклеточного рака желудка и правильность тактики лечения больной.

Больная консультирована химиотерапевтом: учитывая гистологию рака желудка, больной адъювантная химиотерапия не показана.

Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N0M0, стадия 2, гр.3. Динамическое наблюдение за больной (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больной рецидива и метастазов опухоли.

Анализ представленного клинического случая также свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения, которая отличается при разных гистологических формах рака желудка.

Технико-экономическая эффективность изобретения «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» позволяет дифференцировать аденокарциному и перстневидноклеточный рак желудка. Заявляемый способ является экономически оправданным для уточнения предоперационного диагноза, дает возможность своевременной дифференцировки вида опухоли желудка; принятия правильной тактики лечения больных и улучшению результатов лечения больных раком желудка; осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии (ПЦР), без использования специального дорогостоящего оборудования; отбор материала для его осуществления возможно совместить с гастроскопической биопсией, способ занимает менее 10 часов.

Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов, включающий получение ДНК из биопсийного, операционного материала опухоли и условно здоровой ткани пациента, отличающийся тем, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет коэффициентов копийности генов по формуле K=rCcancer/rCnormal, где

K - коэффициент относительной копийности,

rCcancer - относительная копийность гена в опухолевой ткани,

rCnormal - относительная копийность гена в условно нормальной ткани, сравнивают полученные значения со стандартными коэффициентами копийности, при значении KGSTP1=0,85±0,11, KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06 диагностируют аденокарциному G3, при значении KGSTP1=1,21±0,02, KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10 диагностируют перстневидноклеточный рак желудка.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для оценки дисфункции иммунитета у детей дошкольного возраста с рецидивирующей респираторной инфекцией, проживающих на территориях вокруг химически опасных производств.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом оценивают экспрессию лимфоцитарных маркеров CD4+ и CD8+, рассчитывают коэффициент отношения CD4+/CD8+.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогноза развития увеита у пациентов с ювенильным идиопатическим артритом (ЮИА).

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к электрохимическому иммуноанализу. Предложен способ определения содержания грамотрицательных бактерий в анализируемой среде.

Изобретение относится к медицине, а именно гастроэнтерологии, и может быть использовано для определения генерализации злокачественного процесса после оперативного лечения рака головки поджелудочной железы.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования фетоплацентарной недостаточности при оценке индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции на содержание 7-дегидроксихолестерина на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине и касается способа дифференциальной диагностики начальных проявлений нейроинтоксикации винилхлоридом и парами металлической ртути, включающего проведение неврологического осмотра, где дополнительно определяют в сыворотке крови уровни антител к ацетилхолиновым рецепторам и антител к серотонинэргическим рецепторам, рассчитывают диагностические коэффициенты F1 и F2 по формулам.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения неходжкинских лимфом орбиты. В биоптате опухоли определяют наличие вирусов ВЭБ, ВГЧ-6, ВГЧ-8.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития аллергического ринита. Для этого проводят оценку экспрессии генов дифференцировочных факторов субпопуляций Т-хелперов: Tbet, GATA3, RORC.
Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для определения степени тяжести риносинусита. Сущность способа: обследуют больного риносинуситом и дополнительно до начала лечения в сыворотке крови больного определяют в пг/мл уровни цитокинов интерлейкина - 1β (IL-1β) и интерлейкина - 10 (IL-10), вычисляют с точностью до 0,1 соотношение IL-1β/IL-10.

Изобретение относится к медицине, а именно к профессиональной патологии и пульмонологии, и может быть использовано для диагностики профессиональной хронической обструктивной болезни легких, сформировавшейся в условиях действия токсических промаэрозолей. Для этого в сыворотке крови больного ХОБЛ, экспонированного к токсическим промаэрозолям с превышением ПДК токсических веществ в воздухе рабочей зоны в 1,5 раза и более, со стажем работы в условиях действия токсических промаэрозолей 17 лет и более, методом твердофазного иммуноферментного анализа сэндвич-типа (ELISA) определяют концентрацию интерлейкина 1β, трансформирущего фактора роста β, фактора роста эндотелия сосудов. Затем вычисляют значение регрессионной функции по математической формуле 0,027⋅IL1β+0,00009⋅TGFβ-0,0003⋅VEGF, где IL1β - концентрация интерлейкина 1β сыворотки, пг/мл, TGFβ - концентрация трансформирующего фактора роста β сыворотки, пг/мл, VEGF - концентрация фактора роста эндотелия сосудов сыворотки, пг/мл, и при результате, равном или превышающем 0,2, делают вывод о том, что в данном случае ХОБЛ сформировалась при действии токсических промаэрозолей. Изобретение позволяет диагностировать случаи профессиональной ХОБЛ, сформировавшейся при действии токсического газа, что улучшит качество лечения этой группы больных за счет индивидуализации терапевтической стратегии с учетом характеристик фенотипа, а также повышает объективность экспертизы связи заболевания с профессией. 1 ил., 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области иммунодиагностики и может быть использовано для иммунодиагностического тестирования биологического образца. Карта иммунодиагностического тестирования включает плоскую подложку и множество содержащихся на ней прозрачных колонок с инертным тестовым материалом, выполненным с возможностью формирования реакции агглютинации при добавлении биологического образца и реагента. Каждая колонка содержит индикаторные метки, разнесенные одна от другой, для создания видимых зон градации степени реакции агглютинации на основе положения сформированных агглютинатов. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективности оценки результатов тестирования. 8 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской гельминтологии, в частности к иммунологическому методу обнаружения антигена личинок анизакид в мышечной ткани рыбы, и может быть рекомендовано для ветеринарно-санитарной экспертизы морепродуктов. Способ предусматривает приготовление белково-антигенного экстракта из личинок третьей стадии Anisakis simplex, контроль его на стерильность, определение содержания белка, получение гипериммунной сыворотки к белково-антигенному экстракту из личинок 3-й стадии A.simplex иммунизацией кроликов в комплексе с полным адъювантом Фрейнда; проведение реакции иммунодиффузии (РИД) в агаровом геле с полученной гипериммунной сывороткой и жидкостью, образующейся при разморозке морепродуктов. Проявление полосы преципитации между этой жидкостью и гипериммунной сывороткой к белково-антигенному экстракту A.simplex свидетельствует о присутствии в морепродуктах антигенов личинок. Способ эффективен в выявлении антигенов анизакид в жидкости, полученной при размораживании мышечной ткани рыб. 2 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии. Для этого перед началом проведения специфической иммунотерапии (АСИТ) проводят определение фагоцитарной активности гранулярных нейтрофилов по фагоцитарному показателю (ФП) и фагоцитарному числу (ФЧ) в крови ребенка. При ФП ниже 45,5±1,02% и ФЧ ниже 2,14±0,4 микробных прогнозируют развитие инфекционного осложнения атопического дерматита вирусной, бактериальной или грибковой этиологии. Использование данного способа позволяет уменьшить частоту инфекционных осложнений атопического дерматита при АСИТ у детей, повышая эффективность дечения тяжелых и стойких форм заболевания. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, имеющего подозрение на метастатический рак предстательной железы. Для этого биологический образец подвергают воздействию меченного 89цирконием антитела против STEAP-1 и измеряют связывание меченного 89цирконием антитела против STEAP-1 с белком в биологическом образце. При этом связывание меченного 89цирконием антитела против STEAP-1 с белком является показателем присутствия белка STEAP-1 в образце. Меченное 89цирконием антитело против STEAP-1 содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую гипервариабельную область CDR-H1, содержащую GYSITSDYAWN, CDR-H2, содержащую GYISNSGSTSYNPSLKS, и CDR-H3, содержащую ERNYDYDDYYYAMDY; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR-L1, содержащую KSSQSLLYRSNQKNYLA, CDR-L2, содержащую WASTRES, и CDR-L3, содержащую QQYYNYPRT, и меченное 89цирконием антитело против STEAP-1 представляет собой 89цирконий-десферриоксамид (Df) антитело против STEAP-1. Изобретение позволяет определять присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, с метастатическим раком предстательной железы. 5 з.п. ф-лы, 2 табл., 30 ил., 10 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2), у женщин во втором триместре беременности. Для этого определяют уровень антител к вирусу гриппа в сыворотке крови, полученной на 21-24 день заболевания, и оценивают его изменение по сравнению с сывороткой крови, полученной на 12-14 день заболевания, в баллах: 1 балл - нет роста титра антител; 2 балла - рост титра антител в 2 раза; 3 балла - рост титра антител в 4 раза; 4 балла - рост титра антител более чем в 4 раза) (А), оценивают содержание среднемолекулярных пептидов в плазме крови на 21-24 день заболевания (ед. оп. пл.) (В), определяют концентрацию фактора некроза опухоли - а на 21-24 день заболевания в сыворотке крови (пг/мл) (С), а затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции: D=-2,790×А-149,616×В-0,121×С; и при D равной или больше -50,23 прогнозируют отсутствие синдрома задержки роста плода, а при D меньше -50,23 прогнозируют развитие синдрома задержки роста плода. Способ позволяет обоснованно и своевременно проводить лечебные мероприятия, направленные на профилактику синдрома задержки роста плода, при простоте его исполнения. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2). Для этого определяют титр антител к вирусу гриппа A(H3N2) в сыворотке крови, полученной на 21-24 дни заболевания, и оценивают его изменение по сравнению с сывороткой крови, полученной на 12-14 день заболевания, в баллах: 1 балл - нет роста титра антител; 2 балла - рост титра антител в 2 раза; 3 балла - рост титра антител в 4 раза; 4 балла - рост титра антител более, чем в 4 раза (А), оценивают концентрацию интерферона-γ (пг/мл) (В), устанавливают содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (ед. оп. пл.) (С), а затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции: D=-2,115×A-0,324×В-328,250×С, и при D равной или больше -82,67 прогнозируют отсутствие внутриутробного инфицирования плода, а при D меньше -82,67 прогнозируют внутриутробное инфицирование плода. Способ позволяет обоснованно и своевременно провести лечебно-профилактические мероприятия, направленные на профилактику внутриутробного инфицирования плода при простоте его исполнения. 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных. Характеризуется использованием как минимум пяти иммунохроматографических стрип-тестов, размещенных в едином корпусе. При этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий. Тестирование ведут путем укладки корпуса иммунохроматических стрип-тестов в теплоизолирующий цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала между ними, а корпус иммунохроматографических стрип-тестов внутри пакета нагревают источником постоянного тепла, причем отверстие пакета закрывают механическим зажимом и считают этот момент началом тестирования. Также предложено устройство для иммунохроматографического анализа. Группа изобретений позволяет увеличить производительность иммунохроматографического анализа, расширить температурный диапазон иммунохроматографического анализа от минус 20 до плюс 50°C, сократить время получения результата до 10 мин по сравнению с анализом при комнатной температуре (20 мин), при условии достижения одинаковой чувствительности, повысить чувствительность анализа по сравнению с анализом, проводимым при комнатной температуре. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл., 8 пр.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+. При содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅109 кл/л и клеток CD3+ меньше 1,5⋅109 кл/л судят о риске формирования Т-хелперного дефицита. Изобретение позволяет выявить лиц, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни. 6 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца. Сущность способа: в сыворотке крови определяют концентрацию PlGF-1 и при уровне P1GF-1 выше 5,33 пг/мл диагностируют острое клеточное отторжение. Преимущество изобретения заключается в обеспечении простоты, доступности, неинвазивности диагностики, сокращении времени ее проведения при одновременном достижении достоверного диагностического скрининга острого клеточного отторжения как в раннем, так и в отдаленном посттрансплантационных периодах у реципиентов сердца, а также в улучшении результатов трансплантации сердца, повышении выживаемости реципиентов путем своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии, коронароангиографии и уточнения тактики ведения больных путем определения уровня концентрации PlGF-1 в сыворотке крови. 2 пр.
Наверх