Способ определения фазы вегетации лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного по малатдегидрогеназе с помощью электрофореза в полиакриламидном геле

Авторы патента:

Владельцы патента RU 2622023:

Шаталаев Иван Фёдорович (RU)
Редкокашин Дмитрий Евгеньевич (RU)
Воронин Александр Васильевич (RU)

Изобретение относится к области фармации и может быть использовано для определения фазы цветения лекарственного сырья, в частности горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного. Способ определения фазы вегетации лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного по малатдегидрогеназе с помощью электрофореза в полиакриламидном геле содержит сбор лекарственного сырья, определение молекулярных форм малатдегидрогеназа (МФ МДГ) электрофоретическим методом с использованием полиакриламидного геля, расчет относительной электрофоретической подвижности (ОЭП) обнаруженных форм МДГ для лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного на следующих фазах вегетации: бутонизация, цветение, плодоношение, определение фазы вегетации горцев по физиологическим маркерам – молекулярным формам фермента малатдегидрогеназы, при этом фазу цветения растений определяют следующим образом: для горца птичьего – если обнаруживается одна МФ МДГ 1 с ОЭП 0,50±0,02, для горца перечного - если обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,60±0,02, для горца почечуйного - если обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,76±0,02. 1 табл.

В настоящее время, в соответствии с действующей нормативной документацией, лекарственное растительное сырье горца птичьего (ГФ XI, ст.56), горца перечного (ГФ XI, ст.57) и горца почечуйного (ГФ XI, ст.58) должно собираться в фазу цветения.

Однако способы определения фазы цветения нормативно-технической документацией не предусмотрены. Имеющийся раздел «Внешние признаки» в фармакопейных статьях на горцы предусматривает определение и доказательство самого вида растения, нежели нужной фазы вегетации (цветения).

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ изучения динамики фракционного состава белков и активности МФ малатдегидрогеназы в сырье душицы обыкновенной, чабреца, монарды дудчатой методом электрофореза в 7,5% полиакриламидном геле. Гелевые пластинки окрашивали раствором амидочерного В. Выявление МФ ферментов проводили феназинметасульфаттетразолиевой реакцией. Количественный анализ электрофореграмм проводили на денситометре «ДенСкан» (Мащенко З.Е. автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, Пермь, 2004 г., стр. 17-20).

Недостатком известного метода является то, что он не предназначен для определения фазы цветения горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного.

Оптимальной фазой для заготовки сырья является именно стадия цветения, так как именно в этот период сырье горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного содержит наибольше количество действующих фармакологически активных соединений (флавоноидов).

Если лекарственное растительное сырье будет собрано на более ранней стадии вегетации (бутонизация и ранее) или более поздней (плодоношение и позже), то сырье не будет содержать необходимого количества биологически активных соединений, определяющих фармакологическую активность самого сырья и препаратов на его основе.

Таким образом, объективный способ определения фазы цветения горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного позволит повысить качество собираемого лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.

Задачей изобретения является создание объективного способа определения фазы цветения горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного.

В качестве маркера для определения фазы вегетации использована малатдегидрогеназа (МДГ). Малатдегидрогеназа (L-малат: NAD-оксидоредуктаза, 1.1.1.37, МДГ, malate dehydrogenase) - ключевой фермент цикла трикарбоновых кислот, катализирующий обратимую реакцию окисления малата (яблочной кислоты) в оксалоацетат (щавелево-уксусную кислоту). МДГ представляет собой мультифункциональный фермент. Он имеет практически универсальное распространение среди живых организмов, встречается в клетках дрожжей, подавляющего большинства представителей бактерий, а также в тканях всех животных и растений. У многих организмов он является димером.

МДГ представлена в клетках различных организмов в виде множественных молекулярных форм, число которых варьирует в зависимости от групповой принадлежности живых существ, от их образа жизни и от сложности метаболизма.

Для растений обнаруживаются следующие характеристики изоферментного спектра МДГ: генетический полиморфизм, изменчивость, видовая и тканевая специфичность. Соотношения между изоферментами МДГ в тканях и клетках организма изменяются в зависимости от этапа его онтогенетического развития и от физиологического состояния. При изучении изоферментного спектра МДГ из свеклы было установлено существовании раннего полиморфизма фермента и о появлении на первых стадиях онтогенеза растений молекулярных форм, не характерных для других этапов их развития.

Число изоферментов МДГ в щитке также падает на более поздних этапах развития кукурузы до четырех молекулярных форм. Возрастные изменения изоферментного состава малатдегидрогеназной системы были обнаружены при исследовании животного и растительного фермента, а также энзима микроорганизмов.

Данные электрофоретического анализа показывают, что изоферментные спектры МДГ из органов разных растений (кукурузы, клещевины, клевера и сои) непостоянны и могут изменяться в зависимости от возраста, от этапов онтогенеза и от физиологического состояния организма. Изменения в изоферментном спектре МДГ этих растений связаны либо с появлением и синтезом дополнительных молекулярных форм фермента, либо с их репрессией (ингибированием) в ходе развития организма.

Рядом исследователей подтверждено наличие видовой специфичности изоферментного спектра МДГ высших растений. Эти свойства изоферментного спектра МДГ позволяют использовать ее как маркерный белок для ведения селекционных работ или как биохимический признак для классификации видов и создания новых естественных таксономических групп.

Исходя из этого, информация о структурной организации и динамике относительной активности МФ МДГ - одного из ключевых ферментов цикла Кребса - может быть использована для идентификации ЛРС по фазам вегетации.

Сущность изобретения заключается в том, что в качестве объектов исследования на молекулярном уровне выбрана малатдегидрогеназа лекарственных растений горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного, которая определяется в приготовленном сырье с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.

Образцы свежего растительного сырья были собраны в разные периоды вегетации: бутонизация, цветение, плодоношение.

Для получения извлечения из 1,0 г (точная навеска) свежего лекарственного растительного сырья использовали 10,0 мл 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2.

Свежее растительное сырье дезинтегрировали в фарфоровой ступке с 5,0 мл охлажденного до 4°С 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2 в течение 5 мин.

Далее дезинтеграт количественно переносили в колбу, добавляли 5,0 мл 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2 и 10 капель тритона Х-100 в конечной концентрации 20 мг/мл. Колбу помещали на магнитную мешалку для солюбилизации фермента на 1 час.

Гомогенат из колбы количественно переносили в центрифужную пробирку, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин.

Полученный супернатант помещали в пробирку с пробкой и хранили в замороженном виде не более 6 суток.

В супернатанте определяли молекулярные формы малатдегидрогеназы.

Для выполнения исследований использован электрофоретический метод анализа. Все использованные в эксперименте реактивы были марки «ХЧ» и «ЧДА». Навески веществ отвешивали с помощь весов ВЛТ-150-П.

Исходные растворы для электрофореза готовили по прописям, предложенным для электрофореза в щелочной системе. Для приготовления геля использовали акриламид и метиленбисакриламид фирмы "Sigma". Перед употреблением проводили перекристаллизацию указанных компонентов с целью удаления акриловой кислоты. Заранее приготовленные и хранимые в холодильнике реактивы перед работой выдерживали некоторое время при комнатной температуре. Для электрофореза готовили 7,5% полиакриламидный гель. Полученный раствор разделяющего геля заливали в кюветы прибора, далее шприцом на поверхность наслаивали холодную воду. Окончание полимеризации фиксировали по образованию хорошо видимой границе раздела между гелем и наслоенной водой. После удаления воды на поверхность мелкопористого геля наслаивали раствор крупнопористого геля, на который осторожно наносили охлажденный верхний электродный буфер. Фотополимеризацию крупнопористого геля проводили с помощью ультрафиолетовой лампы. Окончание полимеризации крупнопористого концентрирующего геля устанавливали по образованию четко видимой границы между гелем и наслоенным буферным раствором.

После окончания полимеризации гелей камеры заливали верхним и нижним буферными растворами. В качестве электродного буфера использовали 1 М трис-ЭДТА-боратный буфер рН 9,2.

Анализируемые образцы супернатанта непосредственно перед началом электрофореза смешивали с 40% раствором сахарозы в соотношении 2:1 и 0,5 мл полученной смеси наносили на линию старта.

Режим электрофореза подбирали опытным путем в предварительных экспериментах. Первые 30 мин электрофорез проводили при силе тока 5,0 мА/см, затем 10,0 мА/см до окончания электрофореза. О времени окончания процедуры электрофореза судили по положению диска красителя бромфенолового синего.

По окончании электрофореза буферные растворы сливали, гели из кювет извлекали путем введения шприцем дистиллированной воды между поверхностью геля и стенкой кюветы.

Выявление на пластинках геля молекулярных форм малатдегидрогеназы проводили феназинметасульфат-тетразолиевой реакцией в чашках Петри.

В заявленном изобретении использовалась оптимизированная инкубационная среда: водные растворы NAD (1 мг/мл) - 40 мл, нитросиний тетразолиевый (1 мг/мл) - 30 мл, 1 М раствор малата натрия (рН=7,0) - 10 мл, феназинметасульфат (1 мг/мл) - 4 мл, 0,2 М трис-HCl буферный раствор (рН=7,1)-до 100 мл.

Гелевые пластины инкубировали 12 ч при 37°С. Молекулярные формы МДГ выявлялись в виде темно-синих полос.

Рассчитывали величину относительной электрофоретической подвижности молекулярных форм малатдегидрогеназы как отношение пройденного при электрофорезе веществом пути к длине гелевой пластины с использованием компьютерной программы TLC Manager. В работе использован прибор: камера для вертикального электрофореза VE-10 (производитель «Хеликон»).

Полученные экспериментальные данные были статистически обработаны с использованием методов проверки статистических гипотез.

Были определены молекулярные формы малатдегидрогеназы (МДГ), рассчитаны относительная электрофоретическая подвижность (ОЭП) обнаруженных форм МДГ для лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного на следующих фазах вегетации: бутонизация, цветение, плодоношение.

Результаты были представлены в виде таблицы:

ОЭП (относительная электрофоретическая подвижность) фермента малатдегидрогеназы - это качественная характеристика, специфичная и характерная для конкретного вида сырья при проведении электрофореза в определенных, описанных выше условиях.

В предлагаемом способе определение фазы вегетации горцев проводится по физиологическим маркерам - молекулярным формам фермента малатдегидрогеназы. Количество молекулярных форм и их значения ОЭП являются качественными характеристиками, присущими конкретным видам сырья при определенных условиях электрофореза.

Результаты исследований позволили выделить именно фазу цветения, как оптимальную и регламентируемую для сборки сырья. Выделяют 3 основные молекулярные формы (МФ) малатдегидрогеназы:

- Малатдегидрогеназа - 1 (МДГ-1);

- Малатдегидрогеназа - 2 (МДГ-2);

- Малатдегидрогеназа - 3 (МДГ-3).

Отличаются три МФ МДГ по молекулярной массе и по тому, в каких процессах участвуют в жизнедеятельности растения. Как видно из приведенной таблицы, в сырье горцев может обнаруживаться как одна (любая) МФ МДГ, так и сразу все три МФ МДГ. Количество МФ МДГ зависит от фазы вегетации растений и его физиологического состояния.

МДГ-1 обнаружение возможно, начиная с ранних стадий развития растений, до цветения на стадии бутонизации. И свидетельствует о том, что происходит активный рост растения, накопление массы самого растения и биосинтез биологически активных веществ.

МДГ-2 обнаружение возможно на разных стадиях вегетации, в большей степени свидетельствует о стабилизации обменных процессов в растении.

МДГ-3 обнаружение возможно преимущественно после периода цветения растений до его отмирания, так как в этот период преобладают окислительные процессы в растительном организме и происходит увядание растения.

Молекулярные формы МДГ в результате проведения электрофореза обнаруживаются в виде темно-синих полос на гелевых пластинках (электрофореграммах).

ОЭП (относительная электрофоретическая подвижность) - величина относительная. Показывает, где именно находится обнаруженная фракция МДГ. Рассчитывается ОЭП как отношение расстояния пройденного МФ МДГ от начала гелевой пластинки до точки окончания электрофореза. Значение ОЭП всегда будет меньше 1,0.

Отличительными особенностями, по которым можно диагностировать фазу вегетации растения, является совокупность признаков, а именно:

- Значение ОЭП для конкретной МФ МДГ;

- Количество определяемых МФ МДГ в растении в определенную фазу вегетации.

Для горца птичьего

- На стадии бутонизации обнаруживается одна МФ МДГ-1 со значением ОЭП 0,83±0,02;

- На стадии цветения одна МФ МДГ-1 со значением ОЭП 0,50±0,02;

- На стадии плодоношения обнаруживаются две МФ МДГ: МДГ 1 с ОЭП 0,65±0,02 и МДГ-2 с ОЭП 0,45±0,01;

Для горца перечного

- На стадии бутонизации обнаруживается две МФ МДГ: МДГ 1 с ОЭП 0,63±0,02 и МДГ 2 с ОЭП 0,42±0,02;

- На стадии цветения обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,60±0,02;

- На стадии плодоношения обнаруживаются все три МФ МДГ: МДГ 1 с ОЭП 0,64±0,02, МДГ 2 с ОЭП 0,44±0,02 и МДГ 3 с ОЭП 0,12±0,01.

Для горца почечуйного

- На стадии бутонизации обнаруживается одна МФ МДГ: МДГ 1 с ОЭП 0,63±0,02;

- На стадии цветения обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,76±0,02;

- На стадии плодоношения обнаруживаются все три МФ МДГ: МДГ 1 с ОЭП 0,64±0,02, МДГ 2 с ОЭП 0,42±0,02 и МДГ 3 с ОЭП 0,10±0,01.

Таким образом, сделать вывод о том, в какой фазе находится растение, например, горца перечного, мы можем после проведения электрофореза в 7,5% полиакриламидном геле и выявления МДГ, если на электрофореграмме обнаруживается одна форма МДГ 1 с ОЭП 0,60±0,02, то это означает, что растение находится в фазе цветения.

Изобретение создает объективный способ определения фазы цветения горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного, что позволит повысить качество препаратов, изготовленных из сырья лекарственных растений.

Способ определения фазы вегетации лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного по малатдегидрогеназе с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, содержащий сбор лекарственного сырья, определение молекулярных форм малатдегидрогеназа (МФ МДГ) электрофоретическим методом с использованием полиакриламидного геля, расчет относительной электрофоретической подвижности (ОЭП) обнаруженных форм МДГ для лекарственного растительного сырья горца птичьего, горца перечного и горца почечуйного на следующих фазах вегетации: бутонизация, цветение, плодоношение, определение фазы вегетации горцев по физиологическим маркерам - молекулярным формам фермента малатдегидрогеназы, при этом фазу цветения растений определяют следующим образом: для горца птичьего - если обнаруживается одна МФ МДГ 1 с ОЭП 0,50±0,02, для горца перечного - если обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,60±0,02, для горца почечуйного - если обнаруживается только МДГ 1 с ОЭП 0,76±0,02.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения феназепама. Сущность способа заключается в том, что готовят растворы определяемого вещества в концентрации 0,02 мг/мл и образца сравнения.

Способ одновременного определения примесей этилендиаминтетрауксусной кислоты, диметилсульфоксида и n-этилмалеимида в фармацевтических субстанциях методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2621645

Изобретение относится к исследованию или анализу материалов с использованием хроматографии. Способ одновременного определения примесей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), диметилсульфоксида (ДМСО) и N-этилмалеимида (ЭТМ) в фармацевтических субстанциях методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии включает определение ЭДТА, ДМСО и ЭТМ во время одного анализа, с использованием хроматографической колонки длиной не более 150 мм, заполненной носителем с зернением не более 5 мкм, используя раствор кислоты ортофосфорной 10-30 мМ (рН 1,9-2,26) с градиентом органического растворителя от 0 до 100%, при температуре колонки 25-45°С, достигается предел детектирования для ЭДТА - от 4,14 до 8,0 нг, ДМСО - от 0,8 до 3,0 нг, ЭТМ - 0,04 до 1 нг и предел количественного определения ЭДТА - от 12,9 до 30 нг, ДМСО - от 2,66 до 10 нг, ЭТМ - от 0,13 до 3 нг.

Способ количественного определения производных дибензотиоксантенов (группы тиксолов) // 2614724

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтическому анализу, и может быть использовано для количественного определения хлорпротиксена гидрохлорида, зуклопентиксола и флупентиксола в субстанциях.

Способ кулонометрического определения содержания воды в лекарственной форме мазь // 2614704

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения содержания воды в лекарственной форме мазь. Сущность способа заключается в том, что проводят растворение навески лекарственной формы мазь в растворителе толуол:метанол в соотношении 7:3, проводят электрогенерацию йода при постоянной силе тока 50мА в фоновом электролите «Аква М®-Кулон AG» в анодной камере, «Аква М®-Кулон СG» в катодной камере на платиновом электроде, далее в ячейку вносят аликвоту раствора эритромицина мази глазной массой 3 г, измеряют время достижения конечной точки титрования, рассчитывают содержание воды в аликвоте по формуле X=I×t×M/F, где I - сила тока, 0,05 A; t - время достижения конечной точки титрования, с; M - молярная масса эквивалента воды, 9,008 г/моль; F - постоянная Фарадея, 96485 Кл/моль, параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в мази.

Способ кулонометрического определения содержания воды в субстанции ампициллина тригидрата // 2614698

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения содержания воды в субстанции ампициллина тригидрата. Сущность способа заключается в том, что проводят растворение навески указанной субстанции в фоновом электролите «Аква М®-Кулон AG», далее в ячейку вносят аликвоту раствора субстанции ампициллина тригидрата массой 0,5г, проводят электрогенерацию йода при постоянной силе тока 50мА в фоновом электролите «Аква М® -Кулон AG» в анодной камере, «Аква М® -Кулон СG» в катодной камере на платиновом электроде, измеряют время достижения конечной точки титрования, рассчитывают содержание воды в аликвоте по формуле X=I×t×M/Fгде I - сила тока, 0,05 A; t - время достижения конечной точки титрования, с; M - молярная масса эквивалента воды, 9,008 г/моль; F - постоянная Фарадея 96485 Кл/моль, параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в субстанции ампициллина тригидрата.

Вольтамперометрический способ определения коэнзима q10 в кремах косметических // 2613897

Способ относится к области химической промышленности и позволяет определить содержание коэнзима Q10 в кремах косметических методом катодной дифференциально-импульсной вольтамперометрии.

Способ количественного определения производных дибензазепинов (группы ипраминов) // 2613876

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и может быть использовано для количественного определения производных дибензазепинов (группы ипраминов) в субстанциях.

Способ амперометрического определения молочной кислоты на платиновом электроде // 2612000

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа определения молочной кислоты на платиновом электроде. Сущность способа заключается в том, что определяют молочную кислоту на платиновом электроде в фоновом электролите - боратный буфер (рН 9.18), при потенциале предельного тока восстановления Е=-0,7 В с помощью хлоридсеребряного электрода сравнения.

Способ количественного определения кальция и магния в растительном сырье // 2605855

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа количественного определения кальция и магния в лекарственном растительном сырье. Сущность способа заключается в том, что проводят озоление сырья в муфельной печи при температуре 500оС, прокаливают до постоянной массы, растворяют полученную золу в 10% растворе соляной кислоты, фильтруют полученный солянокислый раствор золы.

Способ количественного определения метоклопрамида // 2605316

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения метоклопрамида в лекарственных формах, воде и биологических жидкостях.

Способ модельно-дискриминационной оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, покрытых кишечнорастворимой оболочкой // 2629397

Изобретение относится к фармации, фармакологии и клинической фармакологии и касается способа модельно-дискриминационной оценки фармацевтической эквивалентности лекарственных средств, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, включающего определение кинетики растворения изучаемых препаратов и препарата сравнения путем последовательного помещения по одной единице твердой дозированной формы в фосфатный буфер объемом 500 мл с рН 1,05±0,05 и при температуре 37±0,05°С, перемешивания с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбора аликвоты через 2 часа и ее фильтрации, определения в аликвоте действующего вещества, переноса лекарственной формы в фосфатный буфер с рН 7,0±0,05, перемешивания с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбора аликвот через 10, 15, 20, 30, 45, 60 минут и в дополнительное расчетное время объемом 5 мл с восполнением этого объема средой растворения; аликвоты фильтруют, прибавляют к 2 мл фильтрата аликвот по 400 мкл 0,25 моль/л натрия гидроксида, определяют количество действующего вещества, перешедшего в раствор, параллельно проводят второй этап сравнительного теста кинетики растворения, включающий последовательное помещение по одной единице твердой дозированной формы в среду растворения с рН 4,0±0,05 объемом 500 мл, перемешивание с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбор проб через 10, 15, 20, 30, 45, 60 минут объемом 5 мл с восполнением этого объема средой растворения, фильтрацию аликвот, прибавление к 2 мл фильтрата аликвот по 400 мкл 0,25 моль/л натрия гидроксида, определение количества действующего вещества, перешедшего в раствор, с рН 7,0±0,05, объемом 900 мл, перемешивание с помощью лопастной мешалки со скоростью 100 об/мин, отбор проб через 10, 15, 20, 30, 45, 60 минут, при этом дополнительно определяют точку отбора аликвоты из среды растворения с рН 7,0±0,05 по формуле Тр=(Тк×0,121)+t(1). Изобретение обеспечивает повышение точности определения фармацевтической эквивалентности воспроизведенных лекарственных средств, защищенных кишечнорастворимыми оболочками. 5 ил., 2 табл.

Способ экспресс-скрининга потенциальных антиоксидантов с использованием кинетической модели медь-инициированного свободнорадикального окисления липопротеидов низкой плотности плазмы крови человека // 2629398

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, позволяющим осуществлять эффективный скрининг антиоксидантов. Способ экспресс-скрининга потенциальных антиоксидантов заключается в том, что выделяют липопротеиды низкой плотности (ЛНП) из плазмы венозной крови здоровых доноров, осуществляют окисление липопротеидов низкой плотности при температуре 37°С внесением 30 мМ сульфата меди (CuSO4), после чего через фиксированные интервалы времени измеряют накопление липогидропероксидов (конъюгированных диенов) при 233 нм (ΔD233) и по результатам исследования строят кинетическую кривую окисления ЛНП, из которой определяют продолжительность периода индукции (τ), затем в опытные пробы вносят исследуемые антиоксиданты (конечная концентрация 1 мкМ), растворенные либо в 96% этаноле - для жирорастворимых веществ или в среде инкубации - для водорастворимых веществ, и если продолжительность периода индукции исследуемого вещества выше 0,4 - вещество может рассматриваться в качестве эффективного антиоксиданта; если ниже 0,1 - исследованное вещество эффективным антиоксидантом не является. 3 пр., 2 ил., 1 табл.

Способ количественного определения биоцидного азотсодержащего органического соединения гидразида изоникотиновой кислоты (изониазида) в водном растворе этого соединения // 2633080

Изобретение относится к медицине для определения концентрации в биосистемах (сыворотке крови, слюне и др.) и может быть использовано для количественного определения биоцидного гидразида изоникотиновой кислоты (изониазида) в водных растворах этого соединения при токсикологическом и техническом анализе субстанции и лекарственных форм этого препарата. Для этого сорбенты (силикагель или оксид алюминия) предварительно обрабатывают водным раствором соли меди и высушивают. Затем анализируемую пробу водного раствора наносят на сорбент и после развития окраски регистрируют параметр окраски. Регистрацию оптического сигнала осуществляют при сканировании поверхности сорбента с помощью оптического сканера по каналам цветности RGB с получением графического изображения. Концентрацию изониазида определяют по интенсивности отклика сигнала по цветовому каналу В с использованием графического редактора. Изобретение обеспечивает регулирование введения оптимальных доз лекарств при лечении активных форм туберкулеза, а также при исследовании фармакокинетики лекарственного препарата. 2 табл., 8 пр.

Способ скрининга отбеливателей кровоподтеков // 2634268

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, фармации, дерматологии, косметологии и судебной медицине, и может быть использовано при разработке новых лекарственных средств, предназначено для поиска и оценки эффективности средств, обесцвечивающих кожу в области «красных» и «синих», свежих и старых кровоподтеков, при разработке косметических технологий, предназначенных для удаления кровоподтеков, а также при судебной медицинской экспертизе давности кровоподтеков и ушибов мягких тканей. Способ скрининга отбеливателей кровоподтеков проводят в лабораторных условиях при температуре +24-+26°С, используя изолированный сегмент передней брюшной стенки свиньи, в качестве пигмента используют свиную венозную кровь, насыщенную и ненасыщенную кислородом, которую вводят внутритканно по 0,5 мл в переднюю брюшную стенку свиньи, с помощью непрерывной цветной киносъемки фиксируют момент введения и момент достижения полного обесцвечивания кожи в области каждого кровоподтека после введения испытуемого средства. Способ обеспечивает срочное исследование в лабораторных условиях отбеливающей активности нескольких средств одновременно. 1 пр.

Способ определения нематоцидной активности авермектинсодержащих субстанций и препаратов // 2637087

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу биотестирования активности противопаразитарных субстанций и препаратов, содержащих в качестве активного вещества авермектины и их производные, с помощью олигохет вида Tubifex tubifex. Сущность способа заключается в том, что готовятся разведения авермектинов (0,5 до 50 мкг/мл), в которые вносятся олигохеты по 15-20 особей и инкубируют в течение 1-2 ч при температуре 27-30°С. Далее оценивают биоцидное действие авермектинов по поведенческой реакции олигохет, причем об активности препарата судят по отсутствию сползания тест-объектов в клубок в результате различной степени паралича. Достигаемый технический результат заключается в стандартизации, повышении чувствительности и экспрессности способа биотестирования активности авермектинсодержащих субстанций и препаратов с использованием поведенческой реакции олигохет вида Tubifex tubifex, основанной на их нейрохимических особенностях метаболизма. Преимущества способа заключаются в низкой трудоемкости и стоимости, быстроте анализа, доступности, высокой чувствительности (до 1,0 мкг/мл). 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.

Способ обнаружения микробной и вирусной контаминации растворов и биологических жидкостей // 2641960

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способу определения контаминации растворов и биологических жидкостей. Сущность способа состоит в том, что детектируют биологические объекты, включающие микроорганизмы или вирусы, с помощью наночастиц металлов, формирующихся in situ из внесенных в исследуемый объект солей соответствующих металлов, при последующем анализе динамики спектральных характеристик формирующихся наночастиц. В присутствии клеток микроорганизмов в течение 20-40 минут размер формирующихся наночастиц металлов достигает величины более 15 нм, в присутствии вирусов размер формирующихся наночастиц достигает 6 нм, тогда как в отсутствие контаминации исследуемых объектов за то же время размер образующихся зародышей наночастиц не превышает 2 нм. Использование заявленного способа позволяет с высокой чувствительностью, достоверностью, технической простотой и быстротой выявлять случаи микробной контаминации растворов и биологических жидкостей. 4 ил., 3 пр.

Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх // 2643312

Изобретение относится к способу количественного определения методом ВЭЖХ таурина и аллантоина при их совместном присутствии в различных лекарственных препаратах, биологически активных добавках, косметической и пищевой продукции. Способ включает растворение навески исследуемого вещества в подвижной фазе (ПФ), разделение раствора на хроматографической колонке, измерение оптической плотности полученного раствора и определение концентрации исследуемых веществ по калибровочным графикам. В качестве подвижной фазы для таурина использовали 30 мкмоль/л раствора ацетата натрия рН 6.0, а растворение проводили из расчета 250 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ. В качестве подвижной фазы для аллантоина использовали смесь раствора гидрофосфат аммония с рН 7.78 и ацетонитрила 9:1, а растворение проводили из расчета 1000 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ. Для таурина перед разделением раствора с ПФ на хроматографической колонке к нему добавляли боратный буферный раствор с рН 9.0 и 0,1% раствор 2,4-динитрохлорбензола в растворе ацетонитрил - вода (2:1) при соотношении 1:1:1, нагревали полученную смесь, охлаждали до комнатной температуры и на 6 об. ч. полученной смеси добавляли 1 об. ч. 10% раствора уксусной кислоты и 13 об. ч. воды. Детектирование проводили при длинах волн 360±2 нм и 218±2 нм для таурина и аллантоина, соответственно. Способ позволяет идентифицировать и количественно определять таурин и аллантоин при их совместном присутствии в различных лекарственных препаратах. 9 ил.

Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем // 2643934

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя, которая проявляется в способности непосредственно изменять физико-химические и/или биологические свойства исходного вещества при воздействии на него указанным носителем. Для этого аналитическими методами определяют наличие или отсутствие молекул исходного вещества в указанном носителе и, при наличии молекул исходного вещества, перед измерением характерного параметра из носителя удаляют молекулы исходного вещества, и измеряют аналитическими методами один или несколько характерных параметров исходного вещества до и после взаимодействия с ним указанного носителя, при этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах активности, рассчитываемых по формуле (1): где X - количество единиц активности (ЕА); С - безразмерный коэффициент пропорциональности; А - значение характерного параметра исходного вещества до взаимодействия с ним указанного активированного носителя; Ам - значение того же характерного параметра исходного вещества после взаимодействия с ним указанного активированного носителя. Изобретение позволяет определить выраженность модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 7 пр.

Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем // 2643936

Изобретение относится к фармации и может быть использовано для определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества в виде многократного последовательного уменьшения концентрации последнего с использованием носителя, которая проявляется в способности непосредственно изменять физико-химические и/или биологические свойства вещества, состоящего из молекул, структурно схожих с молекулами исходного вещества, при воздействии на него указанным носителем. Для этого аналитическими методами определяют наличие или отсутствие молекул исходного вещества в указанном носителе, и при наличии молекул исходного вещества перед измерением характерного параметра из носителя удаляют молекулы исходного вещества, и измеряют аналитическими методами один или несколько характерных параметров вещества, структурно схожего с исходным, до и после взаимодействия с ним указанного носителя, при этом степень выраженности модифицирующей активности определяют по величине изменения характерного параметра в относительных единицах активности, рассчитываемых по формуле (1): где X - количество единиц активности (ЕА); С - безразмерный коэффициент пропорциональности; А - значение характерного параметра вещества, структурно схожего с исходным веществом, до взаимодействия с ним указанного активированного носителя; Am - значение того же характерного параметра вещества, структурно схожего с исходным веществом, после взаимодействия с ним указанного активированного носителя. Изобретение обеспечивает определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем, приобретенной в процессе технологической обработки исходного вещества. 2 з.п. ф-лы, 1 пр.

Способ количественного определения альдегидных групп в окисленном декстране // 2646451

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для количественного определения альдегидных групп в окисленных полисахаридах, а именно окисленного декстрана. Для этого к окисленному декстрану добавляют водные растворы 3-(4, 5-диметил-2-тиазолил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия бромида и щелочи. Контрольный раствор, содержащий те же компоненты за исключением окисленного декстрана, готовят параллельно. Оптическую плотность опытного и контрольного растворов регистрируют на спектрофотометре при 540 нм, количество окисленного декстрана определяют с использованием калибровочного графика. Изобретение обеспечивает точные и воспроизводимые результаты для определения окисленного декстрана, применяемого в качестве биосовместимого и биодеградируемого носителя для лекарственных препаратов. 2 ил., 5 пр.