Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма



Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма
Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма
Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма

 


Владельцы патента RU 2618196:

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине и андрологии. Для моделирования первичного мужского гипогонадизма осуществляют ишемическое воздействие на тестикулы путем временного наложения лигатуры сроком на 3 суток. Лигатуру накладывают с силой деформирующего воздействия 3-4 Н в одностороннем порядке путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока. Одновременно с наложением лигатуры удаляют контралатеральный тестикул. Способ позволяет избежать развития таких побочных эффектов, как некроз тестикула или развитие экскреторного бесплодия, за счет контролируемого деформирующего воздействия и сохранения коллатерального кровотока. 5 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и андрологии, и предназначено для моделирования первичного мужского гипогонадизма у лабораторных животных.

Мужской гипогонадизм - патологическое состояние, обусловленное уменьшением уровня андрогенов в организме или снижением чувствительности к ним. Первичный гипогонадизм вызван нарушением функции половых желез (Дедов И.И. и др., Эндокринология, М., Гэотар-Медиа, 2007 г.). Андрогены играют ключевую роль не только в поддержании репродуктивной и сексуальной функций мужского организма. Прослеживается взаимосвязь между снижением уровня андрогенов и деминерализацией костей, саркопенией, нарушением метаболизма жиров, депрессией, повышенной утомляемостью, угасанием когнитивных функций и пр. (Dohle GR et al., Guidelines on male hypogonadism, Arnhem (The Netherlands), Europian Assotiation of Urology, 2012). Имеются данные о том, что снижение уровня тестостерона и увеличение 17β-эстрадиола коррелируют с повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний и сердечно-сосудистой смертности (Corona G. et al., Hypogonadism as a risk factor for cardiovascular mortality in men: a meta-analytic study. Eur J Endocrinol., 2011; 165(5):687-701).

На сегодняшний день основным методом лечения первичного мужского гипогонадизма остается заместительная терапия андрогенами, которая имеет ряд противопоказаний и побочных эффектов. Успешно устраняя некоторые симптомы андрогенодефицита, экзогенный тестостерон подавляет сперматогенез и лишь усугубляет такое значимое проявление гипогонадизма, как мужская инфертильность (Kliesch S. Testosterone and infertility. Urologe A, 2010; 49(1):32-6). Согласно европейским рекомендациям в рамках лечения мужского бесплодия заместительная терапия тестостероном строго противопоказана (Jungwirth A., Guidelines on male infertility, Arnhem (The Netherlands), European Association of Urology; 2013).

Таким образом, существует потребность в поиске новых подходов к лечению первичного мужского гипогонадизма, нацеленных на восстановление собственного андрогенпродуцирующего аппарата. Для исследований в этой области необходимо использование удобной экспериментальной модели первичного гипогонадизма.

Так, из уровня техники известен способ моделирования первичного мужского гипогонадизма, заключающийся в введении животным водного раствора 0,1% хлорида кадмия интраперитонеально из расчета 3 мг/кг веса животного (Пахомов А.В., Коррекция нарушений полового поведения самцов крыс при экспериментальном гипогонадизме, вызванном введением хлорида кадмия, путем гормонотерапии и трансплантации суспензии интерстициальных клеток, Вестник Харьковского национального университета им. В.Н. Каразина. Серия: биология, Вып. 17, №1056, 2013 г., с. 173). Недостатком данного способа является высокая токсичность для всего организма экспериментального животного.

Известен также способ моделирования первичного мужского гипогонадизма, заключающийся в фиксации яичек животных в районе латеральных каналов брюшной полости в течение 3 недель и последующем низведении их в мошонку, с рассечением сформированных спаек (Камалов А.А. и др., Особенности регенерации тестикулярной ткани и восстановление фертильности у крыс на фоне ксенотрансплантации обогащенных фетальных клеточных культур при двухстороннем абдоминальном крипторхизме, Урология, №6, 2008 г., с. 7-11). Недостатком данного способа является частое самопроизвольное восстановление половой функции у животного.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ моделирования первичного мужского гипогонадизма, заключающийся в ишемическом воздействии на тестикулы путем временного наложения лигатуры (Куликова П.А. и др., Экспериментальная модель первичного мужского гипогонадизма, Альманах клинической медицины, №31, 2014 г., с. 22-24). Лигатуру накладывали на дистальную часть семенного канатика (funiculus spermaticus) обоих яичек, что приводило к частичной окклюзии яичковой артерии (arteria testicularis). Данную манипуляцию проводили при помощи хирургической иглы и нити. Модель характеризуется стойким снижением гормонпродуцирующей функции, инфертильностью, отсутствием токсического воздействия на организм экспериментальных животных, технической доступностью. Однако данный способ имеет и ряд недостатков - наличие погрешности за счет двустороннего воздействия, существует риск некроза тестикула за счет неконтролируемого давления наложенной лигатурой в дистальной части семенного канатика, одновременная перевязка семявыносящего протока приводит к риску экскреторного бесплодия.

Таким образом, существует потребность в способе моделирования первичного мужского гипогонадизма, лишенном всех вышеуказанных недостатков.

Техническим результатом настоящего изобретения является простота, снижение погрешности в эксперименте, снижение риска некроза тестикула за счет контролируемого воздействия и исключение риска развития экскреторного бесплодия.

Этот технический результат достигается тем, что в предлагаемом способе моделирования первичного мужского гипогонадизма, включающем ишемическое воздействие на тестикулы путем временного наложения лигатуры, лигатуру накладывают в одностороннем порядке с одновременным удалением контралатерального тестикула путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока, при этом накладывают лигатуру с силой деформирующего воздействия 3-4 Ньютон (Н).

Способ осуществляют следующим образом.

Исследование проводили на крысах-самцах Wistar (n=164), возраст два месяца (соответствует массе 200-220 г). Ишемическое воздействие на тестикулы осуществляли путем временного наложения лигатуры в одностороннем порядке. Лигатуру накладывали путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока. Лигатуру накладывали и затягивали под контролем портативного миниатюрного динамометра (Фиг. 1) таким образом, чтобы сила ее воздействия составила 3-4 Н. Под петлю лигатуры (1), полностью охватывающую семенные вену (2) и артерию (3) без сдавливания, заводили крючок (4) неподвижно зафиксированного динамометра и затягивали концы лигатуры (5) до достижения значения в диапазоне 3-4 Н, после чего фиксировали лигатуру вторым узлом (Фиг. 2). Данную манипуляцию проводили при помощи хирургической иглы и нити (Vicryl Plus, Johnson & Johnson).

Минимальный срок окклюзии, после которого не отмечалось восстановления массы и размеров тестикул на отдаленных сроках после инициации гипогонадизма (два месяца и более), - трое суток.

Одномоментно с наложением лигатуры проводили удаление контрлатерального тестикула. Исследовали массу, линейные размеры семенников и уровень тестостерона через 48, 120, 134, 263 суток после инициации гипогонадизма. Также проводили тест на фертильность, для чего одного самца через 48 суток после инициации гипогонадизма подсаживали к пяти половозрелым самкам (всего исследовали 20 самцов и 100 самок). Оценивали количество покрытых самок.

Измерение тестостерона проводили на иммуноферментном автоматическом анализаторе HTI BioChem Analette. Все хирургические манипуляции выполняли под общей анестезией (Золетил и Ксилазин). Для забора крови и выделения семенников с целью взвешивания осуществляли эвтаназию экспериментальных животных путем введения летальной дозы анестетика - 200 мг/кг массы тела.

Животных содержали в стандартных условиях вивария при температуре 21-23°C. Они получали сбалансированный гранулированный корм, свободный доступ к питьевой воде. Исследования проводили по протоколам, одобренным Комиссией по этике Института теоретической и экспериментальной биофизики РАН. Работа выполнена с соблюдением принципов Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным, принципов гуманности, изложенных в директиве Европейского сообщества (86/609/ЕС), в Приказе Минздрава СССР №755 от 12 августа 1977 г. «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных». Статистическую обработку данных проводили с помощью программ Statistica 6.0, Microsoft Office Excel 2010.

Было показано, что линейные размеры семенников крыс, перенесших инициацию гипогонадизма с помощью предлагаемого способа, в 4-5 раз меньше, чем у интактных самцов того же возраста (контроль), на всех исследуемых сроках - через 48, 120, 134, 263 суток (Фиг. 3, (1) - тестикул животного на 48-е сутки после инициации первичного гипогонадизма по предлагаемому способу, (2) - тестикул контрольного животного на аналогичном сроке) (р<0,05). Измерение массы тестикул показало, что данная масса у экспериментальных животных значимо ниже таковой у группы интактного контроля (р<0,05) (Фиг. 4, измерения массы тестикул через 8 мес. после инициации гипогонадизма). Однако очевидно, что масса семенников при изучении гипогонадизма является косвенным параметром, и основной интерес представляет уровень тестостерона исследуемых животных. Измерение общего тестостерона показало, что уровень этого гормона у экспериментальных животных значимо ниже такового у группы интактного контроля (р<0,05) (Фиг. 5, измерение уровня тестостерона через 8 мес. после инициации гипогонадизма). Тест на фертильность был отрицательным - ни одна из самок, подсаженных к экспериментальным животным, не дала потомства.

Среди существенных признаков, характеризующих способ, отличительными являются:

- наложение лигатуры в одностороннем порядке с одновременным удалением контралатерального тестикула;

- открытая селективная перевязка семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока;

- сила деформирующего воздействия лигатуры составляет 3-4 Н.

Между совокупностью существенных признаков и заявляемым техническим результатом существует причинно-следственная связь. Так, наложение лигатуры в одностороннем порядке с одновременным удалением контралатерального тестикула позволяет повысить точность исследования за счет воздействия на конкретный тестикул. Открытая селективная перевязка семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока и определенный диапазон силы деформирующего воздействия лигатуры позволяют снизить и практически исключить риск некроза тестикула, подвергающегося воздействию, при этом максимально точно смоделировать первичный гипогонадизм у лабораторного животного.

Таким образом, предлагаемый способ прост, доступен, обладает высокой точностью и позволяет избежать развития таких побочных эффектов, как некроз тестикула или развитие экскреторного бесплодия.

Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма, включающий ишемическое воздействие на тестикулы путем временного наложения лигатуры сроком на 3 суток, отличающийся тем, что лигатуру накладывают с силой деформирующего воздействия 3-4 Н в одностороннем порядке путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока, одновременно с наложением лигатуры удаляют контралатеральный тестикул.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицинской технике. Тренажерное устройство содержит узел корпуса, содержащий наружный корпус, запускающий узел и демпферный блок, вставленные в наружный корпус.

Изобретение относится к экспериментальной и спортивной медицине, в частности к способам моделирования физического переутомления у крыс в условиях десинхроноза. Нагрузку на животного осуществляют в два этапа.

Изобретение относится к экспериментальной биологии и предназначено для исследования поведенческих реакций лабораторных животных. Для этого предложена модифицированная тест-установка «Открытое поле».

Изобретение относится к медицине, а именно к количественной гистохимической оценке адаптации организма к воздействию низкой температуры окружающей среды. Для этого устанавливают холодовую анестезию у экспериментального животного путем количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для изучения особенностей формирования химического ожога пищевода в эксперименте. Способ включает введение в пищевод животного, подобранного по величине просвета пищевода зонда, имеющего боковые отверстия, и доставку по зонду химического агента.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам экспериментального моделирования процессов, протекающих в полости рта человека, в частности, образования зубного камня.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, иммунологии, патофизиологии, в частности к оценке изучения иммунопатогенетических особенностей хронической почечной недостаточности (ХПН) и методам коррекции данной патологии на модели лабораторных животных.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано для моделирования лимфогенного и гематогенного метастазирования меланомы B16.
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, в частности к изучению состояний, связанных с локальным снижением минеральной плотности костей. Для моделирования этого состояния у кроликов вначале выбирают кость для моделирования.
Изобретение относится к медицине, к экспериментальной онкологии, и может быть использовано для моделирования светлоклеточного рака почки. Способ заключается в том, что крысам самкам проводят внутрибрюшинное введение формальдегида в дозе 1-1,5 мг/кг и фуросемида в дозе 0,8-1,7 мг/кг один раз в неделю в течение 2-3 недель.

Группа изобретений включает хирургический инструмент и способ запечатывания и рассечения тканей хирургическим инструментом, относится к области хирургии и предназначена для запечатывания и рассечения тканей.

Изобретение относится к области медицины, а именно к реконструктивно-пластической хирургии челюстно-лицевой области. Определяют необходимые размеры и форму трансплантата, формируют комбинированный кожно-мышечно-костный лоскут, состоящий из двух фрагментов на единой сосудистой ножке - торокодорсальные артерия и вена, включающий в себя: фрагмент широчайшей мышцы спины с кожной площадкой и фрагмент лестничной мышцы с кожной площадкой и фрагментом ребра.

Изобретение относится к медицине, хирургии. Культю бронха формируют путем подхватывания адвентиции и мышечного слоя стенки пищевода атравматической иглой.
Изобретение относится к медицине, хирургии. Устанавливают внутренний дренаж у пациентов с забрюшинной лимфаденопатией после аллотрансплантации почки.

Группа изобретений относится к медицинской технике, а именно к рукоятке управления медицинским устройством, в частности к рукоятке управления с механизмами, управляющими несколькими вытяжными проволоками при манипуляциях разными функциями медицинского устройства по отдельности, и к катетеру, управляемому такой рукояткой.

Изобретение относится к медицине, к области сосудистой хирургии, и может применяться для формирования проксимального анастомоза при выполнении инфраингвинальной шунтирующей операции реверсированной аутовеной, или по методике «in situ».

Группа изобретений относится к медицине, хирургии. Определяют показания к миниинвазивному лечению у больных хроническим геморроем III-IV стадии.
Изобретение относится к медицине, а именно к челюстно-лицевой хирургии, и предназначено для использования при устранении синдрома обструктивного апноэ во сне. Предварительно проводят компрессионно-дистракционный остеогенез путем разреза по переходной складке слизистой оболочки полости рта от ретромолярной области до второго премоляра нижней челюсти.

Изобретение относится к медицине, в частности к эндоскопии, и может быть использовано для эндоскопического гемостаза при активном кровотечении из варикозно расширенных вен пищевода и желудка.

Изобретение относится к медицине, хирургии. При хирургическом лечении распространенного гнойного перитонита в поздней стадии выполняют срединную лапаротомию.

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине и андрологии. Для лечения первичного мужского гипогонадизма в эксперименте проводят трансплантацию аллогенной ткани костного мозга лабораторному животному с первичным мужским гипогонадизмом, смоделированным на основании временной ишемии тестикул. Для моделирования осуществляют ишемическое воздействие с помощью наложения лигатуры в одностороннем порядке с одновременным удалением контралатерального тестикула путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока сроком на 3 суток. При этом лигатуру накладывают с силой деформирующего воздействия 3-4 Н. Трансплантацию аллогенной ткани костного мозга осуществляют путем инъекции под белочную оболочку тестикула клеточно-гелевого комплекса. Комплекс состоит из клеточной массы аллогенного костного мозга и биодеградируемого гетерогенного гидрогеля Сферо®ГЕЛЬ медиум. Соотношение объема вносимой клеточной массы к объему гидрогеля Сферо®ГЕЛЬ составляет 1:1-1,5:1. Способ обеспечивает высокую эффективность лечения гипогонадизма на экспериментальной модели данной патологии при снижении побочных и искажающих чистоту эксперимента эффектов. 8 ил.
Наверх