Способы быстрого выявления риска т-хелперного дефицита у людей в условиях арктики

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+. При содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅109 кл/л и клеток CD3+ меньше 1,5⋅109 кл/л судят о риске формирования Т-хелперного дефицита. Изобретение позволяет выявить лиц, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни. 6 пр.

 

Изобретение относится к физиологии, иммунологии, лабораторной диагностике и касается способа выявления риска формирования Т-клеточного (хелперного) вторичного экологически зависимого иммунодефицита у человека в экстремальных условиях Арктики.

Известно, что под влиянием природных и техногенных воздействий высоких широт происходит изменение физиологического профиля человека по ряду параметров. Долевой вклад экологического фактора в ухудшение здоровья и основные формы патологии на севере находятся в пределах 40-60%. Иммунологическая реактивность северян характеризуется повышенным уровнем иммуносупрессии, что в свою очередь свидетельствует об активизации клеточных, а в конечном итоге и гуморальных механизмов иммунитета. В результате неэффективности супрессорного звена происходит появление и нарастание концентраций ЦИК, некоторых иммуноглобулинов и аутоантител [Добродеева Л.К. Влияние среды обитания на иммунологическую реактивность, медико-демографические показатели и заболеваемость населения Архангельской области / Л.К. Добродеева, Л.П. Жилина. - Архангельск, 2003. - С. 250; Lancavecchia A. Mechanism sof antigen uptake for presentation / A. Lancavecchia // Curr. Opin. Immunol. - 1996. - Vol. 8. - P. 348-354]. В условиях выраженного иммунодефицита Т-клеток указанные процессы в полной мере реализуют воздействие на организм указанные процессы в полной мере реализуют воздействие на организм клеточно-опосредованной цитотоксичности [Gardiner, С.М. Killercellimmunoglobulin-likereceptorsonNKcells: thehow, whereandwhy. / С.М. Gardiner // Int. J. Immunogenet. 2008. - 35(1). - P. 1-8]. Однако адекватное хелперно-супрессорное соотношение является не только диагностическим, прогностическим, но и физиологическим показателем, уравновешивающим активизацию и подавление иммунных реакций организма человека [Лебедев К.А. Иммунограмма в клинической практике: Введение в прикл. иммунологию / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. - М.: Наука, 1990. - 223 с.; Добродеева Л.К. Взаимосвязи в системе иммунитета / Л.К. Добродеева, Л.С. Щеголева, Л.В. Сенькова // Мед. иммунология. - 2000. - Т. 2, №2. - С. 127-129]. Клеточный иммунитет опосредован цитотоксическими Т-лимфоцитами и Т-хелперами [Farag, S.S. Human natural killer cell development andbiology. / S.S. Farag, M.A. Caligiuri // Blood Rev. 2006. - 20(3). - P. 123-137].

Известно, что каждая Т-клетка имеет специфический рецептор, который распознает этот антиген. Большинство цитотоксических Т-клеток относится к субпопуляции CD8+ и распознает антиген, презентированный в ассоциации с молекулами МНС класса I, но меньшая их часть (примерно 10%), относящаяся к субпопуляции CD4+ способна распознавать антиген в ассоциации с молекулами МНС класса II. Маркер CD4+ экспрессируют Т-клетки (хелперы/индукторы), составляющие 45% лимфоцитов периферической крови; в периферической крови до 5% клеток несут одновременно маркеры CD4+ и CD8+, слабая экспрессия молекулы CD4+ наблюдается на клетках макрофагально/моноцитарного ряда.

Важно отметить, что в определении эффекторных механизмов иммунного ответа важный этап составляет дифференцировка CD4 Т-хелперов на субпопуляции: ТН1 и ТН2. Обе эти субпопуляции различаются по набору (профилю) синтезируемых ими цитокинов, и от этого профиля зависит, какой из двух основных типов иммунного ответа будет реализован. У человека ТН1-клетки, как правило, продуцируют ИФ-гамма, ФНО-бета и ИЛ-2 и участвуют в опосредованных клетками воспалительных реакциях [Хаитов P.M. Физиология иммунной системы / Р.М. Хаитов. - М.: ВИНИТИ РАН, 2001. - 223 с.]. Некоторые из цитокинов, выделяемые ТН1, обладают провоспалительной активностью, а также стимулируют цитотоксические клетки и Т-эффекторы гиперчувствительности замедленного типа [Jenkins, М.K. The role of naive T-cell precursor frequency and recruitment indictating immune response magnitude / Jenkins, M.K., Moon, J.J. // Journalofimmunology. - 2012. - V. 188. - I. 9. - p. 4135-4140; Ройт А. Основы иммунологии / А. Ройт. - M.: Мир, 1991. - 328 с.; Пол У. Иммунология: в 3 т. / У. Пол. - М.: Мир, 1989-360 с.; Фрейдлин И.С. Иммунные комплексы и цитокины / И.С. Фрейдлин, С.А. Кузнецова // Мед. иммунология. - 1999. - №1-2. - С. 27-37].

Известно влияние климатических условий на состояние здоровья и качество жизни населения арктических территорий, оно оценивается подавляющим большинством исследователей как негативное [Щеголева Л.С. Результаты исследования иммунного статуса у человека в условиях Севера / Л.С. Щеголева, Л.К. Добродеева // Иммунология. - 2003. - Т. 24, №3. - С. 177-180]. Среди специфических факторов риска наиболее существенными являются длительное воздействие холода, а также взаимно усиливающие эффект друг друга ветер, осадки и годовая световая апериодичность. Глобальное потепление климата также негативно сказывается на состоянии здоровья населения, проживающего в высоких широтах. Данная проблема особенно актуальна как для коренных народов в связи с возможными рисками их традиционным способам добывания пищи (нарушение условий для выпаса оленей или уменьшение биоразнообразия океана), так и для приезжих лиц, работающих вахтовым методом [Сергеева Т.Б. Физиологическая значимость содержания цитотоксических лимфоцитов (CD8+, CD16+) в периферической крови у человека на Севере: автореф. дис. … канд. биол. наук / Т.Б. Сергеева. - Архангельск, 2015. - 20 с.].

Известен способ определения соотношения фенотипов лимфоцитов периферической крови у взрослых практически здоровых лиц в различных климато-экологических и профессиональных условиях в процессе физиологической регуляции иммунного ответа, выбранный нами за прототип [Филиппова О.Е. Соотношение фенотипов лимфоцитов периферической крови у людей в процессе физиологической регуляции иммунного ответа: автореф. дис. … канд. биол. наук / О.Е. Филиппова. - Архангельск, 2015. - 20 с.]. Способ включает забор крови из вены, определение соотношения отдельных фенотипов иммунокомпетентных клеток периферической крови, определение дефицита активности иммунокомпетентных клеток и суждение о снижении эффективности защиты или лечебных мероприятий. Выявлено, что иммунные реакции, сопровождающие реакции воспаления, включают пролиферацию лимфоцитов, увеличение содержания активированных лимфоцитов (CD25+, CD71+, HLA-DR+), а также (NKCD16), Т-хелперов (CD4+) и цитолитических супрессоров (CD8+); уровни выраженности указанных реакций зависят от содержания в крови провоспалительных цитокинов.

Указанный способ не содержит конкретного соотношения иммунокомпетентных клеток периферической крови для суждения о риске Т-хелперного дефицита.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего определить вторичные экологически зависимые иммунодефициты [Хаитов P.M. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 1999. - №1. - С. 14-17], быстро выявить лиц, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни.

Технический результат состоит в том, что способ позволяет проводить быструю скрининговую диагностику риска формирования вторичного экологически зависимого иммунодефицита у людей при работе в экстремальных условиях.

Технический результат достигается тем, что способ быстрого выявления риска Т-хелперного дефицита у людей в условиях Заполярья, включающий забор крови из вены, определение соотношения отдельных фенотипов иммунокомпетентных клеток периферической крови, определение активности иммунокомпетентных клеток и суждение о иммунодефиците, согласно изобретению позволяет определить общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+, при содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅109 кл/л и клеток CD3+ меньше 1,5⋅109 кл/л судят о риске формирования Т-хелперного дефицита.

Заявленный способ осуществляется следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в объеме 3 мл до 10 часов утра, натощак. Содержание Т-хелперов CD3+ определяют с помощью непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенная капля» производства НПЦ «МедБиоСпектр» г. Москва.

Указанным способом было проведено обследование 180 человек в возрасте от 19 до 40 лет и 102 человека в возрасте 41-60 лет в условиях экспедиций в районы Заполярья и Приполярья: п. Несь НАО (2009; 2011 гг.) и п. Пинега Архангельской области (2010 и 2011 гг) с установленным диагнозом основного заболевания по результатам исследования местных фельдшерских пунктов, где наблюдались пациенты (59 человек, 1 группа) и практически здоровые люди на момент обследования (223 человека, 2 группа, контроль). В течение 2015 г. проведен ретроспективный анализ анамнеза обследуемых лиц за указанный период. Обследование проводили с учетом образа жизни (кочевые, оседлые) и с письменного согласия респондентов с соблюдением основных норм биомедицинской этики в соответствии с документом «Этические принципы проведения медицинских исследований с участием людей в качестве субъектов исследования» (Хельсинская декларация Всемирной медицинской ассоциации 1964 (с изменениями и дополнениями 2008 г). Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0» (США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории РФ. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия U-Манна-Уитни. Статистическая достоверность присваивалась при значении p<0,005.

Проведенные исследования показали, что у жителей Приполярья, постоянно проживающих в северном регионе, лейкопении и лимфопении регистрируются в 21,31% и 14,75% у женщин и 15,38% и 15,41% у мужчин соответственно; p<0,05. Следует отметить, что лимфоцитозы встречались у мужчин в 3 раза чаще, чем у женщин (8,20% и 26,92% соответственно; p<0,05). Уровень содержания Т-лимфоцитов хелперов/индукторов CD4+ находится в пределах общепринятых физиологических норм, причем у женщин достоверно ниже, чем у мужчин (0,49±0,03 и 0,71±0,09⋅109 кл/л соответственно, p<0,01).

Среднее содержание супрессоров/киллеров CD8+ в 1,5 раза превышает установленные физиологические колебания у 61,92% обследуемых. Средний уровень хелперно/супрессорного коэффициента CD4+/CD8+ равен 1,02±0,07 без существенной разницы по полу. Крайне низкие значения хелперно/супрессорного коэффициента (<2) являются следствием нарушения хелперно/супрессорного соотношения за счет повышенных концентраций Т-лимфоцитов (супрессоров/киллеров CD8+) в периферической крови. Высокий уровень корреляционной взаимосвязи между указанными параметрами, а также высокий удельный вес клеток CD8+ от всего дифференцированного пула CD3+ свидетельствует о выраженной супрессии обследуемых лиц трудоспособного возраста. Дефицит хелперов/индукторов CD4+ встречался в 2,5 раза чаще (35,06%), чем его повышенные концентрации (14,54%), особенно у женщин (39,34 и 9,84% p<0,01).

Высокие уровни цитотоксических лимфоцитов CD8+ в среднем встречались у 61,92% обследуемых лиц, при этом у 62,30% женщин и 61,54% мужчин данный показатель составил 0,59±0,07⋅109 кл/л. Недостаточность в содержании клеток с рецепторами к CD8+ выявлена у 8,20% женщин и только в 3,85% случаев у мужчин.

Общее содержание лимфоцитов у жителей Заполярья 2,23±0,15⋅109 кл/л с колебаниями у женщин и у мужчин 2,05±0,15 и 2,40±0,15⋅109 кл/л соответственно. Анализируя формулу крови, выявили достаточно высокие средние значения общего количества моноцитов: 0,54±0,07⋅109 кл/л (0,46±0,05; 0,61±0,08⋅109 кл/л соответственно), p<0,001.

Общее количество нейтрофилов у обследуемых лиц составляет 3,77±0,33⋅109 кл/л (соответственно 3,58±0,35 и 3,96±0,3⋅109 кл/л), p<0,05. Среднее содержание Т-лимфоцитов хелперов/индукторов CD4+ находится ближе к нижней границе общепринятых физиологических норм 0,48±0,05⋅109 кл/л (соответственно 0,40±0,04 и 0,55±0,06⋅109 кл/л), причем у мужчин достоверно выше (p<0,001).Средний уровень супрессоров/киллеров CD8+ составляет 0,41±0,05⋅109 кл/л (соответственно 0,38±0,05 и 0,44±0,04⋅109 кл/л). Уровень содержания Т-клеток естественных киллеров CD16+в среднем составляет 0,48±0,05⋅109 кл/л (0,44±0,04 и 0,52±0,05⋅109 кл/л соответственно).

Результаты исследований позволили установить взаимосвязь роста уровня экспрессии рецепторов CD8+ и выраженный дефицит CD3+. Кроме того, результаты исследования лимфоцитограммы выявили, что среди 95% лиц с низким содержанием общего количества лимфоцитов (<1,5⋅109 кл/л) в 80% случаев фиксируется дефицит Т-хелперов.

Способ скрининга риска Т-хелперного дефицита у оленеводов, работающих в условиях Заполярья основан на том, что определяется общее количество лимфоцитов в периферической крови (капиллярной) при производстве обычного анализа гемограммы и определения лейкоцитов: при снижении абсолютного содержания лимфоцитов меньше 1,5⋅109 кл/л и CD3+ меньше 1,5⋅109 кл/л подтверждается риск формирования Т-хелперного дефицита.

Проведено комплексное иммунологическое обследование людей, включавшее изучение гемограммы, лимфоцитограммы и фенотипирование лимфоцитов. Определяли содержание в периферической крови лейкоцитов, лимфоцитов, лимфоцитов с рецепторами CD3+ (зрелые лимфоидные клетки), CD4+ (хелперы/индукторы), CD5+ (выявляются на поверхности всех зрелых Т-клеток), CD8+ (цитотоксические Т-лимфоциты, супрессоры), CD10+ (клетки с рецепторами, отражающие лимфопролиферацию), CD16+ (естественные киллеры), CD25+ (Т-лимфоциты с рецепторами к интерлейкину-2), CD71+ (клетки с рецепторами к трансферрину), CD95+ (клетки с рецепторами к апоптозу), HLA-DR+ (активированные Т-, В-клетки с рецептором к главному комплексу гистосовместимости класса II), CD20+ (зрелые формы В-лимфоцитов). Анализ полученных результатов показал, что у 87% оленеводов низкое содержание Т-хелперов CD4+ корреляционно взаимосвязано с уровнем общего количества лимфоцитов, содержанием клеток, отражающих лимфопролиферацию CD10+ и нормальных киллеров CD16+ и характеризует риск формирования Т-хелперного дефицита. Корреляционный анализ свидетельствует о взаимозависимости общего абсолютного содержания лимфоцитов, малых и средних лимфоцитов в составе лимфоцитограммы и дефиците Т-хелперов.

Ниже приведены примеры реализации заявленного способа.

Пример 1. Доброволец О., 47 лет, пол женский. Оседлый образ жизни. Место проживания Заполярье. При комплексном лабораторном обследовании периферической венозной крови в 2009 г. выявлен низкий уровень содержания общего количества лимфоцитов 1,00⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 1,10⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 0,68⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии О. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,34⋅109 кл/л, проявляющийся частыми герпетическими инфекциями.

Пример 2. Доброволец И., 42 г, пол женский. Кочевой образ жизни. Место проживания Заполярье. При прохождении комплексного иммунологического обследования 2009 г. концентрация общего количества лимфоцитов 0,99⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 0,98⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 0,71⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии И. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,31⋅109 кл/л, проявляющийся в частых и длительных ОРВИ.

Пример 3. Доброволец К., 23 г., пол мужской, кочевой образ жизни. Место проживания Заполярье. При прохождении комплексного иммунологического обследования 2009 г. концентрация общего количества лимфоцитов 1,41⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 0,78⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 0,63⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии К. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,29⋅109 кл/л, проявляющийся в частых и длительных ОРВИ.

Пример 4. Доброволец Ш., 25 г., пол мужской, кочевой образ жизни. Место проживания Приполярье. При прохождении комплексного иммунологического обследования 2010 г. концентрация общего количества лимфоцитов 1,29⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 1,00⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 0,87⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии Ш. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,39⋅109 кл/л, проявляющийся в частых и длительных ОРВИ.

Пример 5. Доброволец У., 30 г., пол мужской, оседлый образ жизни. Место проживания Приполярье. При прохождении комплексного иммунологического обследования 2010 г. концентрация общего количества лимфоцитов 0,99⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 1,38⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 1,02⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии У. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,32⋅109 кл/л, проявляющийся в частых и длительных ОРВИ.

Пример 6. Доброволец Т., 40 лет, пол женский, кочевой образ жизни. Место проживания Приполярье. При прохождении комплексного иммунологического обследования 2010 г. концентрация общего количества лимфоцитов 1,39⋅109 кл/л; в лимфоцитограмме определено содержание малых лимфоцитов 1,28⋅109 кл/л; концентрации клеток CD3+ 1,32⋅109 кл/л; сделан вывод о подозрении на формирующийся вторичный экологически зависимый иммунодефицит Т-хелперного звена. При последующем участии Т. в добровольном обследовании 2011 г. выявлен выраженный дефицит Т-хелперов CD4+ 0,38⋅109 кл/л, проявляющийся в частых и длительных ОРВИ.

Как показывают исследования интенсивное и длительное воздействие экстремальных климатических и неблагоприятных экологических факторов на организм человека вынуждает постоянно мобилизовать компенсаторно-приспособительные механизмы, резервы которых ограничены и со временем могут истощаться. В конечном итоге происходит перенапряжение и нарушение адаптационных механизмов организма, что предполагает развитие предболезненных и хронизации основных патологических процессов [Щеголева Л.С. Резервные возможности иммунного гомеостаза у человека на Севере / Л.С. Щеголева. - Екатеринбург: УрО РАН, 2007 - 207 с.; Щеголева Л.С. Формирование иммунологической недостаточности человека на Севере: автореф. дис. … канд. биол. наук / Л.С. Щеголева. - Архангельск, 1996. - 14 с.; Щеголева Л.С. Соотношение иммунно-гормональных реакций у лиц разных профессий в приполярном регионе /Л.С. Щеголева, М.В. Меньшикова, Е.Ю. Шашкова // Экология человека, 2009. т. №7. - С. 7-10].

Заявленный способ позволяет выявить лиц, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни.

Способ быстрого выявления риска Т-хелперного дефицита у людей в условиях Арктики, включающий забор крови из вены, определение соотношения отдельных фенотипов иммунокомпетентных клеток периферической крови, определение их активности и суждение о иммунодифиците, отличающийся тем, что определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+, при содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅109 кл/л и клеток CD3+ меньше 1,5⋅109 кл/л судят о риске формирования Т-хелперного дефицита.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2).
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2), у женщин во втором триместре беременности.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, имеющего подозрение на метастатический рак предстательной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии.

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской гельминтологии, в частности к иммунологическому методу обнаружения антигена личинок анизакид в мышечной ткани рыбы, и может быть рекомендовано для ветеринарно-санитарной экспертизы морепродуктов.

Изобретение относится к области иммунодиагностики и может быть использовано для иммунодиагностического тестирования биологического образца. Карта иммунодиагностического тестирования включает плоскую подложку и множество содержащихся на ней прозрачных колонок с инертным тестовым материалом, выполненным с возможностью формирования реакции агглютинации при добавлении биологического образца и реагента.

Изобретение относится к медицине, а именно к профессиональной патологии и пульмонологии, и может быть использовано для диагностики профессиональной хронической обструктивной болезни легких, сформировавшейся в условиях действия токсических промаэрозолей.

Изобретение относится к области молекулярной онкологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов. Способ включает получение ДНК, выделенной из биопсийного материала; амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров; количественную интерпретацию результатов амплификации.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для оценки дисфункции иммунитета у детей дошкольного возраста с рецидивирующей респираторной инфекцией, проживающих на территориях вокруг химически опасных производств.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца. Сущность способа: в сыворотке крови определяют концентрацию PlGF-1 и при уровне P1GF-1 выше 5,33 пг/мл диагностируют острое клеточное отторжение. Преимущество изобретения заключается в обеспечении простоты, доступности, неинвазивности диагностики, сокращении времени ее проведения при одновременном достижении достоверного диагностического скрининга острого клеточного отторжения как в раннем, так и в отдаленном посттрансплантационных периодах у реципиентов сердца, а также в улучшении результатов трансплантации сердца, повышении выживаемости реципиентов путем своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии, коронароангиографии и уточнения тактики ведения больных путем определения уровня концентрации PlGF-1 в сыворотке крови. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для выявления антиотцовских антител после иммунизации женщин с идиопатическим привычным выкидышем лимфоцитами полового партнера. Женщинам двукратно с интервалом в один месяц на 5-9 день менструального цикла внутрикожно вводят партнерские лимфоциты в однократной дозе 50 млн клеток в 10-12 точек ладонной части предплечья. Затем через две недели получают сыворотку крови, в которую добавляют в соотношении 1:1 выделенные из цельной периферической венозной крови лимфоциты (CD3+) партнера, полученные в градиенте плотности фиколл-верографин 1,077 г/см3 в течение 10 минут при 1600 g в соотношении 500 мкл фиколла к 1000 мкл крови, разведенной в 2 раза фосфатно-солевым раствором. Далее инактивированную женскую сыворотку с полученными лимфоцитами партнера инкубируют в течение 30 минут при температуре 37°С, после чего добавляют антитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина G в разведении 1:4 с фосфатно-солевым раствором в объеме 1:1 суспензии лимфоцитов и инкубируют в течение 30 минут при температуре 4°С. Методом проточной цитометрии определяют процент партнерских лимфоцитов (CD3+), покрытых антителами к Fc-фрагменту иммуноглобулина G партнера, которые соответствуют уровню антиотцовских антител в сыворотке женщин. Изобретение позволяет отразить динамику появления антиотцовских антилейкоцитарных антител после иммунизации указанных женщин. 3 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих путем иммобилизации неосмектина с гетерологичными антигенами, дающими перекрестные реакции с иммуноглобулинами, где к сорбенту вносят водорастворимый антиген, проводят экспозицию, отмывают от несвязавшегося антигена, доводят рН и проводят одномоментную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител с контролем иммунологических показателей готовых препаратов в РИФ. Изобретение обеспечивает эффективную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося красителя и гетерологичных антител. 2 пр., 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Сущность способа: осуществляют забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, перемешивают и оставляют на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов при комнатной температуре, после седиментации эритроцитов берут 0,5 мл лейкоцитарной взвеси и определяют в ней количество лейкоцитов любым способом (рутинным или автоматизированным), доводят ее концентрацию до величины 5*109 лейкоцитов/л дистиллированной водой, биологическую жидкость помещают в морозильную камеру при температуре -20°С до полного замораживания и используют ее после процесса размораживания для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов. Применение изобретения обеспечивает точность определения концентрации цитокинов методом ИФА, снижается индивидуальная вариабельность показателей. 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к оптическим биосенсорам, предназначенным для определения белковых молекул в малых концентрациях. Заявленный флуоресцентный оптический ДНК-биосенсор состоит из подложки, адсорбированной на подложке тонкой пленки комплекса ДНК-белок, причем подложка выполнена из монокристаллического кремния с ориентацией поверхности (100), размером 18×18 мм и толщиной 380±20 мкм, шероховатость рабочей поверхности ≤0,06, а содержание белка в тонкой пленке составляет от 10-15 до 10-9 моль/л. Технический результат - разработка флуоресцентного оптического ДНК-биосенсора, обладающего возможностью многократного его использования без потери чувствительности, в частности, при определении белковых молекул в малых концентрациях. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов. Изобретение раскрывает способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, отличающийся тем, что в лунки планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4, инкубируют, добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют, вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, отмывают лунки планшетов 0,1-0,2 фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют, добавляют 100-120 мкл на лунку однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Изобретение направлено на ускорение и упрощение определения иммуногенной активности вакцины против бешенства. 2 пр.
Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития. Способ определения пола плода заключается в определении уровня антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке крови, в сроки 7, а также 9-10 недель беременности, и при увеличении АМГ в 2,6 и более раз за этот период диагностируют наличие плода мужского пола, при увеличении его не выше чем в 1,5 раза - наличие плода женского пола. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью диагностировать пол плода в ранние сроки беременности. 4 пр.

Изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Способ состоит в том, что в лейкоцитах периферической крови беременной на 5-11 неделе гестации с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровни экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR4 и TLR9, гена противомикробного пептида HBD1. При одновременном снижении определяемых показателей, по меньшей мере, в 2,5 раза по сравнению с их уровнем, установленным при физиологически протекающей беременности, прогнозируют угрозу выкидыша в первом триместре гестации. Использование изобретения позволяет осуществить профилактику осложнений, обусловленных инвазивностью исследования (исключение забора биологического материала клеток эндометрия) при одновременном обеспечении точности прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации за счет использования в качестве биологического материала лейкоцитов периферической крови. 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого риносинусита. Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита включает исследование сыворотки крови больного до начала лечения и определение уровней цитокинов интерлейкина - 6 (IL-6) и γ-интерферона (γINF) пг/мл, после чего вычисляют коэффициент диагностики K по формуле: K=IL-6/γINF, и при значении K≤1,4 диагностируют вирусный риносинусит, при выполнении условия 1,4<K<2,5 диагностируют поствирусный риносинусит, при значении K≥2,5 диагностируют бактериальный риносинусит. Предложенный способ позволяет с высокой достоверностью проводить дифференциальную диагностику острого риносинусита за счет использования объективных критериев оценки, позволяющих четко, быстро и однозначно дифференцировать вирусный, поствирусный и бактериальный риносинусит. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения ОРИ у детей. Для этого у детей путем в браш-биоптате слизистой носо-ротоглотки определяют местный неспецифический секреторный иммуноглобулин А, колонизационную активность: индекса инфицирования, индекса адгезии, степени деструкции эпителиоцитов и уровень внеклеточного фосфатидилхолина. По снижению уровня местного неспецифического иммуноглобулина А в пределах 4-16 lg, индекса инфицирования 50-100%, индекса адгезии клеточных эпителиоцитов 100-500 м.кл., деструкции эпителиоцитов 20-50%, уровня внеклеточного фосфатидилхолина 0,001-0,01 мг/мл прогнозируют осложненное течение острых респираторных инфекций у детей. Использование данного способа позволяет прогнозировать осложненное течение ОРИ у детей на ранних стадиях путем одновременного определения нескольких показателей, интегрально характеризующих антиинфекционную резистентность слизистой носо-ротоглотки. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+. При содержании общего количества лимфоцитов меньше 1,5⋅109 клл и клеток CD3+ меньше 1,5⋅109 клл судят о риске формирования Т-хелперного дефицита. Изобретение позволяет выявить лиц, имеющих риск патологии, связанной с иммунодефицитом Т-хелперного звена иммунитета при профотборе для работы в экстремальных условиях Приарктического региона, а также с целью профилактики лиц, ведущих кочевой образ жизни. 6 пр.

Наверх