Способ сбора и фиксации нематод, паразитирующих в сычуге и тонком кишечнике жвачных животных

Авторы патента:

G01N33/483 - физический анализ биологических материалов

G01N1/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2617417:

ФАНО России, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И. Скрябина (ФГБНУ "ВНИИП им. К.И. Скрябина") (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики нематодозов жвачных животных. Способ сбора и фиксации нематод, паразитирующих в сычуге и тонком кишечнике жвачных животных, включает извлечение сычуга и тонкого кишечника с содержимым во время патологоанатомического вскрытия. Их выдерживают в течение 1 часа при температуре +4°C. Содержимое и соскобы слизистых оболочек сычуга и тонкого кишечника помещают в ведро или другую емкость, смешивая с водой в соотношении 1:1. Отстаивают 10-15 минут, сливают надосадочную жидкость с повтором цикла 3-5 раз, пока надосадочная жидкость не становится прозрачной. Далее фиксируют осадок 96%-ным этанолом в соотношении 1:1. У собранных и зафиксированных нематод морфологические структуры сохраняются пригодными для микроскопирования и проведения ДНК-исследований. Изобретение позволяет упростить процесс сбора паразитических нематод во время патологоанатомического вскрытия жвачных, уменьшить потери образцов при сборе, исключить смешивание образцов от разных животных, обеспечить возможность исследования ДНК собранных нематод. 3 пр.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности - ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано для диагностики нематодозов жвачных животных.

Нематодозы широко распространены у жвачных как в России, так и в других странах. Ущерб от нематодозов складывается из ухудшения усвояемости корма, снижения темпов развития молодняка, повышения восприимчивости к инфекционным заболеваниям, снижения продуктивности [1, 3, 5]. Нематоды, паразитирующие в сычуге и тонком кишечнике, по современной классификации принадлежат в основном к надсемейству Trichostrongyloidea и насчитывают несколько десятков видов [7]. Эти виды отличаются как по особенностям биологии, так и по устойчивости к антигельминтным препаратам [6]. Методы прижизненной диагностики гельминтозов (копроовоскопия, копролярвоскопия) не позволяют точно определить таксономический состав нематод, паразитирующих у жвачных в сычуге и тонком кишечнике. В большинстве случаев при копроовоскопии таксономическая принадлежность таких нематод может быть определена только до уровня подотряда, а при копролярвоскопии - до рода. Посмертная диагностика (гельминтологическое вскрытие) дает возможность точно определить видовой состав нематод, однако существующий способ сбора и фиксации нематод имеет недостатки.

Наиболее широко применяемым способом сбора и фиксации нематод, паразитирующих в сычуге и тонком кишечнике, до сих пор является способ, предложенный в 1928 году [4], или его модификация 1971 года [2]. Согласно этому способу, для промывания от слизи и пищеварительных соков предлагается помещать содержимое сычуга и тонкого кишечника в мешок из мельничного газа или марли (с ячеей 0,2-0,4 мм²), завязывать и затем промывать под струей воды или прополаскивать в емкости с водой или водоеме. При этом гельминтологический материал часто оказывается не полностью отмытым от пищеварительных соков, что может вызвать разрушение нематод. В ряде случаев мешки разрываются, что ведет к потере собранного материала. Некоторое количество нематод застревает в складках и швах мешка, что невозможно определить при визуальном осмотре, однако при повторном использовании мешка такие нематоды могут попасть в материал от другого животного, что исказит получаемые научные данные. Используемая для фиксации нематод жидкость Барбагалло (3%-ный раствор формалина (40%-ного формальдегида) на 0,8%-ном растворе хлорида натрия) разрушает ДНК, что делает невозможным использование образцов нематод для молекулярной диагностики и молекулярной таксономии.

В связи с этим, в задачу данного исследования входило создание способа сбора и фиксации нематод, обеспечивающего достаточное промывание нематод от пищеварительных соков, минимизирующего потери образцов при сборе, предотвращающего смешивание образцов от разных животных, а также позволяющего использовать собранных нематод для ДНК-исследований.

Предлагаемый способ сбора и фиксации нематод включает в себя: 1. вскрытие сычуга и тонкого кишечника (без разделения); 2. визуальный осмотр их содержимого и извлечение крупных гельминтов; 3. перенос содержимого в пластиковую, металлическую или стеклянную емкость объемом 5-10 литров; 4. добавление воды в соотношении 1:1 по объему; 5. перемешивание; 6. отстаивание в течение 10-15 минут; 7. слив надосадочной жидкости. Действия с 4 по 7 повторяются 3-5 раз, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. После этого осадок (матрикс) фиксируют 96%-ным этанолом в соотношении 1:1.

Предлагаемый способ обладает следующими преимуществами:

1. Простота применения - нет необходимости изготавливать мешок из марли или мельничного газа, в качестве емкости для промывания может быть использовано пластиковое или металлическое ведро, стеклянная банка и т.п.

2. Минимизируются потери образцов при сборе.

3. Исключено смешивание образцов от разных животных.

4. Фиксация материала в 96%-ном этаноле позволяет в дальнейшем использовать обнаруженных нематод для ДНК-исследований.

Перечисленные положительные признаки предлагаемого способа по сравнению с прототипом обеспечивают соответствие технического решения критерию «новизна» и это позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию «существенные отличия».

Эффективность предлагаемого способа демонстрируется следующими примерами:

Пример 1. Сбор и фиксация нематод при гельминтологическом вскрытии сычуга и тонкого кишечника крупного рогатого скота.

После вскрытия брюшной полости на сычуг (на границе с книжкой) и тонкий кишечник (на расстоянии около 100 см от сычуга) накладывали лигатуры для предотвращения вытекания содержимого, затем сычуг и тонкий кишечник, без разделения друг от друга, отрезали от других частей пищеварительной системы. После этого сычуг и тонкий кишечник выдерживали 1 час при температуре +4°C и затем разрезали вдоль с помощью ножниц. Проводили визуальный осмотр внутреннего содержимого на наличие крупных гельминтов, затем содержимое (объем которого составил около 3 л) помещали в пластиковое ведро, заливали 3 л водопроводной воды, перемешивали. Слизистую оболочку сычуга и тонкого кишечника осматривали на наличие нематод, соскабливали скальпелем и смывали водой в ведро с содержимым. После отстаивания в течение 10-15 минут, надосадочную жидкость сливали, к осадку вновь добавляли 3 л воды, перемешивали и отстаивали. Промывание осадка повторяли 3-5 раз, пока надосадочная жидкость не становилась прозрачной. После этого осадок (матрикс) фиксировали 96%-ным этанолом в соотношении 1:1 по объему и переливали в другой сосуд для хранения. Емкость, в которой проводили промывание осадка, тщательно ополаскивали водопроводной водой, чтобы исключить контаминацию следующих исследуемых образцов.

В дальнейшем матрикс просматривали в лаборатории под бинокулярной лупой типа МБИ-15. Для этого порции матрикса по 1-2 мл помещали в чашку Петри, просматривали при 12,5-25-кратном увеличении. Обнаруженных нематод извлекали и помещали в пробирки или флаконы с 96%-ным этанолом. При микроскопировании обнаруженных нематод установлено, что 96%-ный этанол не оказывает разрушающего действия на их морфологические структуры, а при проведении ДНК-исследований были успешно получены различные фрагменты рибосомальной и митохондриальной ДНК размером порядка 700 нуклеотидов, что является достаточным для диагностических и таксономических исследований.

Пример 2. Сбор и фиксация нематод при гельминтологическом вскрытии сычуга и тонкого кишечника овцы.

Аналогично примеру 1 проводилось вскрытие брюшной полости овцы, отделение сычуга и участка тонкого кишечника (в данном случае длиной около 50 см), их выдерживание 1 час при температуре +4°C, разрезание, перенос содержимого в пластиковое ведро. Объем содержимого составил около 1 л, к нему добавляли 1 л воды, далее порядок действии был аналогичен указанным в примере 1. У собранных и зафиксированных нематод овцы морфологические структуры сохранились пригодными для микроскопирования, при проведении ДНК-исследований этих образцов были успешно получены фрагменты рибосомальной и митохондриальной ДНК размером порядка 700 нуклеотидов.

Пример 3. Сбор и фиксация нематод при гельминтологическом вскрытии сычуга и тонкого кишечника европейской косули.

Аналогично примерам 1 и 2 проводилось вскрытие брюшной полости европейской косули, отделение сычуга и участка тонкого кишечника (в данном случае длиной около 30 см), их выдерживание 1 час при температуре +4°C, разрезание, перенос содержимого в пластиковое ведро. Объем содержимого составил около 0,5 л, к нему добавляли 0,5 л воды, далее порядок действий был аналогичен указанным в примере 1. Собранные и зафиксированные образцы нематод европейской косули были пригодны для микроскопирования и ДНК-исследований.

Полученные результаты показывают, что предлагаемый «Способ сбора и фиксации нематод, паразитирующих в сычуге и тонком кишечнике жвачных животных», по сравнению с прототипом - методом полного гельминтологического вскрытия, является более простым в применении, минимизирует потери образцов при сборе, исключает смешивание образцов от разных животных, обеспечивает хорошую сохранность морфологических структур нематод и позволяет исследовать ДНК собранных образцов.

Литература

1. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е., А.И. Ятусевич, Пашкин П.И., Василевич Ф.И. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос. - 1998. - 743 с.

2. Ивашкин В.М., Контримавичус В.Н., Назарова Н.С. Методы сбора и изучения гельминтов наземных млекопитающих. - М.: Наука. - 1971. - 124 с.

3. Сафиуллин Р.Т. Распространение и экономический ущерб от основных гельминтозов жвачных животных // Ветеринария. - 1997. - №6. - С. 28-32.

4. Скрябин К.И. Метод полных гельминтологических вскрытий позвоночных, включая и человека. - М.: Изд-во МГУ, 1928. - 45 с.

5. Скрябин К.И., Петров A.M. Основы ветеринарной нематодологии. - М.: Колос - 1964. - 527 с.

6. Cintra M.C.R., Teixeira V.N., Nascimento L.V., Sotomaior C.S. Lack of efficacy of monepantel against Trichostrongylus colubriformis in sheep in Brazil // Veterinary Parasitology. - 2016. - V. 216. - P. 4-6.

7. Durette-Desset M.C., Hugot J.P. A cladistic analysis of the Trichostrongyloidea (Nematoda) // Int. J. Parasitol. - 1999. - V. 29 (7). - P. 1065-1086.

Способ сбора и фиксации нематод, паразитирующих в сычуге и тонком кишечнике жвачных животных, заключающийся в извлечении сычуга и тонкого кишечника с содержимым во время патологоанатомического вскрытия, выдержке их в течение 1 часа при температуре +4°C, отличающийся тем, что содержимое и соскобы слизистых оболочек сычуга и тонкого кишечника помещают в ведро или другую емкость, смешивая с водой в соотношении 1:1, отстаивают 10-15 минут, сливают надосадочную жидкость с повтором цикла 3-5 раз, пока надосадочная жидкость не становится прозрачной, и далее фиксируют осадок 96%-ным этанолом в соотношении 1:1, при этом у собранных и зафиксированных нематод морфологические структуры сохраняются пригодными для микроскопирования и проведения ДНК-исследований.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения массы микрочастицы в суспензии. Для этого осуществляют формирование измерительного объема между двумя электродами, соединенными с источником переменного напряжения и расположенными в камере с жидкостью, диспергирование в этот объем частицы, измерение параметров взаимодействия частицы с электрическим полем и последующее вычисление ее массы.

Способ диагностики мастита // 2607383

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для ранней диагностики мастита у коров. Способ заключается в том, что молоко в объеме 100-200 мкл наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препарата в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°С и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении.

Способ детекции белков // 2606852

Группа изобретений относится к медицине и касается системы детекции для электрохимического выявления белкового аналита, включающей наноструктурированный микроэлектрод, содержащий линкер на своей поверхности, где линкер присоединен к антителу или его фрагменту, способным связывать белковый аналит; и редокс-репортер, способный к переносу электронов с указанным наноструктурированным микроэлектродом, где связывание белкового аналита с указанными антителом или его фрагментом препятствует переносу электронов между указанным редокс-репортером и указанным наноструктурированным микроэлектродом.

Блок датчиков // 2593797

Изобретение относится к области измерений для диагностических целей. Блок датчиков для проведения диагностических измерений, размещенных на поверхности тела, включает основание, содержащее выемку, в которой закреплен пьезоэлемент датчика давления.

Способ анализа цитохрома с в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеивания на наноструктурированных покрытиях // 2585118

Настоящее изобретение относится к области биоаналитических исследований и представляет собой способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), включающий подготовку митохондрий и их нанесение на подложку на основе диэлектрического химически инертного материала с наноструктурированным покрытием толщиной 1-10 мкм в виде кольцевых наноструктур серебра, при этом ободки серебряных колец состоят из сообщающихся друг с другом пористых агрегатов серебра, на поверхности которых расположены округлые наночастицы серебра размером 2-90 нм, с последующей иммобилизацией митохондрий на данные наноструктурированные покрытия, детектирование спектров ГКР с последующей расшифровкой характеристических колебаний анализируемой пробы спектров ГКР с использованием стандартного программного обеспечения.

Способ прогнозирования развития тяжёлого гнойного трахеобронхита при термоингаляционном поражении дыхательных путей // 2579315

Изобретение относится к медицине, в частности к фибробронхоскопии, и описывает способ прогнозирования развития тяжелого гнойного трахеобронхита при термоингаляционном поражении дыхательных путей методом хемилюминесценции.

Способ и аппарат для измерения иммунной и кислородной системы и скрининга лекарственных средств // 2574000

Группа изобретений относится к области мониторинга здоровья по части функции иммунной системы и измерения эффектов токсинов и других воздействий. Способ включает в себя предоставление аппарата, предоставление образца крови, установление базового значения молекулярного кислорода, приложение воздействия на упомянутый образец, получение данных об изменении концентрации молекулярного кислорода и скорости ее изменения, а также сравнение полученных данных с данными здорового индивидуума.

Биолюминесцентный способ определения антиоксидантной активности вещества // 2571229

Предложен способ определения антиоксидантной активности вещества, предусматривающий приготовление контрольных проб, содержащих буферный раствор и биолюминесцентный сенсор, определения исходной интенсивности биолюминесценции.

Способ прогнозирования перинатального поражения цнс у недоношенных новорожденных // 2568914

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования перинатального поражения ЦНС у недоношенных новорожденных, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в 10% гомогенате плаценты, взятой сразу после преждевременных родов, методом капиллярного электрофореза определяют содержание глутамата и агматина, рассчитывают их соотношение и при величине коэффициента, равного 1,70 и ниже, прогнозируют перинатальное поражение ЦНС у недоношенных новорожденных.

Способ комплексной оценки прогноза течения и эффективности лечения гипертрофии глоточной миндалины и хронического аденоидита у детей по оксидант/антиоксидантной активности кожи // 2565838

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано при выборе тактики лечения гипертрофии глоточной миндалины и хронического аденоидита.

Пробоотборник почвы для радиологических измерений // 2617395

Изобретение относится к области экологических и радиоэкологических исследований и предназначено для оценки содержания и распределения химических элементов, в том числе радионуклидов в почвенном слое.

Способ пробоподготовки биоорганических образцов // 2617364

Изобретение относится к методам пробоподготовки биоорганических, в том числе медицинских образцов для определения в них изотопного соотношения 14С/12С и 14С/13С с помощью ускорительного масс-спектрометра (УМС).

Способ отбора проб жидкости из газожидкостного потока в трубопроводе и устройство для его осуществления // 2616780

Группа изобретений относится к технологии и технике отбора проб жидкости из газожидкостного потока в трубопроводе и может найти применение в нефтедобывающей и других отраслях промышленности, где требуется осуществление отбора представительной пробы ручным или автоматическим способом.

Устройство для размещения объекта, подлежащего медицинскому исследованию посредством продувки // 2616722

Изобретение относится к устройству для размещения объектов, подлежащих медицинскому исследованию посредством продувки. Устройство содержит средство крепления контейнера, узел всасывания со средством выталкивания и всасывания воздуха, узел нагнетания воздуха для создания, средство перемещения фильтра к узлу всасывания и узлу нагнетания воздуха.

Способ изготовления модельного образца для определения деформаций // 2616671

Изобретение относится к прокатному и кузнечно-прессовому производству при исследовании напряженно-деформированного состояния металла в различных процессах пластического формоизменения.

Устройство для отбора и разведения порций радиоактивного раствора // 2616657

Изобретение относится к области радиохимии и может быть использовано при подготовке разведенных порций высокоактивных растворов в условиях каньонов, тяжелых боксов или защитных камер в целях анализа состава этих растворов.

Устройство для сбора, хранения и транспортировки биологического материала живых организмов и растений // 2616242

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, сельскому хозяйству и может быть использовано для сбора, хранения и транспортировки биологических материалов.

Способ применения устройства маятникового скрайбирования для получения корней стружек при резании // 2613569

Изобретение относится к области способов исследования материалов путем получения корней стружек при резании с последующим их изучением. Сущность: осуществляют установку и закрепление образца на столе устройства, задание маятнику начальной энергии путем оснащения грузом некоторой массы и поворота маятника вокруг оси качания в исходное положение, позиционирование образца смещением предметного стола относительно траектории качательного движения маятника.

Способ изготовления гистологических препаратов // 2613175

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к гистологии, и к гистологической технике и может быть использовано в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений и морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.Изобретение решает задачу создания ускоренного способа изготовления гистологических препаратов, которые можно было бы длительное время хранить в условиях лабораторий и многократно использовать для изучения.

Установка для получения водного конденсата из воздуха и способ концентрирования примесей из воздуха, осуществляемый на этой установке // 2612719

Группа изобретений относится к получению водного конденсата из воздуха и способу концентрирования примесей из воздуха, которые могут быть использованы для высокочувствительного определения примесей в воздухе при проведении экологических исследований.

Образец для определения модуля упругости и предела прочности высокомодульных углепластиков при сдвиге в плоскости листа // 2617776

Изобретение относится к испытательной технике, а именно к образцам, и позволяет испытывать полимерные композиционные материалы (ПКМ) на сдвиг в плоскости листа, а точнее высокомодульные углепластики, с укладкой слоев под углом ±45°. Испытательный образец для определения модуля упругости и предела прочности высокомодульных углепластиков при сдвиге в плоскости листа, выполнен в форме прямоугольной пластины с защитными накладками, имеющей рабочую часть, состоящую из двух рабочих зон между симметрично расположенными на противоположных сторонах пластины двумя парами вырезов U-образной формы вдоль линии приложения нагрузки. Радиус скругления R каждого выреза составляет диапазон величин от 5 до 10 мм, при этом размеры рабочей зоны выбираются из соотношения: l/b=5÷10, где l - длина рабочей зоны, b - ширина рабочей зоны. В центральной части образца перпендикулярно линии приложения нагрузки выполнены сквозные отверстия. Предлагаемый образец позволяет достичь при испытаниях равномерного напряженно-деформированного состояния в рабочей части образца, обеспечить максимальное снижение уровня концентраторов напряжений, что дает возможность повысить точность и достоверность определения прочностных характеристик высокомодульных углепластиков. 4 ил., 1 табл.