Способ определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2613302:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников. Для этого во время проведения больным раком яичников операции полного объема в гомогенате ткани опухоли определяют уровень НЕ4, и при его значении от 4768 пМ/г до 5674 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода 6 и более месяцев, а при его значении от 7995 пМ/г до 9339 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев. Способ позволяет оценить биологическую активность первичной опухоли яичника, индивидуальный прогноз заболевания и тактику дальнейшего ведения пациенток при возможности многократного воспроизведения в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников.

В настоящее время важной составляющей противораковой борьбы, способной улучшить результаты лечения, является скрининг заболеваний (см. Сергеева Н.С., Маршутина Н.В. Опухолеассоциированные маркеры в скрининговых программах, направленных на активное выявление рака яичников: реальность и перспективы. Практическая онкология 2010. - Т 11. - №2. - с. 110-119; см. Порханова Н.В. Значение биомаркеров для формирования групп риска и ранней диагностики опухолей на примере рака яичников и рака молочной железы. Практическая онкология 2011. - Т. 12. - №4. - с. 155-165). При этом поиск новых маркеров в первую очередь должен быть направлен на выявление тех злокачественных новообразований, удельный вес которых в структуре заболеваемости велик, но имеются эффективные методы лечения на ранних стадиях (см. Сергеева Н.С., Маршутина Н.В. Опухолеассоциированные маркеры в скрининговых программах, направленных на активное выявление рака яичников: реальность и перспективы. Практическая онкология 2010. - Т11. - №2. - с. 110-119; см. Чиссов В.И., Старинский В.В., Гнатюк А.П. Национальная онкологическая программа оказания специализированной медицинской помощи онкологическим больным и этапы ее развития// Российский онкологический журнал 2009. - №6. - с. 43-45).

Рак яичников (РЯ) является одним из наиболее агрессивных злокачественных заболеваний, несмотря на новые химиопрепараты, по причине безуспешности ранней диагностики. Основная причина позднего обнаружения заболевания кроется в отсутствии патогномоничных симптомов. На ранней стадии заболевания с высокодифференцированными формами опухоли успешно излечены почти 90% больных, однако при наличии прогностически неблагоприятных форм опухоли, процент успешного лечения падает до 40% (см. Жордиана К.И. Некоторые аспекты диагностики и лечения рака яичников русский медицинский журнал №24 2002.; Жорданиа К.И., Хохлова СВ. Ранний рак яичников. Наш взгляд на проблему // Онкогинекология 2012 №1 с. 51-58).

До настоящего времени нет окончательного представления о патогенезе РЯ, знание которого разрешило бы проблему ранней диагностики и проведения наиболее эффективного специализированного и персонифицированного патогенетического лечения.

НЕ4 относится к классу ингибиторов протеиназ, однако его мишень пока не идентифицирована, в нормальном эпидермисе принимает участие в созревании спермы (см. Drapkin R., von Horsten Н.Н., Lin Y. Hyman epididymis protein 4 HE4 is a secreted glycoprotein that is overexpressed by serous and endometrioid ovarian carcinomas. Cancer Res. 2005; 65:2162-2169).

У женщин HE4 определяется в железистом эпителии респираторного и генитального тракта (см. Hough CD., Sherman-Baust C.A., Pizer E.S., Montz F.J., Im D.D., Rosenshein N.B. Large-scale serial analysis of gene expression reveals genes differentially expressed in ovarian cancer. Cancer Res. 2000; 60:6281-6287). Этот протеин выделяется клетками как нормального, так и малигнизированного эндометрия. Экспрессия НЕ4 установлена в маточных трубах, эндометрии и эндоцервиксе, в дыхательном эпителии, особенно в трахее, иногда в почечных канальцах и слюнных железах. Не экспрессируется НЕ4 в ЖКТ, печени, поджелудочной железе, селезенке, лимфатических сосудах и мозге. Также не установлено наличие НЕ4 в мезенхимальных тканях - сердце и скелетных мышцах. У женщин с эндоцервикальными и эндометриальными аденокарциномами отмечается высокий уровень НЕ4, однако эти показатели меньше, чем при раке яичников (см. Santin AD, Zhan F, Bellone S, et al. Gene expression profiles in primary ovarian serous papillary tumors and normal ovarian epithelium: identification of candidate molecular markers for ovarian cancer diagnosis and therapy. Int J Cancer 2004; 112:14-25). Уровень HE4 может зависеть от репродуктивного статуса женщины: дискриминационный уровень (ДУ) у пременопаузальных женщин <70 пмоль/л, а у менопаузальных <140 пмоль/л (см. Корнеева И.А., Новикова Е.Г., Сергеева Н.С., Алентов И.И. Эволюция взгляда на маркерный рецидив рака яичников. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена 2013; №4 с 73-80). В отличие от нормального поверхностного эпителия яичника, который не выделяет НЕ4, этот протеин экспрессируется метапластическим мюллеровым эпителием, также установлено наличие НЕ4 в доброкачественных кистах.

Анализ исследований российских и зарубежных авторов показал, что на сегодняшний день НЕ4 обладает наибольшей чувствительностью для рака яичников (см. Сергеева Н.С., Маршутина Н.В. Опухолеассоциированные маркеры в скрининговых программах, направленных на активное выявление рака яичников: реальность и перспективы. Практическая онкология 2010. - Т 11. - №2. - с. 110-119).

Известен способ прогнозирования рецидива рака молочной железы (см. Nishimura п. et al. Clinicopathologic analysis of the prognostic factors in women with coexistence of endometrioid adenocarcinoma in the endometrium and ovary.: J Obstet Gynaecol Res. 2005 Apr; 31(2): 120-6), основанный на биохимическом исследовании менопаузальных больных после комплексного лечения. Развитие рецидива констатируют при снижении соотношения концентрации эстриола к концентрации эстрона и эстрадиола в моче в зависимости от длительности безрецидивного периода. Следует отметить, что способ применим только при раке молочной железы у женщин в постменопаузе и использует параметры, определяемые при биохимическом исследовании.

Известно использование в качестве прогностического фактора степень плоидности опухоли (см. Паниченко И.В. и соавт. "Значение биологических факторов прогноза у больных эпителиальными опухолями яичников", опубликованную в журнале "Новости клинической цитологии России", 2002, - т. 6. - №1-2. - С. 4-8). Авторы провели анализ содержания ДНК и плоидности опухоли у 77 больных раком яичников с помощью лазерной ДНК-проточной цитометрии суспензии опухолевых клеток из кусочков опухоли, полученных во время операции. Они установили, что плоидность опухоли является независимым высокозначимым прогностическим фактором. Так, 2-летняя выживаемость больных раком яичников с диплоидными новообразованиями была достоверно выше, чем больных с анэуплоидными опухолями (соответственно 93 и 67%, р<0,05). Плоидность опухоли имела наибольший коэффициент весомости по сравнению с другими факторами прогноза, такими как стадия заболевания, степень дифференцировки и гистологический тип опухоли, размер остаточной опухоли после операции и др.

Однако плоидность опухоли не была использована для предсказания хорошего или плохого прогноза у каждой конкретной больной распространенным РЯ.

Известен способ определения биологической агрессивности рака для оценки индивидуального прогноза течения заболевания и назначения адекватной терапии (см. Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Франк Г.А. Уточняющая диагностика рака некоторых локализаций с использованием иммуногистохимических маркеров//Практическое пособие. Москва. - 2006. - 16 с), выбранный нами в качестве прототипа.

Метод основан на изучении количества и локализации одного из основных составляющих межклеточного матрикса - гликопротеида тенасцина, обладающего антиадгезивными свойствами, матричных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов

Для иммуногистохимического исследования материал фиксируют нейтральным формалином в течение 24 часов, заливают в парафин, готовят срезы толщиной 4 мкм, которые наносят на высокоадгезивные свойства и высушивают при температуре 37°C. Используют моноклональные антитела к ММР1, ММР2, ММР9, TIMP1 и 2 (NovoCastra), тенасцину, бета-катенину и Е-кадгерину (Dako). Восстановление антигенной активности проводят в миниавтоклаве «2100Retrieval» (Pick Cell) при температуре 121°C в течение 20 мин. И последующем остывании 60 мин. Восстановление проводят в цитратном буфере рН 6,0 для антител к ММР1, кадтерина и катенина и в ЭДТА-буфере рН 8,0 для остальных антител. В качестве детекционной системы применяли систему «Еп Vision» (Dako), в качестве хромогена использовали диаминобензидин. Интенсивность реакции оценивали полуколичественным способом по балльной шкале от 0 до 3+.

Авторы проводили исследования на операционном материале протокового рака молочной железы, рака легкого и рака мочевого пузыря. Полученные результаты показали возможность оценки индивидуальной агрессивности опухоли, позволили оценить клинически еще не реализованную биологическую агрессивность опухоли, ее инвазивный и метастатический потенциал. Полученные в результате исследования индивидуальные характеристики опухоли, по мнению авторов, должны учитываться для оценки индивидуального прогноза течения заболевания и назначения адекватной терапии. Проведение уточняющей морфологической диагностики с использованием панели антител позволят определять индивидуальные параметры карциномы разных локализаций и гистологических типов и поможет в определении индивидуального прогноза течения заболевания и выбора адекватной тактики лечения.

Однако применение этого способа ограничивают и затрудняют такие его недостатки, как длительность проведения исследования. Поэтому он не может быть использован для коррекции объема оперативного вмешательства при раке яичников и назначения специфической терапии в ближайшие сутки после операции. Кроме того, применение указанного метода требует большого количества оборудования и реактивов, что влечет за собой большие затраты.

Техническим результатом предлагаемого нами изобретения является оценка биологической активности первичной опухоли яичника, позволяющая прогнозировать продолжительность безрецидивного периода у больных серозным раком яичников.

Поставленный технический результат достигается тем, что во время проведения больным раком яичников операции полного объема в гомогенате ткани опухоли определяют уровень НЕ4 и при его значении от 4768 пМ/г до 5674 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода 6 и более месяцев, а при его значении от 7995 пМ/г до 9339 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев.

Анализ известных способов определения биологической агрессивности опухоли, позволяющей прогнозировать направленность патологического процесса, дает основание говорить о новизне предлагаемого способа, который представлен исследованием объективного показателя-онкомаркера НЕ4 в ткани удаляемой злокачественной опухоли яичников. Изучение клеточного маркера, характеризующего биологические свойства опухоли, позволяет определить индивидуальный прогноз заболевания и тактику дальнейшего ведения пациенток. В отличие от прототипа предлагаемый способ осуществляется в течение 1 рабочего дня и дает возможность прогнозировать продолжительность безрецидивного периода у больных серозным раком яичников, что в свою очередь обеспечивает возможность назначения адекватного лечения. Разработанный способ обладает изобретательским уровнем, так как явным образом не следует для специалиста из известного уровня развития медицины и дает возможность определить индивидуальный прогноз заболевания. В известных источниках информации России, стран СНГ и за рубежом подобный способ не обнаружен.

Изобретение является промышленно применимым, так как оно может быть многократно воспроизведено в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями.

Способ осуществляется следующим образом.

Во время операции производят забор кусочка ткани злокачественной опухоли в объеме 100-150 мг, готовят 10% гомогенат на физиологическом растворе, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин, отбирают надосадочную жидкость и определяют в ней уровень НЕ4 с помощью ИФА с использованием стандартных тест-систем (фирмы «Биохимак»).

При получении результата, равного 5176±498 пМ/г сырой ткани, прогнозируют продолжительность безрецидивного периода более 6 месяцев. При получении результата, равного 8667±672 пМ/г сырой ткани, прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев.

Приводим клинические примеры применения способа.

Пример №1. Больная А., 51 года, была госпитализирована в отделение онкогинекологии 29.03.2014 г. для уточнения диагноза и лечения. Считает себя больной с февраля 2014 г., когда стали беспокоить ноющие боли внизу живота, иррадиирующие в поясницу, наличие образования в малом тазу при самостоятельной пальпации. Обратилась к гинекологу по месту жительства, после осмотра с подозрением на рак яичников направлена в РНИОИ.

На догоспитальном этапе больной с целью уточнения диагноза выполнено лабораторно-инструментальное обследование в объеме: ультразвуковое исследование органов малого таза и брюшной полости, фиброгастроскопия, ирригоскопия, ФЛО.

По данным ультразвукового исследования органов малого таза и брюшной полости выявлено: объемное образование в области левых придатков с частичным переходом в задний свод, умеренное количество жидкости в позадиматочном пространстве. По результатам исследований онкопатологии других органов не выявлено.

При бимануальном ректовагинальном осмотре в малом тазу определялось в едином конгломерате с маткой и придатками объемное малоподвижное образование, размерами до 12 см в диаметре, переходящее в задний свод, болезненное при осмотре. В анамнезе 2 родов, 1 аборт, перименопауза 6 мес.

С клиническим диагнозом рак яичников, основанным на данных осмотра, ультразвукового исследования и уровня онкомаркеров, больной выполнена диагностическая лечебная лапаротомия.

В брюшной полости обнаружена свободная жидкость соломенно-желтого цвета (эвакуировано 800 мл жидкости). При ревизии в малом тазу выявлен местно-распространенный опухолевый процесс: объемное кистозно-солидное образование до 10 см в диаметре, исходящее из левых придатков, интимно спаянное с задней стенкой матки, париетальной брюшиной заднего свода, нижним отделом сигмовидной кишки, по данным ирригоскопии не прорастающее в стенку кишки. Макроскопически большой сальник без опухолевого поражения. Диссеминации и мтс-поражения в других отделах малого таза и брюшной полости не выявлено.

Выполнена операция полного объема: пангистерэктомия, удаление большого сальника. Остаточная опухоль составила более 2 см. Гистологическое исследование удаленных органов: низкодифференцированная аденокарцинома, преимущественно солидного строения, микрометастазы в большой сальник. Окончательный диагноз: рак яичников T3cNxM0R2.

Во время операции произвели забор кусочка ткани злокачественной опухоли в объеме 150 мг, приготовили 10% гомогенат на физиологическом растворе, центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин, отобрали надосадочную жидкость и определили в ней уровень НЕ4 с помощью ИФА с использованием стандартных тест-систем (фирма). Результат анализа: 4854 пм/г сырой ткани. Прогноз благоприятный.

В послеоперационном периоде получила 6 курсов полихимиотерапии по схеме САР (цисплатин, эндоксан, доксорубицин). Лечение закончила в августе 2014 г.

Больная находится в состоянии полной ремиссии в течение 14 месяцев.

Пример №2. Больная К., 59 лет, была госпитализирована в отделение онкогинекологии 10.03.14 г. для уточнения диагноза и лечения.

Болеет с декабря 2013 г., когда живот стал увеличиваться в размерах, постепенно появились распирающие боли внизу живота, одышка, снижение аппетита. Самостоятельно обратилась в РНИОИ. В анамнезе 1 роды и 1 аборт, менопауза 9 лет. Тяжелых сопутствующих заболеваний нет.

На догоспитальном этапе с целью уточнения диагноза выполнены ультразвуковое исследование органов малого таза и брюшной полости, фиброгастроскопия, ирригоскопия, рентгенологическое исследование органов грудной клетки, цитологическое исследование асцитической жидкости, полученной после пункции заднего свода.

При цитологическом исследовании асцитической жидкости обнаружены клетки карциномы. При ультразвуковом исследовании и бимануальном осмотре органов малого таза и брюшной полости выявлен выпот в брюшную полость, опухолевая инфильтрация малого таза, метастаз в задний свод. Онкопатологии других органов не выявлено.

13.03.15 г. больная взята на лечебно-диагностическую лапаротомию с диагнозом рак яичников. При лапаротомии выявлен метастатически измененный большой сальник, опухолевая инфильтрация малого таза, метастатический узел в заднем своде, свободная жидкость в малом тазу до 200 мл. Придатки уплотнены, опухолевидно изменены, нормальных размеров. Выполнена операция полного объема: экстирпация матки с придатками, удаление большого сальника. Остаточная опухоль менее 1 см. Послеоперационное гистологическое исследование: умеренно дифференцированная серозно-папиллярная аденокарцинома, обширные метастазы в большом сальнике. Диагноз: рак яичников T3cNxM0R1.

Во время операции произвели забор кусочка ткани злокачественной опухоли в объеме 150 мг, приготовили 10% гомогенат на физиологическом растворе, центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин, отобрали надосадочную жидкость и определили в ней уровень НЕ4 с помощью ИФА с использованием стандартных тест-систем (фирма). Результат анализа: 9124 пм/г сырой ткани. Прогноз неблагоприятный.

В послеоперационном периоде получила 6 курсов адъювантной ПХТ по САР схеме (цисплатин, эндоксан, доксорубицин). Лечение закончила в июле 2014 г.

Через 4 месяца после завершения комбинированного лечения при плановом осмотре выявлено продолжение заболевания в виде локального опухолевого процесса в малом тазу. Получает химиотерапию II линии.

Предлагаемым способом было обследовано 47 больных серозным раком яичников. Эффективность составила 91,5%.

Способ определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников, включающий исследование ткани опухоли, отличающийся тем, что во время проведения больным раком яичников операции полного объема в гомогенате ткани опухоли определяют уровень НЕ4 и при его значении от 4768 пМ/г до 5674 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода 6 и более месяцев, а при его значении от 7995 пМ/г до 9339 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к патологической анатомии и онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики низкодифференцированного нейроэндокринного рака желудка и низкодифференцированных аденокарцином.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и кардиологии, и касается прогнозирования эффективности терапии у пациентов с ИБС через 12 месяцев после острого коронарного синдрома (ОКС).

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики раннего неонатального сепсиса (РНС) у новорожденных первых суток жизни. В клетках буккального соскоба измеряют уровни экспрессии генов IL12A и CD68 относительно представленности мРНК референсных генов В2М, GUS, ТВР или HPRT.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и представляет собой способ прогнозирования задержки роста и макросомии плода у беременных с сахарным диабетом, отличающийся тем, что у беременных на сроке гестации, начиная с 24 недель, определяют содержание глюкозы венозной крови путем проведения трехчасового теста толерантности к глюкозе, объем плаценты методом УЗИ, индекс резистентности маточной артерии методом УЗДГ, рассчитывают коэффициент фетопатии F по формуле: , где V - объем плаценты, определенный методом ультразвуковой плацентометрии (см3), IR - индекс резистентности маточной артерии, определенный методом ультразвуковой допплерографии, TGTT - уровень глюкозы, определенный при проведении трехчасового глюкозотолерантного теста (ммоль/л), GA - срок гестации (недели), при коэффициенте фетопатии F более 2,0 прогнозируют развитие макросомии плода, при коэффициенте фетопатии F менее 0,5 прогнозируют развитие задержки роста плода.

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии. Для прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите проводят определение балльного индекса по результатам суммирования баллов.

Изобретение относится к способу определения пола эмбриона, при котором пол эмбриона определяется при помощи, по меньшей мере, одного неинвазивного (неразрушающего), по меньшей мере, по отношению к яйцу способа определения.

Изобретение относится к области ветеринарии и молекулярной биотехнологии и предназначено для диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики сахарного диабета. Способ включает биохимическое исследование крови у пациентов, где в плазме / сыворотке крови определяют уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности путем иммунометрического сэндвич-метода иммуноферментного анализа.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Способ идентификации и количественного определения специфической молекулы-мишени в образце, включающий: тестирование и выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; или выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; скрининг образца, содержащего специфическую молекулу-мишень, в высокопроизводительном скрининговом анализе, включающий добавление первого и второго лиганда, каждый из которых имеет первую и вторую детектируемую метку, связывание каждого из первого и второго лигандов с отдельными и специфическими сайтами на специфической молекуле-мишени, где скрининговый анализ не требует стадии промывания; обнаружение излучения света, когда первый и второй лиганды специфически связываются со специфической молекулой-мишенью; измерение интенсивности излучаемого света и по интенсивности света проводят идентификацию и количественное определение специфической молекулы-мишени в образце.

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и педиатрии, и предназначено для диагностики тимомегалии у детей. Проводят ПЦР в режиме реального времени с использованием соответствующих праймеров и флюоресцентно-меченого олигонуклеотида с последующим расчетом числа копий Т-рецепторных эксцизионных колец (ТРЭК) по стандартной кривой, построенной по разведениям плазмиды, представленной SEQ ID NO: 1 с известной концентрацией ДНК ТРЭК.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. Сущность: производят отбор пробы крови, экстракцию экстрагентом из указанной пробы ГХБ и определение его количества методом газохроматографического анализа с использованием градуировочного графика. При этом после отбора пробы крови ее подкисляют до рН 6-7 водным раствором серной кислоты, например, 1%-ной концентрации. В качестве экстрагента используют толуол, взятый в объемном соотношении к пробе крови как 0,6 к 1,0 соответственно. Экстракцию ведут дважды последовательно по 5 мин каждую. Полученный экстракт центрифугируют в течение 15 мин при 7000 об/мин и далее определяют количество ГХБ методом газохроматографического анализа с использованием детектора электронного захвата на капиллярной колонке НР-1 35 м * 0,32 мм * 0,25 мкм при температурном режиме: капиллярная колонка - 70°С-230°С; испаритель - 270°С; детектор - 270°С; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин. Достигается повышение степени извлечения ГХБ из пробы крови, а также точности и селективности анализа. 1 з.п. ф-лы; 10 табл., 1 пр.

Изобретение относится к токсикологии, а именно к способу определения 3-метоксигидроксибензола в биологических материалах. Для этого образцы, содержащие 3-метоксигидроксибензол, трижды экстрагируют метилацетатом в течение 45 мин. Объединенные экстракты обрабатывают раствором KOH в этаноле, а затем удаляют растворитель испарением при 18-22°С. Остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, содержащим НСl в избытке по отношению к щелочи в остатке. Подкисленные ацетоновые экстракты объединяют, обрабатывают водным раствором NaOH для создания избытка щелочной среды и удаляют ацетон в токе воздуха при температуре 18-22°С. Водно-щелочной раствор разбавляют водой, подкисляют до рН 2-3 24% НСl, экстрагируют диэтиловым эфиром и насыщают Na2SO4 для удаления остатков воды. Экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°С и хроматографируют на макроколонке с силикагелем КСС 3 80/120 мкм. Смесь элюируют смесью гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему. Фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют и концентрируют до 10 мл. Полученный остаток защелачивают раствором NaOH с рН 12-13, а затем подкисляют 24% НСl до рН 2-3, а затем экстрагируют дихлорметаном и насыщают Na2SO4 для удаления остатков воды. Дихлорметановый экстракт обрабатывают N-метил-N-триметилсилил-трифторацетамидом, 20 минут, 60°С для получения триметилсилильного производного 3-метоксигидроксибензола. Определение проводят методом хромато-масс-спектрометрии. Для разделения используют капиллярную колонку (L=25 м d= 0,2 мм), неподвижной фазой 5%-фенил-метилполисилоксан в токе гелия 0,6 мл/мин. Начальная температура термостата колонки составляет 70°С и выдерживается в течение 3 мин, в дальнейшем температура программируется от 70°С до 290°С со скоростью изменения 20°С в мин, конечная температура колонки выдерживается 10 мин. Температура инжектора составляет 250°С, температура интерфейса детектора - 300°С. Для регистрации сигнала используют масс-селективный детектор в режиме электронного удара ионизирующим пучком электронов 70 эВ. Количество триметилсилильного производного 3-метоксигидроксибензола вычисляют, используя предварительно построенный калибровочный график при сравнении площадей пиков. Изобретение обеспечивает повышение чувствительности метода и может быть использовано на санэпидстанциях, в химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораториях. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения туберкулеза легких. Способ прогнозирования течения туберкулеза, включающий определение концентрации таурина в плазме крови, при этом дополнительно определяют концентрацию таурина в моноцитах, после чего анализируют отношение концентрации таурина в плазме к концентрации таурина в моноцитах и при значении отношения от 0,5 до 0,69 прогнозируют вероятность развития инфильтративного туберкулеза, при значении отношения от 0,7 до 1 прогнозируют вероятность развития туберкулемы, при значении отношения выше 1 прогнозируют вероятность развития фиброзно-кавернозного туберкулеза. Вышеописанный способ позволяет повысить достоверность прогнозирования течения туберкулеза. 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может использоваться для прогнозирования характера течения хронического рецидивирующего афтозного стоматита путем оценки мукозального иммунитета. Способ включает определение бактерицидной активности образца слюны (БАС) методом проточной цитофлюориметрии. При значениях БАС равных 65,7% и выше прогнозируют течение заболевания как благоприятное, а при величине БАС равной 37,0% и ниже - как течение, осложненное эрозиями слизистой оболочки рта. Изобретение дает возможность выявления группы стоматологических пациентов с предрасположенностью к осложнениям эрозиями слизистой оболочки рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите. 2 табл., 1 пр., 1 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и касается прогнозирования в первом триместре беременности у женщин угрозы невынашивания при гриппе A(H3N2). Сущность способа: в первом триместре гестации при гриппе A(H3N2) в период разгара заболевания определяют величину титра противовирусных антител в первой сыворотке (А), оценивают уровень серомукоида (ед. оп. пл.) в плазме крови (В), устанавливают концентрацию среднемолекулярных пептидов (ед. оп. пл.) в плазме крови (С), определяют содержание циркулирующих иммунных комплексов (ед. оп. пл.) в сыворотке крови (Е). Затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции D:D=-0,021×А+8,049×В-106,797×С-46,494×Е, где граничное значение составляет - 35,77, при D больше или равном граничного значения дискриминантной функции прогнозируют отсутствие угрозы невынашивания, а при D меньше граничного значения прогнозируют развитие угрозы невынашивания при гриппе A(H3N2) в первом триместре беременности. Вероятность правильного прогноза составляет 85,5%. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и описывает способ количественного определения суммарного содержания серусодержащих соединений в сыворотке крови человека методом анодной вольтамперометрии. Способ определения суммарного содержания серусодержащих соединений в сыворотке крови включает предварительную пробоподготовку сыворотки крови и вольтамперометрическое определение суммарного содержания серусодержащих соединений на фоне боратного буферного раствора с pH 9,18. Проводят анодную вольтамперометрию с использованием индикаторного ртутно-пленочного электрода при дифференциально-импульсной форме развертки потенциала со скоростью 0,03 В/с в диапазоне потенциалов от -1,0 В до 0,05 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода сравнения. Концентрацию суммарного содержания серусодержащих соединений в сыворотке крови человека от 1,0⋅10-4 до 1,2⋅10-3 моль/дм3 определяют по высоте пика анодного тока при потенциале -0,03 В методом градуировочного графика по стандартному раствору глутатиона. Технический результат: высокая селективность, чувствительность и простота определения. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований щитовидной железы. Способ включает тонкоигольную аспирационную биопсию узловых образований щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, причем пункционную иглу с содержащимся в ней аспиратом промывают двукратно в консервирующем растворе NovaPrep, центрифугируют, отбирают супернатанты, проводят иммуноцитохимический анализ экспрессии Ki-67 и рассчитывают диагностический показатель по формуле , где HS=∑P(i)×i,i - интенсивность окрашивания, выраженная в баллах (от 0 до 3), P(i) - процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью, и при p>0,5 - образование признают злокачественным, при р<0,5 - доброкачественным. Применение изобретения обеспечивает повышение точности и информативности способа. Чувствительность и специфичность способа 81,8% и 93,8% соответственно.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики заболевания животных кетозом. Способ прогнозирования субклинического кетоза у коров включает отбор пробы крови и определение глюкозы в крови. Определяют уровень глюкозы в крови коров в переходный период, не более 1 раза в 3 дня, при этом для измерения глюкозы используют глюкометр с тест-полоской. Перед каждым взятием крови глюкометр выдерживают во внешней среде не более 15 мин, при t 20-30°С. Затем на тест-полоску глюкометра помещают каплю крови диаметром, соизмеримым шириной тест-полоски, промазывают ею тест-полоску и при определении значения глюкозы на нижней границе нормы оптимальной концентрации глюкозы не более 2,2 ммоль/л прогнозируют начало развития кетоза, что является основанием для принятия срочных мер. Способ позволяет быстро и точно спрогнозировать вероятность субклинического кетоза. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к разделу терапевтической стоматологии - заболеваниям слизистой оболочки рта, и может быть использовано для определения степени тяжести изменений микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта с гепатобилиарными расстройствами, исключая гепатиты, обострения заболеваний гепатобилиарной системы и поджелудочной железы. Сущность способа: у данной категории больных выявляют маркеры микроорганизмов в биопробах слюны, крови и фекалиях с помощью метода газовой хроматографии и масс-спектрометрии. При повышении в определенной кратности в каждой из биопроб значений концентрации выявленных маркеров определенных микроорганизмов или хотя бы одного из них, по сравнению со средними значениями таких же показателей контрольной группы, определяют степени тяжести изменений микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у данной категории больных. Изобретение обеспечивает определение степени тяжести изменений микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта. 5 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно урологии, и может быть использовано для определения степени активности обострения хронического обструктивного пиелонефрита. Для этого проводят оценку клинической картины воспалительного процесса на основании жалоб больного, сбора анамнеза и определения клинико-лабораторных показателей, таких как клинический анализ крови, клинический анализ мочи и анализ мочи по Нечипоренко. Дополнительно определяют уровень провоспалительного цитокина iL-8 в моче, взятой из мочеточника пораженной, обструктивной почки больного. При уровне провоспалительного цитокина iL-8, равном 135,0±1,7 пкг/мл, определяют I, легкую степень активности обострения хронического обструктивного пиелонефрита, при уровне провоспалительного цитокина iL-8, равном 278,0±37,0 пкг/мл, - II, среднюю степень активности обострения, а при уровне провоспалительного цитокина, равном 1890,0±250,0, определяют тяжелую степень активности обострения хронического обструктивного пиелонефрита. Изобретение позволяет определить наличие одностороннего или двухстороннего воспалительного процесса и сопутствующего воспалительного процесса в мочевом пузыре. 2 табл., 3 пр.
Наверх