Способ количественного определения салицилатов в плазме крови



Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови
Способ количественного определения салицилатов в плазме крови

Владельцы патента RU 2622996:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) (RU)

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для количественного определения ацетилсалициловой кислоты и ее основного метаболита салициловой кислоты в плазме крови человека. Для этого проводят жидкостно-жидкостную экстракцию салицилатов из плазмы крови с последующей дериватизацией силилирующим агентом N-метил-N-трет-бутилдиметилсилил-трифторацетамидом. Определение анализируемых соединений проводят методом газовой хроматомасс-спектрометрии с внутренним стандартом (п-толуиловой кислотой) осуществляют на неполярной капиллярной колонке HP-5MS при температуре инжектора 250°С и начальной температуре печи хроматографа - 130°С. Колонку термостатируют в течение 2 мин, после чего осуществляют ее нагрев до 280°С с температурным градиентом 25°С/мин. Затем колонку вновь термостатируют при 280°С в течение 4 мин. Регистрацию масс-спектров осуществляют при ионизации “электронным ударом” при 70 эВ и температуре источника ионов 230°С. Регистрация положительных ионов и сканирование выбранных ионов с m/z 309 для ацетилсалициловой кислоты и с m/z 195 для салициловой кислоты производят в режиме мониторинга со скоростью 2 скан/с. Изобретение обеспечивает проведение фармакокинетического лекарственного мониторинга препаратов у пациентов с цереброваскулярными заболеваниями. 9 ил.,3 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической фармакологии, и может быть использовано для количественного определения ацетилсалициловой кислоты и ее основного метаболита салициловой кислоты в плазме крови человека с целью проведения фармакокинетического лекарственного мониторинга препаратов у пациентов с цереброваскулярными заболеваниями в условиях стационара.

Резистентность к препаратам из группы салицилатов - явление достаточно распространенное и встречается, по разным данным, с частотой от 5 до 48%. Несмотря на то, что в медицинской литературе термин «резистентность к ацетилсалициловой кислоте» используется очень часто, эта проблема пока изучена недостаточно. Более того, до сих пор не существует единого общепринятого определения этого термина. В настоящее время выделяют клиническую и биохимическую аспиринорезистентность. Под клинической резистентностью понимают неспособность препарата предотвратить тромботический эпизод у конкретного больного. Биохимическую резистентность определяют как недостаточное подавление функции тромбоцитов на фоне приема ацетилсалициловой кислоты по результатам различных лабораторных тестов. Обсуждается много причин возникновения аспиринорезистентности. Согласно Меморандуму рабочей группы по изучению резистентности к ацетилсалициловой кислоте Международного общества по тромбозу и гемостазу, она может быть обусловлена снижением биодоступности препарата, функциональным состоянием тромбоцитов, взаимодействием тромбоцитов с другими клетками крови, генетическими причинами и даже такими факторами, как курение, гиперхолестеринемия, физическая нагрузка и стресс. Резистентность, связанная со снижением биодоступности ацетилсалициловой кислоты, подразумевает низкую приверженность к лечению, недостижение оптимальной дозы препарата, плохую абсорбцию из желудочно-кишечного тракта (АСК в кишечнорастворимой оболочке) и конкурентное взаимодействие АСК с другими лекарствами (например, с нестероидными противовоспалительными препаратами). Данную резистентность можно охарактеризовать как фармакокинетическую резистентность (Воробьева Н.М. Резистентность к ацетилсалициловой кислоте: значение лекарственной формы. Медицинский совет, 2013, №9, С. 76-81). Для изучения этого явления наиболее оптимальным решением является проведение мониторинга слицилатов в плазме крови больных с цереброваскулярными заболеваниями.

На сегодняшний день известен способ раздельного определения салицилатов путем концентрирования кислот из водной пробы изобутиловым спиртом в присутствии 10-20 мас. % сульфата лития по отношению к пробе. Определение кислот осуществляется непосредственно в экстракте методом фотометрического титрования по реакции комплексообразования с Fe3+. Титрант - раствор FeCl3⋅6Н2O в диоксане. Это обеспечивает снижение пределов их обнаружения до 0,01 мг/дм3 и повышение точности анализа: погрешность не превышает 9% (RU 2137113, 10.09.1999). Однако данный способ применим для выделения препаратов салицилатов только из водной среды.

Известен также способ определения салицилатов (аспирина и салициловой кислоты) в плазме крови путем жидкостной хроматографии. Образцы крови отбирают в охлажденные пробирки, содержащие антикоагулянт фторид, и плазму отделяют центрифугированием. После простой стадии подкисления, 200 мкл аликвоты пробы вводят непосредственно в систему ВЭЖХ. Экстракционную колонну С-18 промывают подкисленной водой в течение 2 мин, после чего соединения удаляют путем обратной промывки непосредственно на аналитической колонке (С-8 Нуклеосил, 5 мкм, 250 мм ×4,6 мм). Скорость потока через обе колонки составляет 1 мл/мин. Аналиты количественно определяют путем измерения их по УФ-поглощению при длине волны 225 нм. Подвижная фаза представляет собой смесь вода-метанол-ацетонитрил-ортофосфорная кислота (650:200:150:1 об./об./об./об.). Метод является линейным в интервале концентраций 0.10-5.00 мкг/мл для аспирина и 0.25-15.00 мкг/мл для салициловой кислоты. Оба соединения имеют предел количественного определения 0,10 мкг/мл и предел обнаружения 0,04 мкг/мл. Такое извлечение салицилатов из плазмы устраняет необходимость во внутреннем стандарте. Процедура легко выполнима и требует меньшего количества обработки выборок по сравнению с методами, описанными в литературе в настоящее время. Способ успешно применен к исследованию уровней аспирина и салициловой кислоты у здоровых добровольцев после перорального введения 600 мг аспирина (McMahon GP, Kelly МТ Determination of aspirin and salicylic acid in human plasma by column-switching liquid chromatography using on-line solid-phase extraction., Anal Chem., 1998 Jan 15; 70 (2): 409-14). Недостатками способа является низкая избирательность метода, поскольку на определение салицилатов оказывают сильное влияние коэкстрактивные вещества биологического происхождения, имеющие аналогичный спектральный максимум поглощения, которые могут интерферировать с анализируемыми соединениями, либо образовывать с ними критические пары.

Наиболее близким техническим решением является способ определения салицилатов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а именно одновременного определения ацетилсалициловой кислоты (АСК) и его основного метаболита салициловой кислоты (СК) в плазме крови человека. Подкисленную плазму крови депротеинизировали ацетонитрилом, который отделяли от водного слоя путем добавления натрия хлорида. АСК и СК экстрагируются в ацетонитриловом слое с высоким выходом, и определяются с помощью обращенной фазы (колонка: Novapak С18 4 мкм двуокиси кремния, 150×4 мм ID; элюент: 740 мл воды, 900 мкл 85% ортофосфорной кислоты, 180 мл ацетонитрила) и фотометрического детектирования (237 нм). В качестве внутреннего стандарта использовали 2-метил-бензойную кислоту. Метод позволяет определять АСК и СК в плазме крови человека до 100 нг/мл с хорошей точностью (более 10%). Анализ использовали для определения фармакокинетических параметров АСК и СК после перорального введения 100-500 мг АСК у здоровых добровольцев (Kees F. et al. Simultaneons determination of acetylsalycilic acid and salicylic acid in human plasma by high-performance liguid chromatography. J. Chromatogr. - B-Biomed Appl., 1996, N677 (1), pp. 172-177). Недостатками способа также являются низкая избирательность и селективность по отношению к анализируемым соединениям. Основным способом преодоления данных недостатков и является применения масс-спектрометрического детектирования, используемого в заявленном способе.

Технический результат заключается в расширении арсенала технических средств определения салицилатов в плазме крови с высокой избирательностью, достоверностью и точностью.

Технический результат достигается тем, что количественное определение салицилатов в плазме крови проводят путем анализа крови на их наличие с помощью жидкостно-жидкостной экстракции и дериватизации из плазмы крови с последующей газовой хромато-масс-спектрометрией продуктов экстракции и дериватизации и расчетом концентрации салицилатов, согласно изобретению экстракцию и дериватизацию анализируемых соединений и внутреннего стандарта - пара-толуиловой кислоты, проводят с силилирующим агентом N-метил-N-трет-бутилдиметилсилил-трифторацетамидом, а газовую хромато-масс-спектрометрию продуктов дериватизации анализируемых соединений и внутреннего стандарта осуществляют на неполярной капиллярной колонке HP-5MS, при температуре инжектора 250°С и начальной температуре печи хроматографа - 130°С, затем колонку с продуктами дериватизации термостатируют в течение 2 мин, после чего осуществляют ее нагрев с температурным градиентом 25°С/мин до 280°С, вновь проводят термостатирование на 280°С в течение 4 мин и осуществляют регистрацию масс-спектров дериватизированных салицилатов в следующем режиме: энергии ионизации 70 эВ, температуры источника ионов - 230°С, ионизации типа «электронный удар» с регистрацией положительных ионов и сканированием в режиме мониторинга выбранных ионов с m/z 309 для ацетилсалициловой кислоты и с m/z 195 для салициловой кислоты со скоростью 2 скан/с, с последующим расчетом концентрации салицилатов по линейной калибровочной кривой.

Способ осуществляется следующим образом.

Пробоподготовка

Подготовку плазмы крови осуществляют методом жидкостно-жидкостной экстракции. В пластиковую пробирку типа «Эппендорф» объемом 2 мл отбирают 250 мкл плазмы, добавляют 25 мкл стандартного раствора внутреннего стандарта - толуиловой кислоты с концентрацией 100 мкг/мл, затем перемешивают на аппарате для встряхивания жидкости в течение 5 с, добавляют 250 мкл 20% ортофосфорной кислоты и 1 мл диэтилового эфира. Далее пробирку встряхивают на вортекс-миксере в течение 5 мин, центрифугируют 10 мин при 14000 об/мин. Верхний органический слой декантируют, переносят в хроматографическую виалу и упаривают в испарителе-концентраторе в течение 30 мин при нагревании до 45°С. Сухой остаток перерастворяют в 50 мкл дериватизирующей смеси (N-метил-N-трет-бутилдиметилсилил-трифторацетамид, содержащий 1% трет-бутилдиметилхлоросилана) и выдерживают пробы при 70°С в течение 30 минут.

Схема дериватизации анализируемых соединений и внутреннего стандарта представлена на фиг. 1 А, Б, В, где А - дериватизация салициловой, Б - ацетилсалициловой и В - пара-толуиловой кислот.

Далее в виалу с продуктами дериватизации добавляют 300 мкл этилацетата и полученный образец помещают в автосемплер для дальнейшего хроматомасс-спектрометрического анализа.

Причем для одновременного количественного определения ацетилсалициловой и салициловой кислот используют газовую хромато-масс-спектрометрию. Хроматограф - «Agilent 6850 Series II Network GC System». Детектор - моноквадрупольный масс-спектрометрический «Agilent 5975B inert XL MSD».

Хроматографическое разделение проводят в неполярной капиллярной колонке HP-5MS (привитая фаза - (5%-фенил) метилполисилоксаном. Длина колонки 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина фазы 0,25 мкм, газ-носитель - гелий 6.0, давление газа-носителя 5 psi. Для разделения смеси анализируемых веществ используют следующий режим работы хроматографа: температура инжектора - 250°С, начальная температура печи хроматографа - 130°С. Термостатирование колонки с продуктами дериватизации проводят в течение 2 мин, после чего осуществляют нагрев с температурным градиентом 25°С/мин до 280°С, затем вновь термостатируют на 280°С в течение 4 мин. Общее время анализа составляет 12 минут. Для регистрации масс-спектров анализируемых веществ выбирают следующий режим: энергия ионизации 70 эВ, температура источника ионов - 230°С, ионизация типа «электронный удар» с регистрацией положительных ионов, сканирование в диапазоне 50-400 Да со скоростью 2 скан/с. Объем вводимой пробы - 1 мкл, пробы вводили в режиме без деления потока. Были получены следующие масс-спектры: масс-спектр TBDMS-производного пара-толуиловой кислоты (трет-бутилдиметилсилиловый эфир толуиловой кислота, TBDMS-производное) показан на фиг. 2; масс-спектр 2TBDMS-производного салициловой кислоты, (трет-бутилдиметилсилиловый эфир салициловой кислоты) показан на фиг. 3; масс-спектр TBDMS-производного ацетилсалициловой кислоты, (трет-бутилдиметилсилиловый эфир ацетилсалициловой кислоты) показан на фиг. 4.

После анализа масс-спектров салицилатов были выбраны следующие параметры для SIM-метода (Selected Ion Monitoring, метод мониторинга выбранных ионов) см. таблица 1.

В методе мониторинга выбранных ионов параметры хроматографирования применяют аналогичные таковым для режима сканирования по полному ионному току. В разработанном SIM-методе сканирование проводят в режиме мониторинга выбранных ионов с m/z 309 для ацетилсалициловой кислоты и с m/z 195 для салициловой кислоты со скоростью 2 скан/с. Пробу вводят в объеме 1 мкл в режиме без деления потока.

В указанных условиях времена удерживания TBDMS-производных целевых соединений составляли - для толуиловой кислоты - 4,55 мин, для ацетилсалициловой кислоты - 5,24 мин, для салициловой кислоты - 6,25 мин. Масс-хроматограмма TBDMS-производных салицилатов с внутренним стандартом - толуиловой кислотой представлена на фиг. 5. По оси абсцисс - время хроматографирования в минутах, по оси ординат - ионный ток в условных единицах интегрирования. Пик с временем удерживания 6,1 относится к TBDMS-производное ортофосфорной кислоты.

Для приготовления калибровки готовили маточные растворы стандартов салициловой, ацетилсалициловой и пара-толуиловой кислоты (внутреннего стандарта) в метаноле с концентрациями 1 мг/мл. Растворы салициловой и ацетилсалициловой кислот применяли для приготовления растворов рабочих стандартных образцов на плазме крови с концентрациями 0,156 мкг/мл; 0,313 мкг/мл; 0,625 мкг/мл; 1,25 мкг/мл; 2,5 мкг/мл; 5 мкг/мл; 10 мкг/мл Раствор внутреннего стандарта с концентрацией 1 мг/мл разбавляли в 10 раз для получения рабочего раствора внутреннего стандарта с концентрацией 100 мкг/мл. Линейные калибровочные кривые анализируемых соединений представлены на фиг. 6 и 7.

Градуировочная зависимость для салициловой кислоты в плазме крови описывалась формулой:

ССК=4,752×AR-0,1301, где ССК - концентрация салициловой кислоты (мкг/мл), AR (Area Ratio) - отношение площадей пиков аналита и внутреннего стандарта. Коэффициент корреляции составил R2=0,998, что соответствует надлежащей аналитической аппроксимации (см. фиг. 6).

Градуировочная зависимость для ацетилсалициловой кислоты в плазме крови описывалась формулой:

CАСК=15,53×AR-0,2142, где САСК - концентрация ацетилсалициловой кислоты (мкг/мл), AR (Area Ratio) - отношение площадей пиков аналита и внутреннего стандарта. Коэффициент корреляции составил R2=0,997, что соответствует надлежащей аналитической аппроксимации (см. фиг. 7).

Предел количественного определения,- 0,625 мкг/мл.

Точность и воспроизводимость

Точность выражалась в виде коэффициента вариации (% C.V.) для каждой серии образцов согласно уравнению:

где

SD - стандартное отклонение серии определений;

- среднее арифметическое значение полученных концентраций.

Воспроизводимость измерялась, как процент отклонения (% dev.) от теоретического значения по формуле: , где

- среднее арифметическое значение полученных концентраций;

Для метрологической валидации полученной методики определяли точность в течение рабочего дня. Каждый из образцов, предназначенных для контроля качества, анализировали в течение 1 рабочего дня (6 определений).

Результаты представлены в таблицах 2 и 3.

Таким образом, относительная ошибка определения анализируемых соединений не превышала 15%. Заявленный способ обладает высокой избирательностью, достоверностью и точностью.

Способ количественного определения салицилатов в плазме крови, включающий анализ крови на их наличие путем их жидкостно-жидкостной экстракции и дериватизации из плазмы крови с последующей газовой хромато-масс-спектрометрией продуктов экстракции и дериватизации и расчетом концентрации салицилатов по линейной калибровочной кривой, отличающийся тем, что экстракцию и дериватизацию анализируемых соединений и внутреннего стандарта - пара-толуиловой кислоты, проводят с силилирующим агентом N-метил-N-трет-бутилдиметилсилил-трифторацетамидом, а газовую хромато-масс-спектрометрию продуктов дериватизации анализируемых соединений и внутреннего стандарта осуществляют на неполярной капиллярной колонке HP-5MS, при температуре инжектора 250°С и начальной температуре печи хроматографа - 130°С, затем колонку с продуктами дериватизации термостатируют в течение 2 мин, после чего осуществляют ее нагрев с температурным градиентом 25°С/мин до 280°С, вновь проводят термостатирование на 280°С в течение 4 мин и осуществляют регистрацию масс-спектров дериватизированных салицилатов в следующем режиме: энергии ионизации 70 эВ, температуры источника ионов - 230°С, ионизации типа «электронный удар» с регистрацией положительных ионов и сканированием в режиме мониторинга выбранных ионов с m/z 309 для ацетилсалициловой кислоты и с m/z 195 для салициловой кислоты со скоростью 2 скан/с.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для исследования физических характеристик нативной биологической жидкости (НБЖ).

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и касается контейнера для сбора крови. Указанный контейнер содержит первый конец и второй конец и по меньшей мере одну внутреннюю стенку, образующую резервуарную часть для приема крови, причем данный резервуар содержит смесь, содержащую тромбин и соединение поликарбоновой кислоты с молекулярной массой менее чем примерно 500 г/моль, и крышку.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, ревматологии, и может быть использовано для прогнозирования суставного болевого синдрома (БС) у лиц с признаками дисплазии соединительной ткани (ДСТ).

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования степени риска нарушения репродуктивного здоровья у женщин второго поколения потомков, прародители которых находились в зоне радиационного воздействия.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены электрохимическая аналитическая тест-полоска и способ определения аналита в образце физиологической жидкости.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, терапии, профессиональной патологии, и позволяет проводить дифференциальную диагностику профессиональной бронхиальной астмы (БА) и профессионального токсико-пылевого бронхита (ТПБ).

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования акушерского риска у беременных женщин с ВИЧ-инфекцией.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу прогнозирования тромбоэмболических осложнений у больных с повреждениями или заболеваниями опорно-двигательного аппарата, которым предстоит операционное вмешательство.

Группа изобретений относится к области взятия и стабилизации цельной крови или ее компонентов. Устройство для сбора и стабилизации цельной крови или ее компонента содержит первый конец и второй конец и по меньшей мере одну внутреннюю стенку, образующую резервуар. При этом резервуар включает стабилизирующий агент, содержащий ингибитор лизофосфолипазы (LysoPLA), и антикоагулянт. Также раскрывается способ сбора и стабилизации цельной крови или ее компонента, способ диагностирования нарушения метаболизма пациента, способ обнаружения наличия пролекарства и/или его активного метаболита в крови или ее компоненте, способ контролирования лечения пациента с нарушением метаболизма, а также способ определения количества пролекарства и/или его активного метаболита в крови или ее компоненте. Группа изобретений обеспечивает относительно более длительную стабильность крови или ее компонента при хранении для проведения достоверного клинического тестирования. 6 н. и 18 з.п. ф-лы, 3 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Способ диагностики преэклампсии у беременных с хронической болезнью почек (ХБП) заключается в том, что в крови беременной определяют растворимую fms-подобную тирозинкиназу и плацентарный фактор роста, вычисляют отношение первой величины ко второй и при величине этого отношения более 20 во втором триместре беременности и при величине этого отношения более 65 в третьем триместре беременности диагностируют преэклампсию. Способ позволяет диагностировать заболевание, начать своевременный мониторинг признаков преэклампсии, лечение и своевременную подготовку к родоразрешению. 3 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для профилактики фетоплацентарной недостаточности (ФПН) у беременных с хронической болезнью почек (ХБП). Назначают антиагрегантное средство в профилактической дозе. Дополнительно беременным с патологией интерстиция при ХБП III-V стадий, гломерулопатиями при ХБП проводят гепаринотерапию в профилактической дозе. Беременным с ХБП II стадии проводят исследование плазменного звена гемостаза методом тромбодинамики и в случае выявления, по меньшей мере, двух спонтанных сгустков в течение 30 минут наблюдения проводят гепаринотерапию в профилактической дозе. Далее контролируют состояние плазменного звена гемостаза методом тромбодинамики не реже 1 раза в 20 дней. При выявлении, по меньшей мере, двух спонтанных сгустков в течение 30 минут наблюдения корректируют профилактическую дозу гепарина в сторону увеличения. Способ позволяет обеспечить профилактику ФПН. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для подбора режима интенсивности аэробных тренировок в реабилитации больных с хронической сердечной недостаточностью. Для этого проводят кардиореспираторный тест (КРТ) с анализом газового состава венозной крови, в процессе которого выявляют индивидуально для каждого больного физиологический этап, определяющий лактатный порог по резкому увеличению уровня содержания лактата крови при постепенно возрастающей физической нагрузке, определяют на трэдмиле скорость ходьбы на уровне лактатного порога и по полученному результату составляют индивидуализированную программу режима реабилитации, предусматривающую тренировочную ходьбу по 40-60 минут ежедневно в течение 18 недель со скоростью на уровне лактатного порога, при этом каждый месяц проводят контрольный КРТ, после чего в соответствии с состоянием пациента проводят коррекцию программы режима физической реабилитации. Способ позволяет повысить эффективность физической реабилитации за счет повышения точности индивидуализированного определения биологических резервов адаптации организма к физической нагрузке. 3 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для определения показаний к местному и/или системному противогерпетическому лечению центральных бактериальных язв роговицы с затяжным течением. В соскобе с роговицы, полученном с центральной зоны язвы и по ее периферии, и в плазме крови определяют наличие ДНК вирусов герпеса человека: ВПГ1,2, ВЭБ, ЦМВ, ВГЧ-6. При наличии ДНК хотя бы одного вируса в соскобе и/или в плазме крови дополнительно проводят противогерпетическую системную и/или местную терапию. Способ обеспечивает полноценную ускоренную эпителизацию язвы с предупреждением перфорации, интенсивных помутнений роговицы, сохранение и восстановление зрительных функций, предупреждение торпидного течения язвы роговицы и исключение необходимости хирургического лечения. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно производственной и клинической трансфузиологии, и раскрывает способ морфофункционального анализа тромбоцитов, пригодных для криоконсервирования. Способ включает определение концентрации тромбоцитов (СТР, тыс./мкл) в тромбоцитном концентрате (ТК), прижизненную окраску тромбоцитов красителем, приготовленным разведением 5-15 мг трипафлавина и 15-25 мг акридинового оранжевого при комнатной температуре в 100 мл фосфатного буфера при рН=7,2-7,4, посредством введения красителя в пробу ТК из расчета 200 мкл красителя на 1 мл ТК, после чего осуществляют исследование препарата с окрашенными тромбоцитами с помощью флуоресцентного микроскопа с последующим определением средней интенсивности свечения (ИСопыт) 1-го поля зрения микроскопа, кроме того, по калибровочной кривой или по формуле определяют стандартное значение интенсивности свечения 1 поля зрения микроскопа у препарата с пробой ТК, содержащей 25% тромбоцитов, богатых гранулами (ТБГ) (ИСТБГ25%); после чего сравнивают ИСТБГ25% с ИСопыт, при ИСопыт≥ИСТБГ25% тромбоциты считают пригодными для криоконсервирования. Изобретение может быть использовано для отбора доноров тромбоцитов с целью получения тромбоцитного концентрата (ТК), пригодного для криоконсервирования. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования степени вероятности полной регрессии при проведении неоадъювантной химиотерапии у пациенток с трижды негативным молекулярно-генетическим субтипом рака молочной железы. Способ включает гистологическое исследование препаратов ткани первичного новообразования до проведения неоадъювантной химиотерапии, причем, в препаратах оценивают инфильтративный компонент, в котором определяют наличие трабекулярных, тубулярных, альвеолярных, солидных структур и дискретных групп опухолевых клеток, также оценивают стромальный компонент, в каждом случае в инфильтративном компоненте опухоли определяют наличие или отсутствие дискретных групп опухолевых клеток, в строме опухоли оценивают выраженность воспалительной инфильтрации, степень злокачественности по модифицированной схеме на основании оценки количества тубулярных структур, митозов и выраженности клеточного полиморфизма, также проводят иммуногистохимическое исследование для оценки экспрессии bc1-2, Р-гликопротеина в клетках воспалительного инфильтрата, MRP1 в клетках воспалительного инфильтрата, мембранной экспрессии MRP2 в опухолевых клетках и наличия его экспрессии в клетках воспалительного инфильтрата, наличие экспрессии BCRP в клетках воспалительного инфильтрата и оценивают в баллах, рассчитывают значение уравнения регрессии Y, а значение вероятности достижения полной регрессии опухоли P определяют по формуле: P=eY/(1+eY). При Р≥0,5 прогнозируют высокую, а при Р<0,5 - низкую вероятности полной регрессии при проведении неоадъювантной химиотерапии. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения степени риска развития отдаленных метастазов у больных раком ободочной кишки. Проводят исследование молекулярных характеристик в опухоли ободочной кишки и в неизмененной ткани: X1 - химотрипсинподобная активность протеасом в опухоли, ⋅103 Ед/мг белка; Х2 - химотрипсинподобная активность протеасом в неизмененной ткани, ⋅10 Ед/мг белка; Х3 - общая кальпаиновая активность в опухоли, ⋅10 Ед/мг белка; Х4 - общая кальпаиновая активность в неизмененной ткани, ⋅10 Ед/мг белка; учитывают Х5 - возраст пациентов, после чего рассчитывают значения Y1 и Y2 по дискриминантным уравнениям:Y1=0,039*X1+0,126*X2+0,775*X3-0,083*X4-0,040*X5-23,51; и Y2=0,015*X1+0,115*X2+0,509*X3-0,026*X4-0,026*X5-13,84, и при Y1>Y2, пациента относят к группе с низким риском развития отдаленных метастазов; при Y1<Y2 - к группе с высоким риском развития отдаленных метастазов рака ободочной кишки. Способ позволяет повысить чувствительность и точность диагностики. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования плацентарной недостаточности при повреждающем действии цитомегаловирусной инфекции на содержание общего холестерола в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител класса G к цитомегаловирусу, спектрофотометрическое определение в периферической крови содержания холестерола и иммуноферментное определение содержания эстрадиола, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания общего холестерола до 5,70±0,005 ммоль/л, эстрадиола до 14892,3±503,0 пмоль/л создается угроза формирования плацентарной недостаточности. Способ позволяет оценить угрозу формирования плацентарной недостаточности при простоте его исполнения. 1 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки мукозального иммунитета слизистой оболочки носа и носоглотки. В эпителиальных клетках слизистой оболочки полости носа определяют экспрессию генов рецептора врожденного иммунитета (TLR2) и противомикробного пептида (HBD2), и при соотношении показателя HBD2 к TLR2 меньше 0,1 диагностируют нарушение мукозального иммунитета, что является обоснованием хирургического метода лечения. Способ позволяет определить показания для хирургического лечения у пациентов с воспалительными заболеваниями ЛОР-органов. 1 табл., 4 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-07-21 2017-06-29T11:35:20
Наверх