Система для получения аутологичной сыворотки

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

A61K38/20 - интерлейкины

Владельцы патента RU 2617537:

Общество с ограниченной ответственностью "Просто лаборатория" (RU)

Изобретение относится к медицине и касается системы для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительного цитокина, включающей шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β, содержащий стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и по меньшей мере один шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β, и стерильный переходник, выполненный с возможностью перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β. Изобретение обеспечивает значительное снижение концентрации провоспалительного цитокина ИЛ-1β и повышение эффективности лечебного действия аутологичной концентрированной сыворотки. 3 з.п. ф-лы, 3 пр., 7 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к системе для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA, факторов роста и со сниженным содержанием провоспалительных цитокинов и других провоспалительных факторов, и может быть использовано для получения препаратов аутологичной плазмы в различных вариантах, активно использующихся в медицине для лечения широкого спектра заболеваний.

Среди провоспалительных цитокинов наиболее значимыми в настоящее время считаются IL-1 и TNF-a.

К сожалению, применение лекарственных препаратов, блокирующих данные цитокины (ремикейд, адалимумаб), не может осуществляться рутинно для лечения дегенеративных заболеваний из-за большого числа ограничений и стоимости. Однако применение биотехнологии по увеличению IL-1RA (антогониста интерлекина 1 IL-1) в сыворотке крови (аутологичная концентрированной сыворотка - ACS) и введение данного препарата внутрисуставно (паравертебрально, парасухожильно и т.п.) дают в эксперименте и клинике положительные результаты.

Основной целью исследования является поиск способов стимуляции высвобождения из клеток крови противовоспалительных цитокинов в высоких концентрациях и удаления образующихся провоспалительных цитокинов (и других факторов). При этом предполагается стимулировать выделение цитокинов инертными, легкоудаляемыми компонентами или средами.

Препараты аутологичной плазмы служат ценным дополнением и альтернативой существующим подходам к лечению. Ни один другой вид инъекционной терапии (например, введение кортикостероидов или гиалуроновой кислоты) не обладает выраженностью и продолжительностью эффекта, характерных для данного метода.

Терапия препаратами аутологичной плазмы предполагает введение в пораженный сустав, места энтезопатий или в воспаленное сухожилие аутологичной кондиционированной сыворотки (АКС) с повышенным содержанием антагониста рецепторов к интерлейкину 1 (IL-1RA).

Исследование по болям в спине, проведенное Бохумским университетом (Becker et al., 2007), сравнивало терапию препаратами аутологичной плазмы с кортикостероидами при эпидуральном периневральном введении. Никаких специфических побочных эффектов не наблюдалось.

Терапия препаратами аутологичной плазмы признана на международном уровне как высокоэффективный, инновационный метод локальной терапии; преимущества данного метода описаны в специализированных медицинских изданиях.

Из уровня техники известны технические решения.

Известен аппарат для получения терапевтически активных белков в крови (международная заявка №2015085348, 18.06.2015), включающий пробирку, содержащую гранулы с силикатным покрытием. После сбора крови пробирку инкубируют в асептических условиях при 37°С в течение 24 ч. После инкубации в каждую пробирку центрифугируют (3500 оборотов в минуту, 10 мин) и верхний слой, будучи плазмы или сыворотки, переводят в стерильный шприц и вводят обратно пациенту.

Также известна система для получения антагониста рецептора интерлейкина-1 или терапевтически эффективного белка, выбранная в качестве ближайшего аналога патентуемому решению (США №2010125236, 20.05.2010). Кровь получают от пациента с помощью обычного шприца, а затем вводят в двойную люэровскую центрифужную пробирку. Центрифужная пробирка снабжена шариками с силанизированным покрытием. Пробирку затем инкубируют и центрифугируют. После инкубации и центрифугирования сыворотки, содержащей терапевтически активные аутологичные белки, такие как IL-1RA, получившуюся плазму вводят обратно в организм пациента.

Однако исследования последних лет показали, что известные методики приводят к увеличению в сыворотке крови как противовоспалительных, так и прововоспалительных цитокинов одновременно. А этот факт ставит под сомнение однозначную эффективность применения полученных продуктов при лечении хронических и острых артритов.

Техническим результатом предлагаемого технического решения является значительное снижение концентрации провоспалительного цитокина ИЛ-1β (возможно дополнительно ФНО-α, ИЛ-6, ММП), как следствие, повышение эффективности лечебного действия аутологичной концентрированной сыворотки.

Заявленный технический результат достигается за счет применения конструкции многокомпонентной системы для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительных цитокинов, включающей один шприц (шприц 1), внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β (возможно дополнительно к ФНО-α, ИЛ-6), кроме стенок твердофазный полимерный сорбент может быть расположен на дополнительной структуре (губке, сетке, системе трубочек) внутри шприца, содержащего стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и 3-6 шприцов (шприц 2), внутренние стенки которых покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β (возможно дополнительно ФНО-α, ИЛ-6), и стерильный переходник для перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β.

Также может применятся один трехкомпонентный шприц для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительных цитокинов, что также обеспечивает указанный результат.

Технический результат достигается за счет реакции антиген-антитело, при которой ИЛ-1 (возможно ИЛ-6, ФНО-α), образующийся при получении аутологичной сыворотки или находящийся изначально в крови человека в повышенной концентрации, связывается со специфическим белком (моноклональным антителом), в ходе этой реакции на твердофазном сорбенте остается фиксированным комплекс моноклональное антитело - ИЛ-1 (возможно дополнительно моноклональное антитело - ФНО-α, моноклональное антитело - ИЛ-6), а находящаяся в шприце свободно аутологичная сыворотка содержит значительно сниженное количество ИЛ-1β (возможно ИЛ-6, ФНО-α).

Шприц 1 по сути является пробиркой, выполняющей функцию шприца за счет вакуума и двухсторонней иглы.

Использование дополнительной пористой структуры или различных вариантов ребристости стенки пробирки (шприца 1) увеличивает площадь соприкосновения плазмы и фиксированных на твердой фазе антител, в большей степени обеспечивая фиксацию провоспалительных цитокинов и меньшую их концентрацию в получаемой плазме.

Объем шприца, стенки которого покрыты антителом к IL-1b (возможно дополнительно к ИЛ-6, ФНО-α), составляет от 20 до 60 мл. Наиболее вероятно использование моноклональных мышиных антител, полученных путем гибридомной технологии, также возможно использование других видов генно-инженерных моноклональных антител.

Объем шприца, стенки которого покрыты изнутри человеческим IL-1β (возможно дополнительно ИЛ-6, ФНО-α), пригодного для употребления in vivo, для элиминации мышиных моноклональных антител, составляет 5-10 мл.

Стерильный переходник представляет собой полимерную трубку диаметром до 4 мм и длиной от 40 до 100 мм, которая также изнутри может быть покрыта или моноклональными антителами или человеческим IL-1, в зависимости от необходимости. Переходник дает возможность делать многократные пассажи плазмы, таким образом стимулируя связывание провоспалительных цитокинов с фиксированными антителами.

Далее решение поясняется ссылками на фигуры, на которых представлено следующее.

Фиг. 1 - варианты выполнения первого шприца.

Фиг. 2 - вид шприца с фиг.1 сверху.

Фиг. 3 - варианты выполнения шприца с дополнительной пористой структурой.

Фиг. 4 - вид сектора шприца с дополнительной пористой структурой сверху.

Фиг. 5 - схема выполнения процесса получения плазмы с помощью двух шприцев.

Фиг. 6 - схема выполнения процесса получения плазмы с помощью переходника и двух шприцев.

Фиг. 7 - схема выполнения процесса получения плазмы с использованием трехкомпонентного шприца.

Система включает шприц 1 (поз. 1), внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом (поз. 2) с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β (возможно дополнительно к ФНО-α, ИЛ-6). Кроме стенок твердофазный полимерный сорбент может быть расположен на дополнительной структуре (губке, сетке, системе трубочек) (поз. 4) внутри шприца 1. Шприц 1 содержит стеклянные шарики (поз. 3) диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и 3-6 шприцев (шприц 2), внутренние стенки которых покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β (возможно дополнительно ФНО-α, ИЛ-6), и стерильный переходник (поз. 5, 7) для перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β.

Получение аутологичной сыворотки посредством предлагаемой системы осуществляется следующим образом. Кровь получают от пациента с помощью обычного шприца и вводят в шприц 1 (поз. 1), возможно введение в шприц 1 не только крови, но и других аутологичных жидкостей, плазмы, плазмы, обогащенной тромбоцитами. Шприц 1 затем инкубируют. Инкубация осуществляется на специально предназначенной для этих целей стойке (с возможностью придания шприцу 1 дополнительно качательных движений или определенных циклов пространственного положения с изменением угла наклона к горизонту от 90 до 30°, при температуре 36,5-37°С в течение 2-24 часов. Для инкубации могут быть использованы, например, стойки фирм LABMEDIX (http://labmedix.ru/preanalitika/miksery/programmiruemyj-rotator-vstryaxivatel-rm-1.html), ВИЛИТЕК (http://vilitek.ru/products/173/868/). GFL (http://deltaanalytics.ru/3025.php) и другие стойки с подобными характеристиками. Центрифугирование может быть осуществлено как до инкубации, так и после, возможно добавление дополнительного цикла инкубации. При окончании этого этапа в шприце в верхней части образуется, в зависимости от объема взятой крови, 5-25 мл аутологичной сыворотки.

В шприц 1 после асептической обработки вставляют стерильный переходник (поз. 5, 7), по которому полученная сыворотка перемещается из шприца 1 в шприц 2 (поз. 6). Перемещение может быть осуществлено в нескольких режимах, с изменением параметров скорости и возможной сменой направления потока. Наиболее вероятно использование режима с малой скоростью, обеспечивающей переход сыворотки из шприца 1 в шприц 2 в течение 5-15 минут.

Система, состоящая из шприцев 3 (поз 8). Система совмещает в одном шприце все принципиальные детали процесса получения плазмы, с повышенным содержанием IL-1RA, с низким содержанием провоспалительных цитокинов. Система состоит из вакуумной пробирки, преобразующейся в шприц объемом 5-10 мл, содержащего стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 30-40% от общего объема шприца и поршня, состоящего из множества капилляров, покрытых изнутри твердофазным сорбентом с фиксированными на нем антителами к ИЛ-1 (возможно, дополнительно к ИЛ-6, ФНО-α). В шприце предусмотрен фиксатор поршня в положении 2 (поз. 10).

Заявленная система может быть реализована в следующих процессах получения аутологичной сыворотки.

Процесс 1.

Процесс получения плазмы с помощью двух шприцев: шприц 1 (поз. 1) и шприц 2 (поз. 6). Кровь центрифугируется в шприце 1 (возможна любая модификация), затем полученная плазма набирается в шприц 2 с помощью универсального переходника с двухсторонними иглами (поз. 5). В процессе провоспалительные цитокины связываются с антителами и фиксируются на полимере (шприц 1), а остатки антител удаляются в шприце 2 с помощью ИЛ-1.

Процесс 2.

Кровь центрифугируется в шприце 1 (возможна любая модификация), затем полученная плазма набирается в шприц 2 с помощью универсального переходника с двухсторонними иглами (поз. 5). В процессе провоспалительные цитокины связываются с антителами и фиксируются на полимере (шприц 1), а остатки антител удаляются в шприце 2 с помощью ИЛ-1. Процесс может быть интенсифицирован с помощью прохождения крови через переходник (поз. 7), который изнутри покрыт антителами к провоспалительным цитокинам (ИЛ-1) (возможен вариант размещения на внутренней поверхности переходника фиксированного ИЛ-1).

Процесс 3.

Кровь центрифугируется в шприце 3 (поз. 8) (поршень находится в положении 1 (поз. 9)). Затем поршень переводится из положения 1 (поз. 9) в положение 2 (поз. 10) с помощью иглы, которая вводится в пробирку. Полученная плазма медленно проходит сквозь капилляры поршня, внутренняя поверхность которых покрыта моноклональными антителами к ИЛ-1 (возможно к ФНО, ИЛ-6). Провоспалительные цитокины (ИЛ-1, возможно ФНО, ИЛ-6) связываются с антителами и фиксируются на полимере. Поршень смещается иглой до фиксатора. Этой же иглой плазма набирается в шприц (универсальный), которым осуществляется инъекция.

1. Система для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительного цитокина, включающая шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β, содержащий стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и по меньшей мере один шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β, и стерильный переходник, выполненный с возможностью перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β.

2. Система по п. 1, в которой дополнительно используются моноклональные антитела к ФНО-α и/или ИЛ-6.

3. Система по п. 1, в которой дополнительно используются человеческие ФНО-α и/или ИЛ-6.

4. Система по п. 1, в которой твердофазный полимерный сорбент расположен на дополнительной структуре, представляющей собой губку, и/или сетку, и/или систему трубочек внутри первого шприца.

Группа изобретений относится к области молекулярной диагностики и может быть использована для диагностики заболеваний с помощью молекул биомаркеров. Устройство для обнаружения специфической молекулы-мишени или биомаркера путем определения изменения электрических свойств включает: измерительный датчик, включающий проводящую или полупроводящую структуру; систему электродов, передающих сигнал от устройства; и контрольный датчик, имеющий структуру, идентичную измерительному датчику, но защищенную, т.е.

Способ диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей // 2617419

Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и касается способа диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей. Сущность способа заключается в изучении клинических, морфологических и иммуногистохимических показателей слизистой оболочки желудка на наличие антигенов простого герпеса, цитомегаловируса и вируса Эпштейн-Барр.

Способ прегравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода // 2617249

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской кардиологии, и касается предгравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода.

Способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению // 2617061

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению, включающий обследование женщин в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), отличающийся тем, что у женщин с хроническим эндометритом на 19-21 день менструального цикла получают смыв из полости матки, в котором методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют содержание альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) и при содержании а2-МГ равном или более 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как низкую, рекомендуют дополнительное лечение и перенос сроков ЭКО, а при содержании а2-МГ менее 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как высокую и рекомендуют инициацию программы ЭКО.

Способ прогнозирования риска развития инфекционного эндокардита // 2617060

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и хирургии, и может быть использовано для прогнозирования генетической предрасположенности или повышенного риска развития инфекционного эндокардита (ИЭ) у пациентов из группы риска.

Способ прогнозирования осложненного течения острых респираторных инфекций у детей // 2617046

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения ОРИ у детей. Для этого у детей путем в браш-биоптате слизистой носо-ротоглотки определяют местный неспецифический секреторный иммуноглобулин А, колонизационную активность: индекса инфицирования, индекса адгезии, степени деструкции эпителиоцитов и уровень внеклеточного фосфатидилхолина.

Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита // 2617044

Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого риносинусита. Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита включает исследование сыворотки крови больного до начала лечения и определение уровней цитокинов интерлейкина - 6 (IL-6) и γ-интерферона (γINF) пг/мл, после чего вычисляют коэффициент диагностики K по формуле: K=IL-6/γINF, и при значении K≤1,4 диагностируют вирусный риносинусит, при выполнении условия 1,4<K<2,5 диагностируют поствирусный риносинусит, при значении K≥2,5 диагностируют бактериальный риносинусит.

Способ прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации // 2616902

Изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Способ состоит в том, что в лейкоцитах периферической крови беременной на 5-11 неделе гестации с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровни экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR4 и TLR9, гена противомикробного пептида HBD1.

Способ определения пола плода // 2616901

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития. Способ определения пола плода заключается в определении уровня антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке крови, в сроки 7, а также 9-10 недель беременности, и при увеличении АМГ в 2,6 и более раз за этот период диагностируют наличие плода мужского пола, при увеличении его не выше чем в 1,5 раза - наличие плода женского пола.

Способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства // 2616898

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов.

Способ активации цитотоксических лимфоцитов человека // 2603079

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения активированных цитотоксических лимфоцитов, и может быть использовано в медицине. Выделяют периферические мононуклеары из крови онкологических больных или доноров и культивируют их в бессывороточной среде ex-vivo с добавлением рекомбинантных человеческих IL-2 в концентрации от 125 нг/мл до 500 нг/мл и IL-15 в концентрации от 2,5 нг/мл до 5 нг/мл.

Способ локальной иммунокоррекции при проведении дентальной имплантации с одномоментным закрытым синус - лифтингом // 2600867

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической стоматологии, и может быть использовано для локальной иммунокоррекции при проведении дентальной имплантации с одномоментным закрытым синус-лифтингом.

Способ локальной иммунокоррекции при лечении осложненных переломов нижней челюсти // 2599509

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической стоматологии, и может быть использовано для локальной иммунокоррекции при лечении осложненных переломов нижней челюсти у пациента.

Способ лечения рассеянного склероза у детей // 2596792

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано в медицинской практике для лечения рассеянного склероза (PC) у детей. Способ включает плазмаферез, иммунокорригирующую и противовирусную терапию.

Способ лечения онкологических больных цитотоксическими лимфоцитами // 2596505

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения онкологических больных цитотоксическими лимфоцитами. Для этого проводят взятие венозной крови у онкологического больного или донора, выделение лимфоцитов.

Способ лечения инсульта // 2571282

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения инсульта. На фоне базисной и дифференцированной терапии дополнительно вводят антагонист рецептора интерлейкина-1 - ралейкин в дозе 15-25 мг на килограмм массы тел.

Мутеины липокалина слезы, связывающие альфа il-4 r // 2569745

Группа изобретений относится к новым мутеинам, полученным из липокалина слезы человека, которые связываются с альфа-рецептором IL-4. Последовательности этих мутеинов содержат конкретные комбинации аминокислот.

Способ лимфотропной терапии при маститах у коров // 2568918

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для комплексной терапии коров с острыми и хроническими маститами. Способ включает поочередное введение лимфотропно через одну иглу растворов 6.4 ME гиалуронидазы, растворенной в 1 мл 0,5%-ного раствора новокаина, затем, 500000 ME ронколейкина, растворенного в 50 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, а затем половинной суточной дозы Кобактана 2,5%-ного в область основания соска пораженной доли вымени 3 раза с интервалом 24 часа.

Способ получения препарата интерлейкина-2, препарат интерлейкина-2 и фармацевтический иммуномодулирующий препарат // 2565553

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к способу получения препарата интерлейкина-2, препарату интерлейкина-2, полученному указанным способом, и фармацевтическому препарату, содержащему указанный препарат интерлейкина-2.

Способ превентивной терапии ринальных осложнений после травмы носа // 2559587

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано для лечения пациентов с сочетанной травмой носа и черепно-мозговой травмой в первые сутки после травмы.

Способ профилактики постнатального заражения вирусом лейкоза крупного рогатого скота молодняка крупного рогатого скота // 2621146

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики постнатального заражения вирусом лейкоза крупного рогатого скота молодняка крупного рогатого скота. Способ включает одновременное применение ронколейкона и фоспренила, риботана и анандина по следующей схеме: ронколейкин в дозе 100000 МЕ/гол., фоспренил в дозе 5 мл/гол., анандин в дозе 10 мл/гол. внутримышечно, риботан в дозе 2 мл/гол. подкожно 1 раз в месяц в течение 6 месяцев. Использование заявленного изобретения обеспечивает восстановление активности иммунной системы и естественной резистентности до показателей физиологической нормы, повышая иммунобиологические и защитные свойства организма животных в отношении повышения устойчивости животных к заражению ВЛКРС. 11 табл., 4 пр.