Штамм бактерий micrococcus luteus 805 - продуцент сайт-специфической метилзависимой эндонуклеазы mluvi

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Micrococcus luteus, депонированный под регистрационным номером В-12410 во Всеросиийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика, является продуцентом сайт-специфической метилзависимой эндонуклеазы MluVI. Изобретение обеспечивает получение нового фермента MD-эндонуклеазы, который узнает и расщепляет обе цепи последовательности ДНК 5'-GCGC^NGCGC-3'/3'-CGCGN^CGCG-5' перед центральным нуклеотидом (N) с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов при наличии в данной последовательности не менее шести С5-метилированых цитозинов, и может быть использовано для крупноблочного сайт-специфичного гидролиза ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания. 2 ил., 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий Micrococcus luteus 805 - продуцента сайт-специфической метилзависимой эндонуклеазы MluVI, которая может быть использована для крупноблочного сайт-специфического гидролиза ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания.

На данный момент описано несколько сайт-специфических метилзависимых ДНК-эндонуклеаз (MD-эндонуклеаз), узнающих и расщепляющих ДНК, только при наличии в сайте узнавания 5-метилцитозина.

Например, описан штамм бактерий Glacial ice bacterium I, являющийся продуцентом MD-эндонуклеазы Glal, которая узнает и расщепляет метилированную последовательность нуклеотидов 5'-R(5mC)GY-3', где 5mC - означает 5-метилцитозин, R - пурин, a Y - пиримидин [1, 2].

Известны штаммы бактерий Bacillus simplex 23 [3], Bacillus subtilis 230 [4] и Glacial ice bacterium 24 [5], продуцирующие сайт-специфические эндонуклеазы Blsl, BisI и Glul, соответственно, которые узнают и расщепляют метилированную последовательность 5'-GCNGC-3', при наличии в ней от двух до четырех 5-метилцитозиновых оснований.

Недостатком вышеперечисленных штаммов является то, что продуцируемые ими MD-эндонуклеазы не способны узнавать и расщеплять обе цепи нуклеотидной последовательности ДНК 5'-GCGCNGCGC-373'-CGCGNCGCG-5' имеющей только шесть, семь или восемь 5-метилцитозинов.

Наиболее близким к заявляемому штамму - прототипом, является штамм бактерий Microbacterium testaceum 17В, продуцирующий сайт-специфическую метилзависимую эндонуклеазу MteI, которая узнает метилированную последовательность 5'-GCGCNGCGC-3'/3'-CGCGNCGCG-5' и расщепляет ее перед центральным нуклеотидом (N) с образованием однонуклеотидного 5'-выступающего конца при условии С5-метилирования в ней от пяти до восьми цитозинов [6].

Недостатком штамма-прототипа является то, что продуцируемая им сайт-специфическая эндонуклеаза расщепляет вышеуказанную последовательность, в которой метилированы не менее пяти цитозинов, что в ряде случаев не позволяет использовать ее для получения крупных фрагментов при сайт-специфическом расщеплении ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания.

В настоящее время не описаны штаммы бактерий, являющиеся продуцентами сайт-специфических метилзависимых ДНК-эндонуклеаз, узнающих и расщепляющих только гиперметилированные последовательности ДНК 5'-GCGCNGCGC-3' при наличии в них не менее шести С5-метилцитозинов.

Задачей изобретения является получение бактериального штамма, продуцирующего сайт-специфическую метилзависимую ДНК-эндонуклеазу, способную узнавать и расщеплять обе цепи нуклеотидной последовательности 5'-GCGCNGCGC-3'/3'-CGCGNCGCG-5' только при наличии в ней не менее шести 5-метилцитозиновых оснований.

Поставленная задача решается путем получения штамма Micrococcus luteus 805 - продуцента сайт-специфической метилзависимой ДНК-эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей обе цепи нуклеотидной последовательности 5'-GCGCNGCGC-3'/3'-CGCGNCGCG-5' при условии С5-метилирования в ней не менее шести 5-метилцитозиновых оснований.

Техническим результатом изобретения является получение бактериального штамма, являющегося продуцентом метилзависимой ДНК-эндонуклеазы с новой сайт-специфичностью, обладающей способностью узнавать и расщеплять обе цепи нуклеотидной последовательности 5'-GCGCNGCGC-3'/3'-CGCGNCGCG-5' с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов, при условии С5-метилирования в ней не менее шести цитозиновых оснований.

Предлагаемый штамм выделен из природного источника (почвы) в результате целенаправленного систематического поиска. Полученный штамм Micrococcus luteus 805 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-12410, а продуцируемая им сайт-специфическая эндонуклеаза названа MluVI.

Штамм Micrococcus luteus 805 характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Грамположительные неподвижные кокки диметром 0,5-1,5 мкм. Могут образовывать тетрады и нерегулярные скопления. Спор не образуют.

На агаризованной среде Луриа-Бертрани (LB) образует лимонно-желтые, гладкие, блестящие, непрозрачные, выпуклые круглые колонии.

Физиолого-биохимические признаки. Облигатно аэробные. Каталазоположительные. Оксидазоположительные. Массовая доля G/C-нуклеотидов составляет 70-75%. Растут при температуре от 4 до 40°C с температурным оптимумом роста 25-37°C, при рН от 6 до 9.

Штамм идентифицирован на основе анализа морфологических и биохимических свойств по определителю [7], а также с помощью анализа первичной структуры фрагмента гена 16S рРНК по программе BLAST [8] как вид бактерии Micrococcus luteus. Продуцируемая заявляемым штаммом сайт-специфическая метилзависимая эндонуклеаза MluVI названа согласно номенклатуре [9].

Хранение штамма осуществляют в лиофильно высушенном состоянии или в пробирках «Eppendorf» с 22% глицерином, 0,5% желатиной, 20 мМ Трис-HCl (рН 8,1), 60 мМ NaCl, 15 мМ MgCl2, 1 мМ CaCl2 при -50°C.

Для культивирования штамма используют питательную среду следующего состава (г/л): триптон - 10, дрожжевой экстракт - 5, NaCl - 5, рН 7,5. Культивирование осуществляют при 30°C с аэрацией до достижения стационарной стадии роста.

Полученная сайт-специфическая MD-эндонуклеаза MluVI характеризуется следующими свойствами:

1. Узнает и расщепляет в ДНК последовательность нуклеотидов 5'-GCGCNGCGC-3', в которой С5-метилированы не менее шести цитозинов.

2. Расщепляет межнуклеотидные связи перед центральным нуклеотидом (N) в обеих цепях узнаваемой последовательности.

3. Не расщепляет вышеприведенную последовательность, не содержащую С5-метилцитозиновых оснований или содержащую менее шести метилированных цитозинов.

4. Оптимальная температура действия фермента 37°C.

5. Оптимальное значение рН для действия фермента 7,5-9,0.

6. Для проявления активности MluVI требуются ионы Mg2+, оптимальная концентрация - 5-10 мМ.

Определяющим отличием предлагаемого штамма от всех известных в настоящее время штаммов-продуцентов сайт-специфических метилзависимых ДНК-эндонуклеаз (MD-эндонуклеаз) является то, что новый штамм продуцирует сайт-специфическую эндонуклеазу, которая узнает и расщепляет обе цепи метилированной нуклеотидной последовательности ДНК 5'-GCGC^NGCGC-3' только при наличии в ней не менее шести 5-метилцитозинов.

Таким образом, MD-эндонуклеаза MluVI представляет собой новый, не имеющий аналогов фермент, который может быть использован для выявления и анализа участков ДНК, содержащих избыточное количество С5-метилцитозинов.

Поскольку предлагаемый штамм получен впервые и для выделения сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей вышеназванную последовательность нуклеотидов в указанной позиции, никогда не использовался, можно сделать вывод о соответствии предлагаемого штамма критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Выращивание штамма-продуцента и выделение фермента MluVI.

Для получения колоний штамм Micrococcus luteus 805 высевают на агаризованную среду LB в чашку Петри и выращивают в течение 48 часов при 22-25°C. Для ферментации штамм выращивают при встряхивании в 0,5-литровых колбах, содержащих по 300 мл среды (1% триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 0,5% NaCl, рН 7,5) при 120-140 об/мин в течение 20 часов при 30°C. Клетки осаждают на центрифуге J2-21 («Весктап», США) в роторе JA-10 при 8000 об/мин и хранят при -20°C. С 1 л среды получают 6-8 г биомассы.

Разрушение клеток ультразвуком, выделение и очистку фермента проводят с использованием модификации известной методики [10]. Фермент хранится при - 20°C в буфере, содержащем 10 мМ Трис-HCl (рН 7,5), 0,2 М NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,08% Тритон Х-100, 7 мМ 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин.

За единицу активности принимают минимальное количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10 [6], дополнительно метилированной метилазой Fsp4HI и линеаризованной эндонуклеазой рестрикции Dril, в течение 1 часа при температуре 37°C в 20 мкл реакционной смеси. Выход фермента составляет 1500 ед/г сырой биомассы, концентрация 2000 ед/мл.

Пример 2. Определение специфичности MD-эндонуклеазы MluVI.

Обработку субстратных ДНК MD-эндонуклеазой MluVI проводят в оптимальных условиях (37°C, реакционный буфер - 33 мМ Трис-ацетат, рН 7,9 (при 25°C), 10 мМ магния ацетат, 66 мМ калия ацетат, 1 мМ дитиотреитол) в течение 1 часа. Продукты расщепления ДНК разделяют путем электрофореза в 1% агарозном геле в буфере ТАЕ, содержащем 0,04 М Трис-HCl (рН 8,4 при 25°C), 0,02 М уксусной кислоты, 1 мМ ЭДТА.

В качестве субстратов для определения специфичности фермента используют различные плазмидные ДНК: метилированные и неметилированные (контрольные ДНК, которые не расщепляются MluVI вследствие отсутствия метилированных сайтов узнавания). Для подтверждения возможности сайт-специфического расщепления последовательности 5'-GCGCNGCGC-3' с различными узорами метилирования используют следующий набор сконструированных плазмид, содержащих ген ДНК-метилтрансферазы HspAI, метилирующей первый цитозин в положении С5 на обеих цепях последовательности 5'-GCGC-3' [6]:

1) Плазмида pHspAI4 содержит единственный гиперметилированный участок:

то есть последовательность 5'-GCGCNGCGC-3' с четырьмя 5-метилцитозинами.

2) Плазмида pHspAI10 содержит единственный гиперметилированный участок:

то есть последовательность 5'-GCGCNGCGC-3' с шестью 5-метилцитозинами.

3) Плазмида pHspAI12 содержит единственный гиперметилированный участок:

то есть последовательность 5'-GCGCNGCGC-3' с пятью 5-метилцитозинами.

Кроме того, для анализа использовались эти же три плазмиды, pHspAI4, pHspAI10 и pHspAI12, но предварительно метилированые метилазой Fsp4HI по сайту 5'-GCNGC-3', в результате чего в уникальных последовательностях 5'-GCGCNGCGC-3' этих плазмид дополнительно метилировались цитозины перед центральным нуклеотидом на обеих цепях. В результате в последовательностях 5'-GCGCNGCGC-3' этих гиперметилированных плазмид к уже имеющимся 5-метилцитозиновым остаткам добавилось еще по два модифицированных остатка.

Для оценки возможности гидролиза MD-эндонуклеазой MluVI метилированного внутреннего сайта 5'-G(5mC)NGC-3' также использовали плазмиду pFsp4HI3, несущую ген ДНК-метилтрансферазы Fsp4HI [5, 6], метилирующей как раз первый цитозин в последовательности 5'-GCNGC-3'. Поэтому в составе плазмиды pFsp4HI3 встречаются последовательности 5'-GCNGC-3' с двумя, а в случае перекрывания сайтов - с тремя или четырьмя 5-метилцитозинами. Так, в данной плазмиде имеется гиперметилированный участок, содержащий несколько перекрывающихся сайтов узнавания ДНК-метилтрансферазы Fsp4HI:

Следовательно, в плазмиде имеется единственная метилированная последовательность 5'-GCNGC-3' (подчеркнута), в которой все четыре цитозина метилированы, в качестве центрального нуклеотида выступает G/C-пара, и данная последовательность фланкирована с 5'-конца нуклеотидом «С», а с 3'-конца - нуклеотидом «А».

Все используемые плазмиды предварительно были линеаризованы путем расщепления эндонуклеазой рестрикции Dril (сайт узнавания 5'-GACNNN^NNGTC-3').

На фиг. 1 представлена электрофореграмма продуктов расщепления MD-эндонуклеазами MluVI и MteI (контроль) ДНК вышеназванных плазмид, в том числе дополнительно метилированных метилазой Fsp4HI.

Описание дорожек на электрофореграмме, изображенной на фиг. 1: 1 - pHspAI4/DriI; 2 - pHspAI4/DriI + MteI; 3 - pHspAI4/DriI + MluVI; 4 - pHspAI10/Dril; 5 - pHspAI1O/Dril + MteI; 6 - pHspAI10/Dril + MluVI; 7 - pHspAI12/DriI; 8 - pHspAI12/DriI + MteI; 9 - pHspAI12/DriI + MluVI; 10 - маркер молекулярного веса ДНК 1 kb; 11 - pHspAI4/DriI + M.Fsp4HI; 12 - pHspAI4/DriI + M.Fsp4HI+MteI; 13 - pHspAI4/DriI + M.Fsp4HI + MluVI; 14 - pHspAI10/Dril + M.Fsp4HI; 15 - pHspAI10/Dril + M.Fsp4HI + MteI; 16 - pHspAI10/Dril + M.Fsp4HI + MluVI; 17 - pHspAI12/DriI + M.Fsp4HI; 18 - pHspAI12/DriI + M.Fsp4HI + MteI; 19 - pHspAI12/DriI + M.Fsp4HI + MluVI; 20 - pFsp4HI3/DriI; 21 - pFsp4HI3/DriI + MluVI; 22 - маркер молекулярного веса ДНК 1 kb.

Как видно из фиг. 1, MD-эндонуклеаза MluVI, подобно MteI, не расщепляет плазмиду, метилированую метилазой HspAI, в которой в последовательности 5'-GCGCNGCGC-3' имеется только четыре 5-метилцитозиновых остатка (pHspAI4, дор. 3). Однако, в отличие от MteI, новый фермент MluVI не расщепляет и плазмиду, в которой в последовательности 5'-GCGCNGCGC-3' присутствует пять 5-метилцитозиновых остатков (pHspAI12, дор. 9).

В то же время MD-эндонуклеаза MluVI расщепляет последовательность 5'-GCGCNGCGC-3' лишь в случаях, если она содержит шесть (pHspAI10, дор. 6 и pHspAI4 + M.Fsp4HI, дор. 13), семь (pHspAI12+M.Fsp4HI, дор. 19) или восемь (pHspAI10 + M.Fsp4HI, дор. 16) 5-метилцитозиновых остатков

Более наглядно эти данные представлены в таблице 1.

Из фиг. 1 также видно, что MD-эндонуклеаза MluVI не расщепляет ДНК плазмиды pFsp4HI3, содержащей последовательности 5'-GCNGC-3' с двумя, тремя и четырьмя С5-метилированными цитозинами. Данный факт свидетельствует о том, что для гидролиза MluVI недостаточно только внутренней метилированной последовательности 5'-GCNGC-3', даже при условии модификации всех цитозинов в ней. Однако данная последовательность является частью сайта узнавания MluVI - 5'-GCGCNGCGC-3'.

Пример 3. Анализ сайт-специфичности и определение позиции гидролиза MluVI на синтетических олигонуклеотидных дуплексах.

Для подтверждения правильности определения узнаваемой новым ферментом последовательности и узора метилирования, а также для определения позиции гидролиза ДНК в сайте узнавания, проводили гидролиз MD-эндонуклеазой MluVI синтетических олигонуклеотидных дуплексов, образованных из олигонуклеотидов следующей структуры:

При этом олигонуклеотид Mte7 является комплементарным олигонуклеотидам Mte8 и Mte14, которые, в свою очередь различаются по количеству включенных 5-метилцитозинов (три - в Mte8 и два - в Mte14).

На фиг. 2 приведен радиоавтограф электрофореграммы, полученной в результате расщепления ферментами MluVI или MteI радиоактивно-меченных дуплексов Mte7/Mte14, Mte7/Mte8 и последующего нанесения продуктов на 20% полиакриламидный гель, содержащий 7 М мочевину.

Описание дорожек на электрофореграмме, изображенной на фиг. 2:

1 - исходный дуплекс Mte7*/Mte14; 2 - дуплекс Mte7*/Mte14, обработанный MluVI; 3 - дуплекс Mte7*/Mte14, обработанный MteI; 4 - исходный дуплекс Mte7*/Mte8; 5 - дуплекс Mte7*/Mte8, обработанный MluVI; 6 - дуплекс Mte7*/Mte8, обработанный MteI. Олигонуклеотиды, меченные радиоактивным фосфором Р32 по 5'-концу, обозначены знаком *.

Из фиг. 2 видно, что олигонуклеотидный дуплекс Mte7*/Mte14, содержащий сайт 5'-GCGCNGCGC-3' с пятью 5-метилцитозинами расщепляется MteI (дор. 3), но не расщепляется MluVI (дор. 2).

При этом олигонуклеотидный дуплекс Mte7*/Mte8, содержащий сайт 5'-GCGCNGCGC-3' с шестью 5-метилцитозинами расщепляется как MteI (дор. 6), так и MluVI (дор. 5).

Таким образом, MluVI на олигонуклеотидном дуплексе расщепляет последовательность 5'-GCGCNGCGC-3' с шестью 5-метилцитозинами и не расщепляет эту же последовательность с пятью 5-метилцитозинами.

Из фиг. 2 также видно, что электрофоретические подвижности фрагментов ДНК, образованных в результате гидролиза ферментами MteI и MluVI дуплекса Mte7*/Mte8, совпадают.

Следовательно, можно заключить, что оба фермента имеют одинаковые позиции гидролиза в сайте узнавания, то есть MD-эндонуклеаза MluVI расщепляет обе цепи последовательности узнавания перед центральным нуклеотидом (N), так же, как и MteI, с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов: 5'-G(5mC)G(5mC)^NG(5mC)G(5mC)-3'/3'-(5mC)G(5mC)GN^(5mC)G(5mC)G-5'.

Использование предлагаемого штамма-продуцента позволит получать новую сайт-специфическую метилзависимую эндонуклеазу MluVI, узнающую и расщепляющую обе цепи нуклеотидной последовательности ДНК 5'-GCGCNGCGC-3', при условии С5-метилирования в ней не менее шести цитозиновых остатков. Данная MD-эндонуклеаза может быть использована в молекулярной биологии, биотехнологии и генной инженерии для крупноблочного сайт-специфического расщепления метилированной ДНК, в частности для выявления и анализа метилированной хромосомной ДНК млекопитающих и человека.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Чернухин В.А., Наякшина Т.Н., Абдурашитов М.А., Томилова Ю.Э., Мезенцева Н.В., Дедков B.C., Михненкова Н.А., Гончар Д.А., Дегтярев С.Х. // Новая эндонуклеаза рестрикции GlaI узнает метилированную последовательность 5'-GCGC-3'. // Биотехнология. - 2006. - 4. - С. 31-35.

2. G.V. Tarasova, Т.N. Nayakshina, S. Kh. Degtyarev. Substrate specificity of new methyl-directed DNA endonuclease GlaI // BMC Molecular Biology 2008, 9:7.

3. Чернухин В.А., Томилова Ю.Э., Чмуж E.B., Соколова О.О., Дедков B.C., Дегтярев С.Х. Сайт-специфическая эндонуклеаза BIsI узнает последовательности ДНК 5'-G(5mC)NGC-3' и расщепляет ее с образованием 3'-выступающих концов. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. - 2007. - Т. 3. - 1. - С. 28-33.

4. Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Мезенцева Н.В., Дедков B.C., Гончар Д.А., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Новая эндонуклеаза рестрикции BisI из Bacillus subtilis Т30 узнает метилированную последовательность ДНК 5'G(m5C)^NGC-3' // Биотехнология. - 2005. - 3. - C. 22-26.

5. Чернухин В.А., Чмуж Е.В., Томилова Ю.Э., Наякшина Т.Н., Гончар Д.А., Дедков B.C., Дегтярев С.Х. Новая сайт-специфическая эндонклеаза Glul узнает метилированную последовательность ДНК 5'-G(5mC)NG(5mC)-3'/3'-(5mC)GN(5mC)G-5' // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. - 2007. - Т. 3. - 2. - С. 13-17.

6. Чернухин В.А., Гончар Д.А., Килева Е.В., Соколова В.А., Голикова Л.Н., Дедков B.C., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Новая метилзависимая сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза MteI расщепляет девятинуклеотидную последовательность 5'-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)GC-3'/3'-CG(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5'. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. - 2012. - Т. 8. - №1. - С.16-26.

7. Определитель бактерий Берджи. / Под ред. Дж. Хоулта и др.: (9-е издание в 2 томах: Пер. с англ. под ред. акад. РАН Г.А. Заварзина. - М., 1997.

8. Madden, T.L., Tatusov, R.L. & Zhang, J. Applications of network BLAST server. // Meth. Enzymol - 1996. -. V. 266 - P. 131-141.

9. Smith, H.O., Nathans, D. A suggested nomenclature for bacterial host modification and restriction systems and their enzymes. // J. Mol. Biol. - 1973. - Vol. 81. - P. 419-423.

10. Bickle, T.A., Pirrotta, V. and Imber, R. A simple, general procedure for purifying restriction endonucleases. // Nucleic Acids Res. - 1977. - V. 4 - P. 561-2572.

Штамм бактерии Micrococcus luteus 805, депонированный под регистрационным номером ВКПМ В-12410, продуцент сайт-специфической метилзависимой ДНК-эндонуклеазы MluVI, узнающей и расщепляющей обе цепи нуклеотидной последовательности 5'-GCGC^NGCGC-3'/3'-CGCGN^CGCG-5' перед центральным нуклеотидом (N), содержащей не менее шести С5-метилированных цитозинов с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биохимии. Описан способ выявления контаминации вирусами культуры клеток иммунопероксидазным методом, включающий взаимодействие антигена с мечеными антителами в неинфицированной культуре клеток и учет результатов реакции по интенсивности окрашивания образовавшегося комплекса под микроскопом.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к трансформированному микроорганизму Escherichia sp., продуцирующему О-ацетилгомосерин.

Группа изобретений относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения трансформантов дрожжей Schizosaccharomyces pombe, продуцирующих молочную кислоту. Предложен трансформант, несущий ген ldh, кодирующий лактатдегидрогеназу из Lactobacillus acidophilus или фермент, аминокислотная последовательность которого гомологична ей не менее чем на 93%.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм аскомицетного гриба из класса Sordariomycetes ИНА 01108 обладает способностью продуцировать антибиотик эремоксиларин А.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению интерферонов, и может быть использовано для получения рекомбинантного белка интерферона лямбда.

Группа изобретений относится к биотехнологии и касается штаммов бактерий B.adolescentis 150 и B.angulatum GT 102. Штаммы бактерий B.adolescentis и B.angulatum депонированы во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационными номерами ВКПМ Ас-1974 и ВКПМ Ас-1973 и обладают способностью синтезировать гамма- аминомасляную кислоту (ГАМК).

Изобретение относится к биотехнологии. Планктонный штамм одноклеточной зеленой водоросли Chlorella kessleri NF обладает высокой продуктивностью.
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает следующее.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм непатогенной грамотрицательной бактерии, депонированный в CNCM 8 апреля 2010 г.

Настоящее изобретение относится к области биохимии, биотехнологии и микробиологической промышленности, в частности к рекомбинантному штамму мицелиального гриба Penicillium canescens CS15 ВКМ F-4679D, секретирующего термостабильную целлюлазу Cel48S из Clostridium thermocellum.

Изобретение относится к молекулярной биологии, биохимии и биотехнологии. Предложено средство, представляющее собой производное хроменона: , где n=1 или 2, или проявляющее способность ингибировать действие фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека.

Группа изобретений относится к упаковке для раздельного хранения компонентов состава перед использованием, содержащей деформируемый материал, выполненный с возможностью образовывать по меньшей мере две герметичные камеры, где упаковка содержит: первую камеру и вторую камеру, где камеры разделены одним или более барьерами, которые являются хрупкими или отрываемыми, где первая камера содержит раствор жидкости с низкой вязкостью, содержащий фермент, обладающий пергидролитической активностью и содержащий SEQ ID NO: 1, и где вторая камера содержит триацетин и источник пероксида, выбранный из пероксида мочевины, комплексов поливинилпирролидона-пероксида водорода, перкарбоната натрия, пербората натрия и пероксидов металлов; а также к набору и способу отбеливания зубов.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ получения композиции, содержащей очищенный рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазу (GALNS) человека, где фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Serratia marcescens, являющийся продуцентом неспецифической бактериальной эндонуклеазы.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ сайт-специфического гидролиза С5-метилированной последовательности ДНК. Готовят реакционную смесь, содержащую буферный раствор и образец С5-метилированной ДНК, добавляют к смеси диметилсульфоксид до конечной концентрации 15-25%, а затем MD-эндонуклеазу, смесь инкубируют в течение часа при 30-37°C с последующим анализом результата гидролиза ДНК методом гель-электрофореза, при этом в качестве MD-эндонуклеазы используют GlaI с концентрацией 4-8 е.а./мкл или PcsI с концентрацией 1-2 е.а./мкл.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм Plantibacter flavus 3Kz, депонированный в ВКПМ под регистрационным номером В-12248, являющийся продуцентом метилзависимой сайт-специфической эндонуклеазы PfsI, которая узнает и расщепляет обе цепи последовательности ДНК , перед центральным нуклеотидом N, с образованием однонуклеотидных 5′-выступающих концов, при наличии в данной последовательности не менее семи С5-метилированых цитозинов.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ферментному биокатализатору в виде наноразмерных частиц, представляющих собой нековалентные полиэлектролитные комплексы, образованные полигистидинсодержащим полипептидом с активностью органофосфатгидролазы и блок-сополимером полиэтиленгликоля с полиглутаминовой кислотой.

Настоящее изобретение относится к фосфодиэстеразе 4D7 (PDE4D7) для применения в качестве маркера для агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы, где экспрессия маркера повышена при сравнении экспрессии в ткани агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы с экспрессией в нормальной ткани или ткани доброкачественной опухоли предстательной железы, и к применению PDE4D7 в качестве диагностического маркера для агрессивного гормон-чувствительного рака предстательной железы.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения (3aS,7aR)-гексагидроизобензофуран-1(3Н)-она.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой молекулу ДНК, которая кодирует полипептид, обладающий фосфолипазной активностью, по существу без липазной активности, причем последовательность молекулы ДНК предпочтительно происходит из Aspergillus и более предпочтительно из Aspergillus fumigatus.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения рекомбинантного штамма бактерий Escherichia coli N106 (pM.AgsI) . Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli N106 (pM.AgsI) получают трансформацией клеток штамма Escherichia coli RR1 плазмидой pM.AgsI-106, продуцирующий ДНК-метилтрансферазу M.AgsI, узнающую нуклеотидную последовательность ДНК 5′-TTSAA-3′ и метилирующую внешний остаток аденина этой последовательности с образованием 5′-TTSA(m6A)-3′.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Micrococcus luteus, депонированный под регистрационным номером В-12410 во Всеросиийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика, является продуцентом сайт-специфической метилзависимой эндонуклеазы MluVI. Изобретение обеспечивает получение нового фермента MD-эндонуклеазы, который узнает и расщепляет обе цепи последовательности ДНК 5-GCGC^NGCGC-33-CGCGN^CGCG-5 перед центральным нуклеотидом с образованием однонуклеотидных 5-выступающих концов при наличии в данной последовательности не менее шести С5-метилированых цитозинов, и может быть использовано для крупноблочного сайт-специфичного гидролиза ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания. 2 ил., 1 табл., 3 пр.

Наверх