Способ идентификации и раздельного количественного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии в растительном сырье и фитопрепаратах без предварительного разделения

Авторы патента:

Сливкин Алексей Иванович (RU)

Тринеева Ольга Валерьевна (RU)

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

Владельцы патента RU 2613878:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") (RU)

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа идентификации и раздельного количественного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии в растительном сырье и фитопрепаратах без предварительного разделения. Сущность способа заключается в том, что навеску растительного сырья заливают нагретой до кипения водой, кипятят с обратным холодильником, извлечение процеживают, не дожидаясь охлаждения, в мерную колбу, доводят объем раствора, если необходимо, водой до метки. Далее измеряют оптическую плотность фильтрата, разведенного боратным буферным раствором с рН 9,0, относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм и рассчитывают содержание галловой кислоты и танина в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах. Использование способа позволяет повысить точность одновременного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии в растительном сырье и фитопрепаратах. 5 ил., 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к аналитической химии, химико-фармацевтической промышленности, области фармакогнозии и фармацевтической химии и может быть использовано для контроля качества синтетических лекарственных препаратов, растительного сырья и фитопрепаратов на его основе.

Известен способ количественного определения суммы дубильных веществ (в том числе танина и галловой кислоты) в лекарственном растительном сырье методом перманганатометрии (метод Левенталя), включенный в ГФ XI издания и проект новой ОФС «Определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье» для ГФ XIII (Проект ОФС «Определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье»), основанный на способности дубильных веществ быстро окисляться в сильно разбавленном кислом растворе в присутствии индикатора - индигосульфокислоты. Однако метод имеет большое количество недостатков, таких как завышенность результатов определений (наряду с дубильными веществами происходит окисление и других групп биологически активных веществ); субъективность определения конца титрования по появлению золотисто-желтой окраски; сильная зависимость результатов от интенсивности перемешивания титруемого раствора и освещения; зависимость расхода перманганата калия от скорости титрования; неприемлемость применения единого пересчетного коэффициента для растительного сырья, содержащего танино-катехиновую смесь (показано, что в зависимости от исследуемых объектов он может составлять от 0,00416 до 0,00735). Метод Левенталя следует признать приблизительным и возможным для полуколичественного определения.

Существует способ потенциометрического титрования, позволяющий не только оценить количественное содержание суммы дубильных веществ в лекарственном растительном сырье, но и дифференцировать конденсированные и гидролизуемые группы танинов (Е.И. Рябинина, Е.Е. Зотова, Н.И. Понамарева. Потенциометрическое определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье. - Фармация. - 2012. - №2. - С. 8-10). Однако к недостаткам метода следует отнести невозможность раздельного определения представителей дубильных веществ в общей сумме, содержащейся в растительных объектах.

Известен способ кулонометрического определения дубильных веществ в пересчете на танин в лекарственном растительном сырье, основанный на окислении дубильных веществ гипоиодит-ионами в фосфатном буферном растворе с рН 9,5 (С.Г. Абдуллина, Н.М. Агапова, Г.К. Зиятдинова и др. Кулонометрическое определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье. - Фармация. - 2010. - №4. - С. 13-15). Недостатком данного способа является использование дорогостоящего оборудования, реактивов, а также невозможность дифференцированно определить дубильные вещества в сумме, содержащейся в растительных объектах.

Известен также способ определения содержания танина и производных галловой кислоты в чае методом кондуктометрии (Патент 2127878 от 20.03.1999 г. Способ раздельного определения танина и катехинов (в пересчете на галловую кислоту) в чае. Авторы: Коренман Я.И., Новикова Н.А., Нифталиев С.И. Патентообл.: Воронежская государственная технологическая академия. Класс МКП: G01N 31/16). Недостатком данного способа является применение токсичных органических растворителей (изобутиловый спирт), а также использование цветной реакции с Fe (III), продуктом которой является нестабильное по окраске во времени окрашенное соединение.

Известен также способ количественного определения дубильных веществ в пересчете на танин в листьях скумпии и сумаха методом комплексонометрии после осаждения дубильных веществ солями цинка (ГОСТ 4564-79. Лист скумпии. Технические условия). Недостатком данного способа является длительность проведения анализа и трудность определения точки эквивалентности.

Спектрофотометрические методы, несмотря на невысокую селективность, по-прежнему находят широкое применение в анализе лекарственных препаратов благодаря сравнительной доступности, дешевизне, простоте в сочетании с хорошей точностью. Большинство лекарственных веществ обладает собственным светопоглощением в УФ-области. Главным достоинством спектрофотометрического анализа является его применимость для определения двух и более активных компонентов препаратов сложного состава без их предварительного разделения. В случае перекрывающихся спектров поглощения индивидуальных соединений используют метод Фирордта, включенный в Государственную фармакопею РФ (И.В. Власова, А.В. Шилова, Ю.С.Фокина. Спектрофотометрические методы в анализе лекарственных препаратов (обзор). - Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2011. - №1. - Т. 77. - С. 21-28).

Описан способ количественного определения дубильных веществ спектрофотометрическим методом после реакции с реактивом Фолина-Чокальтеу в пересчете на галловую кислоту (Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03. - М. - 2004 г. - С. 94-95). Известен спектрофотометрический метод после реакции с реактивом Фолина-Чокальтеу, позволяющий определять сумму дубильных веществ в пересчете на пирогаллол и сумму дубильных веществ, не адсорбируемых кожным порошком, в пересчете на пирогаллол (Проект ОФС «Определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье»). Описаны способы спектрофотометрического количественного определения дубильных веществ, основанные на образовании окрашенных комплексов дубильных веществ с железо-тартратным реактивом (Н.А. Данилова, Д.М. Попов. Количественное определение дубильных веществ в корнях щавеля конского методом спектрофотометрии в сравнении с методом перманганатометрии. - Вестник ВГУ. Сер.: Химия. Биология. Фармация. - 2004. - №2. - С. 179-182). Недостатком данных методов является невозможность раздельного определения низко- и высокомолекулярных дубильных веществ.

Наиболее близким к предлагаемому является способ, заключающийся в том, что дубильные вещества определяют методом спектрофотометрии в пересчете на галловую кислоту (Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03. - М. - 2004 г. - С. 94-95). Недостатком данного способа является многократное разведение испытуемого образца, в результате которого концентрация дубильных веществ в растворе плохо определима. Также близким способом к предлагаемому является спектрофотометрический метод количественного определения дубильных веществ в пересчете на танин (К.Н. Разаренова, Е.В. Жохова. Сравнительная оценка содержания дубильных веществ в некоторых видах рода Geranium L. флоры северо-запада. - Химия растительного сырья. - 2011. - №4. - С. 187-192), заключающийся в измерении оптической плотности спирто-водной вытяжки из лекарственного растительного сырья при длине волны 275±2 нм. Данные способы не дают возможность раздельно определить содержание низкомолекулярных и высокомолекулярных дубильных веществ, что также можно отнести к недостаткам данных способов-аналогов.

Способом-прототипом является способ (Патент 2439568 от 12.10.2010 г. Способ определения дубильных веществ в растительном сырье. Авторы: Самылина И.А., Абоянц Р.К., Гринько Е.Н. Патентообл.: ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России. Класс МКЛ: G01N 33/52), в котором навеску сырья экстрагируют водой при кипячении, охлаждают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание суммы всех дубильных веществ по определенной формуле, далее к аликвотной пробе фильтрата добавляют 1% раствор коллагена в 1% уксусной кислоте, взбалтывают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание суммы всех дубильных веществ по определенной формуле. Способ позволяет получать более точные результаты определения дубильных веществ и дает возможность раздельного определения осаждаемых и не осаждаемых дубильных веществ в растительном сырье. Недостатком способа является невозможность определения дубильных веществ во всех видах лекарственного растительного сырья, так как водные извлечения некоторых видов не дают выраженного осадка при обработке раствором коллагена.

В научно-фармацевтической, медицинской и патентной литературе способов, позволяющих проводить идентификацию и количественное определение танина и галловой кислоты при совместном присутствии без предварительного разделения методом прямой спектрофотометрии с применением расчетного метода Фирордта, не обнаружено.

Задача изобретения: заключается в разработке спектрофотометрического способа идентификации и раздельного количественного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии без предварительного разделения с применением расчетного метода Фирордта, так как максимумы данных биологически активных веществ накладываются, в лекарственном растительном сырье и фитопрепаратах на его основе.

Технический результат - повышение точности, а также возможность одновременного количественного определения танина и галловой кислоты, присутствующих в лекарственном растительном сырье без предварительного разделения, достигается тем, что навеску измельченного сырья помещают в коническую колбу, заливают нагретой до кипения водой и кипятят с обратным холодильником при периодическом перемешивании. Извлечение процеживают через несколько слоев марли, не дожидаясь охлаждения, так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Измеряют оптическую плотность аликвотной части фильтрата, разведенного боратным буферным раствором с рН 9,0, относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм (максимумы поглощения танина и галловой кислоты в боратном буфере). Содержание галловой кислоты (Х_гк) и танина (Х_т) в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах вычисляют по формулам:

; .

где А^λ1 - оптическая плотность исследуемого извлечения при длине волны 275±2 нм; А^λ2 - оптическая плотность исследуемого извлечения при длине волны 305±2 нм; а - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; W₁ и W₂ - объем мерных колб, взятых для разведения, мл; V_a - объем аликвоты извлечения, взятой на анализ, мл; E₁^λ1 - величина удельного показателя поглощения галловой кислоты при 275 нм; E₁^λ2 - величина удельного показателя поглощения галловой кислоты при 305 нм; Е₂^λ1 - величина удельного показателя поглощения танина при 275 нм; Е₂^λ2 - величина удельного показателя поглощения танина при 305 нм.

Изобретение проиллюстрировано графиками, чертежами, схемами, таблицами, где на фиг. 1 показан спектр поглощения раствора стандартного образца танина в воде и боратном буферном растворе с рН 9,0. На фиг. 2 - спектр поглощения раствора стандартного образца галловой кислоты в воде и боратном буферном растворе с рН 9,0. На фиг. 3 - спектр поглощения смеси растворов стандартных образцов галловой кислоты и танина (1:1) в воде и боратном буферном растворе с рН 9,0. Спектры поглощения смеси растворов стандартных образцов галловой кислоты и танина в боратном буферном растворе с рН 9,0 приведены в различных соотношениях на фиг. 4. Фиг. 5 демонстрирует спектр поглощения водного извлечения из листьев крапивы двудомной в воде и боратном буферном растворе с рН 9,0. В таблице 1 приведены экспериментально вычисленные величины удельных показателей поглощения галловой кислоты и танина в боратном буфере при длинах волн 275 и 305 нм. Метрологическая оценка результатов определения танина и галловой кислоты (на примере листьев крапивы двудомной) представлена таблице 2. Результаты количественного определения галловой кислоты и танина в различных растительных объектах (в пересчете на абсолютно сухое сырье) приведены в таблице 3.

Точную навеску (около 2,0 г) измельченного сырья помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают нагретой до кипения водой в количестве 250 мл и кипятят с обратным холодильником при периодическом перемешивании в течение 30 минут. Извлечение процеживают через несколько слоев марли из конической колбы, не дожидаясь охлаждения, в мерную колбу вместимостью 250 мл так, чтобы частицы сырья не попали в колбу, доводят объем раствора, если необходимо, водой до метки. Измеряют оптическую плотность 1-5 мл фильтрата, разведенного боратным буферным раствором с рН 9,0 в мерной колбе вместимостью 25 мл, относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм (фиг. 1 и 2). Данные спектров поглощения лекарственного растительного сырья (фиг. 5) свидетельствуют о присутствии в извлечениях галловой кислоты и танина в различных соотношениях с максимумом поглощения в диапазоне 275-305 нм, что соответствует наличию максимумов поглощения растворов смеси стандартных образцов танина и галловой кислоты в боратном буферном растворе в различных соотношениях (фиг. 3 и 4). Т.е. в извлечениях присутствует сумма данных веществ в определенном соотношении, максимумы которых накладываются (фиг. 3 и 4). Содержание галловой кислоты и танина в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах в растительном сырье рассчитывают с применением метода Фирордта. Значения величин удельных показателей поглощения галловой кислоты и танина в боратном буфере при длинах волн 275 и 305 нм (максимумы поглощения индивидуальных веществ) представлены в табл. 1.

Способ позволяет проводить идентификацию и раздельное количественное определение галловой кислоты и танина в растительном сырье при совместном присутствии и стандартизировать лекарственное растительное сырье и лекарственные фитопрепараты по содержанию данных дубильных веществ и отличается достаточной чувствительностью (1×10^-6 г/мл), экономичностью, доступностью и экспрессностью.

Способ иллюстрируется следующими конкретными примерами.

Пример 1. Разработанный способ был апробирован на лекарственном растительном сырье листьев крапивы двудомной.

Получение извлечения: Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья, проходящего через сито с размером отверстий 0,5 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость процеживают через несколько слоев марли в мерную колбу 250 мл, не дожидаясь охлаждения, так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Доводят раствор водой до метки и перемешивают. Отбирают 1 мл полученного извлечения в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки боратным буферным раствором с рН 9,0. Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм. Максимум поглощения для извлечения из листьев крапивы двудомной в боратном буферном растворе находится при 294±2 нм (фиг. 5). Результаты количественного определения танина и галловой кислоты в листьях крапивы двудомной представлены в табл. 3. Метрологическая оценка результатов определения представлена табл. 2.

Пример 2. Разработанный способ был апробирован на лекарственном растительном сырье коре дуба обыкновенного.

Получение извлечения: Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья, проходящего через сито с размером отверстий 0,5 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость процеживают через несколько слоев марли в мерную колбу 250 мл, не дожидаясь охлаждения, так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Доводят раствор водой до метки и перемешивают. Отбирают 1 мл полученного извлечения в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки боратным буферным раствором с рН 9,0. Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм. Результаты количественного определения танина и галловой кислоты в коре дуба обыкновенного представлены в табл. 3.

Пример 3. Разработанный способ был апробирован на лекарственном растительном сырье плодов облепихи крушиновидной.

Получение извлечения: Около 2,0 г (точная навеска) высушенного до остаточной влажности не более 20% измельченного сырья помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость процеживают через несколько слоев марли в мерную колбу 250 мл, не дожидаясь охлаждения, так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Доводят раствор водой до метки и перемешивают. Отбирают 5 мл полученного извлечения в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки боратным буферным раствором с рН 9,0. Измеряют оптическую плотность полученного раствора относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм. Результаты количественного определения танина и галловой кислоты в плодах облепихи крушиновидной представлены в табл. 3.

Источники информации

1. Сорокина, А.А. Потенциометрия как метод контроля качества лекарственного растительного сырья, содержащего дубильные вещества, и препаратов на его основе / А.А. Сорокина, А.И. Марахова // Фармация. - 2014. - №2. - С. 49-53.

2. Марахова, А.И. Разработка и валидация методики потенциометрического определения суммы дубильных веществ в траве зверобоя / А.И. Марахова, Я.М. Станишевский, В.И. Потапов, А.А. Сорокина // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2014. - №3(8). - С. 138-141.

3. ГОСТ 4565-79. Лист сумаха. Технические условия.

4. Беликов, В.Г. Анализ лекарственных веществ фотометрическими методами. Опыт работы отечественных специалистов / В.Г. Беликов // Рос. жим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2002. - Т. XLVI. - №4. - С. 52-56.

5. Власова, И.В. Новые подходы к спектрофотометрическому анализу многокомпонентных смесей / И.В. Власова, А.В. Шилова // Вiсник Харкiвського нацiонального унiверситету. - 2007. - №770. - Вип. 15(38). - С. 141-146.

6. Боровикова, Н.А. Спектрофотометрическое количественное определение дубильных веществ в коре дуба, соплодиях ольхи и в водных извлечениях из данного сырья / Н.А. Боровикова, Н.Г. Селезенев, Д.М. Попов // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2010. - №11. - С. 19-23.

7. Мальцева, А.А. Количественное определение дубильных веществ в траве горца почечуйного / А.А. Мальцева, А.С. Чистякова, А.А. Сорокина и др. // Вестник ВГУ. Сер.: Химия. Биология. Фармация. - 2013. - №2. - С. 203-205.

Способ идентификации и раздельного количественного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии в растительном сырье и фитопрепаратах без предварительного разделения, характеризующийся тем, что навеску исследуемого измельченного сырья помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают нагретой до кипения водой в количестве 250 мл, кипятят с обратным холодильником при периодическом перемешивании в течение 30 минут, извлечение процеживают через несколько слоев марли из конической колбы, не дожидаясь охлаждения, в мерную колбу вместимостью 250 мл так, чтобы частицы сырья не попали в колбу, доводят объем раствора, если необходимо, водой до метки; измеряют оптическую плотность 1-5 мл фильтрата, разведенного боратным буферным раствором с рН 9,0 в мерной колбе вместимостью 25 мл, относительно буфера при длинах волн 275±2 нм и 305±2 нм, а содержание галловой кислоты (Х_гк) и танина (Х_т) в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах вычисляют по формулам:

; .

где А^λ1 - оптическая плотность исследуемого извлечения при длине волны 275±2 нм; А^λ2 - оптическая плотность исследуемого извлечения при длине волны 305±2 нм; а - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; W₁ и W₂ - объем мерных колб, взятых для разведения, мл; V_a - объем аликвоты извлечения, взятой на анализ, мл; Е₁^λ1 - величина удельного показателя поглощения галловой кислоты при 275 нм; E₁^λ2 - величина удельного показателя поглощения галловой кислоты при 305 нм; E₂^λ1 - величина удельного показателя поглощения танина при 275 нм; Е₂^λ2 - величина удельного показателя поглощения танина при 305 нм.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гинекологии, и предназначено для прогнозирования спонтанного наступления беременности в течение года после проведения хирургического лечения бесплодия у женщин с I и II стадиями наружного генитального эндометриоза.

Высокопроизводительный скрининг соединений, модулирующих экспрессию клеточных макромолекул // 2612017

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Способ идентификации и количественного определения специфической молекулы-мишени в образце, включающий: тестирование и выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; или выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; скрининг образца, содержащего специфическую молекулу-мишень, в высокопроизводительном скрининговом анализе, включающий добавление первого и второго лиганда, каждый из которых имеет первую и вторую детектируемую метку, связывание каждого из первого и второго лигандов с отдельными и специфическими сайтами на специфической молекуле-мишени, где скрининговый анализ не требует стадии промывания; обнаружение излучения света, когда первый и второй лиганды специфически связываются со специфической молекулой-мишенью; измерение интенсивности излучаемого света и по интенсивности света проводят идентификацию и количественное определение специфической молекулы-мишени в образце.

Способ флуоресцентного гистологического выявления амилоида // 2611408

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и представляет собой способ флуоресцентного гистологического выявления амилоида, включающий фиксирование срезов ткани органов в 10%-ном формалине, окрашивание флуоресцентным красителем, промывку водой, обезвоживание, заделку в прозрачные нефлуоресцирующие среды и микроскопирование на флуоресцентном микроскопе, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного красителя используют производные 4-N-арил-3,5-диоксо-1-формил-10-окса-4-азатрицикло[5.2.11.7.02.6]дец-8-енов формулы где Y=2-NO2, 3-NO2, 4-NO2, 3-СООН, 4-СООН,а окрашивание осуществляют 1,5% спиртовым раствором красителя, смешанным с 1% водным раствором гидроксида натрия в соотношении 1:1.

Способ оценки степени повреждений плодовых растений морозами // 2608811

Изобретение относится к области сельского хозяйства, плодоводству и селекции. Способ включает промораживание однолетних побегов в период покоя в камере искусственного климата.

Способ количественного определения метоклопрамида // 2605316

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения метоклопрамида в лекарственных формах, воде и биологических жидкостях.

Способ дифференциальной диагностики заболеваний поджелудочной железы // 2602689

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано для ранней дифференциальной диагностики острого панкреатита и рака поджелудочной железы.

Способ выявления веществ и их композиций с противоопухолевой активностью // 2602452

Изобретение относится к области разработки лекарственных препаратов для лечения онкологических заболеваний. Предложен способ выявления веществ и их композиций с противоопухолевой активностью, основанный на увеличении продукции репортерного белка, кодируемого рекомбинантным репликативно-дефектным аденовирусом, в ответ на воздействие веществ или их композиций на молекулярные мишени из числа протеинкиназы mTOR, топоизомераз I и II, гистон деацетилаз и неизвестных мишеней, ингибируемых соединениями LY294002 и LY303511.

Способ получения днк-праймеров и зондов для малоинвазивной пренатальной пцр-диагностики трисомии 21-й хромосомы у плода по крови беременной женщины и диагностический набор для ее осуществления // 2602366

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ получения ДНК-праймеров и зондов для малоинвазивной пренатальной ПЦР-диагностики трисомии 21-й хромосомы у плода по крови беременной женщины, характеризующийся тем, что выбирают сайт дифференциального метилирования фетальной ДНК 21-й хромосомы и ДНК 21-й хромосомы взрослого человека, чувствительный к эндонуклеазам, синтезируют прямой и обратный праймер, соответствующие ампликону длиной от 60 до 300 п.н., а также зонд, соответствующий этому ампликону, проводят ПЦР в реальном времени смеси образцов после их обработки эндонуклеазой рестрикции, отбирают пары праймеров и зонды, обеспечивающие эффективность реакции ПЦР в реальном времени выше 90% и линейность при изменении относительной концентрации образцов выше 90%.

Способ определения мозговой изоформы креатинфосфокиназы в крови человека // 2600165

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике и касается способа определения мозговой изоформы креатинфосфокиназы в крови человека.

Применение индоцианина в качестве маркера наночастиц // 2599488

Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для применения индоцианина зеленого в качестве оптической метки наночастиц, содержащих лекарственное вещество белковой природы.

Способ определения длительности болезни при лихорадке ку на основании биохимических показателей крови // 2618446

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения длительности болезни при лихорадке Ку у лиц в возрасте до 50 лет. Способ определения длительности болезни при лихорадке Ку, заключающийся в том, что в сыворотке крови больных в возрасте до 50 лет определяют активность каталазы на 1 или 2 неделях болезни, затем, решая регрессионные уравнения зависимости между активностью каталазы, длительностью эндотоксикоза и продолжительностью заболевания, определяют длительность болезни при лихорадке Ку в днях, при этом при определении активности каталазы сыворотки крови на 1 неделе болезни определяют длительность болезни с точностью до 1-2 дней, а при определении активности каталазы сыворотки крови на 2 неделе болезни - с точностью до 1-3 дней. Вышеописанный способ повышает точность определения длительности болезни при лихорадке Ку. 3 табл., 4 пр.

Способ количественного определения флуоресцеина натрия // 2621158

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения флуоресцеина натрия. Сущность способа заключается в том, что прозрачную полиметакрилатную матрицу выдерживают в анализируемом растворе при встряхивании в течение 15 минут, при этом в анализируемый раствор добавляют раствор NaOH для создания среды кислотностью pH 9. Оценку концентрации флуоресцеина натрия осуществляют по градуировочному графику интенсивности полосы при максимуме флуоресценции 440 нм. Использование способа позволяет с высокой точностью определять флуоресцеин натрия в растворах. 3 табл., 2 пр.

Способ определения феназепама // 2622000

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения феназепама. Сущность способа заключается в том, что готовят растворы определяемого вещества в концентрации 0,02 мг/мл и образца сравнения. В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1М раствор натрия гидроксида. В качестве образца сравнения используют натрия нитрат. Измеряют оптическую плотность раствора определяемого вещества и образца сравнения на спектрофотометре при длине волны 345 нм. Расчет результатов проводят по формуле ,где Dx и Dвос - оптические плотности определяемого вещества и образца сравнения соответственно; аx и авос - точные навески определяемого вещества и образца сравнения соответственно; V1 и V2 -объемы приготовленного раствора определяемого вещества; V3 - объем аликвоты определяемого вещества; - объем приготовленного раствора образца сравнения; 100 - коэффициент для пересчета в проценты; W - влажность, %; 0,0208 - коэффициент пересчета по натрия нитрату в 0,1M растворе натрия гидроксида. Использование способа позволяет с высокой точностью определять феназепам в исследуемых образцах. 3 пр.

Способ определения о-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-n-метилкарбамата и о-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-n-(дибутиламиносульфенил)-n-метилкарбамата в биологическом материале // 2623070

Изобретение относится к области аналитической химии, и касается способа определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата и O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-(дибутиламиносульфенил)-N-метилкарбамата в биологическом материале. Сущность способа заключается в том, что биологический объект, содержащий O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат или O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-(дибутиламиносульфенил)-N-метилкарбамат, измельчают, трижды обрабатывают смесью ацетона и этилацетата, взятых в соотношении 6:4 по объему, каждый раз в течение 30 минут. Полученные извлечения объединяют, экстрагент испаряют, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном. Ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в ацетонитриле. Полученный раствор разбавляют водой в соотношении 1:4 по объему, образующийся водно-ацетонитрильный раствор насыщают хлоридом натрия. Далее дважды экстрагируют этилацетатом, органические экстракты объединяют, упаривают до сухого остатка. Остаток растворяют в ацетоне, вносят в макроколонку сорбента, которым является силикагель КСС №3 80/120 мкм. Процесс хроматографирования осуществляют, используя двухкомпонентную подвижную фазу гексан-диоксан в соотношении 8:2 по объему. Фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в метаноле. Далее проводят определение исследуемого вещества хромато-масс-спектрометрическим методом в капиллярной колонке HP-5MS длиной 30 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой (5%-фенил-95%-метилполисилоксан, при толщине пленки неподвижной фазы 0,25 мкм), используя газ-носитель гелий, подаваемый со скоростью 1,0 мл/мин, и масс-селективным детектором, работающим в режиме электронного удара, где начальная температура термостата колонки составляет 70°С, данная температура выдерживается в течение 2 минут, в дальнейшем температура повышается от 70 до 200°С со скоростью 40°С в минуту, а затем от 200 до 290°С со скоростью 12,5°С, конечная температура колонки выдерживается в течение 2 минут, температура инжектора составляет 250°С, температура квадруполя 150°С, температура интерфейса детектора 290°С, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ. Регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество ализируемого вещества, которым является O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамат или O-(2,3-дигнщро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-(дибутиламиносульфенил)-N-метилкарбамат, по площади хроматографического пика. Использование способа позволяет с высокой точностью определять O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата и O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-(дибутиламиносульфенил)-N-метилкарбамата в биологическом материале. 4 табл. 3 пр.

Способ диагностики гипоксии плода в родах // 2623858

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики гипоксии плода в родах, включающий определение концентрации лактата в амниотической жидкости, отличающийся тем, что образец амниотической жидкости забирают в первом периоде родов вагинальной амниотомией при раскрытии шейки матки 4-5 см посредством иглы для пункции заднего свода влагалища, определяют в амниотической жидкости концентрацию лактата энзиматическим колориметрическим методом и при концентрации лактата в амниотической жидкости менее 5,0 ммоль/л или более 9,5 ммоль/л диагностируют гипоксию плода в родах. Осуществление изобретения обеспечивает сокращение времени диагностики гипоксии плода в родах при высоких показателях чувствительности и специфичности. 3 пр., 4 ил.

Фотоактивируемое химическое обесцвечивание красителей // 2623880

Изобретение относится к области медицины. Предложены способы зондирования множественных мишеней в биологическом образце, включающие использование фотоактивируемого химического обесцвечивания для обнаружения множественных мишеней в биологическом образце. Способы включают: связывание по меньшей мере одного зонда с одной или более чем одной мишенью, присутствующей в образце, содержащей множественные мишени; обнаружение сигнала от по меньшей мере,одного связанного зонда; приведение образца, содержащего связанный зонд, в контакт с реагентом переноса электрона; облучение образца, связывание по меньшей мере одного зонда с одной или более чем одной мишенью, присутствующей в образце; обнаружение сигнала от зонда. Также предложен способ получения серии по меньшей мере двух изображений, показывающих оптически меченные биологические мишени. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

Способ определения свободно-радикального окисления в модельной системе // 2627459

Изобретение относится к диагностике, а именно способу получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления. Способ получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления по концентрации малонового диальдегида, включающий получение 10% спиртового раствора лецитина, из 0,25 мл полученного раствора лецитина и 5 мл дистиллированной воды инжекционным способом готовят суспензию липосом, в полученную суспензию липосом добавляют 0,2 мл 0,05 н соляной кислоты и впрыскивают 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода, нагревают при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Вышеописанный способ позволяет повысить точность определения свободнорадикального окисления. 1 табл., 1 пр.

Способ дифференциальной диагностики доброкачественных, первичных и вторичных злокачественных опухолей головного мозга // 2628816

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для предоперационной дифференциальной диагностики первичных и вторичных злокачественных, а также доброкачественных опухолей головного мозга. Сущностью изобретения является то, что за 3 дня до операции в плазме крови больного определяют общую БАЭЭ-эстеразную активность трипсиноподобных протеиназ и при ее значении в пределах 305,9-360,1 мЕ/мл диагностируют доброкачественную опухоль головного мозга, при ее значении в пределах 1228,6-1433,4 мЕ/мл диагностируют первичную злокачественную опухоль головного мозга, а при ее значении в пределах 2052,9-2401,1 диагностируют вторичную злокачественную опухоль головного мозга. Способ позволяет проводить дифференциальную диагностику новообразования головного мозга до операции, что, в свою очередь, позволит обеспечить наиболее эффективную медикаментозную и техническую подготовку к оперативному лечению больного, имеющего новообразование головного мозга, и сократить сроки пребывания больного в стационаре. 1 табл., 3 пр.

Способ определения степени метаболической зрелости гетеротопических оссификатов по биохимическим показателям крови пациента // 2628869

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для определения степени метаболической зрелости гетеротопических оссификатов. Сущность способа: перед выполнением хирургического лечения гетеротопических оссификатов определяют характер их расположения и локализации, затем оценивают показатель микрогемоциркуляции (ПМ, п.е. - перфузионные единицы) мягких тканей в проекции гетеротопических оссификатов пациента. В случае, если измеренные характеристики показателя фосфорно-кальциевого обмена в венозной крови пациента составляют по содержанию фосфатазы щелочной более 160-180 Ед./л, по содержанию остеокальцина более 50-58 нг/мл, а также при характеристике маркера формирования костного матрикса (PINP) - N-терминальный припептид проколлагена 1 типа более 90 нг/мл даже при изолированном поражении одного локтевого или одного коленного сустава, то устанавливают факт наличия прохождения активных регенераторных процессов, свидетельствующих о незавершенности процесса образования остеоида, его минерализации с созреванием губчатой костной ткани новообразованной кости и, как следствие, о преждевременности проведения этапа хирургического удаления образовавшихся гетеротопических оссификатов. В случае, если измеренные показатели фосфорно-кальциевого обмена в венозной крови пациента составляют по характеристике маркера формирования костного матрикса (PINP) - N-терминальный припептид проколлагена 1 типа составляют менее 76 нг/мл даже при изолированном поражении одного локтевого или одного коленного сустава, по содержанию фосфатазы щелочной в пределах 40-150 Ед./л и по содержанию остеокальцина в пределах 11-46 нг/мл, то устанавливают факт завершенности процессов образования остеоида и его минерализации с образованием и созреванием губчатой костной ткани новообразованной кости, а также свидетельствующий о достаточности стадии метаболической зрелости гетеротопических оссификатов пациента при купировании активных метаболических процессов в патологическом очаге, показатели которой свидетельствуют о целесообразности проведения этапа хирургического удаления образовавшихся гетеротопических оссификатов с восстановлением функционально достаточного объема движений в пораженном суставе. Изобретение может быть использовано при лечении пациентов с формирующимися гетеротопическими костеобразованиями в условиях травматолого-ортопедических, хирургических и других стационаров. Применение изобретения обеспечивает достаточную точность оценки степени зрелости гетеротопических оссификатов перед их хирургическим удалением, обеспечивает достаточно более раннее и объективное выявление факта развития процесса гетеротопической оссификации, а также обеспечение высокой информативности для выбора индивидуальной тактики хирургического лечения гетеротопических оссификатов. 4 пр.

Способ прогноза развития постперикардиотомного синдрома у больных ибс, перенесших аортокоронарное шунтирование // 2630592

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогноза развития постперикардиотомного синдрома (ПКТС) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС), перенесших аортокоронарное шунтирование, характеризующийся тем, что у пациентов через сутки после операции определяют активность аргиназы в эритроцитах и арилэстеразную активность параоксоназы (PON) в плазме крови, затем рассчитывают коэффициент К по формуле: К = аргиназа/PON, где «аргиназа» - это активность аргиназы, МЕ/(г Hb); «PON» - арилэстеразная активность параоксоназы, МЕ/(мг белка); и при значении коэффициента К, равном 0,39 и более, у пациента прогнозируют развитие ПКТС с вероятностью 67%. Технический результат заявляемого изобретения заключается в повышении точности, специфичности и чувствительности прогностического метода, позволяющего выделить группу риска на раннем этапе и выбрать адекватную терапию для пациентов. 1 табл., 2 пр., 1 ил.