Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота

Авторы патента:

G01N33/531 - получение материалов для иммунологических испытаний

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

G01N33/49 - крови

Владельцы патента RU 2620558:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" (ФГБНУ "НИВИ НЗ России") (RU)

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применение РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих. При этом ППД-туберкулин для млекопитающих разводят 10% раствором левамизола из расчета 20 мл на 1 млн. ME. Использование заявленного изобретения обеспечивает повышение чувствительности серологического способа диагностики лейкоза с применением РИД благодаря повышению уровня вирусспецифических антител. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной вирусологии и иммунологии, и может быть использовано для выявления животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота.

Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы с необратимым процессом, возбудителем которой является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). ВЛКРС оказывает депрессивное действие на организм вследствие генетического паразитизма в В-лимфоцитах, поражения других иммунокомпетентных клеток, органов иммунной системы и хронического стрессового воздействия. Заражение животных ВЛКРС сопровождается выработкой антител к структурным белкам вируса. Антитела и вирус циркулируют в организме у зараженных животных на протяжении всей жизни.

Для установления лейкозной инфекции узаконено серологическое исследование с применением реакции иммунодиффузии (РИД). РИД основана на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Положительные РИД-реакции регистрируются у животных с уровнем вирусспецифических антител в ИФА выше 41 ME [1]. На чувствительность РИД влияет ряд факторов, в частности инкубационный период болезни, продолжительность которого может быть 60-90 дней, иммунологическая толерантность (индуцированное отсутствие иммунного ответа на конкретный антиген при сохранении иммунореактивности на прочие антигены), вторичные иммунодефициты, обусловленные пред- и послеродовым периодом у коров, некоторыми инфекционными и инвазионными болезнями, применением живых вакцин и экологически неблагоприятными факторами окружающей среды. Кроме того, у 20-30% серопозитивных животных отмечается «выпадение» РИД при микроремиссиях, так как антиген ВЛКРС связывается с антителами в иммунные комплексы.

В случае персистентных вирусных инфекций искусственное нарушение равновесия между возбудителем и иммунитетом обеспечивает выявление инфицированных животных в скрытом периоде [2].

Известен способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота провокацией иммунного ответа, включающий серологическое исследование сыворотки крови в РИД с повторным серологическим исследованием крови серо-негативных животных после трехкратного введения инактивированной вакцины против лейкоза крупного рогатого скота с интервалом в 14 дней [3]. Но при сложности осуществления известный способ недостаточно эффективен, что обусловлено строго индивидуальным действием вакцины на фоне вторичных иммунодефицитов.

В качестве предпочтительного аналога нами рассматривается способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота провокацией иммунного ответа туберкулиновой пробой, включающий серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применением РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на туберкулин при проведении диагностических аллергических исследований на туберкулез [4]. Внутрикожное введение ПДЦ туберкулина для млекопитающих с целью диагностики туберкулеза крупного рогатого скота активизирует синтез антител к gp51 антигену вируса лейкоза, но этот процесс зависит от состояния иммунной системы - инфицирование организма ВЛКРС приводит к нарушению регулирования иммунной системы хозяина как на клеточном (поражение В-лимфоцитов, части Т-лимфоцитов, моноцитов), так и на гуморальном уровне (дефицит IgM и IgA) [5].

Цель изобретения - повышение эффективности диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Поставленная цель достигается провокацией туберкулиной пробой, причем ППД-туберкулин для млекопитающих разводят 10% раствором левамизола из расчета 20 мл левамизола на 1 млн. ME.

Левамизол (Levamisolum) - 2,3,5,6-тетрагидро-6-фенилимида-зо-[2,1-b]-тиазола гидрохлорид, высокоэффективный антгельминтик, используемый при желудочно-кишечных и легочных нематодозах. При изучении антигель-минтного действия левамизола было обнаружено, что он повышает общую сопротивляемость организма и может быть использован как средство для иммунотерапии. Опыты на изолированных клетках и наблюдения за здоровыми и больными животными показали, что препарат способен восстановить измененные функции Т-лимфоцитов и фагоцитов и вследствие его тимомиметического эффекта может регулировать клеточные механизмы иммунологической системы. Более подробные исследования показали, что левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функции Т-лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную реакцию. В связи с этими свойствами левамизол был предложен для лечения различных заболеваний, в патогенезе которых придают значение расстройствам иммуногенеза: первичные и вторичные иммунодефицитные состояния, аутоиммунные болезни, хронические и рецидивирующие инфекции, опухоли и др. Так, введение телкам подкожно левамизола в дозе 2, 5 мг/кг живой массы трехкратно с интервалом в 14 дней способствовало снижению уровня инфицированности ВЛКРС у опытных животных через 18 месяцев по сравнению с контрольными (17, 6% - опытная группа, 23, 1% - контрольная группа) [6]. Левамизол как иммуностимулирующий препарат может быть эффективен в комплексной терапии различных заболеваний [7]. Препарат вызывает увеличение числа как Т-, так и В-лимфоцитов, титр естественных антител и процесс антителообразования у интактных животных. Полученные данные показали, что левамизол у интактных животных в основном стимулирует клеточный иммунитет. Он вызывает быстрый эффект: уже через сутки количество Т-лимфоцитов увеличивается в 2 раза по сравнению с контрольными животными. У спонтанно зараженных в эти же дни левамизол в дозе 10 мг/кг по АДВ вызывал повышение уровня Т-лимфоцитов в 5 раз. Возрастающая активность Т-лимфоцитов, наступающая под действием левамизола, очевидно, играет немаловажную роль в способности препарата повышать иммунобиологические свойства организма [7].

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. В хозяйстве, благополучном по туберкулезу, но неблагоприятном по лейкозу, формировали три группы животных (потомство от сероположительных коров-матерей): 2 группы - опытные, 1 группа - контрольная. Серологическую диагностику на лейкозную инфекцию в опытных группах проводили после аллергического исследования животных на ППД-туберкулин для млекопитающих, причем животным первой опытной группы вводили ППД-туберкулин для млекопитающих, разведенный 10%-ным раствором левамизола из расчета 20 мл на 1 млн. ME. Учет результатов проводили в первые 5 дней после учета и оценки реакции на туберкулин. Результаты представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, провокация туберкулиновой пробой позволила повысить выявляемость серопозитивных животных, причем процент выявляемости был значительно выше в первой опытной группе - на 6, 7% по сравнению со второй опытной группой и на 20, 0% по сравнению с контролем.

Пример 2. Исследовали сыворотки крови, отобранные у животных, обработанных, как в примере 1, через 5 дней после введения ППД-туберкулина для млекопитающих для определения уровня вирусспецифических антител иммуноферментным методом с применением ИФА-набором (вариант VeriT-est, НПО НАРВАК). Результаты представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, туберкулиновая проба активизировала синтез вирусспецифических антител, причем более высокий уровень вирусспецифических антител отмечали в первой опытной группе.

Пример 3. Для экспериментальных исследований были отобраны 2 хозяйства, благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота. В результате изучения эпизоотической ситуации по инфекции ВЛКРС в первом хозяйстве было установлено, что первичная инфицированность коров составила 1%, эти животные были изолированы от общего стада. Для хозяйства были разработаны мероприятия, своевременное проведение которых способствовало формированию свободного от лейкоза стада в короткие сроки, где было предусмотрено проведение последующих с интервалом в три месяца серологических исследований на лейкоз сразу же после аллергических исследований на туберкулез. Реагирующих на ППД - туберкулин млекопитающих животных не выявлено, а количество животных-носителей ВЛКРС возросло. В этом варианте второе и третье исследование животных в РИД позволило выявить большое число животных-носителей ВЛКРС. Последующими исследованиями было выявлено незначительное количество инфицированных вирусом лейкоза коров, их полная своевременная изоляция способствовала скорейшему оздоровлению маточного стада от лейкозной инфекции. Во втором хозяйстве первое и все последующие серологические исследования на лейкоз с интервалом в три месяца проводили после проведения аллергических исследований на туберкулез, причем ППД-туберкулин для млекопитающих разводили 10% раствором левамизола в соответствии с изобретением. Количество серопозитивных животных снижалось от исследования к исследованию. Все инфицированные коровы были выведены из основного стада. Благополучное по лейкозной инфекции стадо было получено в короткие сроки. Результаты представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, в исследованных нами хозяйствах инфицированность коров вирусом лейкоза не достигала 10% и оздоровительные мероприятия проводились согласно «Правилам по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота" (Москва. 1999), которыми предусмотрена полная изоляция инфицированных ВЛКРС животных при сложившейся эпизоотической ситуации. Заявленный способ (второе хозяйство) обеспечил сокращение сроков выявления животных, инфицированных ВЛКРС, и количества серологических исследований.

Проведенные исследования показали, что заявленный способ позволяет повысить чувствительность серологического способа диагностики лейкоза с применением РИД благодаря повышению уровня вирусспецифических антител. Способ прост в осуществлении, повышает чувствительность прижизненной диагностики лейкоза с применением РИД, своевременно выявляет животных с недостаточным уровнем вирусспецифических антител, повышает эффективность оздоровительных мероприятий, тем самым сокращая срок нахождения в стаде инфицированных животных, снижая напряженность эпизоотической ситуации по лейкозу.

Источники информации

1. Иванов, О.В. Эффективность серологических методов исследования при лейкозе крупного рогатого скота/О.В. Иванов, О.Ю. Иванова, В.П. Федотов// Ветеринария - 2008. - № 7. - С. 26-29.

2. Макаров, В.В. Иммунологическая концепция персистентных вирусных инфекций/ В.В. Макаров//Проблемы ветеринарной иммунологии: Научн. Тр. ВАСХНИЛ. - М.:Агропромиздат, 1990. - С. 128-132.

3. Патент РФ №2264628 G01N 33/53, 2005.

4. Разумовская, В.В. Выявление животных с латентной инфекцией ВЛКРС методом провокации туберкулиновой пробой/В.В.Разумовская //Научные основы профилактики и лечения болезней животных: Сб. научн. тр. ведущих ученых России, СНГ и др. стран. - Екатеринбург, 2005. - С. 104-110.

5. Иванов, О.В. Качество серологической диагностики - гарантия оздоровления стада от лейкоза крупного рогатого скота/О.В. Иванов, О.Ю. Иванова // Научно-практический журнал Farm animals - 2014. - № 3. - С. 26-29.

6. Никитенко, A.M. Профилактика инфицированная телят ВЛКРС с помощью левамизола/А.М. Никитенко//Проблема оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота: докл. Всесозн. конф., Новосибирск, 11-13 апр., 1990. - Новосибирск, 1990. - С. 78-80.

7. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х томах. Т. 2. - 11-е изд. стер. - М.: Медицина, 1988. - 576 с.

8. Даугалиева Э.Х. Филиппов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. - М.: ВО «Агро-промиздат». - 1991. - 188 с.

Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применением РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих при проведении диагностических аллергических исследований на туберкулез, отличающийся тем, что ППД-туберкулин для млекопитающих разводят 10% раствором левамизола из расчета 20 мл на 1 млн. ME.

Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано при получении эритроцитарного антигена для диагностики некробактериоза животных.

Способ получения имитаторов патогенных биологических агентов // 2607369

Изобретение относится к медицинской микробиологии и санитарной эпидемиологии. Предложен способ получения имитаторов патогенных биологических агентов путем обработки суспензии клеток возбудителя опасного инфекционного заболевания СВЧ-облучением с частотой 2450 МГц, мощностью 6 Вт/см3 двукратно по 5 минут.

Способ получения диагностикума для количественного определения лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями // 2605621

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения диагностикума для определения концентрации лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями.

Способ получения референс-панели сывороток для контроля качества тест-систем и иммуноблотов, используемых для серологической диагностики маркеров вич-1 // 2603483

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано в технологии изготовления референс-панели сывороток, содержащих антигены и антитела к тестируемому вирусу, для контроля чувствительности, специфичности тест-систем иммуноферментных, иммунохемилюминесцентных и иммуноблотов.

Способ получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена, способ получения контрольной положительной сыворотки для набора определения антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против сибирской язвы, в реакции непрямой гемагглютинации и набор для определения антител // 2599035

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена для набора определения антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против сибирской язвы.

Способ получения диагностической сыворотки для выявления вируса алеутской болезни норок // 2592232

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к получению диагностических препаратов. При осуществлении предлагаемого способа получения сыворотки для диагностики алеутской болезни норок (АБН) получают высокоочищенный вирусный антиген путем гомогенизации органов инфицированных АБН норок с последующим трехкратным замораживанием/размораживанием гомогената, дезинтеграции клеточного гомогената трехкратной ультразвуковой обработкой, осаждением неразрушенных клеток двукратным низкоскоростным центрифугированием, последующим осаждением иммунных комплексов, уплотнением осадка низкоскоростным центрифугированием, экстрагированием иммунных комплексов (ИК) минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратной экстракции на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, осаждением ИК высокоскоростным центрифугированием из объединенных экстрактов при 30000 об/мин в течение 2,5 часов, извлечением ИК из осадка минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратного экстрагирования на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, диссоциацией иммунных комплексов в кислой среде в течение 1 часа на холоду, отделением вируса АБН-Ф от антител высокоскоростным ультрацентрифугированием, растворением осадка в минимальном количестве карбонатного буфера, отделением ферритина от вирусных частиц на колонке с сефарозой 6B в системе карбонатного буфера.

Способ дифференциальной диагностики образований шеи // 2581521

Изобретение относится к медицине, а именно к малоинвазивным методам в хирургической эндокринологии, и касается дифференциальной диагностики образований шеи. Способ включает ультразвук-контролируемую тонкоигольную аспирационную пункционную биопсию, которую выполняют однократно одной иглой через один прокол.

Способ консервации иммунопероксидазного конъюгата // 2549971

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии производства иммунопероксидазных конъюгатов, используемых для выявления антигенов возбудителей инфекционных болезней в твердофазном иммуноферментном анализе.

Способ получения тест-системы для диагностики цитомеговирусной инфекции методом иммуноблоттинга // 2545785

Группа изобретений относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, иммунохимии, и касается диагностики цитомегаловирусной инфекции методом иммунного блоттинга, который является референтным, наиболее высокочувствительным, высокоспецифичным, подтверждающим (или исключающим) диагноз при подозрении на инфицирование в случае получения положительных или сомнительных (неопределенных) результатов.

Способ печати биологических лигандов в процессе изготовления биочипов // 2543145

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ печати биологических лигандов, представляющих собой олигосахариды, и/или полисахариды, и/или пептиды, и/или гликопептиды, и/или биотин.

Способ ранней диагностики когнитивных нарушений у больных сахарным диабетом 2 типа // 2620550

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, эндокринологии, и может быть использовано для ранней диагностики когнитивных нарушений у больных с сахарным диабетом 2 типа.

Способ реабилитации больных ишемической болезнью сердца // 2620080

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается оценки эффективности реабилитации больных ишемической болезнью сердца (ИБС). Для этого определяют значение концентрации белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа до проведения диагностического стресс-теста с физической нагрузкой и через 2-3 суток после него.

Способ диагностики у детей возраста 4-12 лет хронических воспалительных заболеваний носоглотки, ассоциированных с ингаляционной экспозицией бензола и формальдегида // 2619873

Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и предназначено для диагностики у детей возраста 4-12 лет хронических воспалительных заболеваний носоглотки, ассоциированных с ингаляционной экспозицией бензола и формальдегида.

Способ диагностики профессиональной хронической обструктивной болезни легких, сформировавшейся в условиях действия пылей // 2619861

Изобретение относится к медицине, а именно к профессиональной патологии и пульмонологии, и раскрывает способ диагностики профессиональной хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), сформировавшейся в результате действия кремнийсодержащих пылей.

Способ диагностики и прогноза при гиперпролиферативных заболеваниях молочной железы // 2619739

Изобретение относится к медицине, а точнее к онкологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностирования рака молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии генов: MGB1, Ki67, Aurca, BIRC5, CCNB1, MMP11 в ткани молочной железы и при превышении уровня экспрессии значений для вышеперечисленных генов соответственно: 13120,05; 21,1; 52,54; 15,96; 13,89; 18,51 делают заключение о злокачественной природе процесса и рекомендуется провести биопсию ткани для получения морфологического подтверждения и/или проведения специфического лечения.

Способ прогнозирования исходов инфекционно-воспалительной патологии у глубоконедоношенных новорожденных // 2619343

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и иммунологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования исходов инфекционно-воспалительной патологии у глубоконедоношенных новорожденных.

Способ прогнозирования метастазирования местно-распространенного рака толстой кишки // 2619340

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования риска метастазирования местно-распространенного рака толстой кишки. Проводят иммунофенотипирование лимфоцитов крови, взятой из локтевой вены до оперативного вмешательства, а также лимфоцитов ткани опухоли и перитуморальной области, с целью выявления субпопуляций лимфоцитов, таких как αβкр - Т-лимфоциты с рецептором αβ в крови (X1), CD4+Пери - Т-хелперно-индукторные лимфоциты в перитуморальной зоне (Х2), CD8+Пери - цитотоксические Т-лимфоциты в перитуморальной зоне (X3),CD19+Пери - В-лимфоциты в перитуморальной зоне (Х4), CD19+Оп - В-лимфоциты в опухолевой зоне (Х5), затем определяют показатель риска метастазирования местно-распространенного рака толстой кишки Рм по формуле и при значении Рм, равном 0,5 и более, прогнозируют появление метастазов местно-распространенного рака толстой кишки в ближайшие 2 года, при значении Рм менее 0,5 прогнозируют отсутствие риска.

Анализ содержания фибриногена // 2619256

Группа изобретений относится к области биохимии и медицины и касается иммунологических способов детекции интактного фибриногена, включающих стадии: a) получения образца, содержащего по меньшей мере некоторое количество фибриногена, необязательно превращенного по меньшей мере частично в фибрин, и необязательно содержащего тромбин; b) растворения образца в растворе растворителя, который ингибирует активность тромбина; c) переноса/нанесения части указанного образца на мембрану, связывающую белок, после необязательного ДСН-ПААГ-электрофореза; d) взаимодействия фибриногена с первичным моноклональным антителом, способным связываться с фрагментом фибринопептида A или фрагментом фибринопептида В; и e) детекции количества интактного фибриногена в образце посредством определения количества связанного первичного моноклонального антитела.

Способ диагностики гипоксического поражения центральной нервной системы у детей, рожденных от матерей с табакокурением // 2618439

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству-гинекологии и лабораторным методам исследования, может быть использовано для диагностики гипоксического поражения центральной нервной системы у детей, рожденных от матерей с табакокурением.

Система для получения аутологичной сыворотки // 2617537

Изобретение относится к медицине и касается системы для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительного цитокина, включающей шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β, содержащий стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и по меньшей мере один шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β, и стерильный переходник, выполненный с возможностью перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β.

Способ исследования синтеза липопротеидов // 2620553

Изобретение относится к медицине и касается способа исследования синтеза липопротеидов. При исследовании синтеза липопротеидов вечером перед сном и утром натощак в плазме крови определяют содержание триглицеридов, липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП), гематокрита и объема циркулирующей крови, после чего рассчитывают коэффициент (К), позволяющий оценить состояние синтеза липопротеидов по формуле: гдеК - коэффициент состояния синтеза липопротеидов, ТГутр - содержание триглицеридов в плазме утром, ТГвеч - содержание триглицеридов в плазме вечером, ЛПВПутр - содержание липопротеидов высокой плотности в плазме крови утром, ЛПНПутр - содержание липопротеидов низкой плотности в плазме крови утром, ЛПОНПутр - содержание липопротеидов очень низкой плотности в плазме крови утром, ЛПВПвеч - содержание липопротеидов высокой плотности в плазме крови вечером, ЛПНПвеч - содержание липопротеидов низкой плотности в плазме крови вечером, ЛПОНПвеч - содержание липопротеидов очень низкой плотности в плазме крови вечером, ОЦКутр - объем циркулирующей крови утром, Htyтp - гематокрит, отражающий удельный вес форменных элементов в крови утром, ОЦКвеч - объем циркулирующей крови вечером, Htвeч - гематокрит, отражающий удельный вес форменных элементов в крови вечером.