Способ прогнозирования течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки t1n0m0 при размерах первичной опухоли в пределах 1 см



Способ прогнозирования течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки t1n0m0 при размерах первичной опухоли в пределах 1 см

 


Владельцы патента RU 2619214:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0. Способ включает следующее. При размерах первичной опухоли в пределах 1 см определяют клетки опухоли матки, экспрессирующие Ki-67, топоизомеразу 2 альфа, рассчитывают коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 и при значении коэффициента менее или равно 0,8 прогнозируют благоприятный исход без проведения адъювантной терапии. При значении коэффициента более 0,8 прогнозируют неблагоприятное течение заболевания и рекомендуют проведение адъювантной терапии. Использование изобретения позволяет повысить точность и информативность прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином матки. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии, онкологии, гинекологии, и может быть использовано для прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0 и последующего обоснования целесообразности адьювантной терапии.

В течение последних лет активно изучаются различные молекулярные маркеры, такие как циклооксигеназы (СОХ-2, СОХ-1), муцины (MUC-1, MUC-2), рецепторы эстрогенов (ER) и прогестерона (PR), антиген Ki-67, онкобелок HER2/neu при самой распространенной разновидности рака тела матки эндометриоидной аденокарциноме (см. интернет-ресурс: http://cyberleninka.ru/article/n/molekulyarnye-markery-raka-sheyki-i-tela-matki-kak-prognosticheskie-faktory#ixzz3stSZ3Dsp). Белок Ki-67 относится к семейству ядерных белков и отражает участие клеток в процессах пролиферации.

Высокая степень экспрессии Ki-67 свидетельствует о неблагоприятном прогнозе у больных раком тела матки (см. «Молекулярные маркеры рака шейки и тела матки как прогностические факторы», Кайрбаев М.Р., Чингисова Ж.К., Кукубасов Е.К., Клиническая медицина Казахстана, №3 (29), 2013, ст. 42-46).

Белок топоизомераза 2 альфа (Topoisomerase IIα, (ТОР2альфа)) представляет собой фермент, который контролирует и определяет топологические состояния ДНК во время транскрипции и репликации, с ним связывают развитие лекарственной резистентности при химиотерапии опухолей.

Известно применение маркера Ki-67 для повышения точности прогнозирования пятилетней выживаемости без прогрессирования у больных раком почечной лоханки и мочеточника после радикального хирургического лечения (см. патент RU №2281698 С1, МПК А61В 10/00, G01N 33/53 «Способ прогнозирования пятилетней выживаемости без прогрессирования у больных раком почечной лоханки и мочеточника после радикального хирургического лечения», опубл. 20.08.2006, Бюл. №23). Авторы изобретения в биоптате подсчитывают количество Ki-67 антиген-положительных клеток в не менее чем пятнадцати полях зрения и определяют индекс пролиферации, рассчитывая его среднее, минимальное и максимальное значения, рассчитывают показатель пятилетней выживаемости без прогрессирования рака (S) по формуле: S=0,38×Кi-67M+0,02×Ki-67Min-0,24×Ki-67Max, где Ki-67Min - минимальное значение индекса пролиферации Ki-67 после исследования 15 полей зрения, Ki-67Max - максимальное значение индекса пролиферации Ki-67 после исследования 15 полей зрения, Ki-67M - среднее значение индекса пролиферации Ki-67 после исследования 15 полей зрения. При значениях S<22 прогнозируют пятилетнюю выживаемость без прогрессирования рака. Однако, на наш взгляд, предлагаемый авторами способ оценки неспецифичен для эндометриоидных карцином тела матки.

Также из патентных источников известно использование маркеров Ki-67 и топоизомеразы 2 альфа (Topoisomerase IIα) для прогнозирования общей выживаемости больных с лейомиосаркомой тела матки I-II стадии (см. заявка на изобретение №2013140844/15 «Способ прогнозирования общей выживаемости больных с лейомиосаркомой тела матки I-II стадии», приоритет от 04.09.2013, дата публикации заявки: 10.04.2015. Бюл. №10). Способ включает в себя определение степени злокачественности, размера опухоли и проведение иммуногистохимического определения экспрессии маркера Ki 67. Сущностью способа является то, что определяют стадию FIGO после экстирпации матки с придатками, степень злокачественности по FNCLCC и дополнительно проводят иммуногистохимические исследование уровня экспрессии маркеров BrdU, CD31, Topoisomerase IIα, HSP70, исследование рецепторного статуса опухоли на эстрогены и прогестерон; плоидометрию; гистохимическое исследование ядрышковых организаторов (AgNORs) опухолевых клеток и эндотелия на степень зрелости сосудов опухоли; определяют плотность микроциркуляторного русла перитуморозной зоны опухоли и рассчитывают прогностическую значимость каждого параметра по формуле с вычислением клинико-морфо-биомолекулярного показателя (КМБП): КМБП=Х1+Х2+Х3…+Х12, где X - это клинико-морфологические и биомолекулярные параметры, а характеристики и значения экспрессии исследованных параметров выражают в баллах: Х1 - (ПМЦР) перитуморозной зоны до 62,4 в 2 мм2 - 0 баллов, более 62,4 в мм2 - 9 баллов; Х2 - плоидность ядер до 9,4 с - 0, более 9,4 с - 9 баллов; Стр.: 1 RU 2013140844 A, RU 2013140844 А; Х3 - число AgNORs ядер до 22,1 - 0 баллов, более 22,1 - 3 балла; Х4 - экспрессия BrdU до 6,3% - 0 баллов, более 6,3% - 3 балла; Х5 - зрелые сосуды опухоли 0 баллов, незрелые сосуды опухоли 3 балла; Х6 - степень злокачественности по FNLCC G1 - 0 баллов, G2 - 2 балла, G3 - 3 балла; Х7 - реакция HSP70 цитоплазматическая, ядерно-цитоплазматическая - 0 баллов, реакция HSP70 ядерно-ядрышковая - 3 балла; Х8 - экспрессия Ki-67 до 16,2% - 0 баллов, более 16,2% - 3 балла; Х9 - интенсивность Topoisomerase II +, ++ - 0 баллов, +++ - 3 балла; X10 - рецепторный статус (по РП) позитивный - 0 баллов, негативный - 3 балла; X11 - стадия FIGO I - 0 баллов, II - 3 балла; X12 - размер опухоли до 7 см - 0 баллов, более 7 см - 3 балла; и в зависимости от суммы баллов прогнозируют общую выживаемость больных с ЛМС: I группа - от 0 до 20 баллов с благоприятным прогнозом, II группа - от 21 до 40 баллов с относительно неблагоприятным (промежуточным) прогнозом, III группа - более 40 баллов с неблагоприятным прогнозом.

Критерии выбора метода адьювантной специальной терапии у нерепродуктивных больных раком тела матки T1N0M0 G2 эндометриоидной аденокарциномы основываются на площади поражения опухолью не более 1 см и глубины инвазии до стенки матки, что не отражает биологических потенций самой опухоли (см. Диагностика и лечение злокачественных новообразований. М., 2013 г., 413 с.).

Также известно применение топоизомеразы 2 альфа в качестве прогностического биомаркера в химиотерапии рака (см. Human topoisomerase II alpha as a prognostic biomarker in cancer chemotherapy. Интернет-ресурс: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26482620). Значения экспрессии топоизомеразы 2 альфа помогают в диагностике рака и в прогнозе прогрессирования заболевания, общей выживаемости пациентов и позволяют рассчитать ответ на терапию.

Из других литературных источников известно использование топоизомеразы 2 альфа как предиктора эффективности адъювантной химиотерапии при раке эндометрия (см. интернет-ресурс: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26588239). Авторами установлено, что у больных с гиперэкспрессией топоизомеразы 2 альфа можно прогнозирвать худший прогноз по сравнению с теми, у кого не наблюдается экспрессии топоизомеразы 2 альфа.

Известна роль таких показателей как ER, PR, C-ErbB-2 и Ki-67 в развитии карциномы эндометрия и их соотношение с клинико-морфологическими особенностями (интернет-ресурс: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26434913). Аномальная экспрессия ER, PR, C-erbB2 и Ki-67 может играть важную роль в злокачественной трансформации и дифференциации клеток эндометрия, поэтому их совместное обнаружение может быть важным и иметь большое значение для прогноза карциномы эндометрия.

Техническим результатом предлагаемого нами изобретения является повышение точности и информативности прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином матки, позволяющего обосновать целесообразность и объем адъювантной терапии.

Технический результат достигают тем, что при размерах первичной опухоли в пределах 1 см определяют клетки опухоли матки, экспрессирующие Ki-67, топоизомеразу 2 альфа, рассчитывают коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 и при значении коэффициента менее или равно 0,8 прогнозируют благоприятный исход без проведения адъювантной терапии, а при значении коэффициента более 0,8 прогнозируют неблагоприятное течение заболевания и рекомендуют проведение адъювантной терапии.

Выбор в качестве маркеров эндометриоидных карцином матки таких белков, как Ki-67, топоизомеразы 2 альфа обусловлен их ролью в определении пролиферативной, митотической активности опухолевой ткани.

Выбранный нами набор белков позволил оценить биологические потенции умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0 в зависимости от уровня коэффициента соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 менее или равно 0,8 или более 0,8.

В таблице 1 представлены результаты сравнительного исследования иммуногистохимических маркеров рецепторов к белку пролиферации Ki-67, топоизомеразе 2 альфа в срезах умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки у 20 пациенток при коэффициенте соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 менее или равно 0,8 (1 группа) и у 20 пациенток с умереннодифференцированными аденокарциномами при коэффициенте соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 более 0,8 (2 группа).

При сравнении результатов исследования между двумя группами пациенток обнаружено, что у пациенток первой группы индекс пролиферации Ki-67 составил не более 20% ядер клеток, отмечался низкий уровень активности топоизомеразы 2 альфа (не более 10% ядер клеток), коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 составил не более 0,8.

Во второй группе пациенток с эндометриодными карциномами тела матки имелось повышение уровня пролиферативной активности опухоли Ki-67 (80-90%), гиперэкспрессия топоизомеразы 2 альфа (65-75%), коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 составил более 0,8.

Подобных иммуногистохимических исследований при комплексной иммуногистохимической оценке умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки в доступной нам научно-медицинской и патентной литературе не встречалось.

Сравнительный анализ известных способов комплексной оценки предлагаемого нами способа позволяет выявить его новизну и отличия от известных.

Новизна способа комплексной иммуногистохимической оценки умереннодифференцированных эндометриоидных карцином эндометрия заключается в определении коэффициента соотношения маркеров топоизомераза 2 альфа/Ki-67 с целью повышения точности и информативности прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином матки, что, в свою очередь, обосновывает необходимость проведения профилактической адъювантной терапии.

Предлагаемый нами способ оценки осуществляют следующим образом.

1. После хирургического удаления матки, из ткани опухоли готовили стандартные блоки, 2 парафиновых среза толщиной 3-5 микрон по стандартной методике, депарафинировали в ксилоле и регидратировали в батарее спиртов. Два среза использовали для проведения иммуногистохимической реакции с маркерами Ki-67, топоизомеразы 2 альфа.

Последовательность этапов проведения реакции с каждым из маркеров совпадала.

2. Иммуногистохимическое исследование по оценке экспрессии Ki-67, топоизомеразы 2 альфа проводили по стандартной методике. Для открытия антигенных детерминант проводили обработку срезов в цитратном буфере [рН 6,0] в течение 30 минут при 95°С на водяной бане.

3. Инкубацию с первичными антителами проводили в течение ночи при 4°С. В качестве первичных антител при оценке экспрессии Ki-67 топоизомеразы 2 альфа использовали мышиные моноклональные антитела к данным маркерам (фирма производитель DAKO Corp).

4. Для визуализации реакции антиген-антитело использовали стрептавидин-биотиновую тест-систему [DAKO Corp] согласно инструкции. В качестве хромогена использовали ДАБ+[DAKO Corp].

5. Затем срезы докрашивали гематоксилином и заключали в бальзам.

6. Реакцию оценивали с применением светового микроскопа (увеличение ×40) по следующим критериям. Количество положительных клеток оценивали в зонах, содержащих их максимальное количество. В качестве негативного контроля использовали иммуногистохимическую реакцию без добавления первичных антител.

Показано, что у пациенток с умереннодифференцированными эндометриоидными карциномами тела матки T1N0M0 имелись два типа иммуногистохимических изменений Ki-67, топоизомеразы 2 альфа и их соотношения (менее или равно 0,8 и более 0,8).

У пациенток первой группы в опухолях матки индекс пролиферации Ki-67 составил не более 20% ядер клеток, низкий уровень активности топоизомеразы 2 альфа (не более 10% ядер клеток), коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 составил не более 0,8.

У пациенток второй группы в опухолях матки отмечалось значительное повышение уровня пролиферативной активности опухоли Ki-67 (80-90%), гиперэкспрессия топоизомеразы 2 альфа (65-75%), коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 составил более 0,8.

Приводим клинические примеры использования способа

Пример 1. Больная X., 1964 года рождения, с верифицированным на догоспитальном этапе диагнозом: рак тела матки (эндометриоидная карцинома) T1N0M0, оперирована по стандартной методике: пангистерэктомия, тазовая лимфаденэтомия.

Макроскопически первичная опухоль располагалась в верхнем сегменте матки и по протяженности не превышала в диаметре 1,0 см.

Послеоперационное морфологическое исследование выявило наличие G2 эндометриоидной карциномы в виде трубчатых структур, выстланных атипическими железистым эпителием; глубина инвазии опухоли в миометрий до толщины стенки матки; в удаленных лимфатических узлах метастазов опухоли не обнаружено.

Ядерный индекс в опухолевых железах составил не более 0,4. Индекс пролиферации Ki-67 составил 18%, экспрессия топоизомеразы 2 альфа 10%, коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 составил 0,55, что позволило установить низкие агрессивные потенции G2 эндометриоидной аденокарциномы у данной больной и не проводить пациентке превентивную адъювантную лучевую терапию. Подобная тактика не протоворечит стандарту лечения больных с T1N0M0G2 эндометриоидной аденокарциномы.

Срок наблюдения пациентки 29 месяцев без признаков рецидива и метастазов.

Пример 2. Больная Ж., 1968 года рождения с верифицированным амбулаторно диагнозом: рак тела матки T1NxM0, прооперирована в объеме пангистерэктомии, тазовой лимфаденэтомии.

Макроскопически опухоль располагалась в области дна, размерами 0,8×1,1 см.

Послеоперационное патогистологическое исследование выявило наличие G2 эндометриоидной аденокарциномы с инвазией менее 50% толщины стенки матки; лимфатические узлы интактны. Ядерный индекс в опухолевых железах составил более 0,7; индекс пролиферации Ki-67 составил 65%, а экспрессия топоизомеразы 2 альфа 70%, коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа / Ki-67 составил 1,07 - более 0,8 референтного значения.

Несмотря на небольшие размеры первичной опухоли, инвазию в миометрий менее толщины стенки матки, отсутствия метастатического поражения тазовых лимфоузлов, что соответствовало T1N0M0 распространенности рака эндометрия, приняв во внимание агрессивный вариант G2 эндометриоидной аденокарциномы - больной проведена превентивная адъювантная лучевая терапия по стандартной методике.

Больная наблюдается 34 месяца без признаков рецидивов и метастазов.

Подобным способом был уточнен прижизненный диагноз 40 больным раком тела матки T1N0M0.

Разработанный способ определения агрессивного поведения умерееннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0 при размерах первичной опухоли в пределах 1 см является промышленно применимым. С помощью этих прогностических факторов можно прогнозировать течение заболевания и планировать лечебные мероприятия.

Способ прогнозирования течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0, отличающийся тем, что при размерах первичной опухоли в пределах 1 см определяют клетки опухоли матки, экспрессирующие Ki-67, топоизомеразу 2 альфа, рассчитывают коэффициент соотношения топоизомераза 2 альфа/Ki-67 и при значении коэффициента менее или равно 0,8 прогнозируют благоприятный исход без проведения адъювантной терапии, а при значении коэффициента более 0,8 прогнозируют неблагоприятное течение заболевания и рекомендуют проведение адъювантной терапии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к методам определения состава и количества компонентов, входящих как в природные минералы, так и соединения, полученные в различных химических реакциях, при действии температуры и давления.

Изобретение относится к области аналитической химии для определения аминов в безводных средах. Для этого анализируемую пробу, содержащую амины, растворяют в ацетонитриле с добавкой от 0,01 до 1 моль/л инертной соли, погружают электрод с предварительно нанесенным на него покрытием толщиной от 10 нм до 10 мкм, состоящим из полимерных комплексов переходных металлов с основаниями Шиффа, и регистрируют вольтамперограмму в диапазоне потенциалов, включающем потенциалы от -0,2 до 1,2 В, со скоростью развертки в пределах 5-1000 мВ/с, которую сравнивают с эталонными вольтамперограммами известных аминов и по ним идентифицируют аналогичные эталонному образцу амины в анализируемой пробе хроноамперометрическим методом с использованием калибровочных кривых.

Изобретение относится к области обработки воздуха. Способ калибровки датчика воздуха устройства обработки воздуха включает в себя этапы, на которых: i) - очищают воздух, используя устройство обработки воздуха; ii) - измеряют первое количество воздуха, используя датчик воздуха для получения первого значения для калибровки датчика воздуха, причем первое количество воздуха представляет собой смесь окружающего воздуха и очищенного воздуха, причем устройство обработки воздуха расположено в воздухонепроницаемом пространстве, а этап 2 дополнительно включает в себя этапы, на которых: определяют, удовлетворяет ли качество первого количества воздуха в воздухонепроницаемом пространстве заданному критерию; и если качество первого количества воздуха удовлетворяет заданному критерию, измеряют первое количество воздуха, используя датчик воздуха, для получения первого значения.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения диоктилфталата в равновесной газовой фазе над изделиями из ПФХ-пластизоля. Для этого применяют способ идентификации и полуколичественного определения диоктилфталата в смеси соединений, выделяющихся из ПВХ-пластизоля.

Изобретение относится к измерению качества различных видовых комплексов трав и травянистых растений на пробах, преимущественно на пойменных лугах, и может быть использовано в экологическом мониторинге территорий с травяным покровом.

Изобретение относится к экотоксикологии, а именно к исследованию особенностей развития оксидативного стресса у двухстворчатых моллюсков, и может быть использовано для выявления влияния техногенного загрязнения среды на состояние популяций речных и морских моллюсков.

Изобретение относится к области экологии, а именно к оценке качества атмосферного воздуха населенных мест по состоянию эпифитной лихенофлоры. Для этого вычисляют индекс загрязнения воздуха (ИЗА) по жизненности лишайников в пределах 89%, сравнивая его с комплексным показателем, определяемым на учетной площадке, и коэффициента толерантности лихенофлоры по отношению к индексу загрязнения воздуха, который исчисляется по формуле ИЗА=(0,89-G/89)/0,298, где 0,89 - максимальная относительная жизненность лихенофлоры в чистом воздухе; G% - комплексный показатель жизненности лихенофлоры на площадке лихеноиндикации; 89% - теоретически возможное максимальное значение жизненности лихенофлоры в чистом воздухе, выраженное в процентах; 0,298 - коэффициент толерантности лихенофлоры к ИЗА.

Изобретение относится к экологии, а именно способу одновременного определения пестицидов разных химических классов в биологическом материале. Для этого печень рыбы гомогенизируют с безводным сульфатом натрия и гидроцитратом натрия, экстрагируют ацетонитрилом, встряхивают и отстаивают.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа определения селена в воде. Сущность способа заключается в том, что к анализируемому раствору добавляют 0,4 мл раствора 3%-ного щелочного борогидрида натрия восстановителя, закрывают пробкой, встряхивают и оставляют на 5 мин для восстановления селена до селеноводорода.

Изобретение относится к ветеринарной эпизоотологии, в частности к способу прогнозирования фасциолеза жвачных животных. Способ включает обследование пастбища.

Изобретение относится к фармацевтике, а именно к количественному определению производных имидазола, незамещенного в 5-положении, а именно гистидина гидрохлорида, гистамина дигидрохлорида, клотримазола, тиамазола, озагреля, бифоназола в субстанциях лекарственных препаратов. Для приготовления испытуемых растворов точный объем ампульного раствора 4% гистидина гидрохлорида (1 мл) помещают в колбу на 25 мл в 10 мл воды очищенной, перемешивают и доводят тем же растворителем до метки; точно отмеренный объем 0,1% гистамина дигидрохлорида (1 мл) или точные навески клотримазола (около 0,1 г), тиамазола (около 0,005 г), озагреля (около 0,01 г), бифоназола (около 0,005 г) помещают в мерные колбы емкостью 50 мл, растворяют в метаноле при комнатной температуре до полного растворения, а затем доводят объемы колб этим же растворителем до метки. Затем в мерные колбы емкостью 20 мл точно отбирают по 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0 мл приготовленного раствора гистидина гидрохлорида и клотримазола, по 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0 мл раствора гистамина дигидрохлорида, по 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0 мл раствора тиамазола, по 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0 мл раствора озагреля и по 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 мл раствора бифоназола. В каждую колбу прибавляют по 5,5 мл раствора диазотированного п-анизидина в соляной кислоте и доводят до метки метанолом, появляется окрашивание. Полученные через 2-3 минуты ярко-красные окрашенные растворы устойчивы в течение 2 часов. Пробы фотоэлектроколориметрируют при длине волны 490 нм и в кювете толщиной 10 мм. Количество определяемых препаратов рассчитывают с помощью калибровочных графиков. В качестве раствора сравнения используют раствор диазотированного п-анизидина в соляной кислоте. Изобретение обеспечивает простой, быстрый и воспроизводимый способ количественного определения лекарственных средств производных имидазола. 7 ил., 1 пр.
Наверх