Способ определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных. Способ включает конденсирование и охлаждение выдыхаемого воздуха с помощью устройства для сбора конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ) с последующей оценкой концентрации пероксида водорода. Для определения концентрации пероксида водорода используют флуорометрическое измерение концентрации H2O2 с волной облучения 568 нм и волной эмиссии 581 нм в растворе на основе флуоресцентного красителя Amplex Red Ultra, где 1 мл раствора содержит следующие реагенты: 20 мМ HEPES (pH 7,4); 1 мМ ЭДТА; 10 мкм Amplex Red Ultra; 4 ед. пероксидазы хрена. Заявленный способ является чувствительным методом определения низких концентраций пероксида водорода. 1 табл.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных и может быть использовано при определении их заболевания. Выдыхаемый воздух у животных насыщен водяными парами, которые могут быть конденсированы при охлаждении. Помимо водяных паров, в выдыхаемом воздухе у животных содержится более 200 летучих и нелетучих веществ, в том числе и малые количества пероксида водорода. Известно, что иммунные клетки, принимающие участие в развитии воспалительного процесса (эозинофилы, макрофаги, нейтрофилы), продуцируют активные формы кислорода, в том числе и пероксид водорода (Н2О2). Установлено, что концентрация Н2О2 в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) у человека и животных при воспалительных заболеваниях органов дыхания (хронический бронхит, бронхиальная астма, пневмония и др.) существенно повышается и может использоваться для диагностики и контроля эффективности их лечения (Hydrogen peroxide in exhaled breath condensate: A clinical study / Nagaraja C. [et al.] // Lung India. - 2012. - V. 29 N.2. - P. 123-127).

Из источников информации известно, что спектрофотометрические методы измерения Н2О2 имеют сравнительно низкую чувствительность к пероксиду водорода, минимальная концентрация пероксида водорода в растворе для точного определения его количества должна составлять не менее 100 нмоль Н2О2 (A Novel Method for the Determination of Hydrogen Peroxide in Bleaching Effluents by Spectroscopy / Q. Zhang [et al.] // BioResources. - 2013. - V. 8. N 3. - P. 3699-3705; Reinhold P. Exhaled breath condensate: lessons learned from veterinary medicine / P. Reinhold, H. Knobloch // J. Breath. Res. - 2010. - V. 4. P. 1-15). Также известен способ оценки концентрации пероксида водорода с помощью электрода на основе берлинской лазури (ферроцианид трехвалентного железа), являющейся высокоэффективным электрокатализатором восстановления пероксида водорода. Недостатком данного метода является сложность анализа и низкий (по отношению к флуорометрическим методам) порог чувствительности к Н2О2 (Ricci F. Sensor and biosensor preparation, optimisation and applications of Prussian Blue modified electrodes / F. Ricci, G. Palleschi // Biosens. Bioelectron. - 2005. - V. 21. N. 3. - P. 389-407; Reinhold P. Exhaled breath condensate: lessons learned from veterinary medicine / P. Reinhold, H. Knobloch // J. Breath. Res. - 2010. - V. 4. P. 1-15).

В качестве прототипа выбран способ, реализуемый с помощью устройства для сбора конденсата выдыхаемого воздуха у животных (патент RU 134772 U1; МПК А61В 5/00, 2013). Устройство содержит сменный контейнер-накопитель, выполненный из полипропилена, снабженный крышкой, имеющей отверстия для прохода трубок. Трубки соединяют полость сменного контейнера-накопителя со спирометром, а также полость сменного контейнера-накопителя с передней камерой дыхательной маски. Маска дыхательная в составе устройства включает переднюю камеру, клапан вдоха и клапан выдоха. Контейнер-накопитель установлен в холодильную камеру, заполненную льдом или охлаждающей смесью. Маска дыхательная позволяет герметично фиксировать устройство на морде животного, причем клапаны вдоха и выдоха в ее составе не дают смешиваться вдыхаемому и выдыхаемому воздуху при спонтанном дыхании и направляют поток выдыхаемого воздуха через силиконовую трубку в сменный контейнер-накопитель КВВ, помещенный в холодильную камеру, закрытую снаружи теплоизоляционным кожухом. Недостатком является то, что в описании к устройству отсутствуют методики непосредственной оценки концентрации пероксида водорода в КВВ после его сбора.

Измерение концентрации пероксида водорода в КВВ в описываемом способе осуществляется флуорометрическим методом с помощью зонда Amplex Red Ultra. Технический результат - упрощение сложности анализа и повышение порога чувствительности к Н2О2 способа достигается тем, что определение концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных осуществляется путем флуорометрического измерения концентрации Н2О2 с использованием красителя Amplex Red Ultra в 1 мл среды следующего состава: 20 мМ HEPES (рН 7,4); 1 мМ ЭДТА; 10 мкм Amplex Red Ultra; 4 ед. пероксидазы хрена.

Способ определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных реализуется следующим образом. Для анализа содержания пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных вначале проводят его конденсирование и охлаждение с помощью устройства для сбора конденсата выдыхаемого воздуха у животных (патент RU 134772 U1; МПК А61В 5/00, 2013), учитывают объем КВВ, образующийся из 100 литров выдыхаемого воздуха. Сразу после процедуры сбора пробы КВВ замораживают в жидком азоте и хранят при -196°С до проведения исследований. Для измерения концентрации пероксида водорода отбирают 50 мкл КВВ и добавляют во флуорометрическую кювету, содержащую 1 мл раствора, который содержит следующие реагенты: 20 мМ HEPES (рН 7,4), 1 мМ ЭДТА, 10 мкм Amplex Red Ultra и 4 ед. пероксидазы хрена. Amplex Red Ultra способен улавливать пероксид водорода в концентрации 10 нмоль. Данный флуоресцентный краситель широко применяется для оценки скорости продукции H2O2 электрон-транспортной цепью митохондрий. Реагент Amplex Red Ultra (Invitrogen USA) - бесцветное вещество, активно вступающее в реакцию с пероксидом водорода в соотношении 1:1 с образованием устойчивого флуоресцентного комплекса резоруфина. Далее измерение проводится на спектрофлуориметре с волной облучения 568 нм и волной эмиссии 581 нм. До начала измерения либо после измерения проводится калибровочный анализ с использованием раствора пероксида водорода известной концентрации. В кювету добавляют порции Н2О2 от 10 до 100 нмоль (5-7 добавок) и регистрируют соответствующие уровни флуоресценции. Далее строят калибровочную прямую (на оси абсцисс откладывают концентрацию пероксида водорода, на оси ординат - интенсивность флуоресценции) и, учитывая разбавление КВВ в кювете с раствором, находят искомые концентрации пероксида водорода в КВВ. Зная объем КВВ, образующийся из 100 л выдыхаемого воздуха, и концентрацию пероксида водорода в КВВ, рассчитывают содержание пероксида водорода в 100 л выдыхаемого воздуха. Способ поясняется примером (Таблица 1).

В зависимости от вида животного, его физиологических параметров, а также условия содержания животного пределы нормальных концентраций Н2О2 в КВВ могут варьировать в широких пределах. Предлагаемый способ определения концентраций Н2О2 в КВВ является высокочувствительным и легко воспроизводимым. Его можно использовать для диагностики и контроля эффективности лечения животных с легочными заболеваниями.

Источники информации

1. Патент RU 134772 U1; МПК А61В 5/00. Устройство для сбора конденсата выдыхаемого воздуха у животных / Черницкий А.Е., Рецкий М.И., Золотарев А.И.; заявитель и патентообладатель Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии); заявл. 30.07.2013, опубл. 27.11.2013. Бюл. №33.

2. A Novel Method for the Determination of Hydrogen Peroxide in Bleaching Effluents by Spectroscopy / Q. Zhang [et al.] // BioResources. - 2013. - V. 8 N 3. - P. 3699-3705.

3. Hydrogen peroxide in exhaled breath condensate: A clinical study / Nagaraja C. [et al.] // Lung India. - 2012. - V. 29. N.2. - P. 123-127.

4. Reinhold P. Exhaled breath condensate: lessons learned from veterinary medicine / P. Reinhold, H. Knobloch // J. Breath. Res. - 2010. - V. 4. P. 1-15.

5. Ricci F. Sensor and biosensor preparation, optimisation and applications of Prussian Blue modified electrodes / F. Ricci, G. Palleschi // Biosens. Bioelectron. - 2005. - V. 21 N. 3. - P. 389-407.

Способ определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных включает конденсирование и охлаждение выдыхаемого воздуха с помощью устройства для сбора конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ) с последующей оценкой концентрации пероксида водорода, отличающийся тем, что для определения концентрации пероксида водорода используют флуорометрическое измерение концентрации H2O2 с волной облучения 568 нм и волной эмиссии 581 нм в растворе на основе флуоресцентного красителя Amplex Red Ultra, где 1 мл раствора содержит следующие реагенты:

20 мМ HEPES (pH 7,4);

1 мМ ЭДТА;

10 мкм Amplex Red Ultra;

4 ед. пероксидазы хрена.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области птицеводства, а именно к кастрации петухов. Способ каплунизации петухов включает подготовку операционного поля, местное обезболивание, лапаротомию в последнем межреберье справа и наложение кастрационной петли на семенной канатик.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть применено для хирургического лечения грыжи межпозвоночного диска грудопоясничного отдела у собак. В область дорсо-латеральной поверхности сосцевидного отростка позвонка, расположенного каудальнее пораженного диска, с помощью направляющей спицы последовательно, коаксиально, вводят дилататоры, устанавливают на них тубус и поворотную насадку эндоскопа.

Изобретение относится к области паразитологии, в частности к способу сбора максимального количества зрелых (оплодотворенных) яиц (in vitro) от самок возбудителя паразитарного зооноза Trichuris (Trichocephalus) suis.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу определения состояния структурно-функциональной незавершенности печени у новорожденных ягнят. Способ характеризуется тем, что определяют топографию печени, гистологически устанавливают структуру паренхимы и стромы печени, биохимически определяют прижизненные показатели крови и при увеличении морфометрических параметров органа при топографическом исследовании, отсутствии структурно-функциональных единиц на тканевом уровне, вакуолизации с оптическим просветлением цитоплазмы гепатоцитов, наличии единичных островков гемопоэза в паренхиме и при недостаточной глобулинсинтезирующей функции при биохимическом исследовании крови судят о структурно-функциональной незавершенности печени.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу лечения геморрагического цистита у кошек. Способ включает введение антибактериального препарата в мочевой пузырь.

Изобретение относиться к ветеринарной хирургии. Накладывают однорядный серозно-мышечно-подслизистый шов желудка и толстого отдела кишечника одной длинной нитью у кошек и мелких пород собак.

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа профилактики желудочно-кишечных болезней телят. Способ включает введение животному пребиотика и пробиотика.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к средствам купирования теплового стресса кур в условиях промышленного птицеводства. Способ характеризуется введением в рацион антиоксиданта 3-оксипиридиновой структуры, а именно комплекса 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионат-2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина дисукцината в терапевтических дозах.

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа профилактики респираторных болезней телят. Способ включает введение сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в течение 1-2 часов после рождения и на 7 сутки жизни.

Изобретение относится к птицеводству, в частности к способу обработки инкубационных яиц. Способ включает сортировку яиц и обработку отобранных на инкубацию яиц дезинфицирующим средством.
Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к способам, направленным на повышение потенции и качества спермы самцов-производителей. Способ предусматривает применение сапропеля интраректально в дозе 200-300 г на одно животное хрякам и 400-500 г на одно животное быкам, при экспозиции 10-15 минут 1 раз в день в течение 5 дней. Использование изобретения позволит повысить потенцию у самцов-производителей и оплодотворяющую способность спермы.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к трансплантологии, травматологии, хирургии, онкологии, и касается протезов, предназначенных для замещения сегментарных дефектов трахеи человека и животных. Протез трахеи для замещения сегментарных дефектов представляет собой многослойный матрикс тубулярной формы, выполненный из полимерного биосовместимого материала. Протез армирован полукольцами из полиуретана, полученными по технологии термопрессования. Матрикс тубулярной формы сформирован из 5-6 разнонаправленно ориентированных слоев нетканого ультраволокнистого материала, полученного с использованием технологии 3D принтинга, а именно электроформования в соответствии с размерами и формой дефектного участка трахеи пациента. Внутренняя и внешняя поверхности протеза модифицированы фибрином сыворотки крови. Изобретение обеспечивает замещение сегментарных дефектов с сохранением воздухопроводящей функции, предотвращает возможность инфицирования области средостения, улучшает цитокондуктивные свойства, улучшает фиксацию и репарацию в области анастомозов. 1 пр., 4 ил.

Изобретение относится к животноводству, а именно к способу оценки состояния здоровья молодняка крупного рогатого скота. Способ предусматривает использование в качестве диагностической биосреды шерсти животного, исследование образцов шерсти по 25 химическим элементам и оценку результатов исследования элементного статуса шерсти по центильной шкале. При значениях в интервалах от 10 до 24,9 центиля и от 75,01 до 90 центиля в центильной шкале состояние животного оценивают как нормальное. Использование изобретения позволит выявить ранние и скрытые формы нарушения здоровья животных. 3 табл.

Изобретение относится к техническим средствам оценки качества воздушной среды обитания человека при воздействии на нее аэрозолей различных загрязнителей, в частности к устройству для подсадки лабораторного животного и фиксации положения его тела. Устройство состоит из пенала, узла фиксации и узла крепления и защитной герметизации конструкции. При этом пенал содержит цилиндрический корпус, соединенный, с одной стороны, с головным обтекателем и далее с головной маской, а с другой стороны - с хвостовиком и крышкой пенала, соединенными между собой при помощи байонетного соединения, шток толкателя, расположенный вдоль общей центральной оси корпуса и крышки пенала, и соединенного одним концом с толкателем, а вторым концом - с ручкой толкателя. Узел фиксации положения тела животного содержит скобу фиксатора, приваренную на внешнюю сторону крышки пенала на расстоянии от ее центра, а также надетых на шток толкателя пружины и планки фиксатора. Причем пружина одним концом упирается соосно в центр внешней стороны крышки пенала, а другой - в планку фиксатора. Узел крепления и защитной герметизации состоит из соосных внутреннего патрон-держателя с вырезанными на торцевой поверхности диаметрально противоположными байонетными пазами для подвижного соединения с подсадочным пеналом и внешнего фланца корпуса защиты с вырезанными на торцевой поверхности тремя круговыми канавками, в крайние из которых уложены резиновые уплотнительные кольца, а в среднюю установлен крепежный винт, фиксирующий корпус защиты на внешнем фланце. На внешний фланец надета уплотнительная резиновая прокладка. Внутренний патрон-держатель и внешний фланец корпуса защиты приварены к внешней стороне корпуса ингаляционной камеры соосно с имеющимися в ней затравочными окнами. Использование изобретения позволит надежно фиксировать животное при длительных экспериментах. 11 з.п. ф-лы, 9 ил.
Изобретение относится к ветеринарии и может быть применимо для хирургического лечения разрыва передней крестовой связки коленного сустава у собак. Удаляют остатки разорванной передней крестовой связки. Образуют каналы в большеберцовой и бедренной костях. Создают аутотрансплантат. На концы аутотрансплантата пришивают нитки. Под контролем видеоартроскопической техники проводят аутотрансплантат через каналы, пропуская концы ниток в каналы. Аутотрансплантат фиксируют канюлированными винтами к бедренной и большеберцовой костям. Аутотрансплантат создают из сухожилия поверхностного сгибателя пальцев, отсекая его в месте прикрепления к пяточной кости и в месте перехода в мышечное брюшко, мышечное брюшко подшивают к икроножной мышце. Способ позволяет уменьшить травматичность, учитывать анатомические особенности строения опорно-двигательной системы.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу интубации трахеи кролика. Способ включает проведение направляющего устройства в трахею на 4-5 см ниже гортани и последующее проведение в трахею по направляющему устройству интубационной трубки. Направляющее устройство в виде бужа с закругленным концом из гибкого металла диаметром до 2 мм вводят с помощью интрадьюсера с внутренним диаметром просвета 2,0 мм, введенного в трахею через проводник, установленный в пункционной мышечной игле, которой предварительно прокалывают трахею и извлекают из трахеи, оставив проводник, который также извлекают вместе с интрадьюсером после установления дистального конца бужа в трахее при ретроградном движении его в трахее до выведения противоположного дистальному конца бужа в ротовую полость. После чего по металлическому бужу проводят интубационную трубку и удаляют из ее просвета буж. Использование изобретения позволит уменьшить травматизацию трахеи и исключить зашивания отверстия в трахее. 4 ил.

Изобретение относится к медицине. Способ терапевтической обработки ран на теле человека или животных включает первую стадию лечения, на которой проводят лечение ран пониженным давлением с помощью приспособления для лечения пониженным давлением, и вторую стадию лечения, которую проводят с применением раневой повязки без создания пониженного давления во влажной среде. Раневая повязка имеет абсорбирующие элементы, содержащие разбухающий полимер. Приспособление для лечения пониженным давлением содержит воздухонепроницаемый покрывающий материал для герметичного укрывания раны и области вокруг раны, где будет образовано раневое пространство, средство для обеспечения жидкостного сообщения между раневым пространством и находящимся снаружи источником пониженного давления, обтянутым покрывающим материалом, таким образом, что в раневом пространстве устанавливается пониженное давление, и жидкость выходит из раневого пространства, раневую повязку, которая способствует, в сущности, равномерному распределению пониженного давления в раневом пространстве. Изобретение обеспечивает улучшение лечения ран с точки зрения его стоимости без влияния на клиническую эффективность и также повышение его клинической эффективности. 10 з.п. ф-лы; 4 ил.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для обработки сосков вымени. Средство содержит поливиниловый спирт марки ПВС18/11, хвойно-глицериновую биологически активную добавку, хлоргексидин 0,05% и дистиллированную воду, при этом компоненты взяты в определенном соотношении. Использование изобретения позволит получить продукт, направленный на смягчение кожи сосков и заживление ран.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу профилактики и коррекции транспортного стресса у сельскохозяйственных животных. Способ включает применение пробиотического препарата «Интестевит» с кормом для животных за 10 дней перед транспортировкой по 5 доз на голову 1 раз в день и 7 дней после транспортировки по 10 доз на голову 1 раз в день. Использование изобретения позволит повысить естественную резистентность организма животных и нормализовать микрофлору кишечника. 2 пр.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу снижение риска развития послеродовых воспалительных заболеваний матки у коров. Способ включает введение коровам биологически активных веществ антиоксидантного действия. Коровам 1 раз в сутки в течение 65 дней до отела и 10 дней после отела перорально вводят фумаровую, аскорбиновую, янтарную и лимонную кислоты в смеси, взятые в определенном соотношении. Использование изобретения позволит оптимизировать показатели уровня эндогенной интоксикации, обменные процессы, что приводит к снижению уровня акушерских заболеваний. 13 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа определения концентрации пероксида водорода в выдыхаемом воздухе у животных. Способ включает конденсирование и охлаждение выдыхаемого воздуха с помощью устройства для сбора конденсата выдыхаемого воздуха с последующей оценкой концентрации пероксида водорода. Для определения концентрации пероксида водорода используют флуорометрическое измерение концентрации H2O2 с волной облучения 568 нм и волной эмиссии 581 нм в растворе на основе флуоресцентного красителя Amplex Red Ultra, где 1 мл раствора содержит следующие реагенты: 20 мМ HEPES ; 1 мМ ЭДТА; 10 мкм Amplex Red Ultra; 4 ед. пероксидазы хрена. Заявленный способ является чувствительным методом определения низких концентраций пероксида водорода. 1 табл.

Наверх