Способ прогнозирования течения онкологических заболеваний

Авторы патента:

Мельников Дмитрий Юрьевич (RU)

Пушина Инна Валерьевна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2622756:

Мельников Дмитрий Юрьевич (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺. После окончания курса первичного лечения в периферической крови больного определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ). После чего оценивают реактивность влияния на течение опухолевого процесса каждого вида цитокина путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле: Кр=nCD3⁺_стим/nCD3⁺_спонт, где Кр - коэффициент реакции влияния на течение опухолевого процесса для соответствующего провоспалительного цитокина, а именно: TNF-α, INF-γ, IL-2; nCD3⁺_стим - количество клеток Т-лимфоцитов (CD3⁺) в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин в тест-системе после стимуляции; CD3⁺_спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3⁺ в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно. Затем вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ и при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный; при значении частного от деления количества субпопуляций CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ меньше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания прогнозируют как гиперреактивное, прогноз благоприятный; при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания прогнозируют как гипореактивное, прогноз неблагоприятный; при значении частного от деления количества лимфоцитов CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ больше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания прогнозируют как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный; при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный. Использование данного способа позволяет прогнозировать течение онкологических заболеваний путем оценки взаимосвязи между соотношением субпопуляций лимфоцитов и влиянием на течение опухолевого процесса цитокинов- TNF-α, IL-2 и INF-γ. 10 пр., 6 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано в онкологии для прогнозирования течения онкологических заболеваний иммунологическими методами, а также в ходе проведения мониторинга иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции в сезонах при многолетнем наблюдении.

Известен способ прогнозирования эффективности лечения и течения опухолевого процесса у больных раком носоглотки (РФ, патент №2526830, G01N 33/49 27.08.2014). В соответствии со способом, до начала химиолучевого лечения и перед каждым последующим курсом у больных раком носоглотки III-IV стадии определяют в периферической крови значения коэффициентов отношения среднего объема нейтрофилов и среднего объема лимфоцитов к их абсолютному количеству: MVNe/#Ne и MVLy/#Ly. При значениях коэффициентов в динамике лечения свыше 45 констатируют низкую эффективность лечения и отрицательный прогноз течения заболевания при отсутствии клинических признаков манифестации. При значениях указанных коэффициентов ниже 45 констатируют положительный эффект лечения и благоприятный прогноз течения заболевания. Изобретение позволяет определить генерализацию опухолевого процесса при отсутствии клинических признаков манифестации заболевания и скорректировать лечение больных на основании полученных коэффициентов.

Известен способ прогнозирования рецидива рака вульвы (РФ, патент №2532342, G01N 33/53, 10.11.2014). Перед началом лечения определяют содержание в крови больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) и уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). При содержании БГЛ выше 11,8% и уровня ЦИК ниже 33,3 у.е. прогнозируют безрецидивный период в течение 5 и более лет. При содержании БГЛ ниже 9,8% и ЦИК выше 42,7 у.е. прогнозируют развитие рецидива в ближайшие 2 года. Использование данного способа позволяет проводить наиболее эффективные лечебные мероприятия у больных с неблагоприятным прогнозом, а также указывает на необходимость регулярного тщательного динамического наблюдения с проведением дополнительных клинико-лабораторных обследований.

Известен способ исследования гематологических, биохимических и иммунологических показателей с целью контроля эффективности противоопухолевого лечения женщин со злокачественными опухолями гениталий (РФ, патент №2170433, G01N 33/48, 10.07.2001). В соответствии со способом выполняют гематологические, биохимические и иммунологические исследования периферической крови на этапах или по окончанию специфической терапии. Определяют уровень гемоглобина, абсолютное число лимфоцитов, содержание больших гранулосодержащих лимфоцитов (БГЛ), показатель моноцитарно-макрофагальной трансформации моноцитов (ПМТМ), отношение активности супероксиддисмутазы к суммарной пероксидазной активности (СОД/СПА) лимфоцитов и нейтрофилов, отношение содержания витамина Е к содержанию витамина А (Е/А) в нейтрофилах, отношение содержания витамина Е в эритроцитах и плазме и при следующих значениях этих показателей соответственно гемоглобина - 112±5,0 г/л, лимфоцитов - 0,8±0,06, БГЛ - 12,4±0,3; ПМТМ - 38,2±2,0, СОД/СПА в лимфоцитах - 16,0±4,9, СОД/СПА в нейтрофилах 9,4±2,3, отношения витаминов Е/А в нейтрофилах - 1,2±0,2, отношение витамина Е в эритроцитах и плазме - 2,0±0,3 лечение расценивают как эффективное и определяют благоприятный прогноз состояния больной, а иные цифровые значения указанных показателей свидетельствуют о необходимости проведения дополнительных диагностических и лечебных мероприятий.

Известен способ прогнозирования ранних рецидивов или/и метастазов рака шейки матки (РФ, №2247377, G01N 33/49, G01N 33/48, 27.02.2005). Изобретение используют для диагностики до клинической манифестации рецидивов и/или метастазов для шейки матки после сочетанной лучевой терапии. Способ заключается в том, что при сочетанной лучевой терапии определяют отношение абсолютного числа лимфоцитов к абсолютному числу моноцитов периферической крови, полученное соотношение делят на 4,05. При значениях полученного результата выше единицы констатируют отсутствие вероятности рецидива заболевания в течение первого года наблюдения, а при значениях ниже единицы констатируют наличие продолженного роста опухоли и возникновение рецидива рака в первый год после лечения. Способ позволяет выявить развитие патологического процесса до клинического его появления.

Известен способ прогнозирования стадий рака молочной железы (№2393474 G01N 33/48 G01N 33/50 27.06.2010). Определяют уровень гемоглобина крови, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), гематологический показатель интоксикации (ГПИ), лимфоцитарный индекс (ИСНЛ), альбумин-глобулиновый индекс, уровень α₂-глобулинов. Определяют диагностический коэффициент (ДК) для каждого показателя. При сумме ДК от (-20) до (-7) прогнозируют рак молочной железы на поздних стадиях (III-IV) течения процесса, при сумме от (+7) до (+20) прогнозируют ранние стадии (I-II) рака молочной железы. Способ позволяет прогнозировать и диагностировать стадии рака молочной железы на этапе первичного обследования, а также своевременно определять тактику ведения пациентов.

Общим для всех выявленных в результате патентного поиска способов прогнозирования течения онкологических заболеваний, является возможность прогнозирования дальнейшего развития только конкретного вида заболевания, что сужает их функциональные возможности и исключает использование роли иммунного гомеостаза в его влиянии на опухолевый процесс. Это объясняется тем, что параметры используемые для прогноза течения онкологического заболевания в известных способах не отражают состояние всего организма, возникающее в результате взаимодействия его с опухолью, что не позволяет перенести полученные результаты на другие виды онкологических заболеваний, кроме того, в известных способах не учитывают изменчивость иммунитета под влиянием накопленных токсичных цитостатиков (иммунодепрессантов) или применения лучевой терапии.

Наиболее близким к предлагаемому, является способ прогнозирования гематогенного метастазирования у больных раком молочной железы при проведении противоопухолевого лечения (РФ, патент №2436099, G01N 33/53, 15.07.2010). Определяют показатели иммунной системы при постановке диагноза, во время противоопухолевого лечения и после его окончания: количество CD4⁺ клеток периферической крови, %, количество CD8⁺ клеток периферической крови, %, количество CD56⁺ клеток периферической крови, %, количество CD22⁺ клеток периферической крови, %, количество CD95⁺ клеток периферической крови, %, функциональный резерв нейтрофилов в НСТ-тесте (тест восстановления нитросинего тетразолия), у.е., функциональный резерв нейтрофилов в НСТ-(тест восстановления нитросинего тетразолия), у.е., функциональный резерв нейтрофилов в НСТ-тесте, %, спонтанную активность нейтрофилов в НСТ-тесте, у.е., спонтанную активность нейтрофилов в НСТ-тесте, %, уровень циркулирующих иммунных комплексов, у.е., уровень иммуноглобулина G (IgG) в сыворотке крови, г/л, уровень IgM в сыворотке крови, г/л, уровень IgA в сыворотке крови, г/л, иммунорегуляторный индекс (ИРИ CD4⁺/CD8⁺), уровень спонтанной продукции фактора некроза опухоли-α (ФНОα) клетками периферической крови, пг/мл, уровень спонтанной продукции интрелейкина-1β (ИЛ-1β) клетками периферической крови, пг/мл, уровень стимулированной продукции ИЛ-1β клетками периферической крови, пг/мл, количество CD3⁺ клеток периферической крови, %, активность системы комплемента в сыворотке крови, у.е., количество CD25⁺ клеток периферической крови, %, индекс стимуляции пролиферации лимфоцитов фитогемагглютинином (ИС ФГА), пролиферативную активность лимфоцитов при стимуляции ФГА, спонтанную пролиферативную активность лимфоцитов, уровень клеток периферической крови с признаками морфологического апоптоза, %, и рассчитывают дискриминантные функции Y₁, Y₂, по дискриминантным уравнениям, соответствующим каждому этапу наблюдения, при этом классифицируемый случай относят к тому классу прогноза, для которого получено большее значение вычисленной дискриминантной функции. Данный способ позволяет повысить точность и информативность прогнозирования гематогенного метастазирования у больных РМЖ, получивших комбинированное противоопухолевое лечение, в течение 3-х лет после постановки диагноза.

Как и в предыдущих случаях, недостатком известного способа прогнозирования течения онкологических заболеваний является возможность прогноза дальнейшего развития только конкретного вида заболевания и конкретного вида метастазирования, что не позволяет перенести полученные результаты на другие виды онкологических заболеваний и сужает его функциональные возможности. Кроме того, известный способ громоздок в выполнении, так как требует большого количества вычислений, что снижает его оперативность и не позволяет использовать для мониторинг-контроля иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции при длительном многолетнем наблюдении, в том числе, в сезонах.

Заявляемое изобретение решает задачу создания способа прогнозирования течения онкологических заболеваний, осуществление которого позволяет достичь технического результата, заключающегося в расширении функциональных возможностей, а именно: в возможности прогнозирования течения разных видов онкологических заболеваний после окончания первичного самостоятельного, комбинированного или комплексного лечения (операция, химиотерапия, лучевая и гормональная терапия), причем, как высокоагрессивных по гистологическим формам и стадиям процессов, с высоким риском манифестации метастазирования, так и низкоагрессивных с поздним проявлением развития метастазирования, а также для любого вида метастазирования; в упрощении и повышении оперативности способа; в возможности проведения мониторинг-контроля системного иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции в сезонах при длительном наблюдении; в повышении достоверности прогноза по результатам оценки иммунного гомеостаза на момент обследования; в повышении эффективности назначений для дальнейшего лечения за счет возможности учета изменчивости иммунитета под влиянием токсичных цитостатиков (иммунодепрессантов) или применения лучевой терапии.

Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что в способе прогнозирования течения онкологических заболеваний, в соответствии с которым при помощи стандартного лабораторного исследования определяют количественные показатели иммунного гомеостаза, при этом в периферической крови больного с помощью лабораторной тест системы определяют количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺, новым является то, что количественные показатели иммунного гомеостаза определяют после окончания курса первичного лечения, при этом в периферической крови больного определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, способные влиять системно на иммунный гомеостаз и течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), после чего оценивают реактивность влияния на течение опухолевого процесса каждого вида цитокина путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле:

Кр=nCD3⁺_стим/nCD3⁺_спонт, где

Кр - коэффициент реакции влияния на течение опухолевого процесса для соответствующего провоспалительного цитокина, а именно: TNF-α, INF-γ, IL-2;

nCD3⁺_стим - количество клеток Т-лимфоцитов (CD3⁺) в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин в тест системе после стимуляции;

CD3⁺_спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3⁺ в периферической крови синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно,

затем, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ и при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный; при значении частного от деления количества субпопуляций CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ меньше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз благоприятный, а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием данного вида цитокинов на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз неблагоприятный; при значении частного от деления количества лимфоцитов CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ больше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный, а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный.

Технический результат достигается следующим образом.

Существенные признаки заявляемого способа: «Способ прогнозирования течения онкологических заболеваний, в соответствии с которым при помощи стандартного лабораторного исследования определяют количественные показатели иммунного гомеостаза, при этом в периферической крови больного с помощью лабораторной тест системы определяют количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺, …» - являются неотъемлемыми признаками заявляемого способа и обеспечивают осуществимость заявляемого способа на системном уровне иммунного гомеостаза, а, следовательно, обеспечивают достижение заявленного технического результата.

Богомольцем А.А. еще в 1924 году было высказано предположение о том, что рак может развиться только при условии понижения реактивности организма (Кавецкий Р.Е. Химиотерапия опухолей и реактивность организма. Проблема химиотерапии злокачественных опухолей. Москва-Киев, 1974, стр. 5).

В последующие годы был накоплен значительный материал, подтверждающий, что иммунодепрессия является не только фоном, но и неизменным условием возникновения опухолевого процесса. В настоящее время известно, что при кажущихся одинаковых условиях опухолевая болезнь протекает по-разному. У одних больных - бурное, агрессивное течениие с быстро наступающей генерализацией и гибелью, у других - медленная форма течения с длительным периодом без рецидива и метастазирования и благоприятным исходом, иногда с полным излечением, что объясняется нейтральным начальным состоянием иммунной системы онкологического больного (Городи лова В.В. Вклад Московского научно-исследовательского онкологического института им. П.А. Герцена в развитие онкоиммунологии в СССР. Вопросы онкологии, 1978, №11, стр. 10-15). Выраженные нарушения иммунной системы имеют место уже при предраковых заболеваниях (Гриневич Ю.А. Нарушения системы иммунитета при злокачественных новообразованиях и проблема его регуляции тимозинами. Тезисы докладов VI съезда онкологов УССР. Киев, 1980, стр. 432-433; Матэ Ж. Активная иммунотерапия рака, иммунопрофилактика и иммунореабилитация. М., 1980, №60, стр. 90-92; From Medscape Education Oncology Tumor Immunity: Exploring the Role of a Checkpoint CME Mary L. Disis, MD Faculty and Disclosures CME Released : 05/13/2014; Valid for credit through 05/13/2015/).

Из вышеизложенного следует, что реакция иммунной системы, влияя на развитие заболевания, в частности, онкологического, может быть использована в качестве критерия для прогнозирования течения онкологических заболеваний. При этом основополагающим является выбор контролируемых параметров иммунного гомеостаза, позволяющий прогнозировать течение любого вида онкологического заболевания.

В заявленном способе прогнозирования течения онкологических заболеваний в качестве контролируемого параметра иммунного статуса больного выбраны: Т-лимфоциты CD3⁺, 10*9/л, синтезирующие спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, способные влиять системно на течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), и субпопуляции Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺.

Выбор этих контролируемых параметров иммунного гомеостаза, позволяет прогнозировать течение любого вида онкологического заболевания. Это обусловлено следующим.

Содержание в периферической крови больного Т-лимфоцитов CD3⁺ (интегральный показатель клеточного звена) субпопуляции CD3⁺CD4⁺ Т-лимфоцитов (так называемых Т-хелперов) и субпопуляции CD3⁺CD8⁺ Т-лимфоцитов (так называемых Т-киллеров, или цитотоксических Т-лимфоцитов) характеризует клеточное звено иммунитета (Пособие по клинической иммунологии для практических врачей http://www.dovidnyk.org/dir/21/118/1296.html). Клеточное звено иммунитета является превалирующим не только при вирусных и грибковых патогенах, атипичных возбудителях (микоплазмы, хламидии), бактериальных инфекциях с внутриклеточным пребыванием возбудителя (микобактерии), но и при иммунном ответе на опухоли (см. там же).

Молекулы CD4⁺ экспрессируют на своей поверхности Т-лимфоциты, которые получили название хелперов. Это главные регуляторные клетки иммунного ответа. От деятельности Т-хелперов зависит как направление (разворачивания) иммунного ответа, так и его эффективность. Субпопуляция CD4⁺ выполняет роль (катализатора) корецептора, стабилизируя рецепторы антиген-презентирующей клетки и Т-хелпера во время антигенной презентации на антиген-презентирующие клетки.

Молекулы CD8⁺ содержат на своей поверхности цитотоксические Т-лимфоциты. Это эффекторные клетки иммунного ответа. Именно цитотоксические Т-лимфоциты наносят конечный повреждающий удар по мишеням иммунной агрессии (опухолевым и инфицированным клеткам). CD8⁺ молекула выступает в роли корецептора, стабилизируя взаимодействие рецепторов Т-киллера и клетки-мишени во время иммунного распознавания последней (Пособие по клинической иммунологии для практических врачей http://www.dovidnyk.org/dir/21/118/1296.html).

Поскольку субпопуляция CD3⁺CD8⁺ Т-лимфоцитов наделена цитотоксическими свойствами (клетки-киллеры), то соотношение количества субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ оценивают в сопоставлении с фазой системного иммунного ответа. В период разгара и стихания клинических проявлений иммунорегуляторный индекс достигает высоких значений за счет большого процентного содержания Т-хелперов (CD4⁺ Т-клеток). В период реконвалесценции (выздоровления) значение показателя уменьшается; в связи с нарастанием активности заболевания типично увеличение уровня CD8⁺ Т-клеток (киллеров). (Пособие по клинической иммунологии для практических врачей. http://www.dovidnyk.org/dir/21/118/1296.html). Для онкологии нарушение такой закономерности свидетельствует о неадекватности иммунной реакции и о возможности хронизации системного опухолевого процесса, в связи с неполной эрадикацией чужеродного опухолевого антигена. При этом в отношении опухолевого процесса неадекватное нарушение соотношения количества субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ может иметь как прямой (положительный), так и обратный (отрицательный) характер влияния, что зависит от конкретного биологического вида рака.

Кроме того, в заявляемом способе для определения иммунного статуса онкологического больного в периферической крови больного определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, способные влиять системно на иммунный гомеостаз и течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), - с последующей с интерпретацией способности их системного влияния на течение опухолевого процесса.

Цитокины - это подобные гормонам клеточные специфические белки, которые синтезируются различными клетками в организме: клетками иммунной системы, клетками крови, селезенки, вилочковой железы, соединительной ткани и другими типами клеток (http.//www.tiensmed.ru/news/citokiny-ab1.html). При этом основная масса цитокинов образуется лимфоцитами, т.е. имеет системное влияние.

Цитокины представляют собой низкомолекулярные информационные растворимые белки, обеспечивающие передачу сигналов между клетками. Деятельность цитокинов можно охарактеризовать как обеспечивающую взаимодействие между клетками (регулирующую их взаимоотношение: клетки иммунной системы - лимфоциты), так и как функционально контролирующую функцию между системами: регуляция продолжительности и интенсивности иммунных реакций (противоопухолевая и противовирусная защита организма); регуляция воспалительных реакций; участие в развитии аутоиммунных реакций; определение выживаемости клеток; участие в механизме возникновения аллергических реакций; стимуляция или подавление роста клеток; участие в процессе кроветворения; обеспечение функциональной активности или токсического воздействия на клетку; согласованность реакций эндокринной, иммунной и нервной систем; поддержание гомеостаза (динамической стабильности) организма (http://www.tiensmed.ru /news/citokiny-ab1.html).

Цитокины осуществляют согласованное взаимодействие всех клеток в иммунной системе, являясь регуляторами иммунных реакций. Они обеспечивают обмен информацией между клетками иммунной системы и координацию их действий, обеспечивают взаимосвязь в пределах иммунной системы между специфическим иммунитетом и неспецифической защитной реакцией организма, между гуморальным и клеточным иммунитетом.

Посредством цитокинов Т-хелперы (лимфоциты, "распознающие" чужеродные белки микроорганизмов) передают команду Т-киллерам (клеткам, уничтожающим чужеродный белок). Точно также с помощью цитокинов Т-супрессоры (разновидность лимфоцитов) контролируют функцию Т-киллеров и передают им информацию о прекращении уничтожения клеток.

Именно цитокины, осуществляя связь между эндокринной, нервной, кроветворной и иммунной системами, вовлекают все эти системы в формирование комплексной защитной реакции организма на внедрение повреждающего болезнетворного агента. При помощи специфических рецепторов провоспалительные цитокины связываются и вовлекают в процесс другие типы клеток: кожи, соединительной ткани, внутренней стенки сосудов, эпителиальные клетки. Все эти клетки также начинают продуцировать провоспалительные цитокины.

Из вышеизложенного следует, что использование в заявляемом способе цитокинов в качестве контролируемого параметра иммунного статуса для прогнозирования течения онкологических заболеваний позволяет распространить результаты прогноза на все виды онкологических заболеваний.

В заявленном способе для прогноза используют цитокины, регулирующие воспалительные реакции: провоспалительные цитокины, а именно интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), фактор некроза опухоли TNF-α. Содержание в периферической крови больного IL-2, INF-γ, TNF-α свидетельствует о функциональной активности Т-хелперов 1 типа (Пособие по клинической иммунологии для практических врачей http://www.dovidnyk.org/dir/21/118/1296.html; From Medscape Education Oncology Tumor Immunity: Exploring the Role of a Checkpoint CME Mary L. Disis, MD Faculty and Disclosures CME Released: 05/13/2014; Valid for credit through 05/13/2015/).

Кроме того, цитокин интерферон гамма относится к цитокинам, регулирующим клеточный и гуморальный иммунитет, а также является противовирусным иммунорегулятором.

При этом по характеру действия: цитокин интерлейкин - 2 относят к цитокинам - регуляторам иммунной системы, обеспечивающим взаимодействие в самой системе и ее связи с другими системами.

Фактор некроза опухоли TNF-α обладает регуляторным и токсическим действием на клетки (http://www.tiensmed.ru/news/citokiny-ab1.html).

TNF-α (фактор некроза опухолей-альфа) вызывает образование на внутренней оболочке стенки сосудов очагов адгезии (прилипания): сначала лейкоциты прилипают к эндотелию, а затем проникают через сосудистую стенку. Этот провоспалительный цитокин стимулирует синтез и выделение лейкоцитами и эндотелиальными клетками других провоспалительных цитокинов (IL-8 и других) и тем самым аутоактивирует клетки на продукцию медиаторов воспаления (лейкотриенов, гистамина, простагландинов, оксида азота и других).

При проникновении в организм инфекции выработка и выделение TNF-α начинается на месте внедрения микроорганизма (в клетках слизистой оболочки, кожи, региональных лимфоузлов) - то есть цитокин TNF-α активирует местные защитные реакции. При этом TNF-α, кроме местного действия, оказывает еще и системное: активирует иммунную систему, эндокринную, нервную и систему гемопоэза, при этом воздействует и влияет системно на весь организм.

Из вышеизложенного следует, что контролируемые в заявляемом способе параметры иммунного гомеостаза Т-лимфоциты CD3⁺, 10*9/л, синтезирующие спонтанно и стимулирование провоспалительные цитокины, способные влиять системно на течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), и субпопуляции Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺, также имеют системный характер, что, в совокупности, обеспечивает возможность использования заявленного способа для прогноза течения любого вида онкологического заболевания.

Кроме того, в настоящее время на практике в лечении широко используются именно эти цитокины, а именно: интерферон γ, интерлейкин - 2, и индукторы фактора некроза опухолей (ФНО), что обеспечивает возможность осуществимости заявленного способа.

Авторами изобретения впервые для прогнозирования течения различных онкологических заболеваний в качестве критерия предложена количественная оценка реактивности влияния на течение опухолевого процесса провоспалительных цитокинов, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), а также впервые предложен инструмент для оценки вышеупомянутой реактивности - путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле:

Кр=nCD3⁺_стим/nCD3⁺_спонт, где

CD3⁺_спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3⁺ в периферической крови синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно.

Кроме того, авторами изобретения для прогнозирования течения различных онкологических заболеваний впервые получена в количественном выражении и использована прогностическая оценка взаимосвязи между соотношением субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ и совокупной реактивностью влияния на течение опухолевого процесса цитокинов фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), а именно:

вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ и при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный;

при значении частного от деления количества субпопуляций CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ меньше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз благоприятный,

а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием данного вида цитокинов на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз неблагоприятный;

при значении частного от деления количества лимфоцитов CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ больше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный,

а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный.

Прогностические сочетания в вариантах прогноза количественных значений частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ и диапазоны значений Кр для каждого цитокина получены в результате набора статистических данных и являются оптимальными.

Как уже упоминалось выше, молекулы CD4⁺ экспрессируют на своей поверхности главные регуляторные клетки иммунного ответа - хелперы. От их деятельности зависит как направление (разворачивания) иммунного ответа, так и его эффективность.

Молекулы CD8⁺ содержат на своей поверхности цитотоксические Т-лимфоциты (киллеры), эффекторные клетки иммунного ответа, которые наносят конечный повреждающий удар по мишеням иммунной агрессии (опухолевым и инфицированным клеткам). CD8⁺ молекула выступает в роли корецептора, стабилизируя взаимодействие рецепторов Т-киллера и клетки-мишени во время иммунного распознавания последней (Пособие по клинической иммунологии для практических врачей http://www.dovidnyk.org/dir/21/118/1296.html).

При этом, как уже упоминалось выше, соотношение количества субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ определяется фазой иммунного ответа. В период разгара и стихания клинических проявлений значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ достигает высоких значений за счет большого процентного содержания Т-хелперов (CD4⁺ Т-клеток). В период реконвалесценции значение показателя уменьшается, в связи с нарастанием уровня CD8⁺ Т-клеток (киллеров).

В отношении опухолевого процесса неадекватное нарушение соотношения количества субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ в циркулирующей крови может иметь как прямой (положительный), так и обратный (отрицательный) характер влияния, что зависит от конкретного биологического вида рака.

Использование в заявляемом способе для прогнозирования течения онкологического заболевания результатов количественного сравнения субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ (вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺) и количественной характеристики взаимосвязи между полученным соотношением субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ и совокупной реактивностью влияния на течение опухолевого процесса цитокинов: фактора некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), позволяет получить прогноз течения онкологического заболевания независимо от его вида. Кроме того, это позволяет получить комплексную информацию о характере иммунного ответа организма на онкологическое заболевание в данный момент времени, учитывая агрессивность его развития, обусловленное влиянием как цитокинов данного вида опухолевого процесса, так и влиянием на течение онкологического процесса каждой из субпопуляций CD4⁺ и CD8⁺. В совокупности, это позволяет с высокой достоверностью прогнозировать агрессивность различных онкологических заболеваний, причем, как высокоагрессивных по гистологическим формам, стадиям и биологическим процессам, с высоким риском манифестации метастазирования, так и низкоагрессивных, с поздним проявлением развития метастазирования, причем для любого вида метастазирования. В результате расширяются функциональные возможности заявленного способа.

Известно, что неблагоприятный прогноз течения заболевания связан с исчерпанием компенсаторных резервов иммунной системы. При этом наличие иммунодефицитной зависимости указывает на исчерпание компенсаторных механизмов при продолжительном существовании иммунного дефекта. Это свидетельствует о необходимости как можно более раннего выявления больных с дисфункциями иммунной системы, особенно, своевременного выявления дисфункции иммунной системы онкологических больных. Заявляемый способ позволяет выполнять мониторинг-контроль иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции в сезонах года или известных рисковых интервалах метастазирования (3-4, 6-7, 11-12 год) при длительном наблюдении.

При этом заявляемый способ позволяет, используя только иммунограмму больного, оперативно принять решение о внесении соответствующей коррекции для измененных величин иммунного гомеостаза задолго до их материального субстрата, привычно выявляемого при МРТ, ультразвуковой диагностике, рентгене или клинически. Причем не требуется наличие результатов предыдущего иммунологического обследования, что упрощает и повышает оперативность заявляемого способа.

В заявляемом способе определение количественных показателей иммунного гомеостаза выполняют после окончания курса первичного лечения, что позволяет не только получить прогноз течения онкологического заболевания, но и по результату прогноза оценить адекватность реакции организма на лечение и принять решение по дальнейшему восстановительному или реабилитационному лечению.

Возможность мониторинга иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции в сезонах при длительном наблюдении повышает эффективность назначений для дальнейшего лечения за счет возможности учета изменчивости иммунитета под влиянием токсичных цитостатиков (иммунодепрессантов) или применения лучевой терапии.

Используемые в заявляемом способе параметры, характеризующие состояние иммунного гомоеостаза больного, предлагаемая количественная оценка реактивности влияния на течение опухолевого процесса цитокинов фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), а также количественная оценка взаимосвязи между соотношением субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺ и совокупной реактивностью влияния на течение опухолевого процесса цитокинов фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), являются результатом обработки статистических данных, полученных при обследовании больных с различными онкологическими диагнозами после окончания курса первичного лечения, а именно: после окончания первичного самостоятельного, комбинированного или комплексного лечения (операция, химиотерапия, лучевая- и гормонотерапия), причем, как высокоагрессивных по гистологическим формам и стадиям процессов, с высоким риском манифестации метастазирования, так и низкоагрессивных с поздним проявлением развития метастазирования, а также для любого вида метастазирования. В результате заявляемый способ позволяет прогнозировать течение различных видов онкологических заболеваний после окончания первичного лечения, что расширяет функциональные возможности способа.

При этом в заявленном способе, по сравнению с прототипом, расчетные формулы просты, в них отсутствуют какие-либо дополнительные коэффициенты для пересчета значений измеренных параметров иммунного гомеостаза, используемых для прогноза, поскольку используют измеренные значения параметров иммунного гомеостаза больного непосредственно. Использование непосредственно в расчетной формуле измеренных значений параметров иммунного гомеостаза конкретного больного делает результаты расчета индивидуальными для каждого больного, что повышает достоверность заявленного способа.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что заявляемый способ прогнозирования течения онкологических заболеваний при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в расширении функциональных возможностей, а именно: в возможности прогнозирования течения разных видов онкологических заболеваний после окончания первичного самостоятельного, комбинированного или комплексного лечения (операция, химиотерапия, лучевая- и гормонотерапия), причем, как высокоагрессивных по гистологическим формам и стадиям процессов, с высоким риском манифестации метастазирования, так и низкоагрессивных с поздним проявлением развития метастазирования, а также для любого вида метастазирования; в упрощении и повышении оперативности способа; в возможности мониторинг-контроля иммунного гомеостаза онкологического больного и его коррекции в сезонах при длительном наблюдении; в повышении достоверности прогноза по результатам оценки иммунного гомеостаза на момент обследования; в повышении эффективности назначений для дальнейшего лечения за счет возможности учета изменчивости иммунитета под влиянием токсичных цитостатиков (иммунодепрессантов) или применения лучевой терапии.

Заявляемый способ прогнозирования течения онкологических заболеваний реализуют следующим образом.

При помощи стандартного лабораторного исследования определяют количественные показатели иммунного гомеостаза. Количественные показатели иммунного гомеостаза определяют после окончания курса первичного лечения. При этом в периферической крови больного с помощью лабораторной тест системы определяют количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, а именно: определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, способные влиять системно на течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ).

Кроме того, определяют количество субпопуляций Т-лимфоцитов CD3⁺: CD4⁺ и CD8⁺. Вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺.

После чего оценивают реактивность влияния на течение опухолевого процесса каждого вида цитокина путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле:

Кр=nCD3⁺_стим/nCD3⁺_спонт, где

nCD3⁺_спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3⁺ в периферической крови синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно.

Имея полученные количественные значения расчетов, выполняют прогнозирование течения онкологического заболевания, а именно: при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный;

а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный.

Спонтанную продукцию Т-лимфоцитами интерлейкина - 2 (IL-2), гамма-интерферона (IFN-γ), фактора некроза опухолей альфа () оценивали по истечении 4 часов инкубации в присутствии брефельдина A («Golgi Plug», Becton Dickinson) при 37°C, в атмосфере 5% CO₂.

В качестве активатора для стимуляции внутриклеточного синтеза цитокинов использовали формолмеристат ацетат (РМА) (50 ng/ml) плюс иономицин.

Иммунофенотипирование проводили с использованием FITC-меченых анти-CD3-, анти-CD4 и анти-CD8-моноклональных антител и РЕ-коньюгированных анти-IL-2, IFN-γ и («Caltag») на проточном цитофлюориметре FACScan фирмы «Becton Dickinson».

Примеры выполнения способа сведены в таблицы по видам онкологических заболеваний

Меланома

Пример 1. Результат обследования пациента показал избыточность CD8 (отношение CD4⁺/CD8⁺ меньше 1), что в совокупности с полученными значениями коэффициентов реакции TNF-α, Кр IL-2, Кр INF-γ может привести к возникновению метастазирования и к летальному исходу. Прогноз неблагоприятный. Больному была проведена стандартная терапия интерферонами. Дополнительная стимуляция субпопуляции CD8⁺ привела к возникновению метастазирования и к летальному исходу.

Пример 2. Результат прогноза показал, что у пациента С.избыточность CD4⁺ (отношение CD4⁺/CD8⁺ больше 1). В совокупности с полученными значениями коэффициентов реакции TNF-α-фактора некроза опухоли и Кр IL-2 - интерлейкина - 2. прогноз дальнейшего течения заболевания неблагоприятный. Больному была выполнена терапия интерфероном альфа 3 млн в течение 8 месяцев без воздействия на гиперреактивные Кр TNF-α и Кр IL-2. Через 8 месяцев наступила летальность.

Пример 3. Результат прогноза показал, что у пациента В. дальнейшее течение заболевание благоприятное. Назначена терапия интерферон альфа 6 млн., которая поддерживает системную гипореактивность в организме. Наблюдение в течение года. На 31.12.2016 г. без метастатических проявлений и рецидива.

Узловые формы рака молочной железы.

Пример 4. Результат прогноза благоприятный. Лечение состояло в запрете XT и проведении иммуннокоррекции. Проведена гормонотерапия 5 лет: аримидекс; сезонная иммуннокоррекция. В итоге - 9 лет ремиссии.

Пример 5. Результат прогноза благоприятный. Выполняли ежегодное наблюдение. Ремиссия 7 лет.

Пример 6. Результат прогноза благоприятный. В анамнезе рак щитовидной железы pT4N1M0 и рак молочной железы pT2N1M0 слева. Назначена стандартная, 5 лет антигормонотерапия анастрозолом и сезонная иммунотерапия. Ремиссия 7 лет без рецидива и метастазирования.

Рак молочной железы с конверсией иммунного гомеостаза через 4 года.

Пример 7_1,2. Пациентку обследовали в 2009 и в 2013 году. Результат обследования показал избыточность CD8⁺. Результат прогноза в 2009 году показал, что у пациента К. дальнейшее течение заболевание характеризуется как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный. Результат ежегодных (до 2013 года) наблюдений пациентки - ремиссия. Результат прогноза в 2013 году показал избыточность CD4⁺, т.е. через 4 года у пациента К. произошла конверсия иммунного гомеостаза и дальнейшее течение заболевание характеризуется как гипореактивное, прогноз благоприятный. За период наблюдения пациентка получила оптимальное количество адъювантных цитостатиков с медленным восстановлением количества CD4⁺ на фоне гипореактивности цитокинов.

На момент контроля 30.10.2016 г. признаков рецедива и метастадирования нет. Общая продолжительность ремиссии, включая 2016 год, составила 7 лет.

Рак кишечника.

Пример 8. Результат обследования больного через 1,5 месяца после операции показал повышенное количество CD4⁺ по отношению к CD8⁺ что можно объяснить послеоперационным состоянием организма. Прогноз течения заболевания характеризуется как гипореактивное, благоприятный.

В течение 7 месяцев выполняли наблюдение пациента, которое включало инструментальный и лабораторный мониторинг. Через 7 месяцев произведено повторное обследование, которое выявила превышение верхних пределов коэффициентами реакции TNF-α (406) и IL-2 (215,5). Прогноз течения заболевания гиперреактивный, неблагоприятный, с риском метастадирования. Учитывая неблагоприятный прогноз течения заболевания для профилактики была назначена отсроченная адьювантная химиотерапия фторурацилом 3,5 гр N2 курса. Результат - 6 лет ремиссии.

Рак почки.

Пример 9. Результат прогноза благоприятный. Пациенту назначено лечение: Бевасизумаб + интерферон 6 млн. Терапия интерфероном носит характер иммунологически-заместительной. Результат - 3 года ремиссии.

Пример 10. Больная Г., 59 лет, прооперирована в 2001 году с диагнозом РМЖ стадия T2NMO справа, (ИГХ не проводилась) сектор + латеральная эксцизия правой М.Ж., лучевая терапия 60 грей, гормонотерапия 5 лет - блокаторы Ароматаз. Иммунологический мониторинг в течение 16 лет. Признаков МТС или рецидива в настоящее время нет.

Результаты обследования сведены в таблицу.

Из вышеизложенного следует, что заявляемый способ прогнозирования течения онкологических заболеваний позволяет получить, независимо от вида онкологического заболевания, комплексную информацию о характере иммунного ответа организма на онкологическое заболевание в данный момент времени, учитывающую развитие заболевания под влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, и характером влияния на течение онкологического процесса каждой из субпопуляций Т-лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺. Это позволяет с высокой достоверностью прогнозировать течение различных онкологических заболеваний, причем, как высокоагрессивных по гистологическим формам, стадиям и биологическим процессам, с высоким риском манифестации метастазирования, так и низкоагрессивных, с поздним проявлением развития метастазирования, причем для любого вида метастазирования, и принять правильное решение о внесении соответствующей коррекции в лечение, используя иммунологическое моделирование реактивности для адекватного иммунологического ответа. В результате способ позволяет, с момента этапа реабилитации и в течении последующего многолетнего мониторинга, формировать многолетний результат безрецидивного лечения онкологического пациента.

Способ прогнозирования течения онкологических заболеваний, в соответствии с которым при помощи стандартного лабораторного исследования определяют количественные показатели иммунного гомеостаза, при этом в периферической крови больного с помощью лабораторной тест-системы определяют количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4⁺ и CD8⁺, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺, отличающийся тем, что количественные показатели иммунного гомеостаза определяют после окончания курса первичного лечения, при этом в периферической крови больного определяют абсолютное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, 10*9/л, синтезирующих спонтанно и стимулированно провоспалительные цитокины, способные влиять системно на иммунный гомеостаз и течение опухолевого процесса, а именно: фактор некроза опухоли (TNF-α), интерлейкин - 2 (IL-2), интерферон γ (INF-γ), после чего оценивают реактивность влияния на течение опухолевого процесса каждого вида цитокина путем вычисления коэффициента реакции для каждого из них по формуле:

Кр=nCD3⁺_стим/nCD3⁺_спонт,

где Кр - коэффициент реакции влияния на течение опухолевого процесса для соответствующего провоспалительного цитокина, а именно: TNF-α, INF-γ, IL-2;

nCD3⁺_стим - количество клеток Т-лимфоцитов (CD3⁺) в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин в тест-системе после стимуляции;

CD3⁺_спонт - количество клеток Т-лимфоцитов CD3⁺ в периферической крови, синтезирующих соответствующий цитокин спонтанно, затем вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4⁺ на количество CD8⁺ и при значении частного от деления равном 1 и выше, при значении коэффициента реакции в заданных пределах хотя бы для двух цитокинов, а именно: для TNF-α в пределах от 80 до 120, для IL-2 от 80 до 120, для INF-γ от 150 до 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как нормореактивное, прогноз благоприятный; при значении частного от деления количества субпопуляций CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ меньше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз благоприятный, а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием данного вида цитокинов на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз неблагоприятный; при значении частного от деления количества лимфоцитов CD4⁺ на количество лимфоцитов CD8⁺ больше 1, при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов выше верхнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 выше 120, для INF-γ выше 250, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гиперреактивное, прогноз неблагоприятный, а при значении коэффициента реакции хотя бы для двух цитокинов ниже нижнего предела, а именно: для TNF-α и для IL-2 ниже 80, для INF-γ ниже 150, развитие заболевания, обусловленное влиянием цитокинов данного вида на течение опухолевого процесса, прогнозируют как гипореактивное, прогноз благоприятный.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.

Способ прогнозирования тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите // 2622016

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител-igg к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой // 2622005

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунохимии, а именно к способу получения материала для биологического связывания с помощью сорбирующих колонок. Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител - IgG к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой с использованием твердофазного носителя, заключающийся в том, что для его получения рекомбинантый человеческий десмоглеин 3 типа (Dsg3) иммобилизируют путем ковалентного связывания с твердофазным носителем, в качестве которого применяют агарозный сорбент, несущий на своей поверхности N-гидроксисукцинимидные группы: NHS-активированную агарозу.

Способ оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови // 2622003

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови.

Способ прогнозирования рецидивирования вульвовагинального кандидоза // 2621636

Изобретение относится к области методов клинико-лабораторной диагностики и касается способа прогнозирования рецидивирующего вульвовогинального кандидоза (ВВК). Сущность способа: проводят генотипирование пациентки по полиморфным локусам генов IL4:-33 С>Т [rs2070874]; CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611]; IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] с применением ПЦР в режиме реального времени и определяют долю лактобацилл в составе вагинальной микрофлоры при помощи комплекта реагентов "Фемофлор 16", после чего полученные данные включают в функцию Z=1,063*IL1B+1,112*IL4+1,483*CCL2-0,044*Lact+1,326, где 1,326 - некоторая константа, IL1B - количество аллелей G в локусе IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] гена IL1B, IL4 - количество аллелей С в локусе IL4:-33 С>Т [rs2070874] гена IL4, CCL2 - количество аллелей G в локусе CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611] гена CCL2, Lact - доля лактобацилл (%) в составе вагинальной микрофлоры.

Способ морфометрической оценки прогноза течения иммунной тромбоцитопении после спленэктомии по индексу соотношения масс cd4+/cd8+ t-лимфоцитов селезенки // 2621627

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и предназначено для прогнозирования течения иммунной тромбоцитопении после спленэктомии. Для осуществления изобретения определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом с приготовлением парафиновых блоков.

Способ прогнозирования формирования толерантности при аллергии к белку коровьего молока у детей раннего возраста // 2621312

Изобретение относится к области педиатрии, а конкретно к аллергологии и диетологии раннего возраста, и может быть использовано аллергологами и/или диетологами для прогнозирования формирования толерантности при аллергии к белку коровьего молока у детей раннего возраста.

Способ прогноза эффективности терапии у больных приступообразной шизофренией // 2621266

Группа изобретений относится к области медицины, в частности к клинической и биологической психиатрии. Регистрируют электроэнцефалограмму (ЭЭГ) до начала терапии больных приступообразной шизофренией с маниакально-бредовыми расстройствами.

Способ прогнозирования угрозы невынашивания при гриппе a(h3n2) у женщин в первом триместре беременности // 2620567

Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования угрозы невынашивания при гриппе A(H3N2) у женщин в первом триместре беременности. Сущность способа заключается в том, что у женщин в первом триместре гестации при гриппе A(H3N2) в период разгара заболевания в первой сыворотке крови определяют величину титра противовирусных антител (А), оценивают уровень TNF-α (пг/мл) (В).

Метод определения формирования угрозы выкидыша эмбриона на первом триместре гестации при действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на фактор, индуцируемый гипоксией // 2620565

Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования выкидыша на первом триместре гестации при действии у беременной цитомегаловирусной инфекции в период обострения.

Способ проведения иммунохроматографического анализа с высокой степенью выявления маркера // 2623075

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку. После контакта тест-полоски с пробой и завершения движения реагентов вдоль мембран на нитроцеллюлозную мембрану наносят вещество, растворяющее нитроцеллюлозу, но не нарушающее структуру подложки, например ацетонитрил. После высыхания растворителя на поверхности подложки образуется стекловидная прозрачная масса. Детекция на просвет оставшегося в зонах связывания маркера дает возможность его полной (100%-ной) регистрации при малом уровне неспецифического окрашивания вне зон связывания, что, в конечном итоге, повышает достоверность регистрации результатов анализа и позволяет выявлять наличие в пробах контролируемого соединения в более низких концентрациях. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Участок связывания антигена (fab), в том числе гуманизированный fab, против ботулинического нейротоксина с (варианты), способ получения fab с использованием дрожжей, способ и набор для детекции ботулинического нейротоксина с // 2623157

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab. Представлены клетки дрожжей, продуцирующие указанные гуманизированные Fab. Предложен способ получения описанных гуманизированных Fab. Также предложены способ детекции ботулинического нейротоксина С и набор для детекции ботулинического нейротоксина С. Изобретение позволяет получить реагенты для детекции ботулинического нейротоксина С, обладающие высокой специфичностью связывания с указанным нейротоксином. 8 н. и 1 з.п. ф-лы, 12 ил., 6 табл., 9 пр.

Способ выявления предраковых изменений в молочной железе // 2623857

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА. После чего вычисляют индекс влияния (ИВ) раково-эмбрионального антигена (ИВ РЭА) на продукцию ИЛ-8 (ИВ РЭА ИЛ-8) по формуле: ИВ РЭА ИЛ-8=А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина. При величине ИВ РЭА ИЛ-8, не превышающей 14, выявляют предраковые изменений в молочной железе (склерозирующий аденоз или пролиферат молочной железы). Использование данного способа позволяет выявлять предраковые изменения в молочной железе, что позволяет своевременно начать адекватное лечение. 4 пр.

Способ прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы // 2623869

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ. При уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости. 1 табл.

Способ анализа пробы // 2623873

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб. При этом для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство вставляют отдельный картридж для реагентов, который содержит ячейки с необходимыми для анализа реагентами-индикаторами, причем в картриджи для реагентов для анализа клинико-химических параметров помещают по меньшей мере один реагент-индикатор, а в картриджах для анализа иммунологических параметров, предусматривают первую ячейку с конъюгатом, вторую ячейку с субстратным раствором и твердую фазу. Изобретение обеспечивает возможность одновременного определения клинико-химических и иммунологических параметров пробы. 10 з.п. ф-лы, 3 ил.

Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности // 2623879

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП). Сущность способа: используют твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании цмЛПНП с 100 мкл раствора агглютинина RCA120 в изотоническом фосфатном буфере (ИБФ) в концентрации 30 мкг/мл, иммобилизованного в лунках планшета, промывке лунок буферным раствором с бычьим сывороточным альбумином (БСА), содержащим 2 г/л БСА, внесении по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител 1 мкг/мл к белку аполипопротеину В, инкубировании 1 ч при комнатной температуре, внесении 100 мкл исследуемого образца крови в ИФБ, инкубировании в течение 2 ч при 20°С, промывке, проявлении цитратным буфером рН 4,5, содержащим ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубировании 30 мин при 37°С, остановке реакции добавлением серной кислоты и количественной оценке цмЛПНП за счет измерения оптической плотности при длине волны 492 нм, что позволяет определять содержание цмЛПНП без их предварительного выделения. Изобретение обладает более высокой чувствительностью и воспроизводимостью и позволяет избирательно анализировать цмЛПНП, таким образом дает возможность точно и надежно измерять концентрацию цмЛПНП без предварительного выделения фракции ЛПНП. Способ является простым, доступным и быстрым в осуществлении, позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и при диспансеризации населения. 3 ил., 4 пр.

Способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни хейли-хейли // 2624501

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут. Осуществление изобретения позволяет повысить достоверность результатов диагностики. 3 пр., 4 ил.

Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка // 2624505

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

Способ прогнозирования длительности ремиссии у больных раком вульвы // 2624508

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67. При значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию. При значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы и позволяет на основе прогностических факторов оценивать эффективность лечения рака вульвы. 2 табл., 2 пр.

Способ оценки уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов // 2624860

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета. Способ включает получение препарата хромосом, его окрашивание и определение цитогенетических показателей, при значении в пределах 18,0-20,6 условных единиц показателя (дозы) активных рибосомных генов оценивают уровень компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавта как оптимальный. Изобретение обеспечивает возможность использовать для оценки один универсальный показатель в условиях космического полета при повышении достоверности оценки, в том числе непосредственно на борту пилотируемого космического аппарата, а также для прогноза необходимости проведения дополнительных реабилитационных процедур в период реадаптации космонавтов к земной гравитации после окончания космических полетов. Оно также может найти широкое применение при первичном отборе кандидатов в космонавты, а также на этапах предварительной диагностики профпригодности лиц опасных профессий, для прогнозирования их профессионального долголетия, оценки рисков развития заболеваний, вызванных вредными условиями профессиональной деятельности, прогноза их течения и исхода. 3 пр., 4 табл.