Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты



Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты
Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты

 

C07K1/10 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2615764:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Уфимский институт химии Российской академии наук (УфИХ РАН) (RU)

Изобретение относится к способу получения гликопептидов тритерпенового гликозида - глицирризиновой кислоты общей формулы (lIa-g)

В предложенном способе продукт получают из глицирризиновой кислоты (ГК) без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной части молекулы, превращая ее в активированный трис-оксибензотриазольный эфир с помощью N-гидрооксибензотриазола (HOBu) и N,N'-дициклогексилкарбодиимида (DCC) или трис-оксисукцинимидный эфир с помощью N-гидроксисукцинимида (HOSu) и DCC в среде тетрагидрофурана или диоксана при 0-+5°C 1 ч, 20-22°C - 24 ч, затем образующийся активированный эфир вводят в реакцию с аминокислотой (АК) (L-фенилаланин, L-тирозин, L-лейцин, L-изолейцин, L-метионин, L-валин, S-бензил-L-цистеин) в растворе 1N водного раствора гидроокиси натрия и N,N'-диметилформамида при мольном соотношении реагентов ГК/HOBt/DCC/AK, равном 1/3.0-3.5/3.0-3.5/4-5, или ГК/HOSu/DCC/AK=1/4-5/3.0-3.5/4-5. Предложен новый эффективный способ, позволяющий получить ценные вещества с высокими выходами. 3 з.п. ф-лы, 7 пр.

 

Изобретение относится к новому способу получения гликопептидов глицирризиновой кислоты (ГК) (I) общей формулы (II), представляющих интерес для медицины в качестве противовирусных агентов и иммуномодуляторов [Hoever G., Baltina L., Michaelis M., Kondratenko R., Baltina L., Tolstikov G., Doerr H.W., Cinatl J., Jr. Antiviral activity of Glycyrrhizic acid derivatives against SAES-Coronavirus. // J. Med. Chem., 2006, 48, 1256-1259; Lin J.-Ch., Cherng J.-M., Hung M.-Sh., Baltina L.A., Baltina L., Kondratenko R. Inhibitory effects of some derivatives of Glycyrrhizic acid against Epstein-Barr virus infection: Structure-activity reationships. // Antiviral Res., 2008, 79, 6-11; Baltina L.A., Zarubaev V.V., Baltina L.A., Orshanskaya I.A., Fairushina A.I., Kiselev O.I., Yunusov M.S. Glycyrrhizic acid derivatives as influenza A/H1N1 virus inhibitors. // Bioorg. Med. Chem. Lett., 2015, 25, 1742-1746; Baltina L.A. (jr.), Kondratenko R.M., Baltina L.A., Baschenko N.Z., Plyasunova O.A. Synthesis and biological activity of new Glycyrrhizic acid conjugates with amino acids and dipeptides. // Russian J. Bioorg. Chem., 2009, 35, 510-517; Л.А. Балтина, С.А. Рыжова, Е.В. Васильева, Г.А. Толстиков, Г.М. Сахаутдинова, Ф.С. Зарудий. Трансформации глицирризиновой кислоты. VIII. Синтез иммуномодулирующих гликопептидов с использованием трет-бутиловых эфиров аминокислот. // Биоорган, химия, 1994, 20 (12), 1365-1374).

Известен способ получения гликопептидов ГК по схеме 1 (прототип 1) [RU 2057139 С1, 27/03/1996; Балтина Л.А., Рыжова С.А., Васильева Е.В., Капина А.П., Толстиков Г.А. Трансформации глицирризиновой кислоты. IV. Новый способ получения карбоксизащищенных гликопептидов. Ж. общей хим., 1993, т. 63, вып. 9, 2140-2147).

Схема 1

Способ заключается в обработке ГК (I) N-гидроксибензотриазолом (HOBt) и N,N'-дициклогексилкарбодиимидом (DCC) в среде растворителя (тетрагидрофурана, диоксана) при соотношении реагентов ГК/HOBt/DCC, равном 1/3.5-4.0/3.5-4.0 ммоль, при 0-+5°C 1 ч, при комнатной температуре 6-8 ч с получением активированного трис-оксибензотриазольного эфира (III), который после отделения осадка образующейся N,N'-дициклогексилмочевины (IV) подвергают взаимодействию с эфирами аминокислот (метиловыми, трет-бутиловыми, бензиловыми, 4-нитробензиловыми) (3.5-4.0 ммоль) в виде их гидрохлоридов, тозилатов или бензолсульфонатов (аминокомпонент) в присутствии третичного амина - N-метилморфолина (NMM), триэтиламина (Et3N) или трибутиламина (Bu3N) (4.2-7.2 ммоль)). Выход карбоксизащищенных гликопептидов ГК (V), содержащих по три остатка эфиров аминокислот, составляет 82-94%.

Основным недостатком данного способа получения гликопептидов ГК является его многостадийность, что усложняет и удлиняет процесс получения целевых гликопептидов - конъюгатов ГК с аминокислотами со свободными COOH-группами.

Способ состоит из следующих стадий:

1) синтез эфиров аминокислот (метиловых, трет-бутиловых, бензиловых, 4-нитробензиловых) для защиты COOH-групп аминокомпонентов;

2) получение активированного эфира (III) в растворе тетрагидрофурана или диоксана;

3) взаимодействие эфира (III) с гидрохлоридами, тозилатами или бензолсульфонатами эфиров аминокислот (метиловыми, трет-бутиловыми, бензиловыми или 4-нитробензиловыми) в присутствии избытка третичного основания - N-метилморфолина (NMM), триэтиламина (Et3N), трибутиламина (BU3N);

4) удаление защитных эфирных групп аминокислотных остатков для получения свободных гликопептидов - трет-бутиловых с помощью CF3COOH, бензиловых (нитробензиловых) - с помощью гидрогенолиза в 75% CH3COOH в присутствии Pd/C.

Метиловые сложноэфирные защитные группы гликопептидов ГК не удаляются, так как их деблокирование требует щелочного гидролиза, что приводит к деструкции гликозидной структуры и образованию сложных смесей продуктов разложения. После удаления защитных групп (бензильных, 4-нитробензильных) гидрогенолизом целевые деблокированные гликопептиды ГК выделяют с помощью колоночной хроматографии (КХ) на силикагеле (СГ) с выходами 65-75% в способе-прототипе 1 (Балтина Л.А., Рыжова С.А., Васильева Е.В., Калина А.П., Толстиков Г.А. Трансформации глицирризиновой кислоты. IV. Новый способ получения карбоксизащищенных гликопептидов. Ж. общей хим., 1993, т. 63, вып. 9, 2140-2147).

Известен способ получения гликопептидов ГК по схеме 2 (прототип 2) [SU 1625882 А1, 07.02.1991; Балтина Л.А., Рыжова С.А., Васильева Е.В., Толстиков Г.А., Сахаутдинова Г.М., Зарудий Ф.С. Трансформации глицирризиновой кислоты. VIII. Синтез иммуномодулирующих гликопептидов с использованием трет-бутиловых эфиров аминокислот. // Биоорган, химия, 1994, 20 (12), 1365-1374).

Способ заключается в обработке ГК N-гидроксисукцинимидом (HOSu) и DCC в среде тетрагидрофурана или диоксана при 3-ступенчатом выдерживании реакционной массы: при 0-+5°C 3 ч, при комнатной температуре - 6 ч, при 4-8°C 12 ч при соотношении ГК/HOSu/DCC=1/4-5/3.0-3.2 ммоль, с получением активированного трис-оксисукцинимидного эфира VI (схема 2), который после отделения осадка дициклогексилмочевины (IV) вводят в реакцию конденсации с эфирами аминокислот (метиловыми, трет-бутиловыми) в виде гидрохлоридов (3.0-3.5 ммоль) в присутствии триэтиламина (4.8-5.4 ммоль). Выход карбоксизащищенных гликопептидов ГК (Vc, VIIa-с) составляет 75-80%.

Схема 2

Недостатком данного способа получения гликопептидов ГК является его многостадийность, как и в способе-прототипе 1, и необходимость проведения операции деблокирования карбоксизащищенных гликопептидов - удаление сложноэфирных трет-бутильных групп CF3COOH для получения гликопептидов со свободными COOH группами, которые выделяют в индивидуальном состоянии с помощью КХ на СГ с выходами 39-47% (Балтина Л.А., Рыжова С.А., Васильева Е.В., Толстиков Г.А., Сахаутдинова Г.М., Зарудий Ф.С. Трансформации глицирризиновой кислоты. VIII. Синтез иммуномодулирующих гликопептидов с использованием трет-бутиловых эфиров аминокислот. // Биоорган, химия, 1994, 20 (12), 1365-1374).

Задача, на решение которой направлено заявленное техническое решение, заключается в разработке нового способа получения гликопептидов ГК со свободными COOH группами аминокислотных остатков с использованием ГК I без предварительной защиты гидроксильных групп углеводной части молекулы и аминокислот с временной защитой их карбокси-групп в виде натриевых солей, что исключает процессы деблокирования и позволяет получать целевые продукты по укороченной схеме по принципу «минимальной защиты» аминокомпонента (схема 3).

Схема 3

В заявленном техническом решении поставленная цель достигается тем, что ГК I обрабатывается HOBt и DCC в соотношении ГК/HOBt/DCC=1/3.0-3.5/3.0-3.5 ммоль или HOSu и DCC в соотношении ГК/HOSu/DCC=1/4.0-5.0/3.0-3.5 ммоль при 0-+5°C 1 ч в растворителе (тетрагидрофуран, диоксан), смесь выдерживается при перемешивании 5-6 ч при комнатной температуре (20-22°C), осадок N,N'-дициклогексилмочевины IV отделяется. Полученный раствор активированного трис-оксибензотриазольного эфира III (схема 1) или активированного трис-оксисукцинимидного эфира VI (схема 2) добавляется постепенно к раствору аминокислоты (4.0-5.0 ммоль) в смеси 1N водного раствора NaOH и N,N'-диметилформамида при соотношении 1:1 (v/v) при 0-+5°C, затем реакционная смесь выдерживается с периодическим перемешиванием при 20-22°C 24 ч. В качестве аминокислот используют L-фенилаланин (L-Phe), L-тирозин (L-Tyr), L-лейцин (L-Leu), L-изолейцин (1-Ile), L-метионин (L-Met), L-валин (L-Val), S-бензил-L-цистеин (L-CysSBn). Целевые продукты - свободные гликопептиды формулы IIa-g выделяют путем разбавления реакционной смеси холодной водой и подкисления 5% соляной кислотой до pH ~2-3. Полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. При активации карбоксильных групп ГК HOBt-DCC выход свободных гликопептидов IIa-g составляет 82-100%, при активации ГК с помощью HOSu-DCC - 80-95%.

Существенные отличия и преимущества предлагаемого способа получения гликопептидов ГК заключаются в следующем.

В качестве аминокомпонентов используются свободные аминокислоты, а не их эфиры (метиловые, трет-бутиловые, бензиловые, 4-нитробензиловые) в виде гидрохлоридов, тозилатов или сульфонатов, что позволяет избежать стадии деблокирования образующихся при синтезе карбоксизащищенных гликопептидов ГК.

Для временной защиты карбокси-групп аминокислот в виде натриевых солей используется 1 N водный раствор NaOH.

Синтез является 2-стадийным, а не 4-стадийным, как в способах-прототипах 1 и 2.

Токсичные третичные амины (NMM, NEM, Et3N) с неприятным запахом в синтезе не используются.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Методика получения гликопептидов ГК (IIa-g)

А) К раствору 1 ммоль глицирризиновой кислоты в 20 мл тетрагидрофурана или диоксана при 0-+5°C прибавляли 3.0-3.5 ммоль N-гидроксибензотриазола, 3.0-3.5 ммоль N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивали смесь при 0-+5°C 1 ч, при комнатной температуре (20-22°C) 5-6 ч. Отфильтровывали осадок дициклогексилмочевины, фильтрат (раствор А) использовали далее в реакции с аминокислотами.

Б) К раствору 1 ммоль глицирризиновой кислоты в 20 мл тетрагидрофурана или диоксана при 0-+5°C прибавляли 4.0-5.0 ммоль N-гидроксисукцинимида, 3.0-3.5 ммоль N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивали смесь при 0-+5°C 1 ч, при 20-22°C 5-6 ч. Отфильтровывали осадок дициклогексилмочевины, фильтрат (раствор Б) использовали далее в реакции с аминокислотами.

В) Готовили раствор аминокислоты (4.0-5.0 ммоль) в смеси 10 мл 1N водного раствора NaOH и 10 мл диметилформамида при 0-+5°C (раствор В). К полученному раствору B прибавляли постепенно раствор A или раствор Б при перемешивании и охлаждении (0-+5°C), выдерживали реакционную смесь 24 ч при 20-22°C с периодическим перемешиванием. Разбавляли смесь холодной водой, подкисляли 5% соляной кислотой до рН 2-3, осадок отфильтровывали, промывали водой и сушили. Выходы целевых продуктов составили 80-100%. Для получения аналитически чистых образцов для ЯМР часть продуктов хроматографировали на колонке с СГ, элюируя смесью хлороформа-метанола-воды, 300:10:1, 200:10:1, 100:10:1, 50:10:1 (v/v).

3-О-{2-О-[-N-(β-глюкопиранозилуроноил)-L-фенилаланин]-N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-фенилаланин}-(3β,20β)-11-оксо-30-(N-карбонил-L-фенилаланин)-30-норолеан-12-ен (IIа).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.48 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилмочевины, 0.82 г (5.0 ммоль) L-фенилаланина. Выход 1.26 г (100%). Для получения аналитически чистого образца часть продукта хроматографировали на колонке с СГ, как описано выше. ИК-спектр, ν, см-1: 3600-3200 (ОН, NH), 1724 (COOH), 1655 (С=O), 1540 (CONH), 1500 (Ph). Спектр ЯМР 13С (Py-d5), δ, м.д.: 40.3 (C1), 27.6 (С2), 90.6 (С3), 40.6 (С4), 56.5 (С5), 18.5 (С6), 33.9 (С7), 46.7 (С8), 63.1 (С9), 38.0 (С10), 202.7 (С11), 129.6 (С12), 171.3 (С13), 44.3 (С14), 27.4 (С15, С16), 32.8 (С17), 48.2 (С18), 42.6 (С19), 44.5 (С20), 32.1 (С21), 38.4 (С22), 28.4 (С23), 17.0 (С24), 17.3 (С25), 19.4 (С26), 23.8 (С27), 29.0 (С28), 29.3 (С29), 175.1 (С30), 104.7 (С1'), 81.3 (С2'), 75.9 (С3'), 73.6 (С4'), 77.3 (С5'), 171.3 (С6'), 104.8 (С1''), 75.2 (С2''), 76.0 (С3''), 73.5 (С4''), 77.9(С5''), 171.6 (C6''); Phe: 174.1, 172.6, 172.5, 138.9-127.8,54.9, 54.6, 54.4, 37.9, 37.8, 37.2. Найдено, %: N 3.3. C69H89O19N3. Вычислено, %: N 3.3. М.в. 1264.6.

Б) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.46 г (4.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.62 г (3 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.82 г (5.0 ммоль) L-фенилаланина. Выход 1.07 г (85%).

3-О-{2-O-[N-O[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-тирозин]-N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-тирозин}-(3β,20β)-11-оксо-30-(N-карбонил-L-тирозин)-30-норолеан-12-ен (IIb).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.48 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.90 г (5.0 моль) L-тирозина. Выход 1.31 г (100%). Для получения аналитически чистого образца часть продукта хроматографировали как описано выше. ИК-спектр, ν, см-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1720 (COOH); 1630 (С=O); 1570 (CONH); 1515 (Ph). Спектр ЯМР 13С (CD3OD, δ, м.д.): 40.3 (С1); 27.6 (С2); 90.8 (С3); 40.6 (С4); 56.4 (С5); 18.4 (С6); 33.9 (С7); 46.7 (С8); 63.1 (С9); 37.9 (С10); 202.8 (С11); 129.8 (С12); 171.3 (С13); 44.5 (С14); 27.4 (С15); 28.5 (С16); 33.0 (С17); 48.2 (С18); 42.5 (С19); 44.7 (С20); 38.1 (С22), 29.0 (С23); 17.0 (С24); 17.3 (С25); 19.3 (С26); 23.8 (С27); 29.2 (С28); 29.3 (С29); 175.2 (С30); 104.6 (С1'); 81.4 (С2'); 76.0 (С3', С3''); 73.5 (С4'); 77.2 (С5'); 171.4 (С6', С6''); 104.9 (С1''); 75.9 (С2''); 73.6 (С4''); 77.9 (С5''); Tyr: 173.2; 173.1; 172.2; 157.7, 157.4, 157.2, 131.6-131.2, 117.0, 116.5, 116.4, 55.3, 54.8. Найдено, %: N 3.1. C69H89N3O22. Вычислено, %: N 3.2. М.в. 1312.4.

Б) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.57 г (5.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.90 г (5.0 ммоль) L-тирозина. Выход 1.24 г (95%).

3-О-{2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-лейцин]-N-(β-D-глюкoпиpaнoзилypoнoил)-L-лeйцин}-(3β,20β)-11-oкco-30-(N-кapбoнил-L-лeйцин)-30-норолеан-12-ен (IIс).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.48 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.65 г (5.0 моль) L-лейцина. Выход 1.10 г (95%). ИК-спектр, ν, см-1: 3600-3200 (ОН, NH), 1720 (COOH), 1660 (С=O), 1540 (CONH). Спектр ЯМР 13С (CD3OD, δ, м.д.): 40.7 (С1), 28.4 (С2), 90.7 (С3), 40.9 (С4), 56.5 (С5), 18.7 (С6), 34.1 (С7), 46.0 (С8), 63.4 (С9), 38.4 (С10), 202.8 (С11), 129.2 (С12), 171.5 (С13), 44.9 (С14), 27.6 (С15), 27.9 (С16), 33.2 (С17), 47.0 (С18), 42.7 (С19), 45.2 (С20), 32.3 (С21), 39.3 (С22), 28.7 (С23), 17.4 (С24), 17.6 (С25), 19.6 (С26), 24.2 (С27), 29.0 (С28), 29.5 (С29), 175.9 (С30), 105.2 (C'), 82.0 (С2'), 76.2 (С3'), 73.9 (С4'), 77.4 (С5'), 171.8 (С6'), 105.3 (С1''), 75.5 (С2''), 75.9 (С3''), 73.3 (С4''), 77.6 (С5''), 173.0 (С6''); Leu: 173.3, 173.2, 173.1, 52.3, 52.2, 52.1, 40.9, 40.8, 40.6, 23.7, 23.4, 22.5, 22.3, 21.0. Найдено, %: N 3.4 C72H96N3O20. Вычислено, %: N 3.6. М.в. 1162.4.

Б) Получен по методике (пример 2) из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.57 г (5 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.65 г (5.0 ммоль) L-лейцина. Выход 1.05 г (90%).

3-О-{2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-изолейцин]-N-(β-D-глюкoпиpaнoзилypoнoил)-L-изoлeйцин}-(3β,20β)-11-oкco-30-(N-кapбoнил-L-изолейцин)-30-норолеан-12-ен (IId).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.5 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.6 г (3 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.65 г (5.0 моль) L-изолейцина. Выход 1.0 г (86%). ИК-спектр, см-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1720 (COOH); 1660 (С11=O); 1530 (CONH). Спектр ЯМР 13С (CD3OD), δ, м.д.: 40.3 (С1), 27.6 (С2), 90.3 (С3), 40.7 (С4), 56.4 (С5), 18.5 (С6), 33.8 (С7), 46.8 (С8), 63.2 (С9), 38.1 (С10), 202.7 (С11), 129.3 (С12), 171.3 (С13), 44.6 (С14), 27.4 (С15, С16), 33.0 (С17), 48.2 (С18), 42.5 (С19), 44.9 (С20), 32.0 (С21), 38.7 (С22), 28.4 (С23), 17.0 (С24), 17.3 (С25), 19.4 (С26), 23.9 (С27), 28.8 (С28), 29.2 (С 29), 175.0 (С30), 104.9 (С1'), 81.7 (С2'), 76.3 (С3'), 73.4 (С4'), 77.3 (С5'), 171.4 (С6'), 105.0 (C1''), 75.2 (С2''), 76.0 (С3''), 73.6 (С4''), 77.7 (С5''), 171.6 (С6''); Ile: 174.5, 174.4, 172.9, 57.9, 57.8, 57.7, 39.0, 38.9, 38.7, 26.5, 26.2, 26.1, 16.1, 16.0, 12.1, 12.0, 11.8. Найдено, %: N 3.3. C60H95N3O19. Вычислено, %: N 3.6. М.в. 1162.4.

Б) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.46 г (4.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.62 г (3.0 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.52 г (4.0 ммоль) L-изолейцина. Выход 0.95 г (82%).

3-O-{2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-метионин]-N-(β-D-глюкoпиpaнoзилypoнoил)-L-мeтиoнин}-(3β,20β)-11-oкco-30-(N-кapбoнил-L-метионин)-30-норолеан-12-ен (IIе).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.42 г (3.0 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.62 г (3.0 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.60 г (4.0 моль) L-метионина. Выход 0.98 г (82%). ИК-спектр, см-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1720 (COOH); 1655 (С11=O); 1550 (CONH). Спектр ЯМР 13С (CD3OD), δ, м.д.: 40.2 (С1), 27.6 (С2), 90.6 (С3), 40.6 (С4), 56.3 (С5), 18.3 (С6), 33.7 (С7), 46.7 (С8), 63.0 (С9), 37.9 (С10), 202.5 (С11), 129.1 (С12), 171.4 (С13), 44.4 (С14), 27.4 (С15), 28.4 (С16), 32.8 (С17), 48.1 (С18), 42.4 (С19), 44.7 (С20), 32.5 (С21), 38.6 (С22), 28.8 (С23), 17.0 (С24), 17.3 (С25), 19.3 (С26), 23.8 (С27), 29.1 (С28), 29.3 (С29), 177.4 (С30), 104.7 (С1'), 80.8 (С2'), 75.8 (С3'), 73.4 (С4'), 77.0 (С5'), 172.5 (С6'), 104.8 (С1''), 75.9 (С2''), 76.1 (С3''), 73.3 (С4''), 77.5 (С5''), 172.6 (С6''); Met: 175.0, 173.1, 173.0, 52.9, 52.7, 52.6, 31.9, 31.7, 31.4, 31.3, 31.0, 30.6, 17.0, 16.9, 15.4. Найдено, %: N 3.4; S 7.8. C57H86O19N3S3. Вычислено, %: N 3.5; S 8.0. М.в. 1201.4.

Б) Получен по методике (пример 2) из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.46 г (4.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.62 г (3.0 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.6 г (4.0 ммоль) L-метионина. Выход 0.96 г (80%).

3-О-{2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-валин]-N-(β-D-глюкoпиpaнoзилypoнoил)-L-вaлин}-(3β,20β)-11-oкco-30-(N-кapбoнил-L-вaлин)-30-норолеан-12-ен (IIf).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.48 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.58 г (5.0 моль) L-валина. Выход 1.0 г (89%). ИК-спектр, см-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1710 (COOH); 1660 (С11=O); 1540 (CONH). Спектр ЯМР 13С (CD3OD), δ, м.д.: 40.4 (С1), 27.9 (С2), 90.3 (С3), 40.7 (С4), 56.5 (С5), 18.2 (С6), 33.9 (С7), 46.8 (С8), 63.2 (С9), 38.2 (С10), 202.7 (С11), 129.2 (С12), 171.6 (С13), 44.6 (С14), 27.5 (С15), 28.7 (С16), 33.0 (С17), 48.2 (С18), 42.8 (С19), 44.7 (С20), 32.1 (С21), 38.8 (С22), 28.8 (С23), 17.0 (С24), 17.3 (С25), 19.4 (С26), 23.8 (С27), 29.1 (С28), 29.4 (С29), 177.6 (С30), 104.8 (С1'), 81.7 (С2'), 76.4 (С3'), 73.8 (С4'), 77.4 (С5'), 171.7 (С6'), 105.0 (С1''), 75.2 (С2''), 76.1 (С3''), 73.8 (С4''), 77.8 (С5''), 172.4 (С6''); Val: 174.9, 174.2, 172.8, 59.0, 58.9, 58.4, 32.2, 32.1, 31.8, 19.8, 19.6, 19.5, 18.7, 18.5, 18.0. Найдено, %: N 3.5. C57H89N3O19. Вычислено, %: N 3.8. М.в. 1120.3.

Б) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.46 г (4.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.62 г (3.0 моль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.58 г (5.0 ммоль) L-валина. Выход 0.90 г (80%).

3-О-{2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин-8-бензил]-N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин-8-бензилн}-(3β,20β)-11-оксо-30-(N-карбонил-L-цистеин-S-бензил)-30-норолеан-12-ен (IIg).

А) Получен по методике из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.48 г (3.5 ммоль) N-гидроксибензотриазола, 0.72 г (3.5 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.6 г (5.0 моль) S-бензил-L-цистеина. Выход 1.15 г (82%), ИК-спектр, см-11: 3600-3200 (ОН, NH); 1710 (COOH); 1670 (С11=O); 1550 (CONH), 1510 (С6Н5). Спектр ЯМР 13С (ацетон-d6), δ, м.д.: 38.4 (С1), 27.6 (С2), 88.1 (С3), 38.8 (С4), 54.3 (С5), 16.6 (С6), 32.2 (С7), 45.7 (С8), 61.0 (С9), 36.0 (С10), 199.0 (С11), 127.7 (С12), 170.7 (С13), 44.5 (С14), 27.3 (С15), 28.3 (С16), 32.2 (С17), 47.8 (С18), 42.8 (С19), 44.6 (С20), 31.9 (С21), 38.4 (С22), 28.8 (С23), 15.5 (С24), 15.7 (С25), 17.7 (С26), 22.4 (С27), 29.0 (С28), 29.4 (С29), 177.2 (С30), 102.9 (С1'), 80.1 (С2'), 74.1 (С3'), 72.6 (С4'), 75.3 (С5'), 169.6 (С6'), 103.2 (С1''), 74.8 (С2''), 73.7 (С3''), 71.7 (С4''), 75.3 (С5''), 170.0 (С6''); L-Cys (SBn): 173.0, 172.4, 172.1, 130.0 127.3, 51.3, 50.8, 50.5, 35.5, 35.3. Найдено, %: N 2.8, S 6.7. С57Н89N3О19. Вычислено, %: N 3.0, S 6.8. М.в. 1402.7.

Б) Получен по методике (пример 2) из 0.82 г (1 ммоль) ГК, 0.46 г (4.0 ммоль) N-гидроксисукцинимида, 0.62 г (3.0 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида, 0.6 г (5.0 ммоль) S-бензил-L-цистеина. Выход 1.12 г (80%), после переосаждения из метанола-эфиром - 60%.

Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (грант 14-03-01307).

1. Способ получения гликопептидов глицирризиновой кислоты общей формулы (IIa-g)

путем обработки глицирризиновой кислоты (ГК) N-гидроксибензотриазолом (HOBt) и N,N-дициклогексилкарбодиимидом (DCC) или N-гидроксисукцинимидом (HOSu) и N,N'-дициклогексилкарбодиимидом (DCC) в среде тетрагидрофурана или диоксана при температуре 0-+5°С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре с последующим отделением осадка N,N'-дициклогексилмочевины и получением раствора активированного трис-оксибензотриазольного или активированного трис-оксисукцинимидного эфира, отличающийся тем, что соотношение ГК/HOBt/DCC составляет 1/3.0-3.5/3.0-3.5 ммоль, соотношение ГК/HOSu/DCC составляет 1/4.0-5.0/3.0-3.5 ммоль, реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре (20-22°С) при перемешивании в течение 5-6 ч, раствор активированного трис-оксибензотриазольного эфира или активированного трис-оксисукцинимидного эфира добавляется постепенно к раствору аминокислоты в смеси 1 N водного раствора гидроокиси натрия и N,N'-диметилформамида при 0-+5°С, реакционную смесь выдерживают с периодическим перемешиванием при температуре 20-22°С в течение 24 ч, затем разбавляют холодной водой, подкисляют 5% соляной кислотой до рН ~2-3, полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве аминокислот используют L-фенилаланин, L-тирозин, L-лейцин, L-изолейцин, L-метионин, L-валин, S-бензил-L-цистеин.

3. Способ по пп. 1, 2, отличающийся тем, что концентрация аминокислот составляет 4.0-5.0 ммоль.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что смесь 1N водного раствора гидроокиси натрия и N,N'-диметилформамида берут в соотношении 1:1 (v/v).



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложена автоматизированная система бесклеточного получения белка, способ бесклеточного получения белка и реакционный набор для автоматизированного бесклеточного получения белка.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая способ получения иммуноглобулина человека и препарат иммуноглобулина человека, полученный вышеуказанным способом.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены способы очистки моноклонального антитела.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения очищенного белка, представляющего интерес, с использованием матрицы для аффинной хроматографии (АС), с которой связывается белок.

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ получения препарата белка из образца смеси, содержащей белок, являющийся целью выделения, и по меньшей мере один НСР.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению вариантов альбумина, у которых изменен период полужизни в плазме по сравнению с исходным альбумином, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к кристаллу циклопептида формулы I, способам его получения и применению для получения соединения, обладающего противогрибковой активностью. Кристалл циклопептида обладает высокой чистотой и стабильностью.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения полипептидного мультимера, который включает первый полипептид, обладающий антигенсвязывающей активностью, и второй полипептид, обладающий антигенсвязывающей активностью, или помимо первого и второго полипептидов мультимер включает один или два третьих полипептида, обладающих антигенсвязывающей активностью, или помимо первого, второго и третьего полипептидов мультимер включает четвертый полипептид, обладающий антигенсвязывающей активностью, и способ включает стадии: (a) экспрессии ДНК, которая кодирует первый полипептид, обладающий антигенсвязывающей активностью, и ДНК, которая кодирует второй полипептид, обладающий антигенсвязывающей активностью, или экспрессии ДНК, которая кодирует первый, второй и третий полипептиды, обладающие антигенсвязывающей активностью, или экспрессии ДНК, которая кодирует первый, второй, третий и четвертый полипептиды, обладающие антигенсвязывающей активностью; и (b) сбора продукта экспрессии стадии (а) с использованием аффинной хроматографии с белком А.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению меченого альдегидом антитела для конъюгации с интересующим лекарственным средством, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к способу эффективного получения полипептидного фрагмента, подходящего для связывания способом NCL. Способ получения включает стадию взаимодействия полипептида, состоящего из первого полипептидного фрагмента, имеющего на N-конце цистеиновый аминокислотный остаток, и второго полипептидного фрагмента, связанного через вставочную последовательность -Cys-W-(His)n-Z-Met- с CNBr для получения первого полипептидного фрагмента, имеющего на N-конце цистеиновый аминокислотный остаток, и третьего полипептидного фрагмента, стадию последующего взаимодействия с третьим полипептидным фрагментом с соединением, представленным формулой (I), и соединением, представленным формулой (II), для получения второго полипептидного фрагмента, имеющего модифицированный С-конец.

Изобретение относится к способу получения дифталата бетулинола формулы ацилированием бетулинола, в котором в качестве ацилируюшего агента используют фталевую кислоту, и ацилирование проводят сплавлением бетулинола с фталевой кислотой при температуре 180-200°С в течение 2-3 минут при мольном соотношении бетулинола и фталевой кислоты, равном 1:3, с последующей перекристаллизацией целевого продукта из этанола.

Изобретение относится к соединению или его фармацевтически приемлемой соли, имеющему структуру: Изобретение также относится к другим индивидуальным соединениям и их фармацевтически приемлемым солям, структурные формулы которых указаны в формуле изобретения, к фармацевтической композиции для ингибирования репликации ВИЧ и к способу лечения ВИЧ-инфекции.

Изобретение относится к способу получения диацетата бетулинола, проявляющего противоопухолевую активность. Диацетат бетулинола получают ацетилированием бетулинола уксусной кислотой в присутствии каталитических количеств ортофосфорной кислоты в среде толуола с удалением воды, образующейся в ходе реакции.

Изобретение относится к способу получения новых потенциально биологически активных производных бетулиновой кислоты - сульфобетаинов с фрагментом 3-(диметиламмоний)пропан-1-сульфоната в положении С-3 и с фрагментом 4-(диметиламмоний)бутан-1-сульфоната в положениях С-3 или С-28 общей формулы (1, 2а, б, 3).

Изобретение относится к способу получения бетулоновой кислоты из наружного слоя коры березы (бересты), которая является промежуточным продуктом для получения бетулиновой кислоты и других биологически активных веществ.

Изобретение относится к получению дипропионата бетулинола - биологически активного вещества, проявляющего противоопухолевую активность. Дипропионат бетулинола получают в одну стадию кипячением бетулинола с пропионовой кислотой в присутствии каталитических количеств ортофосфорной кислоты в среде толуола с удалением воды, образующейся в ходе реакции, при этом концентрация пропионовой кислоты в реакционной смеси 13,3 мас.

Изобретение относится к применению трифенилфосфониевых солей лупановых и урсановых тритерпеноидов формулы 1-11 в качестве средств с шистосомицидной активностью, новым соединениям 8-11, а также способу их получения.

Изобретение относится к способу получения производных 3-пропионата-28-сульфата бетулина формулы (I). Сульфатирование 3-пропионата бетулина проводят в N,N-диметилформамиде смесью сульфаминовой кислоты и мочевины при температуре 30-40°C в течение 2,0-3,0 часов, а выделение продукта проводят охлаждением реакционной массы, разбавлением ее водой, экстракцией бутиловым или изоамиловым спиртом, промывкой водой, обработкой спиртового экстракта с последующим концентрированием спиртового слоя и выделением целевого продукта.

Изобретение относится к способу получения производных 3-ацетата-28-сульфата бетулина формулы I, который заключается в сульфатировании 3-ацетата бетулина в N,N-диметилформамиде смесью сульфаминовой кислоты и мочевины при температуре 30-40°C в течение 2,0-2,5 часов, выделении продукта путем охлаждения реакционной массы, разбавления ее водой, экстракции бутиловым или изоамиловым спиртом, промывки водой, обработки спиртового экстракта с последующим концентрированием спиртового слоя и выделением целевого продукта.

Изобретение относится к способу получения производных 3-пропионата-28-сульфата бетулина формулы I, заключающийся в сульфатировании 3-пропионата бетулина в 1,4-диоксане смесью сульфаминовой кислоты и мочевины при температуре 30-40°C в течение 3,0-3,5 часов, выделении продукта охлаждением реакционной массы, разбавлением ее водой, экстракцией бутиловым или изоамиловым спиртом, промывкой водой, обработкой спиртового экстракта с последующим концентрированием спиртового слоя и выделением целевого продукта.

Изобретение относится к лекарственному средству, обладающему противовоспалительной активностью, содержащему в качестве активного ингредиента N-(2-гидроксиэтил)-3β-гидроксиурс-12-ен-28-амид формулы .Технический результат: получено новое эффективное лекарственное средство, обладающее противовоспалительной активностью. 2 ил., 1 табл., 4 пр.
Наверх