Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови



Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови
Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови
Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови
Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови

 


Владельцы патента RU 2622003:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства России (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови. Способ включает забор в пробирки с гепарином венозной крови у обследуемого человека, центрифугирование крови, замену плазмы буфером. Проводят инкубацию аликвот ресуспендированных клеток крови с тестируемыми субстанциями в микроплейте, а также с анти-IgE в качестве положительного контроля и с буфером - отрицательного контроля. После центрифугирования микроплейта определяют уровень гистамина в надосадочной жидкости лунок микроплейта методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемным масс-спектрометрическим детектором. Проводят сравнение уровней гистамина, полученных для каждой из тестируемых субстанций, с положительным и отрицательным контролями. При повышении уровня содержания гистамина в опытном образце по сравнению с отрицательным контролем при наличии реакции в положительном контроле выявляют гиперчувствительность к тестируемой субстанции. Использование данного способа позволяет диагностировать сенсибилизацию к аллергену, а также мониторировать эффективность антиаллергического лечения за счет прямого количественного определения гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови, методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрического анализа. 5 ил., 1 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии-иммунологии, патофизиологии, фармакологии и токсикологии, и может быть использовано для определения реактивности лейкоцитов в цельной крови путем определения гистамина, высвобождающегося после ее инкубации со специфическими и неспецифическими высвободителями гистамина, включая лекарственные средства и пищевые продукты.

Методология определения гистамина in vitro после специфической стимуляции позволяет использовать как стандартные, так и лабораторно приготовленные аллергены. Для анализа высвобождения гистамина из базофилов можно использовать также экстракты из пищевых продуктов, лекарств, любых других материалов, подозрительных в отношении их причастности к причинно-значимым агентам, вызывающим гистаминолиберацию.

Методология определения гистамина ценна не только для целей диагностики сенсибилизации к тому или иному аллергену (или выявления прямого токсического действия какой-либо субстанции), но также и для мониторинга эффективности антиаллергического лечения при использовании как фармакологических препаратов, так и аллерген-специфической иммунотерапии. Определение гистамина сегодня является одним из инструментов диагностики аллергических состояний у человека. Существуют несколько методов определения гистамина: радиоизотопный, флуорометрический, иммуноферментный, с помощью газовой и жидкостной масс-спектрометрии. Последние два метода являются наиболее чувствительными и точными. Доступность в последнее время высокоэффективных жидкостных хроматографов (HPLC) с масс-спектрометрическими детекторами позволяет использовать этот высокоточный и высокочувствительный метод для целей аллергодиагностики, оценки функции тучных клеток и базофилов при изучении гиперчувствительности, мониторинга лечения аллергических состояний, включая лечение лекарственной и пищевой аллергии.

Наиболее близким аналогом данного изобретения (прототипом) является способ определения гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови, так называемым, «фиброглассовым» методом (Glass-microfiber based histamine analysis) [Skov P.S., Mosbech H., Norn S., Weeke В. Sensitive glass microfiber-based histamine analysis for allergy testing in washed blood sells. Allergy, 1985; 40:213-218]. Отличительной особенностью данного способа является использование стекловолоконного матрикса, который помещается (закрепляется) на дно пластикового 96-луночного плейта и который избирательно сорбирует гистамин. Кратко: гепаринизированную кровь в определенном объеме от пациентов с сенсибилизацией к различным аллергенам или от здоровых доноров помещают в лунки 96-луночных «фиброглассовых» плейтов (производства Reference Laboratory, Дания), куда предварительно в дубликатах вносят, согласно выбранной конфигурации, определенный объем разведений аллергенов или других субстанций, положительного (анти-IgE) и отрицательного (только PIPES-буфер) контролей. Также, в зависимости от задач исследования, можно использовать разведения кальциевого ионофора А23187 или вещества 48/80. Далее плейты инкубируют в течение 1 часа при 37°С и после отмывки дистиллированной водой дополнительно инкубируют в течение 30 мин при 37°C с раствором SDS (Sodium Dodecyl Sulfate). После отмывки дистиллированной водой в каждую лунку плейтов добавляют определенное количество раствора орто-фталиевого диальдегида для перевода гистамина, сорбированного на стекловолоконном матриксе, в раствор с последующей его конденсацией. Реакцию останавливают через определенное время добавлением раствора HClO4. Результаты, полученные путем автоматизированного спектрофлуорометрического анализа на приборе "Histareader 501", выражаются в нанограммах гистамина в 1 мл крови (нг/мл). Чувствительность метода составляет 8-10 нг гистамина в мл крови (нг/мл).

Недостатками данного способа определения гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов цельной крови и сорбирующегося на стекловолоконном матриксе с последующей его конденсацией для флуорометрического анализа, являются трудоемкость, связанная с многостадийностью и рядом последовательно проводимых химических реакций и физико-химических определений, а также высокая стоимость применяемых химических реактивов. Кроме того, являясь монополистом производства "фиброглассовых" плейтов и прибора для регистрации содержания гистамина (Histareader 501), фирма-производитель (Reference Laboratory, Дания) за последние годы многократно поднимала цены, как на сами "фиброглассовые" плейты, так и на прибор для регистрации, что приводило к существенному удорожанию анализа.

Поэтому задачей данного изобретения являлось создание простого и доступного метода определения реактивности (гиперчувствительности) лейкоцитов периферической крови в ответ на специфические и неспецифические стимуляторы с использованием новейших технологий определения гистамина, таких как высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрией.

Для решения данной задачи была предложена концепция прямого определения гистамина в надосадке цельной крови после ее инкубации со специфическими и неспецифическими субстанциями.

Техническим результатом данного изобретения является упрощение и удешевление процедуры специфической и неспецифической стимуляции лейкоцитов крови и повышение точности оценки гиперчувствительности за счет прямого количественного определения гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови.

Представленный технический результат достигается тем, что с помощью способа оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови, включающего забор в пробирки с гепарином венозной крови у обследуемого человека, центрифугирование крови, замену плазмы буфером, дальнейшую инкубацию аликвот ресуспендированных клеток крови с тестируемыми субстанциями в микроплейте, а также с анти-IgE в качестве положительного контроля и с буфером - отрицательного контроля, с последующим центрифугированием микроплейта, прямым количественным определением гистамина в надосадочной жидкости лунок микроплейта методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемным масс-спектрометрическим детектором и сравнение уровней гистамина, полученных для каждой из тестируемых субстанций, с положительным и отрицательным контролями, и при повышении уровня содержания гистамина в опытном образце по сравнению с отрицательным контролем при наличии реакции в положительном контроле выявляют гиперчувствительность к тестируемой субстанции.

Способ осуществляется поэтапно следующим образом:

1. Венозная кровь от здоровых доноров или от больных аллергией забирается в пробирки с гепарином в необходимом объеме (из расчета 150 мкл крови на один образец для анализа), желательно натощак (кровь может храниться до использования в пробирках с гепарином в горизонтальном положении при комнатной температуре оптимально не более 24 часов).

2. После центрифугирования крови в течение 10 мин при 150 g из пробирки отбирают плазму, замещая ее тем же объемом PIPES буфера, после чего ресуспендируют клетки крови.

3. Пробирку с ресуспендированной кровью и 96-луночный плейт, в каждую лунку которого согласно выбранной конфигурации внесены в объеме 50 мкл разведения аллергенов или испытуемых субстанций, стандарт гистамина, разведения анти-IgE, ионофора А23187 и просто PIPES буфер, преинкубируют, помещают в термостат при 37°С на 15 мин для предварительного нагревания

4. После окончания преинкубации аликвоты ресуспендированной крови в объеме 150 мкл вносят в каждую лунку 96-луночного плейта, где уже содержатся вышеперечисленные ингредиенты, после чего плейт помещают в термостат при 37°С на 1 час.

5. По истечении срока инкубации плейты центрифугируют при 150 g 15 мин, и надосадочную жидкость из каждой лунки напрямую анализируют на содержание гистамина.

6. Анализ образцов надосадочной жидкости на содержание гистамина проводят методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) в сочетании с тандемным масс-спектрометрическим детектором. Объем забираемой пробы (образца для анализа) - 10 мкл. Колонка - Agilent Eclipse XDB-С18 (4,6×150 mm; 5 μm) с предколонкой Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (4,6×50 mm, 5 μm). Температура колонки: 40°С. Предварительно прибор калибруется по различным концентрациям гистамина от 10 до 1000 нг в мл. После калибрования проводится анализ образцов надосадочной жидкости в каждой лунке плейта на содержание гистамина. Примерное время получения результата по содержанию гистамина в образце - 5,1 мин. Результаты выражаются в нанограммах гистамина в 1 мл крови (нг/мл). Предел количественного определения гистамина составляет 10 нг/мл, что сравнимо с ближайшим прототипом - «фиброглассовым» методом. Чувствительность «фиброглассового» метода определения гистамина в цельной крови, основанного на детекции гистамина по его флуоресценции, составляет 8-10 нг/мл. Оценка и сравнение уровней гистамина, полученных для каждого из разведений аллергенов или тестируемых субстанций, проводится после математической обработки на основании значений «площади под кривой» или прямого сравнения количества гистамина при определенных концентрациях тестируемых субстанций.

7. При повышении уровня содержания гистамина в опытном образце по сравнению с отрицательным контролем при наличии реакции в положительном контроле выявляют наличие гиперчувствительности.

Заявленный способ представляет собой новый современный подход для быстрой оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови, основанный на принципе высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрического анализа. Использование стандартных 96-луночных плейтов позволяет анализировать гистамин-высвобождающую активность значительного количества субстанций (аллергенов, лекарственных препаратов, пищевых продуктов, профессиональных вредностей и др.) за счет инкубации с малым количеством крови. Результаты анализа высвобождения гистамина из лейкоцитов периферической крови могут быть использованы для in vitro аллерго-диагностики при оценке степени сенсибилизации к клинически-значимым аллергенам, особенно у детей младшего возраста (в том числе лекарственным препаратам, пищевым аллергенам, профессиональным вредностям), для изучения псевдоаллергических реакций, а также для мониторинга эффективности антиаллергического лечения, включая аллерген-специфическую иммунотерапию.

Краткое описание чертежей

На Фиг. 1 показаны уровни гистамина после инкубации с различными концентрациями (по белку) модифицированного (sD1) и немодифицированного (D1) экстрактов из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus.

На Фиг. 2 показаны уровни гистамина по показателю ППК (площадь под кривой), высвобождающегося из лейкоцитов крови больного при инкубации с различными концентрациями (по белку) экстракта персика (F95 - Lofarma, Italy) и с разведениями анти-IgE (aIgE - Dako, Denmark).

На Фиг. 3 показаны уровни гистамина по показателю ППК (площадь под кривой) у здорового донора (отсутствие сенсибилизации к пыльце березы) при инкубации его крови с разведениями анти-IgE (Dako, Denmark) и с различными концентрациями (по белку) экстракта пыльцы березы (Т3).

На Фиг. 4 показаны уровни гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови больного А при инкубации с различными концентрациями (по белку) экстракта пыльцы березы (Т3) до и после аллерген-специфической иммунотерапии.

На Фиг. 5 показаны уровни гистамина (по показателю ППК - площади под кривой), высвобождающегося из лейкоцитов крови больного Б до и после аллерген-специфической иммунотерапии.

Пример 1

Экстракт из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus (D1) был химически модифицирован методом сукцинилирования, в результате чего получен мономерный аллергоид (sD1). Для сравнительной оценки аллергенности модифицированного экстракта sD1 кровь от больного с сенсибилизацией к Dermatophagoides pteronyssinus (Der р) инкубировали с различными концентрациями (по белку) модифицированного (sD1) и немодифицированного (D1) экстрактов.

Показано значительное снижение уровня гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови сенсибилизированного больного, при ее инкубации с модифицированным экстрактом sD1 в сравнении с немодифицированным D1 (Фиг. 1), что свидетельствует о существенном снижении аллергенности аллергоида sD1.

Пример 2

Больной Р.С.А. - диагноз: оральный аллергический синдром. Уровни аллерген-специфического IgE (Pharmacia UniCap 100, Швеция) к аллергенам: береза (Т3) - >100 кЕдА/л (6 класс); вишня (F242) - 1,62 кЕдА/л (2 класс); персик (Pru р) (F95) - 4,41 кЕдА/л (3 класс).

Проведен анализ высвобождения гистамина из лейкоцитов цельной крови (данные представлены по показателю ППК - "площади под кривой") при ее инкубации с разведениями анти-IgE (aIgE - Dako, Denmark) и с различными концентрациями (по белку) экстракта персика (F95 - Lofarma, Italy). Полученные данные свидетельствуют о наличии корреляции между уровнем гистамина, высвобождающегося из лейкоцитов крови больного при ее инкубации с экстрактом F95, и уровнем анти-Pru p IgE, что является ценным показателем, демонстрирующим возможность диагностики гиперчувствительности к аллергенам (в данном случае к аллергенам персика - Pru р) путем анализа высвобождения гистамиина из лейкоцитов крови (Фиг. 2)

Пример 3

Б.Е.Н. - здоровый донор. Аллергологический анамнез - отрицательный. Сенсибилизация к пыльце деревьев отсутствует. Кожные пробы: береза - (-), ольха - (-), орешник - (-).

Проведен анализ высвобождения гистамина из лейкоцитов цельной крови (данные представлены по показателю ППК - "площади под кривой") при ее инкубации с разведениями анти-IgE (Dako, Denmark) и с различными концентрациями (по белку) экстракта пыльцы березы (Т3). Полученные данные свидетельствуют о высокой специфичности анализа высвобождения гистамина из лейкоцитов крови (Таблица 1, Фиг. 3).

Пример 4

Больной Т.В.В. - диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма, легкое интермиттирующее течение; сенсибилизация к пыльце деревьев и трав. Кожные пробы до проведения аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ): береза ++, ольха +++, орешник +++.

Проведена инъекционная АСИТ смесью водно-солевых экстрактов аллергенов: береза (40%), ольха (30%), орешник (30%). Больной получил 30 инъекций (по одной инъекции ежедневно). Суммарная доза по трем аллергенам, полученная в ходе АСИТ, составила 5976 PNU. Для аллергена березы суммарная доза составила 2390,4 PNU.

Проведен анализ высвобождения гистамина из лейкоцитов цельной крови при ее инкубации с различными концентрациями (по белку) экстракта пыльцы березы (Т3) за неделю до начала АСИТ и через 10 дней после ее окончания (Фиг. 4 и Фиг. 5)

Полученные данные свидетельствуют о том, что анализ гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов крови при ее стимуляции специфическим аллергеном может служить ценным показателем эффективности АСИТ.

Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови, включающий забор в пробирки с гепарином венозной крови у обследуемого человека, центрифугирование крови, замену плазмы буфером, дальнейшую инкубацию аликвот ресуспендированных клеток крови с тестируемыми субстанциями в микроплейте, а также с анти-IgE в качестве положительного контроля и с буфером - отрицательного контроля, с последующим центрифугированием микроплейта, прямым количественным определением гистамина в надосадочной жидкости лунок микроплейта методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемным масс-спектрометрическим детектором и сравнение уровней гистамина, полученных для каждой из тестируемых субстанций, с положительным и отрицательным контролями, и при повышении уровня содержания гистамина в опытном образце по сравнению с отрицательным контролем при наличии реакции в положительном контроле выявляют гиперчувствительность к тестируемой субстанции.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области методов клинико-лабораторной диагностики и касается способа прогнозирования рецидивирующего вульвовогинального кандидоза (ВВК). Сущность способа: проводят генотипирование пациентки по полиморфным локусам генов IL4:-33 С>Т [rs2070874]; CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611]; IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] с применением ПЦР в режиме реального времени и определяют долю лактобацилл в составе вагинальной микрофлоры при помощи комплекта реагентов "Фемофлор 16", после чего полученные данные включают в функцию Z=1,063*IL1B+1,112*IL4+1,483*CCL2-0,044*Lact+1,326, где 1,326 - некоторая константа, IL1B - количество аллелей G в локусе IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] гена IL1B, IL4 - количество аллелей С в локусе IL4:-33 С>Т [rs2070874] гена IL4, CCL2 - количество аллелей G в локусе CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611] гена CCL2, Lact - доля лактобацилл (%) в составе вагинальной микрофлоры.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и предназначено для прогнозирования течения иммунной тромбоцитопении после спленэктомии. Для осуществления изобретения определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом с приготовлением парафиновых блоков.

Изобретение относится к области педиатрии, а конкретно к аллергологии и диетологии раннего возраста, и может быть использовано аллергологами и/или диетологами для прогнозирования формирования толерантности при аллергии к белку коровьего молока у детей раннего возраста.

Группа изобретений относится к области медицины, в частности к клинической и биологической психиатрии. Регистрируют электроэнцефалограмму (ЭЭГ) до начала терапии больных приступообразной шизофренией с маниакально-бредовыми расстройствами.
Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования угрозы невынашивания при гриппе A(H3N2) у женщин в первом триместре беременности. Сущность способа заключается в том, что у женщин в первом триместре гестации при гриппе A(H3N2) в период разгара заболевания в первой сыворотке крови определяют величину титра противовирусных антител (А), оценивают уровень TNF-α (пг/мл) (В).
Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования выкидыша на первом триместре гестации при действии у беременной цитомегаловирусной инфекции в период обострения.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применение РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применение РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, эндокринологии, и может быть использовано для ранней диагностики когнитивных нарушений у больных с сахарным диабетом 2 типа.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается оценки эффективности реабилитации больных ишемической болезнью сердца (ИБС). Для этого определяют значение концентрации белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа до проведения диагностического стресс-теста с физической нагрузкой и через 2-3 суток после него.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунохимии, а именно к способу получения материала для биологического связывания с помощью сорбирующих колонок. Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител - IgG к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой с использованием твердофазного носителя, заключающийся в том, что для его получения рекомбинантый человеческий десмоглеин 3 типа (Dsg3) иммобилизируют путем ковалентного связывания с твердофазным носителем, в качестве которого применяют агарозный сорбент, несущий на своей поверхности N-гидроксисукцинимидные группы: NHS-активированную агарозу. При использовании изобретения получают иммуносорбент, обладающий высокой селективной сорбционной способностью по отношению к аутоантителам - IgG к десмоглеину 3 типа. Полученный предлагаемым способом иммуносорбент может использоваться для лечения больных пузырчаткой в качестве адъювантного метода терапии. Его применение улучшает качество терапии, позволяет уменьшить дозы и длительность системных глюкокортикостероидных препаратов, снизить частоту развития побочных эффектов вследствие иммуносупрессивной терапии. 2 ил., 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм. Изобретение обеспечивает высокую точность и специфичность исследования, сокращение времени на диагностику. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов. Дополнительно анализируют Индекс Риска Астмы (API) и при его положительном значении и уровне эозинофилов в мокроте, равном или больше 2,5%, диагностируют бронхиальную астму. Причем при уровне эозинофилов в мокроте меньше 2,5% проводят повторное исследование и при выявлении повышения уровня эозинофилов мокроты не менее чем в 2 раза диагностируют бронхиальную астму, при этом повторное исследование проводят не менее одного раза в 6 месяцев, а при появлении респираторных симптомов - более одного раза в 6 месяцев. Использование способа позволяет с высокой точностью диагностировать бронхиальную астму на ранних стадиях у детей в возрасте 5 лет и младше. 1 з.п. ф-лы, 8 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4+ и CD8+, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+. После окончания курса первичного лечения в периферической крови больного определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ). После чего оценивают реактивность влияния на течение опухолевого процесса каждого вида цитокина путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле: Кр=nCD3+стим/nCD3+спонт, где Кр - коэффициент реакции влияния на течение опухолевого процесса для соответствующего провоспалительного цитокина, а именно: TNF-α, INF-γ, IL-2; nCD3+стим - количество клеток Т-лимфоцитов (CD3+) в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин в тест-системе после стимуляции; CD3+спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3+ в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно. Затем вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+ и при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный; при значении частного от деления количества субпопуляций CD4+ на количество лимфоцитов CD8+ меньше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания прогнозируют как гиперреактивное, прогноз благоприятный; при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания прогнозируют как гипореактивное, прогноз неблагоприятный; при значении частного от деления количества лимфоцитов CD4+ на количество лимфоцитов CD8+ больше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания прогнозируют как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный; при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный. Использование данного способа позволяет прогнозировать течение онкологических заболеваний путем оценки взаимосвязи между соотношением субпопуляций лимфоцитов и влиянием на течение опухолевого процесса цитокинов- TNF-α, IL-2 и INF-γ. 10 пр., 6 табл.

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку. После контакта тест-полоски с пробой и завершения движения реагентов вдоль мембран на нитроцеллюлозную мембрану наносят вещество, растворяющее нитроцеллюлозу, но не нарушающее структуру подложки, например ацетонитрил. После высыхания растворителя на поверхности подложки образуется стекловидная прозрачная масса. Детекция на просвет оставшегося в зонах связывания маркера дает возможность его полной (100%-ной) регистрации при малом уровне неспецифического окрашивания вне зон связывания, что, в конечном итоге, повышает достоверность регистрации результатов анализа и позволяет выявлять наличие в пробах контролируемого соединения в более низких концентрациях. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab. Представлены клетки дрожжей, продуцирующие указанные гуманизированные Fab. Предложен способ получения описанных гуманизированных Fab. Также предложены способ детекции ботулинического нейротоксина С и набор для детекции ботулинического нейротоксина С. Изобретение позволяет получить реагенты для детекции ботулинического нейротоксина С, обладающие высокой специфичностью связывания с указанным нейротоксином. 8 н. и 1 з.п. ф-лы, 12 ил., 6 табл., 9 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА. После чего вычисляют индекс влияния (ИВ) раково-эмбрионального антигена (ИВ РЭА) на продукцию ИЛ-8 (ИВ РЭА ИЛ-8) по формуле: ИВ РЭА ИЛ-8=А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина. При величине ИВ РЭА ИЛ-8, не превышающей 14, выявляют предраковые изменений в молочной железе (склерозирующий аденоз или пролиферат молочной железы). Использование данного способа позволяет выявлять предраковые изменения в молочной железе, что позволяет своевременно начать адекватное лечение. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ. При уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости. 1 табл.

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб. При этом для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство вставляют отдельный картридж для реагентов, который содержит ячейки с необходимыми для анализа реагентами-индикаторами, причем в картриджи для реагентов для анализа клинико-химических параметров помещают по меньшей мере один реагент-индикатор, а в картриджах для анализа иммунологических параметров, предусматривают первую ячейку с конъюгатом, вторую ячейку с субстратным раствором и твердую фазу. Изобретение обеспечивает возможность одновременного определения клинико-химических и иммунологических параметров пробы. 10 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП). Сущность способа: используют твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании цмЛПНП с 100 мкл раствора агглютинина RCA120 в изотоническом фосфатном буфере (ИБФ) в концентрации 30 мкг/мл, иммобилизованного в лунках планшета, промывке лунок буферным раствором с бычьим сывороточным альбумином (БСА), содержащим 2 г/л БСА, внесении по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител 1 мкг/мл к белку аполипопротеину В, инкубировании 1 ч при комнатной температуре, внесении 100 мкл исследуемого образца крови в ИФБ, инкубировании в течение 2 ч при 20°С, промывке, проявлении цитратным буфером рН 4,5, содержащим ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубировании 30 мин при 37°С, остановке реакции добавлением серной кислоты и количественной оценке цмЛПНП за счет измерения оптической плотности при длине волны 492 нм, что позволяет определять содержание цмЛПНП без их предварительного выделения. Изобретение обладает более высокой чувствительностью и воспроизводимостью и позволяет избирательно анализировать цмЛПНП, таким образом дает возможность точно и надежно измерять концентрацию цмЛПНП без предварительного выделения фракции ЛПНП. Способ является простым, доступным и быстрым в осуществлении, позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и при диспансеризации населения. 3 ил., 4 пр.
Наверх